Микробиологическое исследование в стоматологии. Микроскопия зубной бляшки

Добавил пользователь Дмитрий К.
Обновлено: 20.12.2024

Бляшка, расположенная на доступной гладкой поверхности зуба (щечная, язычная), может быть снята путем соскабливания обычным стерильным инструментом: экскаватором, скейлером. Для снятия бляшки с апроксимальных поверхностей можно использовать стерильную нитку. Бляшку из ямок, фиссур можно получить острым зондом или заостренной ортодонтической проволокой. В некоторых случаях материал берут маленькими стерильными ватными тампонами. Однако из-за плотности прилипания бляшки и трудности её снятия этот способ годится только для изучения начальной стадии колонизации микробов на эмали. Наддесневую зубную бляшку можно снять стерильным экскаватором или скейлером.

Сложнее получить материал из патологического десневого кармана, где часть бактерий находится в фиксированном состоянии на поверхности корня, а другие - в свободном состоянии в десневой жидкости.

Забор материала из десневого кармана для микроскопического исследования можно проводить на стерильные целлулоидные узкие пластинки, которые осторожно вводят в карман и прижимают к поверхности корня со стороны десны. С внутренней стороны пластинки находятся микробы с корневой части зуба, с наружной - свободно находящиеся в десневой жидкости микробы.

Материал из кармана можно также брать с помощью стерильной кюретажной ложечки или проволокой с ложбинкой. С удаленных зубов можно сделать соскобы или приготовить гистологические срезы.

Для бактериологического исследования материал должен быть сразу после забора помещен в транспортную питательную среду с целью сохранения жизнеспособности микробов.

Методика дисперсии материала бляшки

Точность определения количества и видов бактерий в бляшке зависит от тщательности дисперсии материала.

Можно разбивать конгломераты бляшки путем встряхивания со стеклянными бусами в гомогенизаторе, обработкой материала в ультразвуковых дезинтеграторах. Однако ультразвук может вызвать гибель некоторых бактерий: особенно чувствительны к ультразвуковой обработке спирохеты и некоторые грамотрицательные бактерии. В связи с этим обработку ультразвуком обычно проводят в течение не более 10 секунд.

Микроскопический подсчет, подсчет выживаемости микробов при культивировании

Прямой микроскопический подсчёт суспензированных микробов можно осуществлять в камере Горяева. Можно также изучать материал в темном поле или при фазово-контрастном микроскопировании.

Подсчет жизнеспособных клеток из взятого образца проводят методом серийных разведений в стерильном физиологическом растворе (1:10, 1:20 и так далее). Из каждого разведения определенный объем засевают на поверхность плотной среды. После инкубации подсчитывают количество КОЕ (колониеобразующих единиц) и пересчитывают количество их на исходный объем.

Успех метода зависит от использования необходимых питательных сред и условий культивирования, так как большая часть резидентов является строгими анаэробами и микроаэрофилами.

Низкую высеваемость микробов можно объяснить недостаточной дисперсией, прилипанием микробов к поверхности стекла при приготовлении разведения и неудачным подбором питательной среды.

Исследование ротовой жидкости

Ротовую жидкость обычно берут у больных утром (9-11 часов) через 2 часа после приема пищи, собирая ее в течение 10 минут в стерильные пробирки. Эту слюну называют нестимулированной.

Стимулированную слюну получают после нанесения на спинку языка 1-2 капель стерильного 2% раствора лимонной кислоты или жевания 5 г парафина в течение 30 секунд. Паротидную слюну получают путем введения в проток специальной стерильной канюли.

Исследование кариозной полости

Сначала из кариозной полости стерильным бором убирают поверхностные слои размягченного дентина, смоченного слюной. Не допуская попадания в исследуемый материал слюны, другим стерильным бором обрабатывают полость и помещают дентин с помощью стерильной гладилки в транспортную среду.

Исследование корневых каналов

Материал из корневых каналов берут корневыми иглами, на которых находятся стерильные ватные турунды. Предварительно на 4-5 корневых игл накручивают тонкие ватные турунды, упаковывают их в бумажные пакетики и стерилизуют в автоклаве.

Исследование десневой жидкости

Из десневого желобка, патологического десневого кармана материал можно брать маленькой стерильной кюретажной ложечкой, скейлером. Десневую жидкость можно собирать по принципу капилярности стерильной микропипеткой, стерильными фильтровальными полосками, стерильными нитками.

Исследование соскобов со слизистой оболочки

Соскоб со слизистой оболочки спинки языка можно делать стерильным шпателем, гладилкой. Перед взятием материала из эрозий, язв необходимо удалить поверхностный налет сухим или смоченным изотоническим раствором тампоном, не применяя антисептических препаратов. Этот материал может быть использован для микроскопического и бактериологического методов исследования.

В некоторых случаях можно делать мазки-отпечатки со слизистой оболочки или из элементов поражения. Для этого сухое обезжиренное стекло с зашлифованными краями прикладывают несколько раз к исследуемому участку. Если имеются труднодоступные места, то можно для забора материала использовать стерильные резиновые столбики, приготовленные из ластиковой резинки, которые прикладывают сначала к пораженному участку, а затем к стеклу.

Микробиологическое исследование в стоматологии. Микроскопия зубной бляшки

Клиническая диагностика заболеваний пародонта. Стоматологический анамнез

Данные эпидемиологических исследований свидетельствуют, что по распространенности ВЗП занимают 2-е место после кариеса у лиц до 30 лет, а среди лиц старше 30 лет выходят на 1-е место, достигая 85-90 %. Следует отметить тенденцию к нарастанию степени тяжести патологических изменений в тканях пародонта: за последние годы прогрессивно уменьшилась частота поверхностных поражений за счет резкого увеличения числа пациентов с выраженными деструктивными явлениями.

Высокая трудоемкость и низкая эффективность лечения развившихся стадий ВЗП диктуют необходимость изыскания точных объективных методов диагностики, позволяющих определять ранние признаки поражения тканей пародонта, отслеживать клиническую симптоматику в динамике, оценивать эффективность применяемых методов лечения.

Все известные методы диагностики заболеваний пародонта можно классифицировать следующим образом:
• клинические;
• рентгенологические;
• лабораторные;
• функциональные.

Клиническое обследование пациентов с ВЗП состоит из следующих этапов:
• оценка стоматологического и пародонтологического анамнеза;
• оценка основных показателей пародонтологического статуса;
• характеристика анатомо-топографических особенностей тканей пародонта.

В настоящее время доказано, что главную роль в развитии заболеваний пародонта играет бактериальная инвазия. Становится все более очевидным, что тканевое поражение определяется взаимодействием фактора повреждения, с одной стороны, и локальным тканевым ответом на нее — с другой. Интенсивность тканевого ответа на повреждение широко варьирует у разных индивидуумов и зависит как от выраженности местных патофизиологических реакций в ответ на повреждение, так и от вовлечения системных реакций организма. Итогом многочисленных клинических исследований явилось уточнение связи поражения пародонта с целым рядом общих факторов: генетическая предрасположенность, общие заболевания, иммунные нарушения, беременность и т. д.

Анализ анамнестических данных является первым и одним из наиболее важных этапов клинического обследования. При опросе учитывают жалобы пациентов: на кровоточивость десен (в том числе давность ее появления и причины, при чистке зубов, во время приема пищи или спонтанную), абсцедирование, его частоту, наличие неприятного запаха изо рта. Со слов пациента уточняют длительность заболевания, характер и результаты проводимого ранее лечения, продолжительность ремиссии.

Для выявления генетической предрасположенности выясняют наличие заболеваний пародонта у ближайших родственников. В целях характеристики состояния общего здоровья пациентов учитывают: подверженность простудным заболеваниям; наличие заболеваний сердечно-сосудистой, нервной и эндокринной систем, желудочно-кишечного тракта, наследственные и семейные заболевания. Важными анамнестическими характеристиками является курение и отсутствие носового дыхания. У женщин выясняют наличие гинекологических заболеваний, дисфункций, а также процессы обострения или возникновения заболевания на фоне беременности или последующего грудного кормления.

Данные анамнеза оказывают существенную помощь в построении диагностической гипотезы, проведении дифференциальной диагностики, составлении плана дальнейшего обследования и лечения пациента.
После уточнения анамнестических данных переходят к объективной оценке клинического состояния полости рта и тканей пародонта.

Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.

Только совокупность всех доступных методов лабораторной диагностики позволяет всесторонне обследовать пациента для выявления этиотропного агента, постановки правильного диагноза и, соответственно, назначения адекватного лечения.

Методы лабораторной диагностики воспалительных заболевания тканей пародонта можно систематизировать следующим образом:
• микробиологические;
• иммунологические;
• биохимические;
• цитологические.

Развитие воспалительных изменений в пародонте является следствием повреждающего влияния зубного налета, бактериальная флора которого является первичным фактором, вызывающим поражения пародонта при гингивите и пародонтите.
Для адекватного лечения ВЗП необходимо знать механизмы формирования микробной зубной бляшки, как причинного фактора этих заболеваний.

Зубная бляшка является продуктом микробного размножения. Она состоит из микробных масс, которые прикрепляются к вторичной кутикуле (пелликуле).
Зубная бляшка — это структурированное формирование, состоящее, главным образом, из микроорганизмов, которое визуально определяется на зубах через 1 —2 дня после прекращения чистки зубов в виде белого, сероватого либо желтоватого зубного налета. Ее постоянный прогрессирующий рост сдерживается током слюны, движением губ, языка, пищевого комка, особенно на верхних 2/3 коронок зубов. Поэтому бляшка скапливается и созревает именно в придесневых областях и межзубных промежутках. В 1 мг субстрата зрелой зубной бляшки содержится до 300 млн микроорганизмов.

Наряду с плотно прикрепленной к зубу бляшкой существуют и рыхлые микробные скопления на стенках внутри ПК. В ряде случаев именно рыхло прикрепленные микроорганизмы имеют решающее значение в развитии агрессивных форм пародонтита.

В отличие от структурированной плотной тесно связанной с поверхностью зуба бляшки, мягкий зубной налет представляет собой неструктурированную аморфную практически не скрепленную с поверхностями зуба субстанцию. Эта субстанция состоит из микроорганизмов, слущившихся эпителиальных клеток, лейкоцитов и смеси слюнных белков и липидов с частицами пищи. Мягкий зубной налет легко определяется визуально без индикаторов и удаляется простой струей воды.

На основе исследования механизмов взаимодействия между различными бактериями налета и хозяином разработана классификация пародонтальных микробных комплексов. Микробные комплексы поддесневых бляшек различаются по частоте встречающихся в их составе микроорганизмов. Выделяют красный, зеленый, желтый, пурпурный, оранжевый микробные комплексы, которые также способны вызывать поражения пародонта и другие заболевания полости рта.

Данные литературы позволяют утверждать, что при поражениях пародонта как для диагностики, так и для выбора адекватного этиопатогенетического лечения необходим микробиологический анализ. Успех и неуспех лечения часто зависят от того, удается ли идентифицировать возбудителя того или иного заболевания.

В начале истории микробиологии микроорганизмы дифференцировали только с помощью красителей: например, микроорганизмы, окрашивающиеся красителем по Граму (грамположительные) и неокрашивающиеся (грамотрицательные). Разработанные более 100 лет назад техники окрашивания используются для идентификации отдельных видов микроорганизмов и сегодня.

При определении микрофлоры полости рта в настоящее время применяется целый ряд классических методов. Так, для изучения качественного состава микрофлоры идентифицируют микроколонии и/или микробные тела при микроскопии. Количественную оценку микрофлоры проводят путем посева на селективные и неселективные среды с последующим подсчетом колоний микроорганизмов. При выборе метода лечения оценивают чувствительность микрофлоры к лекарственным препаратам.

Вместе с тем за последние полтора столетия были разработаны и внедрены в лабораторную практику десятки новых методов изучения микрофлоры, такие как проточная цитометрия, серологические исследования, анализ белков, сравнение ДНК-последовательностей и др. Однако многие из этих методов требуют приготовления бактериальных культур, что радикально удлиняет время анализа (например, проточная цитометрия), к тому же после культивирования невозможно определить начальную концентрацию микроорганизма в образце, соотношение погибших и живых клеток.

Биохимические методы, основанные на определении специфических для каждого типа клеток соединений (ферментов, витаминов, кислот и пр.), также нельзя считать стопроцентно пригодными для идентификации, поскольку многие микроорганизмы имеют сходные характеристики.

Сравнительно недавно для идентификации бактерий стали использовать масс-спектроскопию. Масс-спектрометр сортирует молекулы клетки по соотношению молекулярная масса/заряд и составляет характеристические наборы значений для каждого типа клеток. Этот метод также ограниченно годен для диагностики, поскольку клетки разных видов микроорганизмов часто обладают очень сходными молекулами, а количество этих молекул может сильно варьировать на разных стадиях клеточного цикла.

Высокоспецифичными методами определения микробных антигенов являются иммуноблоттинг и полимеразная цепная реакция, но и они имеют свои недостатки.

- Вернуться в оглавление раздела "Стоматология."

99. Исследование зубной бляшки

Состав зубной бляшки можно изучать с помощью бактериоскопических и бактериологических методов.

Перед снятием зубного налета необходимо провести тщательную гигиеническую обработку полости рта, используя различные механические методы и контролируя обработку определением индекса гигиены. С этой целью пользуются специальными красящими растворами, определяя зону зубного налета.

Методика взятия материала зубной бляшки

100. Кариес (от лат. сaries - гниение) зубов - это прогрессирующее разрушение твердых тканей зуба с образованием дефекта в виде полости. В основе кариеса лежит поражение эмали, дентина, цемента. В зависимости от степени поражения твёрдых тканей зуба выделяют следующие стадии развития болезни:

Кариес в стадии пятна. Появление пятна на зубе происходит незаметно для больного.

Поверхностный кариес - поражена эмаль, но дентин не затронут.

Средний кариес - поражена эмаль и периферическая часть дентина.

Глубокий кариес - поражение, охватившее глубокую часть дентина.

Кариес зубов относится к одному из самых распространенных заболеваний населения земного шара.

Зубной налет - это источник микробов, место ферментации углеводов и как следствие этого формирования органических кислот. Полисахариды мягкого зубного налета адсорбируют попадающую в ротовую полость сахарозу. В экспериментальных условиях показано, что даже если после приема сахара полоскать полость рта водой, то тем не менее содержание сахарозы увеличивается в зубном налете в 2,7 раза.

В настоящее время общепризнанно участие микробов в возникновении кариеса зубов. При этом ведущая роль отводится стрептококку мутанс (S.mutans). Данный вид стрептококка обнаруживается в зубных бляшках, в слюне, в испражнениях и в крови. S.mutans отличается от других стрептококков по морфологии колоний, способности ферментировать маннит, сорбит, ферментирует рамнозу, салицин и инулин, не образует перекиси водорода, даёт положительную реакцию Фогеса-Проскауэра, обладает выраженной способностью прилипать к гладкой поверхности в присутствии сахарозы.

Существует также несколько видов других кариесогенных стрептококков S.macacae, S.sobrinus, S.rattus, S.ferus, S.cricetus.

Изучение кариесогенной роли этих микробов выявило незначительное их количество у детей перед прорезыванием зубов и у взрослых беззубых людей, свидетельствующее о непосредственной связи микробов с эмалью зубов. Установлено, чтоS.mutans преимущественно находясь на поверхности эмали, формирует большую часть микробной флоры зубной бляшки. В то же время эти микробы обычно отсутствуют на поверхности неповрежденной эмали вне бляшки.

Одним из важнейших биологических свойств кариесогенных стрептококков является способность этих бактерий прикрепляться к гладким поверхностям и образовывать кислоту. Адгезия к зубам обеспечивает формирование кариесогенных бляшек этими микробами и это действие опосредовано синтезом глюкозных полимеров из сахарозы, присутствующей в пище.

Этот процесс обеспечивается наличием у микробов конститутивного фермента - глюкозилтрансферазы. Данный фермент расщепляет сахарозу на фруктозу и глюкозу, и обеспечивает превращение глюкозы в растворимый и нерастворимый глюкан. Таким образом, формирование бляшки включает два отдельных явления: прилипание бактерий к поверхности зуба и аггрегацию клеток, формирующих бактериальный матрикс.

Если стрептококки превалируют в полости рта, то количество лактобактерий в бляшке составляет примерно 1 % от общего количества микробов, находящихся в зубной бляшке. Установлено, что лактобактерии играют незначительную роль на начальных этапах адгезии микробов к эмали зуба и в формировании бляшки. Их роль резко возрастает в прогрессировании кариеса по мере увеличения степени выраженности кариозного поражения. Очевидно, эти микробы играют решающую роль в деструкции дентина после деформации эмали. Актиномицеты, видимо, участвуют в кариозных поражениях корней зубов у пожилых людей при обнажении корневого участка зуба.

Подчеркивая ведущую роль микробов в развитии кариеса зубов, в первую очередь стрептококков группы "мутанс", нельзя не отметить влияния на этот процесс внутренних системных факторов организма (наследственности, состояния иммунной и эндокринной системы). Известно, что независимо от уровня распространенности кариеса, в любых регионах встречается примерно 1% взрослых, у которых кариес не наблюдается. Это свидетельствует о существовании людей, резистентных к кариесу. Наряду с этим существуют люди, восприимчивые к кариесу, у которых интенсивность кариеса значительно превышает среднегрупповой уровень. Таким образом, устойчивость к кариесу - это состояние макроорганизма и его полости рта, определяющее резистентность эмали зубов к действию кариесогенных факторов.

Устойчивость к кариесу может определяться следующими факторами: составом и структурой эмали и других тканей зуба, специфическими и неспецифическими факторами защиты полости рта, особенностями диеты, количественными и качественными показателями состава слюны, свойствами зубного налета, а также наличием вредных привычек.

Для зубной эмали в норме характерно состояние динамического равновесия между протекающими постоянно процессами деминерализации и реминерализации. При кариесе деминерализация эмали происходит под действием молочной кислоты. Отмечено, что в молодом возрасте интенсивность поражения зубов кариесом более высока, чем в пожилом. Это связано с тем, что полноценная минерализация обеспечивает большую устойчивость эмали зуба к кислотам. Недостаточная же минерализация создает условия, обусловливающие быструю деминерализацию и появление кариеса. Наиболее предрасположенными к деминерализации являются участки зубов, где на поверхность выходят призмы.

Особенностью возрастных изменений эмали является ее уплотнение вследствие поступления микро- и макроэлементов и снижение вариабельности структуры благодаря уменьшению микропористости. Параллельно с этим происходит повышение твердости, уменьшение растворимости и проницаемости эмали.

Важную роль в устойчивости к кариесу зубов играют специфические факторы резистентности полости рта. Восприимчивость к кариесу зависит от функциональной активности слюнных желез.

Вместе с тем приходится учитывать, что иммунизация людей вакцинами, приготовленными из S.mutans сопряжена с определенным риском: во-первых, эти микробы содержат перекрестные антигены с тканями сердца, почек, скелетных мышц человека и животных, что может обусловить различные патологические реакции аутоиммунного характера; во-вторых, ввиду общности антигенов стрептококков группы "мутанс" с другими оральными стрептококками выработка антител к S.mutans может привести к нарушению микробного биоценоза в полости рта.

Таким образом, в развитии кариеса зубов ведущим фактором является микробный - представители стрептококков (S.mutans). Главное условие развития кариеса - формирование зубной бляшки, благодаря чему обусловливается местное деминерализующее действие микробной флоры, населяющей ее (продукция молочной кислоты). Существует связь между наличием S. mutans в полости рта и степенью кариозного поражения зуба. Развитию кариеса способствует поступление в полость рта углеводов, в особенности сахарозы. Это свидетельствует о влиянии диеты на проявление кариесогенных свойств микробов.

Очевидно, что в появлении и развитии кариеса зубов играет также значительную роль общее состояние организма, в особенности его иммунной и эндокринной систем.

Микробиологическое исследование материала из полости рта

3.1. Способы забора материала для исследования микрофлоры полости рта

Непосредственной причиной большинства заболеваний полости рта является резидентная микрофлора, ее воздействие на организм и роль микробных ассоциаций в развитии оппортунистических болезней. Из этого своеобразия патологического процесса вытекают и особенности методов исследования.

При диагностике заболеваний полости рта, вызванных патогенными микроорганизмами (дифтерийной палочкой, микобактериями, нейссериями, дрожжеподобными грибами рода Candida) используют традиционные методы: микроскопический, бактериологический, серологический, биологический, кожно-аллергические пробы.

Использование микробиологических методов при оппортунистических процессах (кариесе, пародонтите, афтозном стоматите и др.) направлено не на диагностику болезни, а на изучение этиологии и патогенеза этих весьма распространенных заболеваний и, соответственно, на рациональную их терапию.

При одонтогенных воспалительных процессах (периодонтитах, абсцессах, флегмонах и др.) эти методы могут быть использованы для контроля проводимого лечения, прогнозирования исхода болезни и определения чувствительности микробной ассоциации к антибиотикам.

В последнее время начинает преобладать мнение о возможной этиологической роли резидентной микрофлоры полости рта в развитии пародонтита, кариеса, афтозного стоматита, так как развивается патологический процесс именно в области усиленной колонизации бактерий (зубной налет или зубная бляшка). Многочисленные исследования по выявлению специфических возбудителей при этих заболеваниях не увенчались успехом.

При стоматологических заболеваниях в качестве исследуемого материала можно изучать зубную бляшку, ротовую жидкость, содержимое десневого желобка или патологического десневого кармана, материал из кариозной полости, корневых каналов, гранулемы, гнойное отделяемое, пунктаты, соскобы и мазки-отпечатки со слизистой оболочки или элементов поражения.

В практической стоматологии чаще исследуют мазки-отпечатки со слизистой оболочки, гнойное отделяемое, пунктаты. Учитывая, что полость рта омывается ротовой жидкостью, содержащей определенные виды бактерий, при заборе материала из различных участков следует исключить попадание в пробу слюны. Для этого исследуемую область обкладывают стерильными ватными тампонами. Перед забором материала нельзя обрабатывать полость рта бактерицидными препаратами, а также необходимо выяснить у больного, не принимал ли он в течение последних 3-х недель антибиотики.

Учитывая, что большая часть резидентов полости рта являются облигатными анаэробами, при взятии материала и его транспортировке необходимо соблюдать условия анаэробиоза.

Исследование зубной бляшки

Три аспекта имеют значение при исследовании зубной бляшки:

а) методика забора бляшки с поверхности зуба;

б) методика дисперсии материала бляшки;

в) методика микроскопического подсчета и подсчета выживаемости микробов при культивировании.

Читайте также: