Определение щелочноустойчивого гемоглобина - методика

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 05.11.2024

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

Напоминаем вам, что самостоятельная интерпретация результатов недопустима, приведенная ниже информация носит исключительно справочный характер

Гемоглобин: показания к назначению, правила подготовки к сдаче анализа, расшифровка результатов и показатели нормы.

Показание к назначению исследования

Гемоглобин – сложный белок, основной компонент эритроцитов, переносящий кислород от легких ко всем тканям организма и участвующий в выведении углекислого газа из клеток организма.

Молекула гемоглобина состоит из гема (небелковой части) и глобина (белковой части, которая содержит в своей молекуле четыре полипептидные цепи: две альфа-цепи и две бета-цепи). К каждой из четырех глобиновых субъединиц прикреплена группа гема с атомом железа.

В норме в крови можно обнаружить несколько форм гемоглобина, отличающихся друг от друга белковой частью (количественным или качественным составом аминокислот, входящих в состав глобина):

эмбриональный (встречается у плода до 2 месяцев внутриутробного развития);
фетальный (образуется со 2 месяца внутриутробного развития, циркулирует до рождения, разрушается в первую неделю жизни);
зрелый гемоглобин.

HbО2 – соединение с кислородом (оксигемоглобин);
HbСО2 – гемоглобин с углекислым газом (карбогемоглобин);
HbMet – гемоглобин с окисленным железом (метгемоглобин);
HbCO – карбоксигемоглобин, образующийся при отравлении угарным газом;
HbA1С – гликозилированный гемоглобин при сахарном диабете.

Наряду с нормальными формами гемоглобина могут существовать мутантные или патологические. Известно более 300 форм патологических гемоглобинов.

Наиболее часто находят:

HbS – гемоглобин при серповидно-клеточной анемии;
гемоглобин Kempsey при полицитемии;
гемоглобин Hammersmith и др.

Срок жизни эритроцитов, сухое вещество которых на 90-95% состоит из гемоглобина, составляет 110-120 дней. Разрушение эритроцитов происходит в селезенке, небольшая часть гемоглобина распадается в красном костном мозге и звездчатых клетках печени.

Определение концентрации гемоглобина в рамках исследования клинического анализа крови - один из важнейших диагностических методов. Расчетный показатель, отражающий среднее содержание гемоглобина в 1 клетке (эритроците) используется для дифференциальной диагностики анемий.

Концентрацию гемоглобина определяют в рамках профилактического, диспансерного наблюдения при первичном обследовании с целью выявления заболеваний, при госпитализации в стационары терапевтического и хирургического профилей.

Определение количественного содержания гемоглобина используется в комплексе с другими гематологическими показателями (величиной гематокрита, количеством эритроцитов, эритроцитарными индексами) для диагностики ряда патологических состояний: анемии, эритремии и вторичных эритроцитозов, для оценки степени дегидратации организма, определения тяжести кровопотери при геморрагических состояниях, оценки эффективности гемотрансфузий в процессе терапии, определения тяжести состояния пациента при воспалительных, инфекционных заболеваниях, а также для мониторинга проводимой терапии и течения различных заболеваний.

Подготовка к процедуре

Кровь рекомендуется сдавать утром с 8 до 11 часов, натощак (не менее 8 часов голода, пить воду можно в обычном режиме).
Сообщите врачу о принимаемых вами лекарственных препаратах.
Исключите прием алкоголя накануне исследования, не курите в течение 1 часа до исследования.
Исключите физические и эмоциональные перегрузки накануне исследования.
После прихода в лабораторию отдохните 10-20 минут перед взятием крови.
Нежелательно сдавать кровь для лабораторного исследования вскоре после физиотерапевтических процедур, инструментальных обследований и других медицинских вмешательств.
При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях: в одной лаборатории (тем же методом), примерно в одинаковое время суток и т. п.

Срок исполнения

1 рабочий день, исключая день взятия биоматериала.

Что может повлиять на результат

В случае несоблюдения правил подготовки полученный результат может быть некорректным.

Уровень гемоглобина может быть повышенным после длительного пребывания в высокогорье. Пониженный уровень гемоглобина регистрируется у беременных, вегетарианцев, после нескольких подряд эпизодов сдачи крови.

Сдать анализ крови на гемоглобин можно в ближайшем медицинском офисе ИНВИТРО. Список офисов, где принимается биоматериал для лабораторного исследования, представлен в разделе «Адреса».

Интерпретация результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т. д.

Исследуемый материал: цельная кровь (с ЭДТА).

Единицы измерения: г/дл.

Альтернативные единицы измерения: г/л.

Коэффициент пересчета: г/л х 0,1 ==> г/дл.

Определение концентрации гемоглобина в крови проводят в ходе исследования клинического анализа крови.

Нормальные показатели

Дети

Возраст	Показатель гемоглобина, г/дл
1 день - 14 дней	13,4 - 19,8
14 дней - 4,3 недели	10,7 - 17,1
4,3 недели - 8,6 недель	9,4 - 13,0
8,6 недель - 4 месяца	10,3 - 14,1
4 месяца - 6 месяцев	11,1 - 14,1
6 месяцев - 9 месяцев	11,4 - 14,0
9 месяцев-12 месяцев	11,3 - 14,1
12 месяцев – 5 лет	11,0 - 14,0
5 лет - 10 лет	11,5 - 14,5
10 лет - 12 лет	12,0 - 15,0

Возраст	Показатель гемоглобина, г/дл
Девушки	Юноши
12 лет - 15 лет	11,5 - 15,0	12,0 - 16,0
15 лет - 18 лет	11,7 - 15,3	11,7 - 16,6

Взрослые

Возраст	Женщины	Мужчины
18 лет - 45 лет	11,7 - 15,5	13,2 - 17,3
45 лет - 65 лет	11,7 - 16,0	13,1 - 17,2
> 65 лет	11,7-16,1	12,6-17,4

Расшифровка показателей

Гемоглобин у новорожденных выше, чем у взрослых. В течение первого года жизни происходит его постепенное снижение, а затем уровень гемоглобина опять возрастает. В норме показатель гемоглобина у женщин ниже, чем у мужчин.

Что значат пониженные результаты

Снижение гемоглобина может свидетельствовать об анемии, развивающейся в результате различных причин (острых и хронических кровопотерь; недостатка фолиевой кислоты, витамина В12, железа; неполноценного питания; поражения костного мозга с угнетением его функции; нарушения регуляции образования эритроцитов при уменьшении продукции гормона, стимулирующего рост и размножение эритроцитов; повышенного разрушения эритроцитов под воздействием различных причин или генетических дефектов; хронических воспалительных, инфекционных заболеваний).
Еще одна причина падения уровня гемоглобина - гипергидратация (избыточное содержание воды в организме).

Что значат повышенные результаты

Повышение уровня гемоглобина регистрируется при обезвоживании, вызванном острой диареей, многократной рвотой, повышенным потоотделением, диабетом, обширными ожогами.
Физиологические эритроцитозы отмечаются у жителей высокогорья, летчиков, спортсменов.
Симптоматические эритроцитозы диагностируются при дыхательной и/или сердечно-сосудистой недостаточности, поликистозе почек, а также у курильщиков.
Для эритремии (разновидность хронического лейкоза), онкологических заболеваний также характерно снижение уровня гемоглобина.
К снижению гемоглобина приводит передозировка или неправильное применение препаратов рекомбинантного эритропоэтина.

Дополнительное обследование при отклонении от нормы

При отклонении от нормы концентрации гемоглобина в крови может быть назначено дополнительное обследование.

Определение щелочноустойчивого гемоглобина - методика

Электрофорез гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе - методика, показатели нормы

Электрофорез на уксуснокислой целлюлозе составляет быстрый и чувствительный метод. Отделяет как физиологические, так и патологические фракции, даже если они находятся в очень малой концентрации.

Материал для электрофореза гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе: буфер трис-ЭДТА-борная кислота [трис (гидроксиметиламинометан) 14,50; 1,50 г ЭДТА (келатон 2); 0,90 г. борной кислоты; до 1000 мл дистилированной воды; 2% раствор цианида натрия; ленты уксуснокислой целлюлозы (сепрафор III, целаграмм, целлогель и пр.)].

Методы для электрофореза гемоглобина на уксуснокислой целлюлозе

Ленты ацетата погрузить в буфер, затем протампонировать между двумя кусками фильтровальной бумаги и растянуть на опорную пластинку аппарата для электрофореза. Рама погружается в ванну для электрофореза. Для лучшего соединения с буфером на края лент ацетата наложить полоску фильтровальной бумаги Ватмана.

Спустя 10 минут после погружения в ванну с помощью капиллярной трубки нанести на отрицательный полюс каждой ленты образец гемоглобина, в виде очень узенькой полоски. Когда ленты широкие, можно нанести несколько образцов. Гемоглобин наносится в виде цианметгемоглобина (5—6 капель раствора гемоглобина на 1 каплю цианида). Подвергнуть двухчасовой миграции, при напряжении 200 в и ампераже 0,5 ма/см.

При таких условиях работы возможно отделить нормальные фракции гемоглобин — А1 и А2, равно как и все патологические фракции гемоглобина, иной электрической зарядки, чем нормальный гемоглобин.

Элюцию фракций проводить, без окраски, в буфере трис. Что касается гемоглобина А2 и контрольного препарата элюцию делать в 3 мл буфера, в то время как для гемоглобина А1 использовать 15 мл буфера. В отношение патологи-гических фракций объем вещества для элюции определить в зависимости от количества аномального гемоглобина.

Через 30 мин. после элюции, прочитать результат, с помощью Спеколя или спектрофотометра, при длине волны 415 нм. При расчете учитывать объемы, использованные для элюции, в том смысле что полученный, в отношение гемоглобина А1 результат следует помножить на 5.

Сумма экстинкций, составляющая 100%, экстинкция каждой фракции деленная на общую экстинкцию, дает, в процентном отношении, значение соответствующей фракции. По этому методу нормальные значения для гемоглобина А2 колеблятся между 1,5—2,5%.

Если по какой-либо частной причине ленты следует окрасить то, после промывания, на лентах помимо нормальной и патологических фракций появляются две белковые негемоглобинные фракции, располагающиеся позади гамоглобина А2, представляющие собой угольные ангидразы b и c.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Экспресс-тест для качественного обнаружения гемоглобина (Hb) и гемоглобин-гаптоглобинового комплекса (Hb/Hp) в кале, используемый для скрининга предраковых заболеваний и рака толстой кишки.

Синонимы русские

Иммунохимический тест кала на скрытую кровь
Анализ на гемоглобин и гемоглобин-гаптоглобиновый комплекс в кале

Синонимы английские

Hb and Hb/Hp Stool Test
Fecal Immunochemical Test

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование проводится перед выполнением ректороманоскопии и других диагностических манипуляций в области кишечника и желудка.

Общая информация об исследовании

Рак толстой кишки занимает второе место в структуре женской онкологической заболеваемости, уступая лишь раку молочной железы, и третье место в структуре мужской заболеваемости после рака предстательной железы и легкого в России. Для скрининга предраковых заболеваний и рака толстой кишки могут быть использованы различные методы, в том числе:

методы прямой визуализации: колоноскопия, гибкая сигмоидоскопия;
методы непрямой визуализации: компьютерная томография (КТ), магнитно-резонансная томография (МРТ), капсульная эндоскопия, бариевая клизма с двойным контрастированием;
исследование кала: анализ кала на скрытую кровь (гваяковая проба и иммунохимические тесты), тест на ДНК в кале.

Каждый из указанных методов имеет свои преимущества и недостатки. Так, например, методы визуализации требуют особой подготовки кишечника, часто дискомфортной и потенциально опасной для пациента. По сравнению с ними анализ кала на скрытую кровь – безболезненный и гораздо более удобный для пациента метод. С другой стороны, колоноскопию достаточно проводить один раз в 10 лет, тогда как анализ кала необходимо сдавать каждый год. В целом можно сказать, что выбор скринингового теста определяется предпочтениями пациента, возможностью медицинского центра и осведомленностью врача о новых методах. Одним из таких новых методов скрининга рака толстой кишки является анализ на скрытую кровь ColonView. Этот тест обладает рядом преимуществ по сравнению с традиционной гваяковой пробой.

Гваяковая проба на скрытую кровь – это самый распространенный метод скрининга рака толстой кишки на сегодняшний день. Она позволяет выявлять гемоглобин, основываясь на псевдопероксидазной активности гема в составе гемоглобина. Таким образом, гваяковая проба определяет кровь по наличию гема. Существенным недостатком метода являются:

низкая специфичность и необходимость соблюдения диеты; при употреблении продуктов, содержащих гем или другие компоненты, проявляющие пероксидазную активность (красное мясо, брокколи, хрен, репа, редис и др.), результат анализа может быть ложноположительным; этот простой тест, таким образом, требует достаточно сложной подготовки;
низкая чувствительность (20-50 %); из-за низкой чувствительности однократного анализа, как правило, рекомендуется исследовать 3 образца кала.

Исследование ColonView – это один из иммунохимических методов определения скрытой крови в кале (FIT, от англ. fecal immunochemical test). В отличие от традиционной гваяковой пробы, в исследованиях FIT используются специфические к глобину человека антитела. Можно, таким образом, сказать, что FIT определяют кровь по наличию глобина. Благодаря этому иммунохимические тесты на скрытую кровь более специфичны, чем традиционная гваяковая проба, и не требуют соблюдения диеты при подготовке к тесту

Особенностью исследование ColonView, отличающей его от всех других FIT, является использование антител как к гемоглобину, так и к гемоглобин-гаптоглобиновому комплексу Hb/Hp. При разрушении эритроцитов гемоглобин или его белковые компоненты (альфа- и бета-глобины) связываются со специальным белком гаптоглобином, который препятствует их дальнейшему окислению. Комплекс Hb/Hp более устойчив к воздействию кислоты и протеолитических ферментов при пассаже по желудочно-кишечному тракту, что обуславливает еще большую чувствительность исследования ColonView.

Благодаря улучшенной чувствительности исследования ColonView для анализа может быть достаточно одного или двух образцов кала. Следует, однако, отметить, что 100-процентная чувствительность будет достигнута при анализе трех образцов кала.

Как и другие исследования кала на скрытую кровь, ColonView следует повторять 1 раз в год. Некоторые врачи рекомендуют своим пациентам комбинацию скрининговых тестов, например гибкую сигмоидоскопию каждые 5 лет в сочетании с одним из иммунохимических исследований кала на скрытую кровь (ColonView) каждые 3 года.

Следует отметить некоторые ограничения исследования ColonView:

несмотря на то что некоторыми исследователями были предприняты попытки использовать этот тест для диагностики кровотечения из тонкой кишки, в настоящее время ColonView одобрен только для определения скрытого кровотечения из нижних отделов ЖКТ;
тест предназначен для скрининга пациентов из группы среднестатистического риска рака толстой кишки, он не заменяет и не изменяет алгоритм диагностики рака толстой кишки у пациентов из группы высокого риска.

Некоторые особенности интерпретации результата исследования ColonView:

положительный результат анализа не всегда указывает на наличие предраковых заболеваний или рака толстой кишки; при других источниках кровотечения (заболевания: геморроидальные узлы, ангиодисплазия, анальная трещина; применение лекарственных препаратов: аспирин, варфарин, любые средства для использования per rectum; менструальное кровотечение) результат анализа также может быть положительным (ложноположительным);
отрицательный результат анализа не позволяет полностью исключить предраковые заболевания или рак толстой кишки; это связано с тем, что некоторые новообразования кровоточат не постоянно, а периодически, а также с тем, что кровь может быть неравномерно распределена в образце кала.

Учитывая эти особенности, результат анализа следует интерпретировать с учетом дополнительных клинических, лабораторных и инструментальных данных.

Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет определить процентное содержание основных изоформ гемоглобина и провести скрининг гемоглобинопатий. В норме в крови взрослого человека не менее 96,5 % гемоглобина представлено изоформой HbA, которая состоит из двух пар полипептидных цепей (глобинов): 2α и 2β, каждая из которых связана с гемом. Гемоглобинопатии связаны с наличием аномального варианта гемоглобина. Посредством электрофореза гемоглобина можно проводить скрининг состояний, связанных со структурными аномалиями гемоглобина. При этом метод не позволяет установить тип и характер гемоглобинопатии.

Serum Hemoglobin Electrophoresis.

Электрофорез и денситометрия.

Единицы измерения

Мг/дл (миллиграмм на децилитр).

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет определить процентное содержание основных изоформ гемоглобина и провести скрининг гемоглобинопатий. В норме в крови взрослого человека не менее 96,5 % гемоглобина представлено изоформой HbA, которая состоит из двух пар полипептидных цепей (глобинов) - 2α и 2β, - каждая из которых связана с гемом. HbA обеспечивает адекватный газообмен и тканевую оксигенацию. Фракция HbA2 - второстепенная форма гемоглобина, имеет формулу 2α2δ. Также у взрослого допустимо наличие следовых количеств фетального гемоглобина HbF (2α2γ), который является преобладающей фракцией в течение внутриутробного периода. В течение первых 6 месяцев жизни HbF замещается HbA.

Нарушения структуры гемоглобина обычно разделяют на две группы: гемоглобинопатии и талассемии, хотя талассемии являются формой гемоглобинопатии. Талассемии представляют собой нарушения синтеза α-, β- или обеих цепей гемоглобина. Также могут отмечаться нарушения синтеза δ-, γ- цепей. Большинство вариантов α- и β-талассемий сопровождается изменением уровня HbF и HbA₂, поэтому определение этих изоформ может быть использовано для скрининга этих состояний.

Остальные гемоглобинопатии связаны с наличием аномального варианта гемоглобина. Наиболее распространённые и клинически значимые аномальные варианты гемоглобина: S, D, E, C. Варианты HbS и HbD - патологические формы гемоглобина, которые обладают идентичной миграцией в щелочном геле и являются результатом точечных мутаций гена, кодирующего β-глобин. Варианты Е и С при данном методе мигрируют в составе фракции HbA₂, при их наличии фракция HbA2 достигает более 25 %. Наибольшее клиническое значение представляет HbS-вариант, который приводит к серповидноклеточной анемии.

Электрофорез гемоглобина в щелочном геле позволяет проводить скрининг состояний, связанных со структурными аномалиями гемоглобина. При этом метод не позволяет установить тип и характер гемоглобинопатии.

Электрофорез является чувствительным методом, с помощью которого можно исключить гемоглобинопатии либо определить тактику дальнейшего обследования для установления точного диагноза заболевания. Метод характеризуется высокой внутрипостановочной (SD Референсные значения

Отбор, приготовление и хранение проб крови при гемоглобинопатиях

Методы, применяемые при диагностировании гемоглобинопатии преследуют, с одной стороны, количественное определение нормального гемоглобина А, А2, Ф — что весьма важно для постановки диагноза таллассемического синдрома, а с другой — выявление возможного наличия аномальных гемоглобин.

Структурные сдвиги в аномальных гемоглсбинах выражаются изменением физико-химических и физиологических свойств по сравнению с нормальным гемоглобином, что, в частности, выражается изменением электрической зарядки, растворимости, молекулярной устойчивости, спектра поглощения, сродства к кислороду, тенденции к окислению.

В соответствии с этими измененными свойствами были разработаны и проведены в жизнь методы, нацеленные на одно или несколько из этих свойств, делающие возможным выявление аномалии гемоглобина. По этим методам исследование проводится на эритроцитах или растворе гемоглобина, получаемого от расплавления данных клеток.

Отбор крови делать на противосвертывающем веществе, преимущественно на 3,8% растворе лимоннокислого натрия из расчета 2 мл противосвертывающего вещества на 8 мл крови. Обработку можно провести непосредственно или сохранить материал в холодильнике, в течение 1—3 дней, что не влияет на результат исследования. Рекомендуется хранить в присутствии плазмы.

Процентрифугировать кровь, удалить плазму, трижды промыть эритроциты солевым изотоническим раствором, с таким расчетом, чтобы отношение между объемом солевого раствора и клетками равнялся 4/1. Расплавление осуществляется с помощью дистилированной воды, в следующих условиях: на один объем промытых гематий, один объем дистилированной воды; взболтать, затем добавить объема хлороформа. Снова энергично взболтать и проценттрифугировать 15 мин. при 3000 об./мин.

После того раствор гемоглобина перелить в пробирку, которую можно сохранить в холодильнике 2—3 недели, при температуре + 4°С. В рефрижераторе препарат сохраняется даже несколько лет.

Приготовленный таким образом раствор гемоглобина применяется для: электрофореза гемоглобина, определения щелочно-устойчивого гемоглобина, хроматографирования. В отдельных случаях тот же гемолизат может послужить для фингерпринта pi исследования аминокислот.

Для лабораторного исследования, в котором используются кровяные клетки, условия отбора одинаковы.

Лабораторные исследования гемоглобина делятся на две группы:
а) текущие исследования для диагностических целей и
б) специальные исследования, предназначенные определению структуры данного гемоглобина.

Первая группа исследований способствует постановке диагноза талласемических синдромов, а из категории структурных гемоглобинопатии — гемоглобиноза S. В отношение всех остальных структурных гемоглобинопатии это исследование приводит лишь к общей формулировке гемоглобинопатии, с аномальным гемоглобином. Определение вида аномального гемоглобина требует специальных исследовандй, которые превышают возможности большинства лабораторий.

Читайте также: