Сыворотка для диагностики сифилиса для рмп

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A26.06.082.001.01 "Определение антител к бледной трепонеме (Treponema pallidum) в нетрепонемных тестах (RPR, РМП) в крови, качественное исследование"

Биоматериал: Сыворотка крови

Срок выполнения (в лаборатории): 1 р.д. *

Описание

Сифилис - передающееся половым путем заболевание, которое вызывает бледная спирохета (Treponema pallidum). Спирохеты представляют собой тонкие, спирально завитые бактерии длиной 3-500 мкм, подвижны, в большинстве своем грамотрицательны. Они представлены комменсалами или паразитическими видами. Для клинической практики среди спирохет наибольшее значение имеют Treponema pallidum - у человека вызывает сифилис и Borrelia burgdorferi - этиологический фактор системного клещевого боррелиоза или болезни Лайма.

Заболевание начинается с появления безболезненной язвы в месте внедрения возбудителя (твердого шанкра) и регионарного лимфаденита. Через некоторое время инфекция становится генерализованной: развивается вторичный, а затем третичный сифилис.

Показания к назначению

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки к исследованию не требуется. Взятие крови проводится натощак или не ранее, чем через 4 часа после необильного приема пищи. Допустимо пить чистую не минеральную и не газированную воду. Чай, кофе, сок запрещаются.

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

Результат исследования — качественный.

Референсные значения: не обнаружено.

Реакция микропреципитации (РМП) позволяет выявить антитела к кардиолипиновому антигену трепонемы. РМП при изолированном применении является не диагностическим, а отборочным тестом, поэтому на основании ее позитивности диагноз сифилиса не устанавливается, а пациенту проводят диагностические тесты (РСК, ИФА). С помощью РМП обследуют лиц, подлежащих периодическим медицинским осмотрам на венерические болезни, больных соматическими заболеваниями и др.

РМП бывает положительной при первичном сифилисе в 59-87 % случаев, вторичном – 100%, позднем латентном – 79-91%, третичном – 37-94%. РМП обычно является отрицательной в первые 7-10 дней после появления твердого шанкра.

Чтобы дифференцировать врожденный сифилис от пассивного носительства материнской инфекции, новорожденным необходимо провести серию исследований с определением титра антител: подъем титра в течение 6-ти месяцев после рождения свидетельствует о врожденном сифилисе, в то время как при пассивном носительстве антитела исчезают к третьему месяцу.

При оценке результатов РМП у детей грудного возраста с врожденным сифилисом необходимо помнить о феномене прозоны. Сущность данного феномена состоит в том, что для агглютинации антигенов и антител в данных реакциях необходимо, чтобы антигены и антитела находились в крови в соответствующих количествах. Когда количество антител значительно превышает количество антигенов, агглютинации не происходит. У некоторых детей грудного возраста с врожденным сифилисом уровни антител в сыворотке настолько велики, что в неразбавленной сыворотке не происходит агглютинации антител и нетрепонемных антигенов, используемых для диагностики сифилиса (РМП нереактивна). Поэтому у детей, обследуемых с целью диагностики врожденного сифилиса, может иметь место феномен прозоны.

Ложноположительная РМП может быть:

при ревматических заболеваниях (СКВ, ревматоидный артрит, склеродермия);
инфекциях (мононуклеоз, малярия, микоплазменная пневмония, активный туберкулез, скарлатина, бруцеллез, лептоспироз, корь, эпидемический паротит, венерическая лимфогранулема, ветряная оспа, трипаносомозы, проказа, хламидиоз);
беременности (редко);
в старческом возрасте (около 10 % людей в возрасте старше 70 лет могут иметь ложноположительную МР);
хроническом лимфоцитарном тиреоидите, гемобластозах, приеме некоторых гипотензивных средств, при наследственной или индивидуальной особенностях.

Где сдать анализ?

Адреса медицинских центров, в которых можно заказать исследование, уточняйте по телефону 8-800-100-363-0
Все медицинские центры СИТИЛАБ в г. Москва >>

Код	Наименование	Срок	Цена
11-10-001	Общий анализ крови (CBC/Diff - 5 фракций лейкоцитов)	от 1 р.д.	370.00 р.
23-12-001	Глюкоза	от 1 р.д.	260.00 р.
41-20-001	ВИЧ-Комбо (HIV): Ат к вирусу иммунодефицита человека 1, 2 + антиген	от 1 р.д.	480.00 р.
42-20-010	Антиген s-вируса гепатита В (HВsAg)	от 1 р.д.	380.00 р.
42-20-020	Ат к вирусу гепатита С (анти-HCV, суммарные)	от 1 р.д.	560.00 р.

* На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории.
Приведенная информация носит справочный характер и не является публичной офертой. Для получения актуальной информации обратитесь в медицинский центр Исполнителя или call-центр.

АНТИГЕН КАРДИОЛИПИНОВЫЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ МИКРОПРЕЦИПИТАЦИИ

(Сифилис-АгКЛ-РМП)

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор применяется при диагностике сифилиса для исследования плазмы или инактивированной сыворотки в реакции микропреципитации (РМП).

Набор рассчитан на проведение 1000 определений.

ПРИНЦИП МЕТОДА

В антигенных структурах Treponema pallidum имеется липопротеиновый антиген, в ответ на который в организме больного формируются "реагины", представляющие собой смесь антител классов M и G. Реагины появляются в сыворотке нелеченных больных через 2-3 недели, а в спинно-мозговой жидкости через 4-8 недель после заражения. Антигенный комплекс, возникающий в спиртовом растворе кардиолипина, лецитина и холестерина (АгКЛ), способен связываться с реагинами, что и регистрируется в реакции микропреципитации (выпадение хлопьев разной величины).

Реагент 1 – антиген кардиолипиновый (АгКЛ) - раствор в спирте этиловом абсолютированном трех высокоочищенных липидов: кардиолипина - 0,03 %; лецитина - 0,27 % и холестерина - 0,9 %; 10 ампул (по 2,0 мл).

Реагент 2 – раствор холин-хлорида в 0,9 % растворе натрия хлористого; 2 флакона (по 5,0 мл).

Реакцию проводят с плазмой или инактивированной сывороткой обследуемых лиц. Для постановки реакции кровь берут из пальца. Перед взятием крови в пробирку вносят 5,0%-ный раствор натрия лимоннокислого, взятого капилляром аппарата Панченкова до метки “50”. Затем тем же капилляром набирают кровь дважды до отметки “0” и вносят в ту же пробирку, перемешивают с раствором натрия лимоннокислого и центрифугируют (если необходимо вскоре после взятия крови приступить к исследованию) при 1000-2000 об/мин в течение 15 минут.

Полученную плазму используют для проведения реакции микропреципитации. При постановке реакции с сывороткой кровь берут из вены в объеме 5-10 мл, отделяют ее от сгустка, инактивируют при температуре (56+1) 0 С в течение 30 мин и используют в реакции.

Пробы, предназначенные для исследования, могут храниться до 5 дней при температуре (6+2) о С или не более 6 недель при минус 20 о С.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ

Потенциальный риск применения набора – класс 1.

Меры предосторожности – соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР” (Москва, 1981 г.).

При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.

· Центрифуга лабораторная, обеспечивающая угловую скорость 1000-2000 об/мин;

· термостат или водяная баня, обеспечивающие температуру прогревания (37+1) 0 С или (56+1) 0 С, соответственно;

· пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02 и 5,0 мл;

· пробирки вместимостью 10 мл;

· вода очищенная (дистиллированная или деионизированная);

· 0,9% раствор натрия хлористого;

· стекло или пластина из плексигласа;

· перчатки резиновые или пластиковые.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Приготовление эмульсии АгКЛ

Перед приготовлением эмульсии проверить прозрачность ампулированного антигена. При выпадении кристаллов холестерина их растворить нагреванием ампул в термостате или водяной бане при температуре (37+1) 0 С или (56+1) 0 С, соответственно.

К определенному объему 0,9 % раствора натрия хлористого добавить равный объем антигена кардиолипинового. Смесь перемешать и оставить при комнатной температуре на 30 мин, после чего центрифугировать при 1000-2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость слить. К осадку добавить 3,5 объема (по отношению к взятому антигену) 10 % раствора холин-хлорида на 0,9 % растворе натрия хлористого.

Хранить антигенную эмульсию в плотно закрытой стеклянной емкости без доступа света не более 6 сут. при температуре (4+2) 0 С.

Допускается хранение антигенной эмульсии при комнатной температуре в течение 14 сут. при условии внесения в нее мертиолята натрия до конечной концентрации 0,01 %.

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

На обычное стекло или углубление пластинки из плексигласа наносят 3 капли нативной плазмы или инактивированной сыворотки, затем добавляют 1 каплю антигенной эмульсии. Ингредиенты перемешивают покачиванием пластины в течение 5 мин, затем в каждую лунку добавляют по три капли 0,9 % раствора натрия хлористого, вновь перемешивают покачиванием пластины и оставляют при комнатной температуре на 5 мин (оптимальный температурный режим реакции 23-28 0 С).

Учет результатов реакции

Результаты реакции учитываются при освещении не ниже 300 люкс. При исследовании плазмы или инактивированной сыворотки от больных сифилисом наблюдается положительная реакция в виде выпадения хлопьев разной величины, а с плазмой или инактивированной сывороткой от здоровых лиц наблюдается отрицательная реакция в виде опалесценции.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте при температуре от 10 до 25 о С в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.

Срок годности набора – 1 год.

АНТИГЕН КАРДИОЛИПИНОВЫЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ МИКРОПРЕЦИПИТАЦИИ

(Сифилис-АгКЛ-РМП)

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор рассчитан на проведение 1000 определений.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Реагент 2 – раствор холин-хлорида в 0,9 % растворе натрия хлористого; 2 флакона (по 5,0 мл).

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ

Потенциальный риск применения набора – класс 1.

· Центрифуга лабораторная, обеспечивающая угловую скорость 1000-2000 об/мин;

· термостат или водяная баня, обеспечивающие температуру прогревания (37+1) 0 С или (56+1) 0 С, соответственно;

· пипетки, позволяющие отбирать объемы жидкости 0,02 и 5,0 мл;

· пробирки вместимостью 10 мл;

· вода очищенная (дистиллированная или деионизированная);

· 0,9% раствор натрия хлористого;

· стекло или пластина из плексигласа;

· перчатки резиновые или пластиковые.

ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

Приготовление эмульсии АгКЛ

ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

Учет результатов реакции

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Срок годности набора – 1 год.

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — бледная трепонема. При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после лечения раннего сифилиса, через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит признаком рецидива сифилиса или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления твердого шанкра. Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, вторичным и рецидивным сифилисом. Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с третичным активным сифилисом, в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 19. Возбудитель сифилиса при многократном увеличении.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

Читайте также: