Тест на вич elisa
О ВИЧ
ВИЧ - это вирус, который атакует иммунную систему. Если он не лечится, он может развиться в СПИД, что является продолжительной и часто смертельной болезнью. ВИЧ распространяется через вагинальный, оральный или анальный сексуальный контакт. Он также распространяется через кровь, продукты крови, употребление инъекционных наркотиков и грудное молоко.
ИФА и Вестерн-блот-тесты
Что такое тест ELISA / Вестерн-блот?
Проводится серия скрининга крови для тестирования на ВИЧ. Фермент-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA), также известный как иммуноферментный анализ (EIA), является первым тестом, который ваш поставщик медицинских услуг будет заказывать для скрининга на ВИЧ. ELISA, как и тест Вестерн-блоттинга, обнаруживает антитела к ВИЧ в крови. Антитела - это белки, которые ваша иммунная система производит в ответ на присутствие посторонних веществ, таких как вирусы. Если вы испытываете положительный результат на ВИЧ на тесте ELISA, ваш провайдер будет заказывать тест Вестерн-блоттинга для подтверждения ВИЧ-инфекции.
Когда этот тест рекомендуется?
Тесты ELISA и Вестерн-блоттинга рекомендуются, если вы подвергаетесь воздействию ВИЧ или подвергаетесь риску заражения ВИЧ. Те, кто подвержен риску заражения ВИЧ, включают:
- людей, которые употребляют внутривенные (IV) наркотики
- людей, которые имеют незащищенный секс, особенно с тем, у кого ВИЧ или неизвестный ВИЧ-статус
- люди, которые имели заболевания, передающиеся половым путем (ЗППП )
- люди, у которых были переливания крови или инъекции факторов свертывания крови до 1985 года
Вы можете сделать тест, если вы не уверены в своем ВИЧ-статусе, даже если вы не в группе высокого риска. Это хорошая идея регулярно проходить тестирование, если вы участвуете в рискованном поведении, например, при употреблении наркотиков или незащищенном сексе.
Как подготовиться к тесту?
Вам не нужно ничего делать, чтобы подготовиться к тесту ELISA или Вестерн-блоттинга. Для получения образца крови требуется очень мало времени, но для получения результатов может потребоваться несколько дней, а в некоторых случаях - недели. Обязательно сообщите своему врачу, а также лаборанту, если у вас есть страх перед иглой или слабый при виде крови. Они могут принять соответствующие меры предосторожности, чтобы обеспечить вашу безопасность в случае, если вы упали в обморок.
Что происходит во время теста?
Перед проведением этих тестов вам, вероятно, потребуется подписать форму согласия. Тестирование и процедура должны быть объяснены вам. Процедура получения образца вашей крови одинакова для обоих тестов. Медицинский работник:
- очистит участок кожи, где они планируют нарисовать вашу кровь раствором для уменьшения количества бактерий или микробов на поверхности кожи над веной, которую они намереваются получить для образца крови
- . жгут или эластичную ленту вокруг вашей руки, чтобы вены набухали кровью
- , поместите иглу в одну из ваших вен и нарисуйте небольшой образец крови в трубку
- , удалите иглу и нанесите повязку Вас могут попросить поднять или сгибать руку, чтобы уменьшить кровоток после теста, чтобы уменьшить дальнейшее кровотечение.
Подача образца крови не является болезненной, хотя вы можете почувствовать жало или прикосновение, когда игла входит в вашу вену. После процедуры ваша рука может слегка пульсировать.
Образец крови будет отправлен в лабораторию для анализа. Для теста ELISA техник лаборатории добавляет образец в чашку Петри, содержащую антиген ВИЧ. Антигеном является любое чужеродное вещество, такое как вирус, что заставляет вашу иммунную систему реагировать.
Если ваша кровь содержит антитела к ВИЧ, она будет связываться с антигеном. Техник проверит это, добавив фермент, который помогает ускорить химические реакции, в чашку Петри. После этого они будут наблюдать, как реагируют ваша кровь и антиген. Если содержимое чашки меняет цвет, у вас может быть ВИЧ.
Общий процесс теста вестерн-блоттинга аналогичен. Однако метод Вестерн-блотта более сложный. Это включает разделение образца ВИЧ на его составные белки с использованием электрического тока. Затем эти белки переносят в специальный вид блоттинговой бумаги и реагируют с вашим образцом крови. Фермент используется для изменения цвета и обнаружения антител.
Эти тесты очень безопасны, но могут возникать редкие осложнения. Например, вы можете:
чувствовать легкомысленный или слабый, особенно если у вас есть страх перед иглой или кровью
- получить инфекцию на месте вставки иглы
- разработать синяк на месте прокола
- есть проблемы с остановкой кровотечения
- Обязательно сообщите своему врачу, если:
у вас были проблемы с сдачей крови в прошлом
Что означают результаты теста?
Если вы тестируете положительный результат теста на ВИЧ на тест ELISA, у вас может быть ВИЧ. Однако иногда на экране ELISA могут быть ложные срабатывания. Это означает, что результаты тестов показывают, что у вас ВИЧ, когда вы на самом деле этого не делаете. Вот почему более сложные тесты, такие как анализ вестерн-блоттинга, проводятся для подтверждения наличия вируса. Например, наличие определенных состояний, таких как болезнь Лайма, сифилис или волчанка, может привести к ложному положительному результату для ВИЧ в тесте на ELISA.
Если вы положите тест на экране ELISA, ваш поставщик медицинских услуг закажет тест на вестерн-блоттинг. Если вы тестируете положительный результат на ВИЧ с помощью теста Вестерн-блоттинга, у вас, вероятно, есть ВИЧ.
Согласно Центрам по контролю и профилактике заболеваний (CDC), период окна человека обычно составляет от трех до 12 недель.Однако, в редких случаях, некоторые люди могут занять шесть месяцев для разработки антител.
Хотя оба теста просты и понятны, ожидание результатов может вызвать беспокойство. Во многих случаях вам придется поговорить с кем-то лично или по телефону, чтобы получить ваши результаты, независимо от того, являются ли они положительными или отрицательными. Положительный результат теста может вызвать сильные эмоции. Ваш поставщик медицинских услуг может направлять вас в группы консультирования или поддержки ВИЧ.
ИФА (ELISA) – иммуноферментный анализ – лабораторное исследование, позволяющее определить присутствие в крови ВИЧ-антител; тест на ВИЧ-антитела.
К числу наиболее апробированных непрямых методов диагностики ВИЧ- инфекции относится метод, позволяющий обнаруживать в организме не сам ВИЧ, а антитела к его антигенам, которые появляются в крови у ВИЧ- инфицированных пациентов. Иммунная система организма почти сразу реагирует на присутствие ВИЧ, выпуская против него антитела, их и пытаются в первую очередь обнаружить медики, используя специальные диагностикумы (тест-системы), основанные на иммуноферментном анализе (ИФА).
В этом анализе используется два типа реакций: иммунологическая и ферментативная.
Все вариации ИФА основаны на способности антител специфически взаимодействовать только с "собственными" антигенами, т.е. на иммунологической реакции "антиген-антитело".
Наибольшее распространение получил гетерогенный вариант иммуноферментного анализа, при котором антиген (определяемое соединение) или антитела фиксируется на твердой основе, в качестве которой могут выступать полистироловый планшет, полистироловые бусины, пористая подложка или магнитный носитель. Анализ проводят в 3 стадии (рис. ). В лунку планшета, содержащую на своих стенках тот или иной антиген (т.е. один из белков вируса), добавляют исследуемый биологический материал - сыворотку крови больного. При наличии в организме инфекционного агента, в сыворотке появляются антитела к нему. Они прочно связываются с антигеном и не удаляются при последующей промывке чашки.
На следующем этапе необходимо определить, образовался или нет в лунке иммунный комплекс, то есть произошло ли соединение антигена с антителом. Простым глазом или под микроскопом это нельзя увидеть, поэтому требуются следующие две стадии, которые можно назвать проявляющими.
На второй стадии анализа в лунку вносят специальные (реагирующие с разными антителами) антитела с заранее прикрепленным к ним ферментом (поэтому метод называется ферментным). Слитый в единый комплекс "антитело-фермент" (конъюгат) способен связаться с антителами, уже зацепившимися за антиген, который закреплен на твердой подложке. В результате возникает "молекулярная цепочка", на одном конце которой вирусный белок, а на другом - фермент. После отмывки весь этот многослойный "пирог" остается в лунке планшета. Теперь нужно обнаружить активность фермента, чтобы сделать вывод о наличие антитела. Для этого на третьей стадии в ту же лунку вносят раствор субстрата и специального бесцветного вещества - хромогена, который способен окрашиваться в результате серии биохимических реакций, осуществляемых присутствующим в лунке ферментом. Если в лунке появляется окраска, это означает, что все элементы цепочки присутствуют. Из этого следует вывод: в крови пациента имеются антитела к антигенам ВИЧ и, следовательно, сам пациент инфицирован этим вирусом.
Существуют и другие варианты метода ИФА. Например, можно детектировать не антитела, а сам антиген. Процедура в целом будет похожей, хотя немного более сложной.
Так как ВИЧ-инфекция длится пожизненно, то для диагностики достаточно самого факта обнаружения антител на любом этапе развития заболевания. Обнаружение антител с помощью ИФА является очень чувствительным методом, который выявляет свыше 99% ВИЧ-инфицированных.
Для проведения ИФА необходимо осуществить несколько операций. (А) На первом этапе к антигену, сорбированному на твердой поверхности (1), добавляют сыворотку крови, содержащую антитело (2). Затем в лунку вносят неспецифические антитела, слитые с ферментом (такой комплекс называют коньюгатом) (3). На конечном этапе (4) в ту же лунку вносят способное окрашиваться вещество - хромоген. Если образуется комплекс-"пирог" (Б), то хромоген под действием фермента расщепляется и появляется окраска. Это означает, что все элементы цепочки присутствуют, "пирог" испекся, и результат тестирования антител положительный.
После выхода известного фильма Дудя большинство ВИЧ-сервисных НКО захлестнула волна желающих провериться. В том числе и СПИД.ЦЕНТР — поток клиентов увеличился почти втрое, а на тестирование пришли люди, раньше никогда не посещавшие открытого пространства фонда на Artplay.
Ввиду большого интереса публики, в том числе и клиентов, дошедших до нашего лофта на Нижней Сыромятнической, сегодня мы рассказываем, как устроены эти и другие тесты на ВИЧ. Почему на ручке тестера появляются полоски, насколько такое тестирование достоверно и надежно, а главное — какие альтернативы ему существуют.
Все, что вы хотели узнать о технологии тестирования на ВИЧ-инфекцию, — в одном материале.
Все анализы на ВИЧ предназначены для того, чтобы либо разыскать части вируса, либо зафиксировать реакцию организма на его присутствие. Поэтому, чтобы понять, как работают тесты на ВИЧ, нужно примерно представлять, как устроен вирус и как он себя ведет, оказавшись в клетке.
Вирус ВИЧ — член семейства ретровирусов (Retroviridae). Представители этого семейства выглядят как крохотные круглые частицы, у которых есть оболочка, усеянная особыми белками. При помощи этих белков вирус распознает клетку-жертву и прикрепляется к ней.
Тестов на ВИЧ очень много, но их можно разделить на несколько больших типов. Те экспресс-тесты, которыми пользуются большинство ВИЧ-сервисных НКО, устроены по принципу иммуноферментного анализа, или ИФА.
Их задача — определить антитела к ВИЧ, которые организм вырабатывает в ответ на проникновение в него вируса.
Как это работает? Когда вирус ВИЧ попадает в организм, иммунная система человека не сидит без дела. Она начинает продуцировать антитела — иммунные белки, которые помогают организму бороться с инфекцией. Эти белки можно обнаружить во многих биологических жидкостях.
Способов обнаружения таких антител существует много. Но наиболее популярным считается именно иммуноферментный анализ (ИФА). За рубежом этот тест называется enzyme-linked immunosorbent assay, сокращенно — ELISA.
В экспресс-тестах, которые используются фондом СПИД.ЦЕНТР и многими другими нашими коллегами для бесплатного и анонимного тестирования, антитела тонкой линией нанесены на специальную поверхность, спрятанную под пластмассовым корпусом тестера.
Сначала клиент промокает десневую жидкость лопаточкой, установленной на конце тестера. А как только жидкость собрана, лаборант опускает лопаточку в реагент, который в течение 15 минут поднимается по тестеру, достигая в итоге полоски с антигенами.
Если антитела в десневой жидкости, смешанной с реагентом, были — полоска краснеет.
Как правило, на ручке тестера имеется и вторая полоса — контрольная, она окрашивается в красный всегда. Так что, как правило, отрицательный результат (вируса в организме нет) маркируется одной полоской на рукоятке тестера, а положительный (вирус в организме есть) — двумя.
Две полоски на тестере — это верный признак того, что человек некоторое время назад получил ВИЧ-инфекцию. А стало быть, клиенту срочно нужно обратиться к врачу за терапией — в областной или городской центр СПИД. Там ему будут назначены подтверждающие анализы и прописана антиретровирусная терапия.
Точно такой же тест (ИФА), только лабораторный, можно сделать и во многих коммерческих клиниках — но за деньги. Технология его в целом выглядит так же, а точность отличается незначительно.
Какие бывают тесты ИФА?
● Лабораторный ИФА-тест — анализ на ВИЧ по форме 50. В нашей стране его применяют в качестве стандартной процедуры лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции. Материал для анализа — кровь из вены, которую нужно сдавать в лаборатории. Результаты приходят через 1—5 дней.
Что важно знать об ИФА-тестах?
Подтверждающие тесты: вестерн-блоттинг (WB)
Цель этого теста — подтвердить результаты первичного анализа.
Чтобы провести анализ, у человека берут кровь и добывают из нее сыворотку. Это все та же кровь, только без эритроцитов, иммунных клеток и всего остального, что может образовывать сгустки крови. Потом эту сыворотку наносят на полоску из нитроцеллюлозы, на которой в строгом порядке размещены различные антигены ВИЧ — белки из оболочки и нуклеокапсида вируса. Если в сыворотке крови уже успели появиться антитела, они свяжутся с антигенами, размещенными на полоске.
Какие бывают тесты этого типа? Разные. Некоторые позволяют подтвердить наличие вируса ВИЧ-1, некоторые — ВИЧ-2, а некоторые — обоих вариантов вируса сразу.
Пример: российская тест-система ИФА-Лайн-Блот-ВИЧ-1,2. Эта тест-система участвует в тендерах — закупках в государственные лаборатории, которые действуют при СПИД-центрах.
Что важно знать о вестерн-блоте?
В России вестерн-блоттинг считается золотым стандартом подтверждения ВИЧ-инфекции. Проблема заключается в следующем.
1. Вестерн-блоттинг все равно иногда дает неопределенный результат. В этой ситуации тест придется пересдать, причем только через три недели.
2. Вестерн-блоттинг дорогой и долгий. Тест требует сложного оборудования, кропотливой работы и квалифицированного персонала. А чтобы разобраться с результатами, нужна помощь эксперта.
В чем проблема с российскими анализами на ВИЧ?
В нашей стране для подтверждения ВИЧ-статуса используют лабораторный ИФА-тест и вестерн-блоттинг — это стандартная процедура. Однако Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) отмечает: в странах, где действует эта схема, на определение ВИЧ-статуса тратится очень много времени и средств. Причем ожидание результата настолько изматывает, что некоторые пациенты даже жалеют о решении узнать свой ВИЧ-статус.
Эксперты ВОЗ советуют отказаться от лабораторных ИФА-тестов и вестерн-блоттинга в пользу комбинированных экспресс-тестов, которые дают быстрый и более надежный результат. И это действительно работает.
Комбинированные тесты
Цель комбинированных тестов, как и вестерн-блоттинга, — определить ВИЧ-статус человека.
● Пример лабораторного комбинированного теста — HIV Ag/Ab Combo, который делают в частных лабораториях за деньги.
Что важно знать об этом тесте? Этот анализ относится к четвертому поколению. На сегодняшний день во всем мире именно он считается оптимальным способом выявления инфекции, потому что недорог и позволяет относительно рано узнать ВИЧ-статус клиента.
Если речь идет об определении ВИЧ-статуса, то в Европе и США чаще всего прибегают именно к комбинированным тестам. Если тест дает положительный результат, нет необходимости проводить подтверждающий анализ, его просто через некоторое время сдают повторно — и это считается достаточно надежным.
Дело в том, что антиген — вирусный белок р24 — появляется в крови уже в первую неделю после заражения, то есть задолго до того, как вырабатываются антитела. Поскольку комбинированный тест определяет антиген, шанс узнать свой статус есть уже через 21—28 дней после предполагаемого инфицирования.
После того как начинают вырабатываться антитела, вирусный белок р24 из крови пропадает. Иногда это происходит уже на вторую неделю, но у 90—95 % инфицированных людей антитела появляются в крови в первые три месяца после заражения.
Предсказать, когда именно появятся антитела, невозможно, ведь организм каждого человека по-своему реагирует на вирус ВИЧ. Но даже если антиген р24 из крови успеет исчезнуть, комбинированный тест найдет если не р24, то как минимум антитела, и все равно даст верный ответ.
ПЦР: самый сложный анализ
Тесты, позволяющие определить непосредственно генетический материал вируса ВИЧ, называются полимеразной цепной реакцией с обратной транскрипцией (ПЦР-ОТ).
Методов полимеразной цепной реакции (ПЦР), при помощи которой можно определять вирус ВИЧ, существует много. Но понять, что именно происходит в пробирке, проще всего на примере ПЦР с обратной транскрипцией (ПЦР-ОТ).
Реакцию ПЦР-ОТ можно провести в режиме реального времени. Это помогает достаточно точно понять, сколько вирусных частиц находится в организме. Обычно для этого в реакционную смесь добавляют кусочек ДНК, помеченный химическим веществом, которое начинает светиться, когда кусок ДНК встраивается в молекулу. Так как этот кусочек ДНК подходит только к одному участку вирусной ДНК, можно подсчитать количество вспышек и понять, сколько же вирусной РНК первоначально было в образце.
Видео: как работает ПЦР-тест
Но тест этот очень дорогой и сложный. Впрочем, это не единственная причина, по которой его не используют для определения ВИЧ-статуса для всех, хотя и это можно сделать в частной лаборатории за деньги. Дело в том, что тест подходит для определения только одного типа вируса — ВИЧ-1. ВИЧ-2 он не находит. Поэтому анализы ПЦР на ВИЧ обычно используют только для контроля лечения человека, который уже знает свой ВИЧ-статус.
Доктор Роберто Жиральдо (Dr Roberto Giraldo) - доктор медицины, специалист по внутренним болезням, инфекционным, иммунологическим и тропическим болезням из университетов Антиокия (Колумбия), Канзаса и Лондона. Независимый исследователь СПИДа с 1981 года. Работал с так называемыми тестами на ВИЧ в течение 13 лет в Нью-Йорке в больнице Медицинского центра Корнелл. Автор ряда критических статей и книг по проблемам СПИДа. Бывший президент общества по переосмыслению СПИДа. В настоящее время является директором департамента психосоматической медицины Международного общества аналитической трилогии в Сан-Паулу, Бразилия. В мае 2008 года принимал участие в международной конференции СПИД-диссидентов, проходившей в Екатеринбурге.
КАЖДЫЙ ПОЗИТИВЕН ПРИ ELISA (ИФА) – ТЕСТИРОВАНИИ НА ВИЧ.
1. Разбавление сыворотки при использовании теcта ELISA.
ELISA является тестом для определения антител, которые, как полагают, вырабатываются против Вируса Иммунодефицита Человека (ВИЧ). Для проведения этого теста, сыворотка пациента должна быть разбавлена специальным раствором в соотношении 1:400. В соответствии с заявленными производителем параметрами, этот раствоитель содержит: 0,1% тринитротолуола Х-100, коровью и козью сыворотки (минимальная концентрация – 5%), человеческие лизаты Т-лимфоцитов (минимальный титр 1:7500), консервант – азид натрия – 0,1%.
Необходимость такого необычно большого растворения сыворотки пациента [400 раз] удивила меня. В большинстве серологических тестов, выявляющих присутствие антител к микробам используется чистая сыворотка [неразбавленная]. Например, в тестах, выявляющих антитела к вирусам гепатита А и В, вирусу коревой краснухи, сифилису, гистоплазме и криптококу, используется обычная сыворотка [неразбавленная]. Однако, во избежание ложноположительных реакций, в некоторых из серологических тестах используется разбавленная сыворотка; например в случае проведенных мною тестов на определение антител к вирусам кори, ветряной оспы и свинки использовалось разбавление в соотношении 1:16, к цитомегаловирусу – 1:20 и к вирусу Эпштейна-Барра – 1:10.
Возникают очевидные вопросы: что делает ВИЧ столь уникальным, что тестируемую сыворотку необходимо разбавить в соотношении 1:400 и что произойдёт, если сыворотка не будет разбавлена?
2. Испытание теcта ELISA без разбавления сыворотки.
Для того, чтобы ответить на эти вопросы, я произвёл эксперимент в медицинской лаборатории Йорктаун Хайтс (Yorktown Heights), находящейся в Нью-Йорке. При проведении этого эксперимента я использовал те же реагенты тест-систем, которые обычно используются при постановке теста ELISA в большинстве клинических лабораторий по всему миру.
Сначала, я взял образцы крови, которые при разбавлении в соотношении 1:400 дали отрицательный результат на антитела к ВИЧ. Затем, используя точно те же образцы сыворотки, я произвёл ещё одно тестирование, но на этот раз не разбавляя их. Неразбавленные, они все были положительными.
Я протестировал около 100 образцов, и всё время получал такой же результат. Я протестировал даже собственную кровь, которая при разбавлении 1:400 была негативной, но в соотношении 1:1 [неразбавленная] показывала положительную реакцию. Я должен упомянуть, что за исключенем моей собственной крови, все остальные образцы [крови пациентов] были получены от врачей, запрашивавших ВИЧ-тестирование. Таким образом, наиболее вероятно, что большинство образцов крови протестированных мною принадлежали лицам, подверженным риску СПИДа.
Что я заметил, это то, что степени оптической плотности образцов дававших отрицательный результат при разбавлении [1:400], но позитивных при тестировании неразбавленными [1:1], имели более низкие значения, чем те образцы, которые при разбавлении были положительны по ELISA и Western Blot. Это, вероятно, должно означать, что кровь, негативная при разбавлении, но позитивная, будучи неразбавленной, имеет более низкий уровень антител, чем разбавленная кровь, положительно реагирующая в обоих случаях и, таким образом, можеть быть негативна по Western Blot [если разбавлена]. Однако, у меня не было возможности проверить эту гипотезу.
3. Дискуссия.
Возможны три объяснения того факта, что неразбавленный образец крови всегда реагирует положительно при тестировании ELISA:
3.1. Антитела присутствуют у каждого из нас.
Это могло бы означать что все мы подвержены воздействию вируса, который, как верят, является причиной СПИДа. Люди, реакция которых положительна даже при растворении [сыворотки] в соотношении 1:400, были бы теми, кто подвергся наибольшему риску воздействия ВИЧ-антигенов. Остальные, – те, кто чья реакция проявлялась при нерастворённой сыворотке, – были бы теми, кто имел более низкий риск подвержености ВИЧ.
3.2. Каждый из нас имеет различный уровень антител к ВИЧ.
3.3. Тест не является специфичным для ВИЧ.
Результаты, представленные здесь могут, также, означать, что тесты, используемые для определения антител к ВИЧ не являются специфичными для ВИЧ, как было изложено выше. В этом случае, должны быть причины, отличные от ВИЧ-инфекции, в настоящем или прошлом, которые бы объясняли почему данное лицо реагирует позитивно на этот тест. Этот тест показывает положительную реакцию, также, при отсутствии ВИЧ.
В научной литературе задокументировано более чем 70 причин, отличных от инфицирования ВИЧ в прошлом или настоящем, при наличии которых возможна положительная реакция. Все эти причины имеют одно общее – полиантигеннуую стимуляцию.
Интересен тот факт, что в некоторых странах, – например в Великобритании, – диагностика ВИЧ-статуса проводится только лишь на основании [результатов] теста ELISA. Для этой цели не производится тестирование Western Blot или какие-либо иные тесты.
В связи с тем, что не существует научного доказательчтва факта специфичности теста ELISA к ВИЧ-антителам, реактивный тест может означать наличие неспецифичных или полиспецифичных антител. Эти антитела могут присутствовать во всех образцах крови. Они, наиболее вероятно, являются результатом стрессовой реакции и не имеют никакого отношения к каким бы то ни было ретровирусам, не говоя уже о ВИЧ. В этом случае, реактивный тест может быть мерилом уровня подверженности стрессогенному фактору или оксидативным агентам.
Неизбежный вывод состоит в том, что все положительные реакции на наличие антител к ВИЧ являются просто ложно положительными. Если никто не является ВИЧ-положительным, то те, кто люди, чья реакция позитивна при тестировании ELISA, имеют какю-либо иные, отличные от ВИЧ, причины для такой реакции.
Результаты этого эксперимента могли бы показать имеют ли данные тесты отношение к определению подверженности индивидуума стресс-факторам или оксидативным агентам. Если данное предположение получит своё подтверждение, то тестирование могло бы быть сохранено как инструмент для измерения уровня интоксикации индивидуума.
Доктор Роберто Жиральдо (Dr Roberto Giraldo) - доктор медицины, специалист по внутренним болезням, инфекционным, иммунологическим и тропическим болезням из университетов Антиокия (Колумбия), Канзаса и Лондона. Независимый исследователь СПИДа с 1981 года. Работал с так называемыми тестами на ВИЧ в течение 13 лет в Нью-Йорке в больнице Медицинского центра Корнелл. Автор ряда критических статей и книг по проблемам СПИДа. Бывший президент общества по переосмыслению СПИДа. В настоящее время является директором департамента психосоматической медицины Международного общества аналитической трилогии в Сан-Паулу, Бразилия. В мае 2008 года принимал участие в международной конференции СПИД-диссидентов, проходившей в Екатеринбурге.
КАЖДЫЙ ПОЗИТИВЕН ПРИ ELISA (ИФА) – ТЕСТИРОВАНИИ НА ВИЧ.
1. Разбавление сыворотки при использовании теcта ELISA.
ELISA является тестом для определения антител, которые, как полагают, вырабатываются против Вируса Иммунодефицита Человека (ВИЧ). Для проведения этого теста, сыворотка пациента должна быть разбавлена специальным раствором в соотношении 1:400. В соответствии с заявленными производителем параметрами, этот раствоитель содержит: 0,1% тринитротолуола Х-100, коровью и козью сыворотки (минимальная концентрация – 5%), человеческие лизаты Т-лимфоцитов (минимальный титр 1:7500), консервант – азид натрия – 0,1%.
Необходимость такого необычно большого растворения сыворотки пациента [400 раз] удивила меня. В большинстве серологических тестов, выявляющих присутствие антител к микробам используется чистая сыворотка [неразбавленная]. Например, в тестах, выявляющих антитела к вирусам гепатита А и В, вирусу коревой краснухи, сифилису, гистоплазме и криптококу, используется обычная сыворотка [неразбавленная]. Однако, во избежание ложноположительных реакций, в некоторых из серологических тестах используется разбавленная сыворотка; например в случае проведенных мною тестов на определение антител к вирусам кори, ветряной оспы и свинки использовалось разбавление в соотношении 1:16, к цитомегаловирусу – 1:20 и к вирусу Эпштейна-Барра – 1:10.
Возникают очевидные вопросы: что делает ВИЧ столь уникальным, что тестируемую сыворотку необходимо разбавить в соотношении 1:400 и что произойдёт, если сыворотка не будет разбавлена?
2. Испытание теcта ELISA без разбавления сыворотки.
Для того, чтобы ответить на эти вопросы, я произвёл эксперимент в медицинской лаборатории Йорктаун Хайтс (Yorktown Heights), находящейся в Нью-Йорке. При проведении этого эксперимента я использовал те же реагенты тест-систем, которые обычно используются при постановке теста ELISA в большинстве клинических лабораторий по всему миру.
Сначала, я взял образцы крови, которые при разбавлении в соотношении 1:400 дали отрицательный результат на антитела к ВИЧ. Затем, используя точно те же образцы сыворотки, я произвёл ещё одно тестирование, но на этот раз не разбавляя их. Неразбавленные, они все были положительными.
Я протестировал около 100 образцов, и всё время получал такой же результат. Я протестировал даже собственную кровь, которая при разбавлении 1:400 была негативной, но в соотношении 1:1 [неразбавленная] показывала положительную реакцию. Я должен упомянуть, что за исключенем моей собственной крови, все остальные образцы [крови пациентов] были получены от врачей, запрашивавших ВИЧ-тестирование. Таким образом, наиболее вероятно, что большинство образцов крови протестированных мною принадлежали лицам, подверженным риску СПИДа.
Что я заметил, это то, что степени оптической плотности образцов дававших отрицательный результат при разбавлении [1:400], но позитивных при тестировании неразбавленными [1:1], имели более низкие значения, чем те образцы, которые при разбавлении были положительны по ELISA и Western Blot. Это, вероятно, должно означать, что кровь, негативная при разбавлении, но позитивная, будучи неразбавленной, имеет более низкий уровень антител, чем разбавленная кровь, положительно реагирующая в обоих случаях и, таким образом, можеть быть негативна по Western Blot [если разбавлена]. Однако, у меня не было возможности проверить эту гипотезу.
3. Дискуссия.
Возможны три объяснения того факта, что неразбавленный образец крови всегда реагирует положительно при тестировании ELISA:
3.1. Антитела присутствуют у каждого из нас.
Это могло бы означать что все мы подвержены воздействию вируса, который, как верят, является причиной СПИДа. Люди, реакция которых положительна даже при растворении [сыворотки] в соотношении 1:400, были бы теми, кто подвергся наибольшему риску воздействия ВИЧ-антигенов. Остальные, – те, кто чья реакция проявлялась при нерастворённой сыворотке, – были бы теми, кто имел более низкий риск подвержености ВИЧ.
3.2. Каждый из нас имеет различный уровень антител к ВИЧ.
3.3. Тест не является специфичным для ВИЧ.
Результаты, представленные здесь могут, также, означать, что тесты, используемые для определения антител к ВИЧ не являются специфичными для ВИЧ, как было изложено выше. В этом случае, должны быть причины, отличные от ВИЧ-инфекции, в настоящем или прошлом, которые бы объясняли почему данное лицо реагирует позитивно на этот тест. Этот тест показывает положительную реакцию, также, при отсутствии ВИЧ.
В научной литературе задокументировано более чем 70 причин, отличных от инфицирования ВИЧ в прошлом или настоящем, при наличии которых возможна положительная реакция. Все эти причины имеют одно общее – полиантигеннуую стимуляцию.
Интересен тот факт, что в некоторых странах, – например в Великобритании, – диагностика ВИЧ-статуса проводится только лишь на основании [результатов] теста ELISA. Для этой цели не производится тестирование Western Blot или какие-либо иные тесты.
В связи с тем, что не существует научного доказательчтва факта специфичности теста ELISA к ВИЧ-антителам, реактивный тест может означать наличие неспецифичных или полиспецифичных антител. Эти антитела могут присутствовать во всех образцах крови. Они, наиболее вероятно, являются результатом стрессовой реакции и не имеют никакого отношения к каким бы то ни было ретровирусам, не говоя уже о ВИЧ. В этом случае, реактивный тест может быть мерилом уровня подверженности стрессогенному фактору или оксидативным агентам.
Неизбежный вывод состоит в том, что все положительные реакции на наличие антител к ВИЧ являются просто ложно положительными. Если никто не является ВИЧ-положительным, то те, кто люди, чья реакция позитивна при тестировании ELISA, имеют какю-либо иные, отличные от ВИЧ, причины для такой реакции.
Результаты этого эксперимента могли бы показать имеют ли данные тесты отношение к определению подверженности индивидуума стресс-факторам или оксидативным агентам. Если данное предположение получит своё подтверждение, то тестирование могло бы быть сохранено как инструмент для измерения уровня интоксикации индивидуума.
Читайте также: