Биохимические свойства холеры. Биовары холеры. Антигены холеры. Антигенная структура холеры. Схемы Хайберга. Серогруппы холеры.

Добавил пользователь Алексей Ф.
Обновлено: 14.12.2024

Семейство Vibrionaceae объединяет подвижные, изогнутые палочковидные бактерии, обладающие полярными жгутиками. Эволюционно происходят из водных бактерий, широко распространены в пресной и морской воде, у беспозвоночных и позвоночных хозяев. Патогенные для человека виды относят к родам Vibrio, Aeromonas и Plesiomonas.

Для рода Vibrio характерны короткие прямые или изогнутые грамотрицательные палочки, подвижные, не образующие спор и капсул, хорошо растущие на обычных средах. Они ферментируют углеводы с образованием кислоты без газа, чувствительны к вибриостатику О/129. Можно культивировать при температуре от плюс 18 до 37 о С, рН 8,6-9,0.

От других родов семейства представители рода Vibrio дифференцируют по биохимическим тестам. Род насчитывает более 25 видов, из них основное значение имеет Vibrio cholerae- возбудитель холеры, а также V.parahaemolyticum, V.vulnificus.

Vibrio cholerae.

Морфология. Холерный вибрион имеет один полярный жгутик, часто напоминает запятую (запятая Коха). Важный диагностический признак - подвижность (определяют микроскопией по методу висячей или раздавленной капли). Морфологически изменчивы. Хорошо окрашиваются водным фуксином Пффейфера и карболовым фуксином Циля.

Культуральные свойства. Факультативный анаэроб. Холерный вибрион неприхотлив к питательным средам. Хорошо размножается на 1% щелочной (рН 8,6-9,0) пептонной воде, опережая бактерии кишечной группы (среда обогащения), образует нежную голубоватую пленку и муть. Для подавления роста протея и некоторых других микроорганизмов используют пептонную воду с добавлением теллурита калия.

На плотных средах холерный вибрион образует гладкие стекловидные, прозрачные с голубоватым оттенком дисковидные колонии вязкой консистенции. Используют щелочной агар, желчно - солевой агар, щелочной агар с кровью, наилучшей является TCBS - агар (агар с тиосульфатом, цитратом, солями желчных кислот и сахарозой).

Биохимические свойства. Холерный вибрион сбраживает с образованием кислоты без газа многие углеводы (глюкозу, сахарозу, маннозу, маннит, лактозу, левулезу, гликоген, крахмал). По отношению к трем сахарам (триада Хейберга) - сахарозе, маннозе и арабинозе вибрионы делят на восемь биохимических групп, холерный вибрион относится к первой группе (разлагает сахарозу и маннозу).

Холерный вибрион разлагает желатин, казеин, свертывает молоко и разлагает белковые препараты до индола и аммиака.

Антигенная структура. У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- антигены и термолабильные Н- антигены. По структуре О- антигенов выделено 139 серогрупп, биотипы Эль - Тор и классический объединены в 01 группу (типируются 01 - антисывороткой). Изоляты Эль - Тор отличаются гемолитическими свойствами (вызывают гемолиз эритроцитов барана), способностью агглютинировать куриные эритроциты, резистентности к полимиксину, чувствительности к фагам.

О- антиген 01 группы неоднороден и включает общий А- компонент и два типоспецифических - В и С. Соответственно их наличию серовар Огава имеет сочетание АВ, Инаба - АС, Хикоджима - АВС.

Не типируемые основной 01 сывороткой (т.е. не относящиеся к 01 группе) вибрионы называются неагглютинирующими (НАГ) вибрионами- холероподобными или парахолерными. Они имеют общий с холерным вибрионом Н- антиген, но отличаются по О- антигену.

По Н- антигену выделяют группы А и В, холерные вибрионы входят в группу А. Вирионы группы В (биохимически отличающиеся от холерных) имеют неоднородную структуру О- антигена и подразделяются на шесть серологических подгрупп.

Факторы патогенности холерного вибриона.

1. Подвижность (жгутики) и хемотаксис.

2. Ферменты способствуют адгезии и колонизации, взаимодействию с эпителиальными клетками- муциназа (разжижает слизь), нейтаминидаза (взаимодействие с микроворсинками, создание посадочной площадки), лецитиназа и другие.

3. Эндотоксин - термостабильный липополисахарид, схожий по структуре и свойствам с другими эндотоксинами грамотрицательных бактерий.

4. Экзотоксин - холероген - главный фактор патогенности, термолабильный белок. Синтез холерогена - важнейшее, генетически детерминированное свойство холерного вибриона. Молекула холерогена состоит из двух фрагментов А и В. Собственно токсическую функцию выполняет пептид А1 фрагмента А. Молекула холерогена распознает рецептор энтероцита, проникает в мембрану клетки, активирует аденилатциклазную систему, накапливающийся циклический АМФ вызывает гиперсекрецию жидкости, Na + , HCO3 - , K + , Cl - из энтероцитов. Это приводит к характерной для холеры диарее, обезвоживанию и обессоливанию организма.

5. У многих вибрионов, в т.ч. не относящихся к 01 группе, имеются различные энтеротоксины.

6. В патогенезе проявлений холеры имеет значение также фактор, повышающий проницаемость капилляров.

Некоторые особенности эпидемиологии. Холера - кишечная инфекция. Основной источник - человек (больной или вибрионоситель), загрязненная вода. Способ заражения - фекально - оральный. Индивидуальная восприимчивость к холере чрезвычайно вариабельна. Характерно большое количество скрытых (стертых) форм, вибрионосительство. Обнаружение возбудителя в воде напрямую связано с наличием больных или бактерионосителей. Холерные вибрионы 01 группы могут длительно находиться в водных экосистемах в виде некультивируемых форм.

Лабораторная диагностика. Холера относится к группе особо опасных инфекций, культивирование ее возбудителя требует соблюдения особого режима биологической безопасности. Основной метод диагностики - бактериологический, включает выделение и идентификацию возбудителя.

Материал для исследования - испражнения и рвотные массы, секционные материалы от погибших, пробы воды и смывы с объектов окружающей среды, пищевые остатки.

Для посева используют жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально - диагностические среды (лучше TCBS). В качестве транспортной среды наиболее удобна 1% пептонная вода. Подозрительные стекловидные прозрачные колонии пересевают для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, подвижности, антигенным свойствам, фаготипируют.

Для ускоренной диагностики применяют иммунолюминесцентный метод, биохимическую идентификацию с набором индикаторных дисков, для обнаружения холерных вибрионов в первичных материалах - РНГА с антительным диагностикумом, для выявления некультивируемых форм - ПЦР, для определения вирулентности и синтеза холерогена - биопробы на кроликах - сосунках, ИФА, ДНК- зонды (выявление фрагмента хромосомы, несущего оперон холерогена).

Специфическая профилактика. Имеются различные вакцины - убитая из сероваров Инаба и Огава, анатоксин холерогена, химическая бивалентная вакцина. Вакцины применяют только по эпидпоказаниям (низкая иммуногенность). Может проводиться антибиотикопрофилактика (превентивная терапия) тетрациклином и другими антибиотиками.

V.parahaemolyticus (парагемолитический вибрион) является галофилом, встречается в морской воде (Японского, Черного, Каспийского и других южных морей). При употреблении морских продуктов, не подвергнутых достаточной термической обработке, этот возбудитель вызывает у людей пищевые токсикоинфекции и дизентерия - подобные заболевания. Вызывает гемолиз на кровяном агаре с повышенной концентрацией хлористого натрия (на 7% NaCl - штаммы с энтеропатогенными свойствами).

V.vulnificus - наиболее патогенный вид для человека из нехолерных вибрионов. Выявляют в морской воде и ее обитателях. Вызывает раневые инфекции, септицемии и другие заболевания. Ферментирует сахарозу и лактозу, на TCBS - агаре образует желтые колонии.

Семейство вибрионов. Vibrionacea. Род - Vibrio.

Очень широко распространены в природе. В пресноводных, в соленых водоемах. Есть и патогенные и безопасные виды микроорганизмов. Они широко распространены в природе. Нас интересует семейство вибрионов - к нему относится возбудитель холеры.

Морфология. Вибрион представляет собой изогнутую палочку толщино 0,3, длинно - 3. один, полярно рапсолоенный жгутик в 2 раза длиннее самой бактерии. Очень высоко подвижна, спор капсул не образует, Гр(-), в исследуемом материале может располагаться в виде стайки рыбок. Биовар эльтор характеризуется полиморфизмом - короткие, толстые.

Культуральные свойства - газовое престрастие. Это аэробный микроб. Это щелочо любивый микроб. Оптимум ph 7,6-8? Способны размоножаться при 9,2. К пиаттельным средам не призотлив, но на щелочных средах растет очень хорошо и быстро, существенно опережая рост других бактерий. Через 4-6 часов - пленка на поверхности щелочного бульона.

Специальные питательные среды для культивирования вибрионов.

1% пептонная вода. Достаточно бедная питательная среда. Щелочной мясо-пептонный агар, и щелочной мясо-пептонный бульон. Селективно-дифференциальная среда ТЦБС агар - тиосульфат натрия, сульфат натрия, соли желчных кислот и сахарозу. Кроме того она содержит индикатор(видно расщепляет ли сахарозу). Рост в идее С формы - гладкие, прозрачные колонии слегка голубоватые, на ТЦБС - желтые.

Биохимические свойства холерного вибриона

Высокая биохимическая активность, ферментирует сахарозу, мальтозу. Разжжают желатин. Образуют индол, не образуют сероводород, имеют оксидазу и декарбоксилазу.

Антигенные свойства. Имеется термостабильный О антиген, соматический липополисахаридный. Выделяют 150 серогрупп по антигену. Антигены сероруппы О1 включают 3 компонента - A, B, С. Те штаммы, которые содержат А,В относятся к штамму Огава, АС - Инаба, А,В,С - Гикошима. Кроме того вибрионы имеют H антиген, общий для всего рода.

Фаги холерных вибрионов - биовары, есть фаги, котоыре биовароспецифические. Используются в фагодиагностике. Различают биовары по способности ратси на среде с полипепсином, по способности лизировать эритроциты.

Патогенность - свойства адгезивность - ворсинки и мембранные белки, колонизации - способность приживаться в щелочной среде тонко кишичника. Основной фаткор патогенности является эндотоксин - холероген, содержит 2 субъединицы- А и В. Субъединица В - обусловливает проникновение в клетки эпителия субъединицы А, а субъединица А активизирует клеточную аденилатциклазу, что приводит к накоплению ЦАМФ, что приводит к выходу электролитов и жидкости в просвет кишки. Переполнение просвета кишки жидкости и объясняет симптом поноса. Кроме того вибрионы выделяют цитотоксин, котоырй содержит эндотоксин, выделяют ферменты- нейроминедазу, ДНКазу, лецитиназу. Резистентность вибриона во внешней среде. В сравнении с энтеро бактериями низкая. Вибрионы погибают при высушивании, при действии фиолетовых лучей, при кипячении мнгновенно. Очень чувствительны к действию кислот, растворы хлористо-водородной и серной кислот в концентрации 1-1000 и даже 1 - 10000 убивают через несколько минут. Вместе с тем вибрионы в воде сохраняются достаточно долго, во льду. Эльтор более устойчив, чем классический биовар.

Эпидемиология. Холера - антропонозная болезнь - или больной или вибрионо носитель. Резервуар инфекции любая водная среда. Механизм заражения - фекально - оральный. Пути - водный, пищевой, контактно-бытовой. Факторы передачи могут быть - вода, пищевые продукты и пр. Сезонность - летняя, касаясь патогенеза - кислая среда желудка губительна и для того, чтобы наступило заболевания вибрионы должны попасть минуя желудок в 12перстную кишку, в щелочную ph.

Микробы там колонизируются , размножаются, выделяют холенорген, котоырй нарушает всасывание электролитов и жидоктси и вызывает симптом диареи. Вся клиника холеры делистя на 3 периода - холерный энтерит. Понос - вода со слизью - рисовый отвар. Стул до 40 раз в сутки, развиваются электролитные нарушения и интоксикация усиливается. Вторая стадия - холерный гастроэнтерит - присоединяется рвота. Если не лечить, не диагностировать наступает стадия холерного алгида. У таких больных понос прекращается, рвота тоже.

Иммунитет - после выздоровления - стойкий, продолжительный, повторных случаев не встречается.

Диагностика - цели диагностики - подтверждение диагноза, выявление носителей и санитарнео исследование. Методы - основной - бактериологический, основан на выделении и идентификации возбудителя. Материал для исследования - испражнения, рвотные массы, материал аутопсии, вода, пищевые продукты, смыв с поверхности санитарных объектов. Взятие пробы и ее доставка в лабораторию осуществляется со всеми предосторожностями, какие необходимы при работе с особо- опасными возюбудителями. Само выделение проводят в 5 этапах

Другие методы диагностики - серологический - опеределние антиетл. Для экспресс диагностики ПЦР реакция. Бактериоскопический в настоящее время из за низкой информативности не используется. Лечение проводится в 2х направлениях. Это восполнение потерь жидкости - восстановление водно-солевого обмена, антибактериальная терапия.

Специфическая профилактика по эпид показаниям. Используется вакцина химическая, котоаря из 70% холероген анатоксина и на 30% из О антигена, включающего все биовары и серовары Инаба и Огава.

Парагемолитические галофильные вибрионы. Это не холерные вибрионы, которые растут при избытке поваренной соли. Первые сведенья 70е года 20го века. V. parahaemolyticus, V. alginolyticus.,V. Vuknificus, V. fluorislis.

Морфология типичная. Их культуральная особенность - не растут без добавления NaCl, среды теже. Есть О и Н антигены, особенность факторов патогенности - их экзотоксин обладает гемолитическими летальными некротоксическими свойствами. Эти вибрионы свободно обладают в морях, на юге, в теплой воде. Резервуар и истчник инфекции для человека - не обработанные термические морепродукты. Пути заражения - пищевой и водный, существует и контактный и аэроенный.

V.parahaemolyticus - пищевая инфекция в Японии из за употребления Суши. V. alginolyticus. Тоже.

Vulnificus - обнаруживается в морской воде. Вызывает у человека пищевые токсикоинфекции, иногда генерализация сразу, пневмония у людей, котоырй наглотался воды, раневые инфекции с некрозом, уретриты и эндометриты, заболевания начинается остро. Эндотоксин патогенный очень мощный.

V. fluorislis - холеро подобный гастродуаденит. Понос и рвота, абдоминальные боли.

Лабораторная диагностика заболеваний.

Основной метод - бактериологчиеский. Первичный посев производят на щелочные солевые среды и ТЦБС агар. Идентиикацию проводят по ключевым признакам. По сахаролитическим свойствам и при NaСl.

Лечение такое же как при холере - антибиотики. Спец профилактки не рахзработано

Возбудители холеры.

Холера- острая кишечная антропонозная особо опасная карантинная инфекция.

Характеристика возбудителей холеры.

Таксономия. Возбудитель холеры - холерный вибрионVibriocholeraeотносится к отделуGracilicutes, семействуVibrionaceae, родуVibrio. Внутри видаVibriocholeraeразличают два биовара:biovarcholeraeclassic(выделенный Р. Кохом) иbiovareltor(открытый супругами Готшлих).

Морфологические и тинкториальные свойства.Это небольшие (2-4 х 0,5 мкм) изогнутые в виде запятой грамотрицательные палочки, очень полиморфные, не образуют спор, капсул. Монотрихи, обладают высокой подвижностью, что является важным диагностическим признаком.

Культуральные свойства.Холерный вибрион - факультативный анаэроб, предпочитающий аэробные условия и быстро погибающий в анаэробных. К питательным средам неприхотлив. Щелочелюбив. Элективными для холерного вибриона являются 1% щелочная пептонная вода (ПВ), щелочной агар. Оптимальная температура для роста 37°.

На 1% ПВ (рН=8,5-9,0) холерный вибрион опережает в росте бактерии кишечной группы и образует через 6-8 часов нежную голубоватую пленку. На плотной среде через 12-14 часов образует мелкие голубоватые колонии.

Биохимические свойствахорошо выражены.

Сахаролитические свойства.Холерный вибрион сбраживает с образованием кислоты многие углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит, лактозу, гликоген, крахмал и др.).

При идентификации возбудителя наиболее важным является определение ферментации маннозы, арабинозы и сахарозы. По способности разлагать эти 3 углевода Хейберг все вибрионы семейства Vibrionaceaeразделил на 8 групп.

Холерные вибрионы разлагают только маннозу и сахарозу и принадлежат к Iгруппе Хейберга.

Протеолитические свойства.Холерные вибрионы разжижают желатин, свертывают молоко, расщепляют белки доNH3и индола.H2Sне образуют. Восстанавливают нитраты в нитриты образуют оксидазу.

Антигенная структура.Холерные вибрионы имеют термостабильные О- и термолабильные Н-антигены.

По структуре О-антигенов выделяют более 150 серогрупп. Возбудителя холеры относят к 01 и 0-139 серогруппам, все другие представители вида V. сholeraeне являются возбудителями холеры, но могут вызывать другие заболевания (например, гастроэнтериты).

О-антиген 01 группы холерных вибрионов не однороден и состоит из А, В, С компонентов. В зависимости от их сочетания различают 3 серовара возбудителя холеры: Огава (А, В), Инаба (А, С), Гикошима (А, В, С).

Н-антиген неспецифичен для V. сholerae, является общим для вего родаVibrio.

Факторы патогенности.Основной фактор патогенности - способность ктоксинообразованию. Холерные вибрионы образуют эндо- и экзотоксин.

Эндотоксин- термостабильный липополисахарид с иммуногенными свойствами (индуцирует синтез вибриоцидных антител), но в патогенезе существенной роли не играет.

Экзотоксин- термолабильный белок, состоящий из нескольких фракций, наиболее важной из которых являетсяхолероген.Молекула холерогена включает 2 компонента: А и Б. Компонент Б взаимодействует с рецепторами эпителия тонкой кишки, облегчая проникновение в клетку компонента А. Компонент А активирует фермент аденилатциклазу и усиливает синтез циклических аденозинмонофосфатов (цАМФ), что приводит к гиперсекреции энтероцитами воды и солей в просвет кишечника и к диарее.

Холерные вибрионы секретируют также экзотоксины, аналогичные токсинам токсигенных эшерихий, шигелл, сальмонелл, в частности, экзотоксины с цитотоксическим действием, вызывающим гибель клеток эпителия тонкой кишки.

Возбудители холеры продуцируют ферменты агрессии- фибринолизин, плазмокоагулазу, лецитиназу, нейраминидазу, коллагеназу, гиалуронидазу

Патогенность связана так же с подвижностью вибриона, ферментом муциназой (разжижающей слизь и обеспечивающей проникновение возбудителя к поверхности эпителия) и с адгезивными свойствами: белки наружной мембраны способствуют прикреплению вибрионов к эпителиоцитам, обеспечивая им возможность размножаться и не быть выведенными из организма человека.

Резистентностьотносительно невысока. При 60° погибают в течение 5 минут, при кипячении - мгновенно. Общепринятые концентрации дезинфицирующих веществ убивают их быстро. Очень чувствительны к кислотам, высаливанию, солнечному свету

Однако низкие температуры переносят хорошо: во льду сохраняются несколько месяцев, в испражнениях, почве, воде - от нескольких недель до 2-3 месяцев.

Более устойчив во внешней среде холерный вибрион Эль-Тор.

Патогенность для животных.В естественных условиях животные не болеют холерой.

Эпидемиология. Источник инфекции- больной или вибрионоситель.Механизм передачи-фекально-оральный. Пути передачи - водный(основной), пищевой, контактно-бытовой.

Факторы передачи- загрязненные выделениями больного руки, предметы обихода, вода, пищевые продукты, мухи. Установлено, что возбудитель холеры Эль-Тор способен размножаться в организме рыб, ракообразных, простейших, в сине-зеленых водорослях и других обитателях водоемов. На этом основании сделано заключение о сапронозном характере инфекции, и возможности инфицирования при употреблении в пищу сырых или термически недостаточно обработанных морских и речных продуктов.

В настоящее время наиболее распространена холера, вызываемая возбудителем Эль-Тор.

Заболевание чаще отмечается в теплое время года. Восприимчивость к инфекции высокая, однако важное значение имеет состояние кислотности желудка и другие факторы неспецифической резистентности.

Патогенез.Заражение происходит перорально. Большинство вибрионов гибнет в кислой среде желудка. Однако при снижении желудочной секреции (как функциональном разбавление желудочного содержимого водой, пищей так и патологическом например, гастрит со сниженной кислотностью) вибрионы проходят через желудок, попадают в тонкую кишку, где прикрепляются к энтероцитам, размножаются и поражают их ферментные системы без развития воспалительного процесса.

Ведущую роль в патогенезе играет холероген, который нарушает водно-солевой обмен, приводит к резкому обезвоживанию организма и ацидозу.

Клиника.Инкубационный период от нескольких часов до 5 суток. Заболевание начинается остро, часто внезапно, в ночные или утренние часы с безболезненного поноса и редко (в 10-20% случаев) - повышения температуры.

Частота дефекации быстро нарастает до 10 и более раз в сутки. Испражнения не имеют зловонного запаха и в 20-40% случаев приобретают вид рисового отвара. При холере боли в животе не характерны.

Первая стадия - холерный энтерит, характеризуется диареей с частотой дефекации не более 10раз в сутки, продолжается 1-3 дня. На этой начальной стадии заболевание может закончиться (легкая форма холеры) или перейти в следующую стадию - стадиюгастроэнтерита(форма средней тяжести). На этой стадии к поносу присоединяется повторная рвота без чувства тошноты. Больной теряет до 30 литров жидкости в сутки.

Заболевание может перейти в IIIстадию (тяжелая форма холеры) -холерный алгид, характерным признаком которого является снижение температуры до 34°. Меняется внешний вид больного: черты лица заостряются, глаза западают, появляются темные круги под глазами (симптом «очков»), кожа кистей сморщивается («руки прачки»), живот втянут, голос пропадает (афония).

Появляется тахикардия, кровяное давление падает, уменьшается количество мочи (олигурия) вплоть до анурии.

В алгидной стадии при отсутствии лечения летальность достигает 60%.

Иммунитетнепрочный и непродолжительный. Нередко отмечают случаи повторного заражения.

Лабораторная диагностика.Материалом для исследования являются испражнения рвотные массы, желчь, пищевые продукты, вода, секционный материал, смывы с объектов внешней среды, гидробионты, мухи и др.

Основным в лабораторной диагностике холеры является бактериологический метод.

Материал засевают на элективные среды - щелочную пептонную воду и щелочной питательный агар. Чистую культуру идентифицируют по морфологическим культуральным, биохимическим свойствам, чувствительности к холерному фагу, агглютинабельности противохолерной О-сывороткой и типовыми агглютинирующими сыворотками Инаба и Огава.

При идентификации чистой культуры определяют ее гемолитические свойства (классический холерный вибрион не вызывает гемолиза бараньих эритроцитов, а биовар Эль-Тор может их гемолизировать); способность агглютинировать куриные эритроциты (классический холерный вибрион не агглютинирует их в отличие от биовара Эль-Тор); чувствительность к полимиксину (классической холерный вибрион чувствителен к полимиксину, биовар Эль-Тор - нет).

В настоящее время существует мнение о нецелесообразности проведения бактериоскопии мазков и препаратов методом «висячая» капля из нативного материала, хотя ранее бактериоскопический метод использовался как ориентировочный в диагностике холеры.

Серологическое исследованиеявляется вспомогательным и применяется для ретроспективной диагностики холеры, выявления вибрионосителей и оценки иммунитета. Определяют агглютинины (в реакции агглютинации и РНГА); вибриоцидные антитела (в реакции лизиса) и антитоксины.

К экспресс-методам диагностикихолеры относятся:

1. Иммобилизация вибрионовпротивохолерными сыворотками и типовыми холерными фагами.

После обработки исследуемого материала указанными сыворотками и фагами в препарате «раздавленная» капля при наличии холерного вибриона через 3-5 минут наблюдается прекращение их движения.

2. Иммунофлюоресцентный метод.

Препараты из исследуемого материала обрабатывают флюоресцирующей противохолерной сывороткой и исследуют в люминесцентном микроскопе. В положительном случае в препарате наблюдается яркое желто-зеленое свечение в виде блестящего ободка по периферии клетки.

3. Метод микроагглютинации нативного материала.

Реакция ставится на стекле с использованием холерной О-сыворотки. При наличии в нативном материале вибрионов через 5-10 минут в капле с сывороткой выпадают хлопья.

4.Определение антигена возбудителя в исследуемом материале с помощью ДНК-зондов.

Препараты для лечения и профилактики.Терапия предусматривает восполнение жидкости и электролитов плазмозамещающими жидкостями (глюкозосолевыми растворами). Проводят антибактериальную терапию препаратамитетрациклинового ряда, левомицетином, фторхинолонами.

Главные профилактическиемероприятия -неспецифические санитарно-гигиеническиеи карантинные.

Для специфической иммунопрофилактикиимеются:

1) убитая вакцинаиз штаммов Огава и Инаба;

2) холероген - анатоксин;

3) бивалентная вакцинаиз анатоксина и О-антигена Огава и Инаба.

Эффективность вакцинации не превышает 60-70%. Невосприимчивость после их применения сохраняется в течение 3-6 месяцев, поэтому вакцинопрофилактика имеет вспомогательное значение и применяют ее по эпидемическим показаниям.

В очагах холеры хороший профилактический эффект дает прием тетрациклина.

Для лечебно-профилактических целей используется поливалентный холерный бактериофаг.

Возбудители брюшного тифа и паратифов А и В. Пути и способы передачи инфекции, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение и профилактика. Сальмонеллы - возбудители острых гастероэнтеритов. Свойства возбудителей, способы заражения, патогенез, клиника, лабораторная диагностика, лечение и профилактика.

Брюшной тиф, паратифы, сальмонеллезы - острые кишечные инфекции; брюшной тиф и паратифы - антропонозы, сальмонеллезы - зоонозы.

Методические разработки 5 семестр / 05. Холера

ТЕМА: Холера. Этиология. Лабораторная диагностика, профилактика.

Курс - III, V семестр

Факультеты: лечебный, педиатрический, медико-профилактический

Продолжительность занятия: 3 часа

Холера - опасное антропонозное инфекционное заболевание, протекающее по типу гастроэнтерита с интоксикацией и нарушением водно-электролитного обмена, приводящих к резкому обезвоживанию организма. Холера относится к карантинным инфекциям. Для этого заболевания характерны фекально-оральный механизм заражения, поражение тонкого кишечника, выраженная склонность к широкому эпидемическому распространению,тяжелое течение с водянистой диареей и рвотой, развитие различной степени обезвоживания организма, высокая летальность.

Контрольные вопросы

Общая характеристика семейства Vibrionaceae.

Классификация, латинские названия возбудителей холеры.

Морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства холерного вибриона.

На основе каких параметров вибрионы разделены на 8 групп по Хейбергу; к какой группе Хейберга принадлежат возбудители холеры;

Антигенная структура возбудителей холеры. Биологические и серологические варианты, их сравнительная характеристика.

Факторы патогенности, токсические субстанции, которые образует холерный вибрион.

Особенности эпидемиологии холеры: а - источник инфекции; б - пути передачи; в - факторы передачи.

Лабораторная диагностика: организация работы баклабораторий при исследовании на холеру; особенности забора материала и его транспортировки, основные этапы бактериологического анализа.

Ускоренные и экспресс-методы диагностики холеры.

Лечение (регидратация и реминерализация, этиотропная терапия), плановая и экстренная специфическая профилактика холеры.

“Классическую” холеру вызывают холерные вибрионы серогруппы О1. К этой серогруппе относятся 2 биовара: классический (V. cholerae биовар cholerae или V. cholerae биовар asiaticae) и Эль-Тор (V. cholerae биовар eltor). Внесите в таблицу 1 параметры, позволяющие дифференцировать эти биовары между собой.

Сравнительная характеристика биоваров холерного вибриона

Дифференцирующий признак

V. cholerae биовар cholerae

V. cholerae биовар eltor

Агглютинация эритроцитов курицы

Лизис бактериофагами (какими?)

Гемолиз эритроцитов барана

Чувствительность к полимиксину

Согласно современным представлениям, это заболевание могут вызывать и вибрионы, относящиеся к серогруппе О139. Чем еще, кроме специфичности структурной организации антигенов, различаются представители этих серогрупп (О1 и О139)?

Ситуационные задачи

Задача № 1. В инфекционную больницу поступил больной, который путешествовал по Индии. Основными симптомами заболевания были рвота и частый водянистый стул, напоминающий “рисовый отвар”. Предварительный диагноз - холера.

На основании каких данных поставлен предварительный диагноз? Какой материал от больного используется для диагностики? Опишите морфологические и тинкториальные свойства возбудителя холеры.

Задача № 2. От больного с подозрением на холеру в качестве материала для бактериологического исследования забраны испражнения. Какие питательные среды можно использовать для первичного посева? Какой характер роста бактерий и в какие сроки можно ожидать на:

а) жидких питательных средах

б) плотных питательных средах

Какие колонии следует считать «подозрительными», на какие среды следует сделать пересев?

Задача №3. От больного с подозрением на холеру из рвотных масс изолирована бактериальная культура со следующими свойствами: мелкие грамотрицательные палочки, слегка изогнутые, подвижные, дают рост в виде нежной пленки на поверхности 1% пептонной воды через 7 часов, на щелочном агаре колонии бесцветные, прозрачные образовались через 14 часов. Оксидаза+, ферментация: глюкоза-К, маннит-К, сахароза-К, манноза-К, арабиноза «‒», инозит «‒» Образование H2S «‒», агглютинируется сывороткой V.cholerae О1. Можно ли считать данный вибрион холерным по представленным данным? Нужно ли проводить дальнейшую идентификацию и, если «да», то какие признаки необходимо еще изучить?

Задача №4. В инфекционную больницу в течение суток поступили 5 пациентов с признаками ОКИ. По клиническим данным возникло подозрение на холеру. Можно ли использовать методы экспресс-диагностики и какие? При положительном ответе экспресс-методиками нужно ли проводить бактериологическое исследование? Нужно ли проводить противоэпидемические мероприятия, если «да», то какие?

Тестовые задания

1. Холерные вибрионы в организме человека локализуются:

А. На эпителиальных клетках тонкого кишечника

Б. В лимфоидной ткани тонкого кишечника

В. В эпителиальных клетках тонкого кишечника

Г. В эпителиальных клетках толстого кишечника.

2. Холерные вибрионы имеют форму:

Б. Изогнутой палочки

В. Палочки в виде запятой

3. По тинкториальным свойствам вибрионы:

В. Хорошо окрашиваются всеми анилиновыми красителями

4. При микроскопировании капли исследуемого материала под покровным стеклом (препараты «висячая капля» или «раздавленная капля») вибрионы двигаются:

Б. В виде стаек рыб

В. Винтообразно, штопорообразно

Г. В виде птиц (чайки)

5. Требуют для своего роста РН среды:

6. По типу дыхания холерные вибрионы являются:

А. Строгими анаэробами

В. Факультативными анаэробами

7. Оптимальной средой обогащения для холерных вибрионов можно считать:

А. Сывороточный бульон

Б. 1% ПВ (пептонная вода)

В. Селенитовый бульон

Г. Среда Раппопорт

8. Для ориентировочной дифференциации холерных и нехолерных вибрионов

в агар добавляют:

9.Для культивирования холерных вибрионов используют плотные среды:

А. Висмутсульфит-агар (ВСА)

10. Для дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae

и Vibrionaceae можно использовать следующий тест:

А. Отсутствие подвижности

Б. Отношение к лактозе

В. Чувствительность к антибиотикам

Г. Оксидазная активность

11. Основным признаком дифференциации биоваров возбудителей холеры является:

А. Характер роста на питательных средах

Б. Антигенная структура

В. Ферментативная активность

Г. Чувствительность к специфическим бактериофагам

12. Главный фактор патогенности возбудителя холеры:

13. Основным признаком, идентифицирующим вид возбудителя холеры, является:

Б. Чувствительность к специфическому бактериофагу

В. Антигенная структура

Г. Чувствительность к антибиотикам

14.Назовите сероварыV. choleraeО1: А. Бенгал Б. Огава В. Инаба Г. Гикошима

15.Средства специфической профилактики холеры: А. О-холерная сыворотка Б. Инактивированная вакцина В. Холероген-анатоксин Г. Пробиотики

16.Холерный вибрион был выделен в чистой культуре: А. Э. Дженнером Б. Р. Кохом В. Л. Пастером Г. 3. Ермольевой

17. Холерой болеют: А. Домашние животные Б. Дикие животные В. Люди Г. Земноводные

20. Основным методом диагностики холеры является: А. Бактериоскопический Б. Бактериологический В. Серологический Г. Биологический

Холера: клиника, диагностика, особенности лечения (обзор литературы)


Холера — это острая антропонозная кишечная инфекция, вызываемая Vibrio cholerae, с фекально-оральным механизмом передачи. Проявляется заболевание признаками дегидратации вследствие диареи и многократной рвоты.

Возбудителем являются представители вида Vibrio cholerae серогрупп О 1 и О 139. Это грамотрицательные подвижные палочки в форме запятой с длинным жгутиком.

Резервуаром и источником инфекции являются больной человек или вибриононоситель. В первую неделю болезни больной наиболее заразен. Механизм передачи — фекально-оральный, ведущий путь передачи-водный, но также немаловажное значение имеет и пищевой путь через продукты, не подвергшиеся адекватной термической обработке.

К основным факторам патогенности относятся:

- муциназа, приводящая к разрушению слизистого барьера кишечника;

- нейраминидаза, способствующая выработке токсинов (термостабильный липопротеиновый комплекс (эндотоксин), термолабильный экзотоксин).

Экзотоксин оказывает токсическое действие на слизистую оболочку кишечника, что приводит к массивному выбросу электролитов и жидкости из клеток и возникновению диареи и обезвоживания. Попадание в ЖКТ холерных вибрионов не всегда приводит к заболеванию, так как даже при массивном заражении большая часть возбудителей погибает под действием кислой среды желудка. При снижении желудочной секреции возбудители попадают в тонкую кишку и прикрепляются к энтероцитам.

Инкубационный период при холере составляет в среднем 1-3 дня. Заболевание начинается остро с внезапного безболезненного позыва к дефекации и ощущения дискомфорта в животе. Вначале стул имеет каловый характер, затем при прогрессировании заболевания он становится водянистым и приобретает вид рисового отвара. Нарастает частота дефекаций и объем выделяемого увеличивается. Характерным признаком является отсутствие зловонного запаха. Спустя несколько часов или на следующий день к диарее присоединяется рвота. Она возникает внезапно, не сопровождаясь чувством тошноты и болями в эпигастральной области. Обильная рвота приводит к быстрой потере ионов натрия и хлора, что способствует ухудшению состояния больного. Возникает мышечная слабость и развиваются судороги.

При осмотре отмечают наличие характерных признаков: бледность кожных покровов, цианоз губ и ногтевых фаланг, сухость слизистых оболочек. Голос сначала становится приглушенным, а затем пропадает за счет снижения эластичности голосовых связок. Черты лица заостряются, появляется так называемый симптом очков, кожа кистей и подушечек пальцев сморщивается (симптом «рук прачки»). У больных наблюдается тахикардия и артериальная гипотензия.

Потерю жидкости по В. И. Покровскому можно разделить на 4 степени:

  1. Потеря не более 3 % массы тела;
  2. Потеря до 6 % массы тела;
  3. Потеря до 9 % массы тела;
  4. Потеря более 9-10 % массы тела.

Дегидратация IV степени характеризуется возникновением признаков резкого обезвоживания (пульс на лучевой артерии не определяется, развивается анурия, нарастает одышка, температура тела снижается).

Холера может осложниться развитием пневмонии, абсцессов, флегмон в результате присоединения вторичной инфекции. Также возможно развитие острого нарушения мозгового кровообращения и инфаркта миокарда вследствие значительной потери жидкости.

Материалом для бактериологического исследования служат испражнения и рвотные массы, содержимое тонкой кишки и желчного пузыря. После забора его необходимо доставить в лабораторию в биксе не позже 3ч с момента получения. Материал засевают на элективную питательную среду, TCBS- агар с последующим субкультивированием на неселективных средах и идентификацией по антигенной структуре и биохимическим свойствам. Также существуют и другие методы диагностики холеры:

- для выявления антител использую реакцию непрямой гемагглютинации крови (РНГА);

- для обнаружения ДНК холерного вибриона используют ПЦР.

Для восполнения дефицита жидкости и электролитов используют глюкозо-солевые растворы (цитроглюкосолан, регидрон, оралит, глюкосолан). Восполнение необходимо после каждого акта дефекации. Если больной не в состоянии самостоятельно принимать жидкость, вводят солевые растворы внутривенно в зависимости от степени дегидратации (квартасоль, хлосоль, трисоль и др.).

Наряду с регидратационной терапией назначают этиотропную антибиотикотерапию. Применяют:

- доксициклин по 200-300 мг/сутки;

- ципрофлоксацин по 250-500 мг 2 раза в сутки.

Курс лечения составляет 5 дней.

Профилактика холеры направлена на выполнение санитарно-гигиенических требований и проведение мероприятий по улучшению санитарно-экономических условий жизни населения.

Специфическая профилактика является вспомогательной и проводится по эпидемиологическим показаниям (применяют холерную убитую вакцину и комплексный препарат, состоящий из холерогена-анатоксина и О-антигена сероваров Огава и Инаба).

Холера - Причины и патогенез

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Причины холеры

Причина холеры - Vibrio cholerae относится к роду Vibrio семейства Vibrionaceae.

Холерный вибрион представлен двумя биоварами, сходными по морфологическим и тинкториальным свойствам (биовар собственно холеры и биовар Эль-Тор).

Возбудителями холеры являются вибрионы серогрупп 01 и 0139 вида Vibrio cholerae, который относится к роду Vibrio, семейства Vibrionaceae. Внутри вида Vibrio cholerae различают два основных биовара - biovar cholerae classic, открытый Р. Кохом в 1883 г., и biovar El Tor, выделенный в 1906 г. в Египте на карантинной станции Эль Тор Ф. и Е. Готшлихами.

Культуральные свойства

Вибрионы являются факультативными анаэробами, но предпочитают аэробные условия роста, поэтому на поверхности жидкой питательной среды образуют пленку. Оптимальная температура роста 37 °С при рН 8,5-9,0. Для оптимального роста микроорганизмы требуют присутствия в среде 0,5% натрия хлорида. Средой накопления является 1 % щелочная пептонная вода, на которой они образуют пленку в течение 6-8 часов. Холерные вибрионы неприхотливы и могут расти на простых средах. Элективной средой является среда TCBS (тиосульфат цитратный сахарозожелчесодержащий агар). Щелочной агар и триптон-соевый агар (ТСА) используют для субкультивирования.

Биохимические свойства

Возбудители холеры биохимически активны и оксидазопозитивны, обладают протеолитическими и сахаролити-ческими свойствами: продуцируют индол, лизиндекарбоксилазу. разжижают в воронковидной форме желатину, не продуцируют сероводород. Ферментируют глюкозу, маннозу, сахарозу лактозу (медленно), крахмал, не сбраживают рамнозу, арабийозу, дульцит, инозит, инулин. Обладают нитратредуктазной активностью.

Холерные вибрионы различаются по чувствительности к бактериофагам. Классический холерный вибрион лизируется бактериофагами IV группы по Mukerjee, а вибрион биовара Эль-Тор - бактериофагами V группы. Дифференциация среди возбудителей холеры проводится по биохимическим свойствам, по способности гемолизировать эритроциты барана, агглютинировать куриные эритроциты, а также по чувствительности к полимиксину к бактериофагам. Biovar El Tor резистентен к полимиксину, агглютинирует куриные эритроциты и гемолизирует эритроциты барана, имеет положительные реакцию Фогес-Проскауэра и гексаминовый тест. V. cholerae 0139 по фенотипичесим признакам относится к биовару El Tor.

Антигенная структура

Холерные вибрионы обладают О- и Н-антигенами. В зависимости от строения О-антигена различают более 150 серогрупп, среди которых возбудителями холеры являются серогруппы 01 и 0139. Внутри серогруппы 01 в зависимости от сочетания А-, В- и С- субъединиц происходит подразделение на серовары: Огава (АВ), Инаба (АС) и Гикошима (ABC). Вибрионы серогруппы 0139 агглютинируются только сывороткой 0139. Н-антиген является общеродовым антигеном.

Отношение к факторам окружающей среды

Возбудители холеры чувствительны к УФ, высушиванию, дезинфектантам (за исключением четвертичных аминов), кислым значениям рН, нагреванию. Возбудители холеры, особенно биовар Эль-Тор, способны к существованию в воде в симбиозе с гидробионтами, водорослями, в неблагоприятных условиях могут переходить в некультивируемую форму. Эти свойства позволяют отнести холеру к антропосапронозным инфекциям.

Факторы патогенности

Геном V. cholerae состоит из двух циркулярных хромосом: большой и малой. Все гены, необходимые для жизнедеятельности и реализации патогенного начала, локализованы на большой хромосоме. Малая хромосома содержит интегрон, который захватывает и экспрессирует кассеты антибиотикорезистентности.

Главным фактором патогенности является холерный энтеротоксин (СТ). Ген, опосредующий синтез этого токсина, локализован в кассете токсигенности, расположенной на геноме нитчатого бактериофага СТХ. Вдобавок к гену энтеротоксина на этой же кассете находятся гены zot и асе. Продуктом гена zot является токсин, (zonula occludens toxin), а ген асе детерминирует синтез добавочного энтеротоксина (accessory cholerae enterotoxin). Оба эти токсина принимают участие в увеличении проницаемости стенки кишечника. На геноме фага находится также ген сер-адгезина и последовательность RS2, кодирующая репликацию фага и его интеграцию в хромосому.

Рецептором для фага СТХ являются токсинкорегулируемые пили (Тер). Они являются пилями 4 типа, которые, помимо того, что являются рецепторами для фага СТХ, необходимы для колонизации микроворсинок тонкого кишечника, а также принимают участие в образовании биопленки, в частности на поверхности панциря гидробионтов.

Тер координированно экспрессируются с геном СТ. На большой хромосоме также находится ген пап, определяющий синтез нейраминидазы, способствующей реализации действия токсина, и ген hap, определяющий синтез растворимой гемаллютининпротеазы, которая играет важную роль в выведении возбудителя из кишечника во внешнюю среду в результате ее деструктивного действия на рецепторы кишечного эпителия, ассоциированные с вибрионами.

Колонизация тонкого кишечника, осуществляемая токсинкорегулируемыми пилями, создает плацдарм для действия холерного энтеротоксина, который представляет белок с молекулярной массой 84000D, состоящий из 1 субъединицы А и 5 субъединиц В. Субъединица А состоит из двух полипептидных цепочек А1 и А2, связанных между собой дисульфидными мостиками. В субъединичном комплексе В пять одинаковых полипептидов соединены друг с другом нековалентной связью в виде кольца. В-субъединичный комплекс ответственен за связывание всей молекулы токсина с клеточным рецептором - моносиаловым ганглиозидом GM1, которым очень богаты эпителиальные клетки слизистой тонкой кишки. Для того чтобы субъединичный комплекс мог взаимодействовать с GM1, от него должна быть отщеплена сиаловая кислота, что осуществляется ферментом нейраминидазой, которая способствует реализации действия токсина. Субъединичный комплекс В после прикрепления к 5-ти ганглиозидам на мембране кишечного эпителия меняет свою конфигурацию так, что позволяет А1 отсоединиться от комплекса А1В5 и проникнуть в клетку. Проникнув в клетку, А1 пептид активирует аденилатциклазу. Это происходит в результате взаимодействия AI с НАД, следствием чего является образование АДФ-рибозы, которая переносится на ГТФ-связывающий белок регуляторной субъединицы аденилатциклазы. В результате происходит ингибиция функционально необходимого гидролиза ГТФ, приводящая к накоплению ГТФ в регуляторной субъединице аденилатциклазы, определяя активное состояние фермента, и как следствие - усиление синтеза ц-АМФ. Под влиянием Ц-АМФ в кишечнике изменяется активный транспорт ионов. В области крипт эпителиоцитами усиленно выделяются ионы С1-, а в области ворсинок затрудняется всасывание Na+ и Сl-, что составляет осмотическую основу для выделения в Просвет кишечника воды.

Холерные вибрионы хорошо выживают при низкой температуре; во льду сохраняются до 1 мес. в морской воде - до 47 сут, в речной воде - от 3-5 дней до нескольких недель, в почве - от 8 дней до 3 мес, в испражнениях - до 3 сут, на сырых овощах - 2-4 дня. на фруктах - 1-2 дня. Холерные вибрионы при 80 °С погибают через 5 мин, при 100 °С - моментально; высокочувствительны к кислотам, высушиванию и действию прямых солнечных лучей, под действием хлорамина и других дезинфектантов погибают через 5-15 мин, хорошо и долго сохраняются и даже размножаются в открытых водоёмах и сточных водах, богатых органическими веществами.

Патогенез холеры

В результате уменьшается объём плазмы, сокращается объём циркулирующей крови и она сгущается. Жидкость перераспределяется из интерстициального во внутрисосудистое пространство. Возникают гемодинамические расстройства, нарушения микроциркуляции, следствием которых становятся дегидратационный шок и острая почечная недостаточность. Развивается метаболический ацидоз, который сопровождается судорогами. Гипокалиемия вызывает аритмию, гипотензию, изменения в миокарде и атонию кишечника.

Читайте также: