Диагностика кампилобактериозов. Принципы микробиологической диагностики кампилобактериозов. Выявление кампилобактер. Лечение кампилобактериозов.

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 14.12.2024

1.1. В методических рекомендациях представлена доступная для практических бактериологических лабораторий методика бактериологического исследования на кампилобактериоз больных острыми кишечными инфекциями с учетом современных возможностей лабораторной техники по созданию условий для культивирования и идентификации кампилобактерий.

1.2. Методические рекомендации предназначены для врачей бактериологов, инфекционистов, эпидемиологов и врачей других специальностей.

2. Общие положения

В настоящее время по данным ВОЗ, во многих зарубежных странах кампилобактериоз является наиболее распространенной этиологической формой в структуре ОКИ и в зависимости от региона на его долю приходится от 3 до 73 % всех расшифрованных острых кишечных инфекций [1, 11].

Для лабораторной диагностики кампилобактериозного энтероколита кроме основного бактериологического метода с выделением чистой культуры возбудителя могут быть использованы и другие методы.

Бактериоскопический метод основан на обнаружении в окрашенном препарате микроорганизмов с характерной морфологией (мелкие изогнутые S-образные палочки, «крылья летящей чайки») или клеток с характерной морфологией в сочетании с молниеносной подвижностью (препарат «раздавленная капля», при фазово-контрастной или темнопольной микроскопии). Бактериоскопический метод является достоверным лишь при обсемененности не менее КОЕ в 1 мл материала и имеет только дополнительное, ориентировочное значение в диагностике кампилобактериоза [6].

Серодиагностика при кампилобактериозе имеет вспомогательное значение и может быть проведена для ретроспективной диагностики при отсутствии выделения возбудителя, при эпидемиологических исследованиях и изучении патогенеза. Исследование парных сывороток при кампилобактериозной инфекции не имеет такого большого диагностического значения как при многих других кишечных заболеваниях, поскольку отчетливое увеличение титров антител наблюдается только у одной трети больных [14].

Для ускоренной индикации кампилобактеров в разное время предлагали использовать иммунологические реакции, такие как реакция коагглютинации, иммуноферментный анализ [3, 12]. Однако они не могут широко использоваться в практических лабораториях из-за ограниченного производства тест-систем.

Одним из наиболее распространенных альтернативных методов индикации кампилобактерий являются методики, основанные на амплификационных технологиях и в частности - методе полимеразной цепной реакции (ПЦР). В связи с высокой частотой циркуляции в популяции здоровых лиц сапрофитных видов кампилобактерий для диагностики кишечных форм кампилобактериоза применяются тест-системы, позволяющие выявлять только термофильную группу этих микроорганизмов и разрешенные к применению на территории Российской Федерации в установленном порядке. Предпочтение при этом должно отдаваться тест-системам, обеспечивающим более высокий уровень контаминационной защищенности при проведении исследований.

Предлагаемая методика микробиологической диагностики кампилобактериозной инфекции учитывает современные возможности лабораторной техники по созданию условий для культивирования и идентификации кампилобактеров, и будет способствовать эффективной диагностике данного заболевания в условиях бактериологических лабораторий лечебно-профилактических организаций и ФГУЗ «центров гигиены и эпидемиологии», его адекватной терапии и осуществлению мониторинга за циркуляцией возбудителя.

Апробация разработанной методики в условиях микробиологической лаборатории инфекционной больницы г. Липецка при обследовании 11607 больных ОКИ подтвердила эффективность ее использования для диагностики кампилобактериозной инфекции. Так, высеваемость кампилобактеров за 2002 - 2005 гг. в г. Липецке в среднем составила 1,8 ± 0,12 %, что более чем в 2 раза выше уровня высеваемости шигелл за анализируемый период (0,8 %), но ниже высеваемости сальмонелл (3,2 %)

3. Описание метода

3.1 Формула метода

Способ бактериологической диагностики кампилобактериоза, включающий выделение чистой культуры возбудителя, с использованием специальных питательных сред и капнофильных условий культивирования, и последующей ее идентификацией.

3.2. Показания и противопоказания к применению метода:

Показанием к проведению бактериологического исследования биологического материала на кампилобактериоз является необходимость обследования

- больных острыми кишечными инфекциями (ОКИ) - с диагностической целью;

- лиц, контактных с больными ОКИ - по эпидемическим показаниям;

- реконвалесцентов кампилобактериоза - для контроля лечения и выявления бактерионосительства.

Противопоказания к использованию метода отсутствуют.

3.3. Материально-техническое обеспечение метода

3.3.1. Стандартное испытательное и вспомогательное оборудование, средства измерения для микробиологических лабораторий.

3.3.2. Питательные среды, химические реагенты, оборудование для культивирования, выделения, идентификации кампилобактерий, в том числе:

- Трековые мембраны с диаметром пор 0,46 и 0,55 мкм (типа изготовляемых лабораторией ядерных реакций им. Г.Н. Флерова ОИЯИ, г. Дубна и др.).

- Сухие газогенерирующие пакеты типа «Кампилогаз» (типа пакетов, выпускаемых ООО «ИНКО», г. Санкт-Петербург и др.);

- Термостат с регулируемой газовой средой или микроанаэростат или системы для инкубации микроаэрофильных и анаэробных микроорганизмов (типа CampyPack Plus jar, Campy Pack (Becton Dickinson), Genbag, Genbox anaer (bio Merieux, Hi Media и др.).

3.3.3. Для лабораторной диагностики кампилобактериоза должны использоваться питательные среды и реагенты, разрешенные к применению на территории Российской Федерации в установленном порядке.

4. Бактериологический метод диагностики кампилобактериозной инфекции

Возбудители кампилобактериоза первоначально были отнесены к роду Vibrio семейства Vibrionaceae, а выделенный для них вид был назван V. fetus []. В 1963 году по предложению Sebald M. и Veron M., доказавших различия между микроаэрофильной группой V. fetus и истинными вибрионами при изучении состава оснований ДНК, род Campylobacter, как новый таксон, был введен в семейство Spirillaceae. В настоящее время микроаэрофильные подвижные, хемоорганотрофные, не образующие спор и капсул грамотрицательные бактерии спиралевидной, S-образной или изогнутой формы объединены в семейство Campylobacteriaceae, а род Campylobacter насчитывает, по последним данным, около 20 видов и подвидов, и это число постоянно растет, уточняются потенциальные возможности данных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболевания у человека. Наибольшее значение для патологии человека на сегодня имеют C. jejuni, C. coli, C. lari, C. fetus. Последний вид чаще поражает ослабленных интеркуррентными заболеваниями людей с развитием гематогенно-диссеминированных форм заболевания [9].

Длина клеток кампилобактеров 0,5 - 5 мкм, толщина - 0,2 - 0,8 мкм, имеют один или два полярно расположенных жгутика, могут обладать плазмидами. В старых культурах бактерии часто принимают сферические или кокковые формы.

Кампилобактерам присущ дыхательный тип метаболизма. В качестве источника энергии они, в основном, используют аминокислоты, но не могут утилизировать углеводы. Кампилобактеры - микроаэрофилы. Кислород необходим для их роста, но становится токсичным для микроорганизмов в избыточном количестве. Для большинства штаммов оптимальной является концентрация кислорода 3 - 6 %. Кампилобактерии являются капнофилами, то есть нуждаются в высоких концентрациях CO₂ (до 10 %). Большинство этиологически значимых кампилобактеров обладают каталазой, оксидазой и супероксиддисмутазой.

В зависимости от температурного диапазона роста кампилобактеры делят на 2 группы: 1) нетермофильные (O. faecalis, Chyointestinalis, C. fetus, O. consicus) - температурный оптимум +37 °С; 2) термофильные (C. jejuni, C. coli, C. lari) - температурный оптимум +42 - 43 °С.

На жидких питательных средах через 48 часов инкубации кампилобактер образует равномерное помутнение с выраженным осадком, на полужидких пробирочных питательных средах - зону роста в виде диска, расположенного на глубине 1 - 2 мм от поверхности питательной среды.

C. jejuni на плотных питательных средах с добавлением крови образуют колонии без гемолиза 2-х типов:

1) низкие, плоские, в краями неправильной формы, блестящие, влажные, полупрозрачные, растекаются по поверхности среды, имеют тенденцию к слиянию (характерны для «свежих» культур, содержащих извитые формы клеток);

2) круглые, гладкие, приподнятые, с ровными краями, 1 - 2 мм в диаметре (характерны для «старых» культур, содержащих кокковидные формы) [3].

На полужидких средах C. jejuni растут в виде диска, 3 - 5 мм от поверхности среды. C. coli на плотных питательных средах с добавлением крови образуют колонии диаметром 1 - 2 мм без гемолиза, гладкие, выпуклые, блестящие с рыжевато-коричневым оттенком.

4.1. Принцип бактериологического метода основан на выявлении живых микроорганизмов в исследуемом субстрате при посеве на специальные питательные среды с последующей инкубацией в термостате при заданной температуре в микроаэрофильных условиях. Изучение культуральных и ферментативных свойств полученных микроорганизмов позволяет идентифицировать бактерии рода Campylobacter.

4.2. При кампилобактериозе бактериологическое исследование обеспечивает постановку этиологического диагноза и контроль освобождения организма от возбудителя. При дифференциальной диагностике кампилобактериоза от других острых кишечных инфекций бактериологическое исследование с выделением возбудителя является единственным методом, так как клиническое течение инфекционного процесса не всегда позволяет различить эти нозологические формы.

4.3 Схема бактериологической диагностики кампилобактерий

Проводить бактериологическое исследование с диагностической целью необходимо в наиболее ранние сроки от начала заболевания, до начала антибиотикотерапии.

4.4 Сбор материала для исследования

Материалом для исследования являются испражнения. Техника взятия исследуемого материала не отличается от техники, применяемой при других ОКИ.

Отбор нативного материала

Испражнения не менее 1 грамма собирают сразу после естественного акта дефекации из судна, горшка (тщательно вымытого и не содержащего следов дезинфектантов) или с пеленки с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли или деревянного шпателя и помещают в стерильную посуду (стеклянную пробирку, вакуумный пробоотборник, контейнер транспортировочный со средой для анаэробов или специальными средами с активированным углем и без него для выделения Campylobacter spp.). При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, хлопья, эпителий, гной), за исключением крови, их включают в отбираемую пробу.

Отбор с использованием ректальных петель (тампонов).

Стерильную ректальную петлю (тампон) вводят в прямую кишку на глубину 56 см. Взятый материал переносят в стерильную пробирку с физиологическим раствором или в транспортную среду. Попадание транспортных сред на слизистую оболочку прямой кишки недопустимо!

Условия и сроки хранения и транспортировки проб.

При возможности доставки нативных фекалий в лабораторию в течение 1 часа, транспортные среды можно не использовать.

При необходимости продолжительной транспортировки используют транспортные среды: 0,1 % пептонная вода, среда контроля стерильности, среда Amies, среда Саrу-Blair (см. Приложение 1). Соотношение материал/среда должно быть 1:3 - 1:5. Применение транспортных сред обязательно при отборе проб ректальными петлями [3].

Сроки хранения материала в транспортных средах при температуре 4 °С в зависимости от вида среды:

- в изотоническом растворе натрия хлорида в течение 24 часов,

- в 0,1 % пептонной воде - 72 часа,

- в среде для контроля стерильности, среде Amies, среде Cary-Blair - 5 - 7 суток.

4.5. Этапы бактериологического исследования

Задачей первого этапа бактериологического исследования является выделение чистой культуры кампилобактеров. С этой целью возможны 2 варианта посева исследуемого материала:

1 - посев на селективные питательные среды;

2 - посев с использованием ядерных фильтров.

Первый вариант предусматривает посев испражнений непосредственно на питательные среды (кровяной эритрит агар, угольный эритрит агар, кампилобакагар) с использованием добавок: аэротолерантных (железа II сульфата, натрия пирувата, натрия метабисульфита в концентрации 0,025 % каждой из солей, (см. Приложение 1) и селективных (смеси антибиотиков для подавления сопутствующей микрофлоры, (см. Приложение 2). Перед посевом фекальные пробы суспензируют в изотоническом растворе NaCl или в 0,1 % пептонной воде в соотношении 1:10.

Применение метода ядерных фильтров позволяет производить посев материала на неселективные питательные среды. Использование ядерных фильтров с диаметром пор 0,46 и 0,55 мкм и отказ от внесения в среду селективных добавок способствует: сокращению времени выделения кампилобактерий до 24 часов инкубации; возможности обнаружения разных видов кампилобактерий; росту возбудителя в чистой культуре, что значительно упрощает учет результатов посева; снижению стоимости анализа.

Ядерные фильтры размером 3×3 см, стерилизованные автоклавированием при +121 °С в течение 30 минут, переносятся пинцетом на подсушенную питательную среду. Затем на поверхность фильтров пипеткой наносят 0,1 мл суспензии фекалий в стерильном изотоническом растворе натрия хлорида или консерванте. Через 30 минут экспозиции фильтры удаляют. Допускается повторное использование ядерных фильтров после: обеззараживания кипячением в дистиллированной воде в течение 5 минут (без интенсивного кипения воды), промывания в проточной воде, просушивания, визуальной проверки целостности, стерилизации автоклавированием при +121 °С в течение 30 минут [4].

Инкубация всех посевов проводится при температуре +42,5 - 43 °С в микроаэрофильных и капнофильных условиях. Оптимальные условия для культивирования кампилобактеров создает атмосфера, содержащая 5 % кислорода, 10 % углекислого газа, 85 % азота. Длительность инкубации составляет 48 часов с обязательным просмотром посевов через 24 часа.

Необходимые устройства для культивирования кампилобактерий:

термостат с регулируемой газовой средой, или микроанаэростаты, или эксикаторы, или сборник для твердых радиоактивных отходов, или системы для инкубации Genbox и др.

Способы создания газовой смеси: использование газовой смеси из баллонов; химические газогенерирующие пакеты.

4.6. Идентификация выделенной культуры

На следующем этапе исследования проводится идентификация выделенной культуры.

При обнаружении подозрительных колоний из них готовят мазки с последующей окраской кристалл-виолетом или 1 % раствором фуксина. При выявлении микроорганизмов с характерной морфологией (изогнутые палочки S-образные или в виде крыльев чайки) проводят традиционные тесты: определение цитохромоксидазы (с использованием стандартных наборов и реактивов для определения цитохромоксидазы), продукция каталазы со свежеприготовленным 3 % раствором перекиси водорода, КОН-тест с 3 % раствором КОН.

В настоящее время возможна первичная идентификация колоний,

подозрительных на кампилобактериозные, с помощью латексного агглютинационного набора (типа Campylobacter test kit фирмы ОХOID), который состоит из: карт с сухим кампилобактер-реагентом, имеющими тестовую и контрольную поверхность, экстрагирующего реагента 1 (раствора уксусной кислоты), экстрагирующего нейтрализующего реагента 2 (трис буфера, содержащего 0,09 % азида натрия в качестве консерванта), положительного контрольного реагента.

Методика основана на взаимодействии латексных частиц тестовой поверхности, сенсибилизированных кроличьими антителами, с поверхностными антигенами отобранных клеток кампилобактера.

Подозрительную колонию сначала смешивают с каплей реагента 1 в экстракционной пробирке, оставляют на 3 минуты. Затем добавляют 2 капли экстрагирующего нейтрализующего реагента 2, тщательно перемешивают. Используя веслообразную пастеровскую пипетку, помещают 1 каплю (50 мкл) нейтрализующего экстракта на тестовой круг и 1 каплю на контрольный круг. Веслообразным концом пастеровской пипетки сначала перемешивают экстракт и сухой контрольный реагент, затем эта процедура повторяется и для тестового реагента.

Учет реакции в течение трех минут покачивания карты без использования увеличительного стекла. Результат является положительным, если агглютинация латексных частиц происходит через три минуты, что указывает на присутствие Campylobacter spp. Реакция считается отрицательной, если агглютинация в тестовом окне отсутствует. Реакции, наступающие в тестовом окне после 3-х минут, игнорируются. Тест не подлежит интерпретации, если происходит агглютинация с контрольным реагентом, что указывает на аутоагглютинацию культуры.

Для определения вида выделенной культуры основным тестом является гидролиз гиппурата, позволяющий дифференцировать С. jejuni от других видов. Кроме того, для идентификации используют также определение устойчивости к налидиксовой кислоте, цефалотину, температурный тест, ТТХ (0,04 % трифенилтетразолий хлорид), продукция нитратредуктазы и др.

Для большинства практических лабораторий Российской Федерации постановка некоторых из этих тестов проблематична, что связано с необходимостью приобретения различных химических ингредиентов для реактивов, сложностью их приготовления, трудностями при тестировании и интерпретации результатов.

Кампилобактериоз

Кампилобактериоз - острая зоонозная инфекция, вызываемая энтеробактериями Campylobacter и протекающая с преимущественным поражением пищеварительного тракта. Локализованная форма кампилобактериоза в большинстве случаев протекает по типу гастроэнтерита или гастроэнтероколита; генерализованная форма сопровождается развитием септицемии или септикопиемии. Диагноз кампилобактериоза подтверждается с помощью бактериологического посева кала, крови; серологических реакций, эндоскопии кишечника. Специфическая этиотропная терапия кампилобактериоза осуществляется противомикробными препаратами (метронидазолом, антибиотиками тетрациклинового ряда, групп макролидов или фторхинолонов и др.).

Общие сведения

Кампилобактериоз - острая кишечная инфекция, возбудителями которой являются бактерии кампилобактеры. В структуре диарейных заболеваний на долю кампилобактериоза приходится 5-15%, что говорит о его распространенности и эпидемиологической значимости. Кампилобактериоз регистрируется во всех странах мира, в т. ч. в России; более высокий уровень заболеваемости отмечается в тропических широтах. Кампилобактериозом болеют представители различных возрастных групп, однако чаще инфекция диагностируется у детей-дошкольников. Возможно возникновение как спорадических, так и групповых случаев кишечной инфекции. Пик заболеваемости кампилобактериозом приходится на летне-осенние месяцы, с июня по сентябрь.

Причины кампилобактериоза

Кампилобактериоз вызывают патогенные виды кишечных бактерий, принадлежащие к семейству Enterobacteriaceae, роду Campylobacter. В настоящее время насчитывается более 14 видов кампилобактеров, выделенных от людей и животных. Наибольшую значимость в этиологии и патогенезе кампилобактериоза человека имеют C.coli, C.jejuni, C.laridis, C.fetus: из них первые два вида вызывают большинство случаев диарейных форм инфекции, а последний - гематогенно-диссеминированные формы заболевания.

Кампилобактеры являются грамотрицательными, не образующими спор бактериями, имеющими небольшие размеры (длина 0,5-0,8 мкм, ширина 0,2-0,5 мкм), изогнутую или спиралевидную форму. Подвижность бактерий обеспечивается одним или двумя жгутиками, расположенными полярно. Оптимальными условиями для роста кампилобактеров является микроаэрофильная среда с концентрацией кислорода не более 5-10% и температурой 37-42°С, однако бактерии устойчивы и к низким температурам.

Основным источником заражения человека кампилобактериозом служат сельскохозяйственные животные и птицы, а ведущим способом передачи возбудителей - алиментарный путь, реализуемый при употреблении загрязненных мясных продуктов, молока, воды. Реже возможно проникновение микроорганизмов через поврежденную кожу, например, при укусах инфицированных животных. Заражение новорожденных может происходить трансплацентарно или во время родов. В группе риска по возникновению кампилобактериоза находятся сельские жители, работники животноводческих и птицеводческих хозяйств, а также туристы, посещающие развивающиеся страны. В большей степени заболеваемости кампилобактериозом подвержены лица, страдающие иммунодефицитными состояниями, дети и беременные женщины.

При попадании в организм кампилобактеры достигают тонкой кишки, где внедряются в ее слизистую оболочку и лимфоидные образования, вызывая развитие воспалительного процесса различной выраженности. По лимфатическим путям кампилобактеры проникают в брыжеечные лимфоузлы, червеобразный отросток, толстый кишечник. В процессе своей жизнедеятельности кампилобактеры продуцируют энтеро- и цитотоксины, а при разрушении выделяют эндотоксины, обусловливающие развитие диарейного, болевого и интоксикационного синдромов. При переходе кампилобактериоза в генерализованную форму развивается септицемия и септикопиемия, приводящие к полиорганному поражению с возникновением абсцессов в печени и селезенке, полиартрита, лимфаденита, менингита, нефрита и др.

Классификация кампилобактериоза

На основании клинико-патогенетических особенностей различают локализованную (гастроинтестинальную) и генерализованная форму кампилобактериоза. К локализованным вариантам течения инфекции относятся гастроэнтерит, гастроэнтероколит, энтерит, энтероколит, мезаденит, аппендицит. Генерализованная форма сопровождается развитием кампилобактериозной септицемии и септикопиемии.

Кампилобактериоз может иметь манифестное или бессимптомное течение. Клинически выраженные формы включают легкую, среднетяжелую и тяжелую степени. Бессимптомные формы представлены субклиническим и реконвалесцентным вариантами кампилобактериоза. В зависимости от продолжительности инфекции различают острую (до 3 месяцев), хроническую (более 3 месяцев) и резидуальную фазу кампилобактериоза.

Симптомы кампилобактериоза

В большинстве случаев кампилобактериоз протекает в локализованной форме, принимая характер энтерита, энтероколита, гастроэнтероколита или колита. У заболевших часто имеются сопутствующие заболевания ЖКТ: гастриты, дуодениты, язвенная болезнь желудка и 12-перстной кишки, дискинезии желчевыводящих путей, холециститы.

Развитие генерализованных форм кампилобактериоза отмечается у лиц с неблагоприятным сопутствующим фоном: кахексией, циррозом печени, сахарным диабетом, туберкулезом, системными заболеваниями, злокачественными опухолями, ВИЧ-инфекцией, а также у детей первых месяцев жизни. Клиническая симптоматика включает стойкую лихорадку (до 40°С и выше), профузные поты, ознобы, истощение, диспепсические явления, гепатоспленомегалию, анемизацию. В некоторых случаях транзиторная бактериемия может прогрессировать в септический процесс, вызывая развитие гнойных метастатических очагов в различных органах в виде артрита, микрополилимфаденита, перитонита, эндокардита, миокардита, плеврита, пневмонии, менингита, энцефалита и др. Течение генерализованной формы кампилобактериоза тяжелое, нередко отмечается летальный исход.

Хронический кампилобактериоз обычно связан с иммунодепрессивными состояниями, в т. ч. ВИЧ-инфекцией. Больных беспокоит субфебрилитет, неустойчивый стул, боли в мезогастрии, снижение аппетита, похудание. Часто выявляются признаки конъюнктивита, кератита, фарингита; у женщин возникают рецидивирующие вагиниты или вульвовагиниты, выкидыши. В периоды обострения кампилобактериоза могут развиться органные поражения, характерные для генерализованной формы.

Диагностика кампилобактериоза

Основаниями для подозрения на кампилобактериоз могут служить эпиданамнез (контакт с животными, туристические поездки и др.), характерные симптомы. При исследовании копрограммы в испражнениях обнаруживается воспалительный экссудат, лейкоциты, эритроциты. Ректороманоскопия или колоноскопия в разгар заболевания выявляет картину катарального, катарально-геморрагического, эрозивно-язвенного проктосигмоидита или колита.

Самым точным подтверждением кампилобактериоза является бактериологическое исследование кала. Иногда материалом для культурального исследования служит кровь, гной абсцессов, ликвор, околоплодные воды. Также проводится серологическая диагностика с помощью методов РА, РНГА, РСК, ИФА, иммуноэлектрофореза, латекс-агглютинации и др.

Гастроинтестинальная форма кампилобактериоза требует дифференциации от других ОКИ, прежде всего дизентерии и сальмонеллеза, а также мезаденита и аппендицита другой этиологии. Эндоскопическая биопсия кишечника позволяет исключить неспецифический язвенный колит и болезнь Крона. Генерализованную форму кампилобактериоза необходимо отличать от сепсиса, вызванного другим возбудителем; хроническую форму - от токсоплазмоза, бруцеллеза, иерсиниозов и других хронических инфекционных заболеваний.

Лечение и профилактика кампилобактериоза

Объем лечебных мероприятий при кампилобактериозе зависит от формы и тяжести инфекции. При легкой степени локализованных форм кампилобактериоза этиотропная терапия не проводится: в этом случае ограничиваются назначением диеты, оральной регидратации, спазмолитиков, ферментов, биологических бактерийных препаратов для коррекции дисбактериоза кишечника. При среднетяжелом и тяжелом течении гастроинтестинальных форм кампилобактериоза, а также при генерализации инфекции показано применение антибактериальных препаратов, к которым чувствительны кампилобактеры (эритромицин, тетрациклин, доксициклин, хлорамфеникол, клиндамицин, фторхинолоны, аминогликозиды, макролиды, метронидазол, фуразолидон и др.) курсом 7-14 дней. Патогенетическая терапия кампилобактериоза предполагает инфузионное введение глюкозо-электролитных и полиионных растворов, назначение десенсибилизирующих средств. Лица, перенесшие кампилобактериоз, находятся на диспансерном наблюдении у инфекциониста в течение 1 месяца и подлежат двукратному бактериологическому обследованию.

При локализованных формах кампилобактериоза прогноз благоприятный. Осложнения возможны лишь при тяжелом течении заболевания и среди лиц с отягощенным сопутствующим фоном. При генерализованных формах, развивающихся у детей, беременных женщин, ослабленных пациентов, летальность может достигать 25-30%. Профилактика кампилобактериоза должна быть направлена на предупреждение инфицированности домашних животных и птиц; санитарный надзор за водоснабжением, режимом хранения и технологией переработки пищевых продуктов; обучение населения нормам личной гигиены и правилам приготовления пищи.

Микробиологическая диагностика кампилобактериозов

Возбудителями кампилобактериозов - кишечных инфекций, склонных к генерализации и выраженным токсико-аллергическим осложнениям, являются Campylobacter jejuni и Campylobacter coli. Оппортунистические инфекции различной локализации и тяжести вызываются преимущественно Campylobacter fetus.

Материалом для исследования в зависимости от характера заболевания являются испражнения, гной, ликвор, кровь, рвотные массы и др., которые с учетом нестойкости возбудителя во внешней среде должны быть доставлены в лабораторию как можно скорее.

Бактериоскопический методявляется весьма чувствительным ввиду характерной морфологии кампилобактеров (грамотрицательные изогнутые, S-образные или извитые палочки размером 0,2- 0,9x0,5-5,0 мкм).

Бактериологический метод.Для выделения чистых культур исследуемый материал засевают на селективные плотные среды (с кровью, факторами роста и антибиотиками) или используют для выделения метод фильтрации. Неконтаминированный материал засевают на неселективные среды обогащения (бруцеллезные бульон или агар, содержащий пептон, дрожжевой экстракт, глюкозу и гидросульфит натрия в качестве редуцента).

Селективные среды (Скирроу, Престона, эритрит-агар) для кампилобактеров содержат баранью кровь (фактор роста) и селективные добавки (антибиотики триметоприм, ванкомицин, амфотерицин Д, полимиксин В и цефалотин), ингибирующие рост нормальной микрофлоры. Культивирование кампилобактеров осуществляется в специальной газовой атмосфере, состоящей из азота, углекислого газа и кислорода в соотношении 85:10:5, которая создается применением специальных газогенераторных пакетов, помещаемых вместе с посевами в герметично закрывающиеся емкости. Посевы инкубируют при 42 0 С.

Метод фильтрации основан на способности подвижных кампилобактеров активно проходить через мембранные фильтры с порами диаметром 0,45 — 0,65 мкм. Фильтр укладывают на поверхность неселективной плотной среды в чашке Петри, наносят на него 10—15 капель суспензии фекалий, инкубируют чашку при 37 0 С в течение 1 ч, после чего фильтр снимают, а чашку инкубируют в микроаэрофильных условиях. Проникшие через фильтр кампилобактеры образуют через 48 — 96 ч на поверхности среды характерные колонии - серые, плоские, с неровным краем, сливающиеся по ходу штрихов. На более сухих средах колонии выпуклые, блестящие, округлые, без выраженной тенденции к распространению; гемолиз отсутствует.

Выделенные культуры идентифицируют по морфологии (мазки, окрашенные по Граму), характерной «винтообразной» подвижности (исследование в препарате «раздавленная капля с использованием темнопольной или фазово-контрастной микроскопии), биохимическим свойствам и чувствительности к антибиотикам. Основные свойства некоторых видов кампилобактеров и Helicobacter pylori представлены в таблице 12. Важным признаком С. jejuniявляется гидролиз гиппурата натрия (в 0,4 мл 1% водного раствора гиппурата суспендируют петлю выделенной культуры, пробирку помещают на 2 часа в термостат при 37 0 С, после чего добавляют 0,2 мл 3,5% раствора нингидрина в ацетон-бутаноловой смеси и вновь помещают в термостат). Пурпурное окрашивание взвеси свидетельствует о положительная пробе. Культура с типичной морфологией, выросшая при 42 °С на селективной среде, положительными пробами на оксидазу и на гидролиз гиппурата, относится к виду С. jejuni.

Нитратный тест культуру выполняют на нитратном бульоне Барретта или полужидкой среде Мюллера-Хинтона с 0,2 % нитрата калия; тест-реактивом является сульфоновая кислота в смеси с нафтиламином. Положительный нитратный тест характеризуется появлением красного окрашивания.

Таблица 12.Дифференциация некоторых видов кампилобактеров и Helicobacter pylori

Биологические свойства	Campylobacter Jejuni	Campylobacter coli	Campylobacter fetus	Helicobacter pylori
Рост при 42 0 С	+	+	-	-
Рост при 25 0 С	-	-	+	-
Уреаза	-	-	-	+
Нитратредуктаза	+	+	+	-
Гидролиз гиппурата натрия	+	-	-	-
Каталаза	+	+	+	+
Устойчивость к:
налидиксовой кислоте	±	-	±	+
Цефалотину	+	+	-	+

Обозначения: (+) - наличие свойства, (-) - отсутствие свойства, (±) - непостоянное свойство

Генодиагностика. Для диагностики кампилобактериоза предложена ПЦР.

Серологическая диагностика при кампилобактериозе не проводится из-за наличия у кампилобактера групповых антигенов и возникновения вследствие этого перекрестных реакций антител против этого микроорганизма с другими микробами.

Диагностика кампилобактериозов. Принципы микробиологической диагностики кампилобактериозов. Выявление кампилобактер. Лечение кампилобактериозов.

4.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Микробиологическая диагностика кампилобактериоза

1. РАЗРАБОТАНЫ: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (к.м.н. Ю.В.Демина); ФГУН "МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского" Роспотребнадзора (к.м.н. Л.В.Пожалостина); МУЗ "Клиническая инфекционная больница" г.Липецка (к.м.н. А.В.Гритчина, В.И.Мищук).

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ к утверждению Лабораторным Советом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 25.06.08).

4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

1. Область применения

В настоящее время, по данным ВОЗ, во многих зарубежных странах кампилобактериоз является наиболее распространенной этиологической формой в структуре ОКИ и в зависимости от региона на его долю приходится от 3 до 73% всех расшифрованных острых кишечных инфекций [1, 11].

Бактериоскопический метод основан на обнаружении в окрашенном препарате микроорганизмов с характерной морфологией (мелкие изогнутые S-образные палочки - "крылья летящей чайки") или клеток с характерной морфологией в сочетании с молниеносной подвижностью (препарат "раздавленная капля" при фазово-контрастной или темно-польной микроскопии). Бактериоскопический метод является достоверным лишь при обсемененности не менее 10 КОЕ в 1 мл материала и имеет только дополнительное, ориентировочное значение в диагностике кампилобактериоза [6].

Предлагаемая методика микробиологической диагностики кампилобактериозной инфекции учитывает современные возможности лабораторной техники по созданию условий для культивирования и идентификации кампилобактеров, и будет способствовать эффективной диагностике данного заболевания в условиях бактериологических лабораторий лечебно-профилактических организаций и ФГУЗ "центров гигиены и эпидемиологии", его адекватной терапии и осуществлению мониторинга за циркуляцией возбудителя.

Апробация разработанной методики в условиях микробиологической лаборатории инфекционной больницы г.Липецка при обследовании 11607 больных ОКИ подтвердила эффективность ее использования для диагностики кампилобактериозной инфекции. Так, высеваемость кампилобактеров за 2002-2005 гг. в г.Липецке в среднем составила (1,8±0,12)%, что более чем в 2 раза выше уровня высеваемости шигелл за анализируемый период (0,8%), но ниже высеваемости сальмонелл (3,2%).

3. Описание метода

3.1. Формула метода

3.2. Показания и противопоказания к применению метода

Показанием к проведению бактериологического исследования биологического материала на кампилобактериоз является необходимость обследования:

больных острыми кишечными инфекциями (ОКИ) - с диагностической целью;

лиц, контактных с больными ОКИ, - по эпидемическим показаниям;

реконвалесцентов кампилобактериоза - для контроля лечения и выявления бактерионосительства.

3.3. Материально-техническое обеспечение метода

трековые мембраны с диаметром пор 0,46 и 0,55 мкм (типа изготовляемых лабораторией ядерных реакций им. Г.Н.Флерова ОИЯИ, г.Дубна и др.);

сухие газогенерирующие пакеты типа "Кампилогаз" (типа пакетов, выпускаемых ООО "ИНКО", г.Санкт-Петербург и др.);

термостат с регулируемой газовой средой или микроанаэростат или системы для инкубации микроаэрофильных и анаэробных микроорганизмов (типа CampyPack Plus jar, Campy Pack (Becton Dickinson), Genbag, Genbox anaer (bio Merieux, Hi Media и др.).

Возбудители кампилобактериоза первоначально были отнесены к роду Vibrio семейства Vibrionaceae, а выделенный вид был назван V.fetus. В 1963 г. по предложению Sebald M. и Veron M., доказавших различия между микроаэрофильной группой V.fetus и истинными вибрионами при изучении состава оснований ДНК, род Campylobacter, как новый таксон, был введен в семейство Spirillaceae. В настоящее время микроаэрофильные подвижные, хемоорганотрофные, не образующие спор и капсул грамотрицательные бактерии спиралевидной, S-образной или изогнутой формы объединены в семейство Campylobacteriaceae, a род Campylobacter насчитывает, по последним данным, около 20 видов и подвидов, и это число постоянно растет, уточняются потенциальные возможности данных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболевания у человека. Наибольшее значение для патологии человека на сегодня имеют C.jejuni, С.coli, С.lari, С.fetus. Последний вид чаще поражает ослабленных интеркуррентными заболеваниями людей с развитием гематогенно-диссеминированных форм заболевания [9].

Длина клеток кампилобактеров 0,5-5 мкм, толщина - 0,2-0,8 мкм, имеют один или два полярно расположенных жгутика, могут обладать плазмидами. В старых культурах бактерии часто принимают сферические или кокковые формы.

Кампилобактерам присущ дыхательный тип метаболизма. В качестве источника энергии они, в основном, используют аминокислоты, но не могут утилизировать углеводы. Кампилобактеры - микроаэрофилы. Кислород необходим для их роста, но становится токсичным для микроорганизмов в избыточном количестве. Для большинства штаммов оптимальной является концентрация кислорода 3-6%. Кампилобактериии являются капнофилами, то есть нуждаются в высоких концентрациях СО (до 10%). Большинство этиологически значимых кампилобактеров обладают каталазой, оксидазой и супероксиддисмутазой.

В зависимости от температурного диапазона роста кампилобактеры делят на 2 группы: 1) нетермофильные (C.faecalis, С.hyointestinalis, С.fetus, С.consicus) - температурный оптимум 37 °С; 2) термофильные (С.jejuni, С.coli, С.lari) - температурный оптимум 42-43 °С.

На жидких питательных средах через 48 ч инкубации кампилобактер образует равномерное помутнение с выраженным осадком, на полужидких пробирочных питательных средах - зону роста в виде диска, расположенного на глубине 1-2 мм от поверхности питательной среды.

С.jejuni на плотных питательных средах с добавлением крови образуют колонии без гемолиза 2-х типов:

1) низкие, плоские, с краями неправильной формы, блестящие, влажные, полупрозрачные, растекаются по поверхности среды, имеют тенденцию к слиянию (характерны для "свежих" культур, содержащих извитые формы клеток); 2) круглые, гладкие, приподнятые, с ровными краями, 1-2 мм в диаметре (характерны для "старых" культур, содержащих кокковидные формы) [3].

На полужидких средах С.jejuni растут в виде диска, 3-5 мм от поверхности среды. С.coli на плотных питательных средах с добавлением крови образуют колонии диаметром 1-2 мм без гемолиза, гладкие, выпуклые, блестящие с рыжевато-коричневым оттенком.

Принцип бактериологического метода основан на выявлении живых микроорганизмов в исследуемом субстрате при посеве на специальные питательные среды с последующей инкубацией в термостате при заданной температуре в микроаэрофильных условиях. Изучение культуральных и ферментативных свойств полученных микроорганизмов позволяет идентифицировать бактерии рода Campylobacter.

При кампилобактериозе бактериологическое исследование обеспечивает постановку этиологического диагноза и контроль освобождения организма от возбудителя. При дифференциальной диагностике кампилобактериоза от других острых кишечных инфекций бактериологическое исследование с выделением возбудителя является единственным методом, так как клиническое течение инфекционного процесса не всегда позволяет различить эти нозологические формы.

4.1. Схема бактериологической диагностики кампилобактерий

4.2. Сбор материала для исследования

Материалом для исследования являются испражнения. Техника взятия исследуемого материала не отличается от техники, применяемой при других ОКИ.

Отбор нативного материала.

Испражнения не менее 1 г собирают сразу после естественного акта дефекации из судна, горшка (тщательно вымытого и не содержащего следов дезинфектантов) или с пеленки с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли или деревянного шпателя и помещают в стерильную посуду (стеклянную пробирку, вакуумный пробоотборник, контейнер транспортировочный со средой для анаэробов или специальными средами с активированным углем и без него для выделения Campylobacter spp.). При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, хлопья, эпителий, гной), за исключением крови, их включают в отбираемую пробу.

Отбор с использованием ректальных петель (тампонов).

Стерильную ректальную петлю (тампон) вводят в прямую кишку на глубину 5-6 см. Взятый материал переносят в стерильную пробирку с физиологическим раствором или в транспортную среду. Попадание транспортных сред на слизистую оболочку прямой кишки недопустимо!

Условия и сроки хранения и транспортирования проб.

При возможности доставки нативных фекалий в лабораторию в течение 1 ч, транспортные среды можно не использовать.

При необходимости продолжительного транспортирования используют транспортные среды: 0,1%-я пептонная вода, среда контроля стерильности, среда Amies, среда Сагу-Blair (прилож.1). Соотношение материал/среда должно быть 1:3-1:5. Применение транспортных сред обязательно при отборе проб ректальными петлями [3].

Сроки хранения материала в транспортных средах при температуре 4 °С в зависимости от вида среды в:

ИНСТРУКЦИЯ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ И ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА

Заместитель начальника Главного эпидемиологического управления Минздрава СССР Г.Г.Онищенко 21 ноября 1989 г. N 15-6/28

Учреждения-разработчики: ЦНИИ эпидемиологии МЗ СССР (Москва), Ленинградский ордена Трудового Красного Знамени НИИЭиМ им.Пастера МЗ РСФСР, МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского (Москва).

В Инструкции нашли отражение результаты исследований, проведенных совместно со специалистами Института гигиены и эпидемиологии Минздрава ЧСР, Прага (Е.Шрамова, Е.Альдова, Г.Лготова) и Региональной санэпидстанции ЧСР, Чешские Будейовицы (О.Гаузнер).

Для врачей инфекционных отделений и бактериологических лабораторий больниц, санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских институтов.

1. Введение

По данным специальной литературы, микроорганизмы рода Campylobacter (кампилобактер) в качестве этиологического фактора острых кишечных заболеваний (ОКЗ) встречаются не реже чем сальмонеллы, шигеллы и ротавирусы и вызывают - в зависимости от сезона и особенностей региона - от 3 до 15 проц. ОКЗ.

В инфекционной патологии человека и животных важнейшую роль играют виды С. jejuni, С. coli и С. bariolis, вызывающие ОКЗ сходного клинического течения (кампилобактериоз) и на основании своей способности к росту при относительно высокой температуре инкубации объединенные в группу термофильных кампилобактеров. Среди прочих - мезофильных, предпочитающих умеренную температуру инкубации - видов кампилобактера известную роль в патологии человека играют С. fetus, зачастую являющийся возбудителем артритов, менингитов, васкулитов, и С. pilori, ассоциирующийся с эрозивно-язвенными поражениями желудка и двенадцатиперстной кишки; виды С. consisus и С. futorum расцениваются как комменсалы полости рта, возможно, играющие роль в патогенезе пародонтита, а виды <. >и <. >встречаются в толстом кишечнике человека при иммунодефицитных состояниях той или иной природы.

Термофильные кампилобактеры обнаружены практически у всех изученных видов диких и домашних животных, многие из которых являются его естественными резервуарами. Основным резервуаром кампилобактера следует считать сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, свиней, кур), дополнительными - больных людей и домашних животных, диких городских птиц и грызунов. Основным путем передачи возбудителя инфекции является пищевой (сырое молоко, битая птица; в меньшей степени - говядина, свинина), дополнительными - водный (речная и морская вода, загрязненная испражнениями животных) и бытовой (несоблюдение санитарно-гигиенических правил при уходе за больными людьми и животными, а также при кулинарной обработке мясных продуктов) пути передачи. Кампилобактериозу свойственна выраженная летняя сезонность с почти полным отсутствием заболеваемости в зимние месяцы года; чаще заболеваемость регистрируется в виде спорадических случаев, изредка - в виде более или менее крупных вспышек. Следует признать, что эпидемиологические особенности кампилобактериоза в СССР изучены недостаточно, и лишь безотлагательное внедрение в широкую практику методов лабораторной диагностики кампилобактериоза может способствовать прогрессу в изучении эпидемиологического аспекта этой комплексной проблемы, чрезвычайно актуальной для практического здравоохранения.

Настоящая Инструкция по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоза предназначена для врачей-инфекционистов и врачей-бактериологов поликлиник, больниц и санитарно-эпидемиологических станций, а также для сотрудников профильных лабораторий научно-исследовательских институтов.

2. Клинические проявления кампилобактериоза

Как это было отмечено выше (раздел 1), кампилобактериоз - острое инфекционное кишечное заболевание зоонозной природы, вызываемое термофильными кампилобактерами.

2.1. Кампилобактериоз у детей:

Кампилобактериозом болеют дети всех возрастных групп (чаще - в возрасте 1-3 лет) со средней частотой 6,7 процента от общего числа госпитализированных по поводу ОКЗ; периоды сезонного подъема заболеваемости этой инфекцией совпадают у всех возрастных групп.

Инкубационный период при кампилобактериозе составляет 1-3, изредка - 5 дней.

Диарея является кардинальным и, чаще всего, начальным симптомом болезни, редко сохраняющимся дольше 1-2 недель. Частота стула у большинства заболевших не превышает 7-10 раз в сутки, лишь у отдельных больных достигает 20 и более раз.

Стул - обильный, жидкий, зелено-бурый, с примесью слизи и зелени, а у половины больных - начиная с 1-3 дня болезни - и крови; зачастую отмечается синдром "водянистой диареи". Из прочих симптомов поражения желудочно-кишечного тракта наиболее часто отмечаются урчание и плеск по ходу толстой кишки; спазм сигмовидной кишки отмечается весьма редко, тенезмы не отмечаются вовсе.

Боли в животе, возникающие как в первый день болезни, так и в более поздние сроки, и являющиеся вторым ведущим симптомом кампилобактериоза, локализуются, как правило, вокруг пупка и в правой подвздошной области, реже - носят разлитой характер. У детей первого года жизни боли в животе проявляются выраженным беспокойством, криком, сучением ножками, реакцией на пальпацию живота. Боли при кампилобактериозе отличаются постоянством и усиливающейся интенсивностью при движении, иногда настолько значительной, что возникает необходимость исключения хирургической патологии брюшной полости. (В ряде случаев наблюдаются и истинные аппендициты с участием кампилобактера в их патогенезе - с развитием язвенно-некротического процесса в червеобразном отростке и слепой кишке, осложняющегося перфорацией и перитонитом.)

Симптомы интоксикации, как правило, выражены умеренно и проявляются в виде бледности кожных покровов, вялости, снижении аппетита и - изредка - адинамии. Температура тела обычно не превышает 39°C и нормализуется к 3-4 дню болезни.

Рвота отмечается у половины больных с первого дня болезни и чаще бывает повторной, но кратковременной - сохраняется лишь в течение 1-2 дней.

Нередко, независимо от возраста детей и степени тяжести течения болезни, при кампилобактериозе наблюдается развитие паренхиматозного безжелтушного гепатита и функциональных нарушений поджелудочной железы, имеющее благоприятное течение.

Экзантемы - весьма редкий для кампилобактериоза симптом, появляющийся на 1-2 день болезни, нарастающий в течение 1-2 дней и быстро угасающий. Сыпь локализуется на лице и туловище и чаще носит пятнисто-папулезный, нежели мелкоточечный характер.

В гемограмме больных кампилобактериозом отмечается умеренный лейкоцитоз со сдвигом влево, моноцитоз, ускорение СОЭ.

В копрограмме отмечаются лишь незначительные неспецифические изменения, характер которых определяется локализацией инфекционного процесса и степенью выраженности нарушений пищеварения: при воспалительных изменениях тонкой или толстой кишки обнаруживаются лейкоциты, эритроциты, клетки десквамированного эпителия; при функциональных нарушениях пищеварения - непереваренный нейтральный жир, крахмал, мышечные волокна. Наличие в копрограмме компонентов последнего типа является показанием к исследованию функции поджелудочной железы: уровней амилазы, липазы и проч., сыворотки крови и мочи.

Кампилобактериозу у детей свойственны два варианта начала болезни - острое (83,4 проц. больных), когда все основные симптомы появляются в первые два дня болезни, и подострое, когда к одному-двум симптомам, чаще болям в животе и симптомам интоксикации, на 2-3 день болезни присоединяются прочие: понос, рвота, лихорадка.

Клинические проявления зависят от возраста заболевшего. Острое начало характерно для большинства детей раннего возраста, когда заболевание, начавшись с появления диареи, протекает по типу энтероколита (гемоколита), реже - энтероколита, с нормализацией стула на 2 неделе болезни; присоединяющаяся в редких случаях рвота, как правило, непродолжительна, кишечные симптомы сочетаются с увеличением печени, умеренными проявлениями интоксикации и эксикоза 1-2 степени и нормальной, изредка - субфебрильной, температурой. У детей старше года кампилобактериоз протекает в двух клинических вариантах. Первый, наиболее часто встречающийся вариант течения, напоминает течение пищевой токсикоинфекции с острым началом, повышением температуры до фебрильных значений, появлением рвоты, нередко повторной, симптомов интоксикации (головная боль, слабость, снижение аппетита, расстройство гемодинамики), болей в животе. В ряде случаев на этой стадии развитие инфекционного процесса завершается, но у двух третей больных к концу первых - началу вторых суток развивается энтерит, реже - энтероколит с диарейным синдромом. Второму варианту течения кампилобактериоза у детей старше 1 года, встречающемуся в трети случаев, свойственно развитие энтерита и энтероколита на фоне умеренной лихорадки, умеренно выраженных симптомов интоксикации в сочетании с развитием выраженной кишечной дисфункции.

Тяжесть течения кампилобактериоза у детей определяется выраженностью кишечного синдрома и - в меньшей степени - уровнем общей интоксикации: у большинства детей отмечается легкое или среднетяжелое течение заболевания.

Рациональная антибиотикотерапия больных кампилобактериозом детей опирается на применение, в первую очередь, эритромицина, а также аминогликозидов; целенаправленная терапия с учетом возраста заболевшего и степени тяжести течения болезни приводит к укорочению срока течения болезни.

Дети с подозрением на наличие у них кампилобактериоза подлежат госпитализации в инфекционные отделения лечебных учреждений.

Кампилобактериозу у детей свойственно рецидивирующее течение - рецидивы наблюдаются у 12,1 процента реконвалесцентов на 10-23 день от начала заболевания, причем у трети детей они протекают тяжелее основного заболевания, и во всех случаях возникновения рецидива диарея остается ведущим его симптомом. Следует отметить, что вероятность возникновения рецидива не определяется ни степенью тяжести течения начального периода болезни, ни возрастом заболевшего.

Реконвалесцентам кампилобактериоза показано диспансерное наблюдение в течение 1 месяца, а при подозрении на возникновение рецидива - повторное обследование и госпитализация.

2.2. Кампилобактериоз у взрослых:

Как и у детей, кампилобактериоз встречается у взрослых достаточно часто - в среднем в 6,5 проц. случаев от общего числа ОКЗ, причем чаще - у лиц до 35 лет, с летне-осенним подъемом уровня заболеваемости.

Инкубационный период составляет 2-5, изредка - 10 дней.

Кампилобактериоз у взрослых может протекать в форме гастроэнтерита, гастроэнтероколита, но чаще в 80 проц. случаев - в форме энтероколита; в большинстве случаев кампилобактериоз протекает в легкой или среднетяжелой формах длительностью не более 1-2 недель.

В отличие от детей, кампилобактериозу взрослых более свойственно подострое начало с возникновением симптомов интоксикации, лихорадки, повышением температуры не более чем до 39°C с нормализацией ее ко 2-4 дню; изредка в течение 1-2 суток отмечается рвота. Диарея и боли в животе, как правило, возникают одновременно на 2-3 день болезни, и длительность их обычно не превышает 5-8 дней, хотя изредка болевой синдром сохраняется до 2 недель при исчезновении диареи в упомянутые выше сроки. Частота дефекации колеблется от 5-10 до 15-20 раз в сутки, обычно без патологических примесей, но к концу 1 - началу 2 суток приобретает характер "ректального плевка", зачастую появляется примесь крови и отмечается синдром "водянистой диареи". Боли в животе имеют различную остроту и могут носить как диффузный характер, так и локализоваться в правой подвздошной области. Развитие выраженной дегидратации при кампилобактериозе отмечается редко, и чаще - при гастроэнтероколитическом варианте течения.

Гемограммам больных кампилобактериозом взрослых свойственен умеренный лейкоцитоз, незначительный палочкоядерный сдвиг; копрограммам - те же изменения, что и у больных кампилобактериозом детей.

При фиброколоноскопии у больных кампилобактериозом наблюдается картина геморрагического колита: на всем протяжении отечной, гиперемированной слизистой толстого кишечника встречаются множественные мелкие геморрагии до 1-2 мм в диаметре, изредка - более крупного размера и сливного характера. Гораздо реже, как правило, в случаях легкого течения заболевания, изменения слизистой носят катаральный характер; еще реже, в случаях тяжелого течения, отмечаются эрозивные и язвенные поражения. Изменения описанного типа, как и повышенная контактная кровоточивость слизистой вследствие стазового полнокровия ее, прослеживаются в течение 2-3 недель от начала заболевания.

В отличие от кампилобактериоза у детей, кампилобактериозу у взрослых не свойственны рецидивы, но в редких случаях возникают реактивные артриты, менингиты, холециститы - как правило, у лиц, страдающих иммунными дефицитами той или иной природы.

Больные с подозрением на кампилобактериоз подлежат госпитализации в инфекционные отделения лечебных учреждений, реконвалесцентам показано диспансерное наблюдение в течение 1 месяца с момента выписки из стационара.

Препаратом выбора в лечении кампилобактериоза взрослых является эритромицин; в зависимости от степени выраженности интоксикации может быть назначена патогенетическая дезинтоксикационная терапия.

При исследовании спорадических случаев или вспышек кампилобактериоза у детей и взрослых тактика врача-эпидемиолога не отличается от таковой при сальмонеллезе.

3. Краткая характеристика термофильных кампилобактеров

Согласно "Руководству по систематической бактериологии Берри" (1984), бактерии рода Campylobacter - грамнегативные, спирально изогнутые вокруг длинной оси извитые формы длиной 0,5-8,0 мкм и шириной 0,2-0,5 мкм, существующие как в виде одиночных, так и попарно расположенных, не разошедшихся после деления клеток, напоминающих в последнем случае "крылья чайки". Описанные морфологические признаки свойственны лишь бактериальным клеткам природных субстратов и молодых культур, тогда как стареющим культурам свойственно наличие кокковых и гиперспирализованных форм, количество которых в культуре пропорционально возрасту ее. Все описанные морфологические варианты кампилобактера легко окрашиваются фуксином, азур-эозином, кристаллическим фиолетовым; в то же время, в природных субстратах, главным образом, фекалиях, клетки кампилобактеров обычно плохо окрашиваются по Граму. Кампилобактеры не образуют спор и капсул, но обладают одним-двумя полярно расположенными жгутиками, обеспечивающими им высокую подвижность со стремительным, "штопорообразным" поступательным характером движения.

Кампилобактеры-микроаэрофилы и капнофилы, то есть бактерии, требующие для культивирования пониженного содержания кислорода и повышенного - углекислого газа; энергию кампилобактеры освобождают из аминокислот и трикарбоновых кислот, но не из углеводов, к окислению или ферменции которых они не способны. Будучи термофилами, кампилобактеры способны к росту при 37-44°C, но не при 25°C.

При комнатной и, в особенности, при пониженной температурах резистентность кампилобактера к действию факторов внешней среды весьма высока - в пищевых продуктах, водопроводной и сточных водах, молоке, моче, фекалиях он может сохранять жизнеспособность в течение 1-5 недель; в то же время, кампилобактер чрезвычайно чувствителен к нагреванию свыше 50°C, действию прямого солнечного света и воздуха, высыханию, низким и высоким значениям рН окружающей среды.

Кампилобактер обладает сложным термолабильным и термостабильным антигенными комплексами. Клеточная стенка кампилобактера содержит эндотоксин, действие которого напоминает действие эндотоксина сальмонелл и иерсиний; некоторые штаммы способны продуцировать энтеротоксин, действие которого отчасти напоминает действие холерогена, а также присущий исключительно кампилобактеру цитотоксин уникального строения, воздействие которого на слизистую толстого кишечника человека приводит к изменениям дизентериеподобного характера.

4. Лабораторная диагностика кампилобактериоза

Как видно из материала раздела 2, клиническая картина при кампилобактериозе не отличается четкостью и не дает оснований для создания надежной схемы дифференциальной клинической диагностики этого заболевания. Очевидно, в подобной ситуации лабораторной диагностике по праву отводится решающая роль, определяющая последующую терапевтическую и эпидемиологическую тактику.

Основным, наиболее надежным и наилучшим образом разработанным методом лабораторной диагностики кампилобактериоза является бактериологический метод исследования; микроскопический метод исследования, дающий вследствие низкой чувствительности значительное число ложноотрицательных результатов, может расцениваться лишь в качестве ориентировочного; серологический метод исследования в диагностике кампилобактериоза находится в нашей стране в стадии разработки. Биологический метод исследования и метод кожно-аллергических проб в диагностике кампилобактериоза не применяются.

4.1. Бактериологический метод исследования:

4.1.1. Материал для бактериологического исследования

У больных ОКЗ материалом для бактериологического исследования служат образцы нативных фекалий или содержимое прямой кишки, полученное путем ректального мазка. Среди клинических симптомов кампилобактериоза "сигнальным" является симптом гемоколита - именно наличие крови в стуле является абсолютным показанием к бактериологическому исследованию фекалий на кампилобактериоз. Забор материала следует производить в возможно более ранние сроки, желательно - до начала антибиотикотерапии; далее, в течение всего периода болезни - по показаниям к бактериологическому исследованию (появление крови в стуле, усиление или рецидив диареи, начало реконвалесценции).

4.1.2. Транспортировка и хранение проб

При необходимости транспортировки исследуемого материала в течение времени, превышающего 1 час с момента его забора, следует применять пробирочные транспортные среды: физиологический раствор хлористого натрия (срок хранения фекалий при комнатной температуре - 3-5 час), 0,1-процентную пептонную воду (3-48 час), тиогликолевую среду для контроля стерильности (КС) (до 3 суток). В любую из перечисленных транспортных сред, разлитую по пробиркам в объеме 3,0-5,0 мл, исследуемый материал помещается в соотношении с ней 1:3-1:5 (об./об.). Охлаждение до 4°C позволяет значительно удлинить сроки транспортировки образцов на транспортных средах: на физиологическом растворе - до 24 час, на 0,1-процентной пептонной воде - до 72 час, на среде КС - до 5-7 суток.

Ректальные мазки транспортируются только на транспортных средах наилучшим образом для этой цели служат агаризованная среда КС: здесь кампилобактер сохраняет жизнеспособность от 1 (без охлаждения) до 3 (с охлаждением) суток. Необходимо учесть, что проволочная петля, предназначенная для забора материала путем ректального мазка, изготовленная и простерилизованная, как это описано в п.4.1.1, помещается в пробирку с транспортной средой лишь после забора материала: попадание транспортной среды на слизистую прямой кишки недопустимо!

Читайте также: