Выявление антитромбоцитных антител: тест Карпаткина

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 14.12.2024

Метод определения Выявление антитромбоцитарных IgG антител в сыворотке крови методом непрямой иммунофлюоресценции на препаратах аллогенных тромбоцитов.

Скрининговый тест, направленный на выявление специфических тромбоцитарных антител. Связывание циркулирующих тромбоцитов с антителами, направленными против антигенов, расположенных на их поверхности (наиболее часто это гликопротеины IIa-IIIb), приводит к их ускоренной элиминации селезёночными макрофагами посредством Fc-рецептор-опосредованного фагоцитоза. Связывание IgG с мембраной развивающихся тромбоцитов может в определённой степени нарушать мегакариоцитопоэз. Антитромбоцитарные антитела выявляются в крови при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, аллоиммунной тромбоцитопении новорожденных (более целесообразно исследование материнской сыворотки), посттрансфузионной пурпуре. Присутствие антитромбоцитарных антител может, кроме того, быть связано с имеющимся системным заболеванием (например, системная красная волчанка), инфекциями (например, ВИЧ, вирус Эпштейна-Барр), лимфопролиферативными и неопластическими заболеваниями. Выработка антитромбоцитарных антител может запускаться приёмом некоторых лекарственных препаратов (такие антитела связываются с тромбоцитами в присутствии этих препаратов). У многих пациентов могут одновременно присутствовать разные типы антитромбоцитарных антител. Образование антитромбоцитарных антител, предположительно, происходит в селезёнке. В данном тесте исследуют специфическое связывание IgG иммуноглобулинов сыворотки пациента с препаратом аллогенных тромбоцитов, фиксированных на стекле. Тест выявляет наличие как аллоиммунных, так и аутоиммунных антител к тромбоцитам, без возможности их разграничить, и, таким образом, не обладает специфичностью, необходимой для дифференциальной диагностики иммунной тромбоцитопении и принятия соответствующих терапевтических решений. Результаты исследования следует интерпретировать в соответствии с клиническими наблюдениями, анамнезом, данными других лабораторных исследований, для исключения или выявления сопутствующих заболеваний и других причин тромбоцитопении.

При необходимости, в комплексе других исследований при диагностике иммунной тромбоцитопении - в случае подтверждённого в повторных исследованиях снижения числа тромбоцитов (на фоне отсутствия других отклонений при подсчёте форменных элементов крови по мазку) у больных без клинических проявлений других заболеваний или факторов, способных вызвать тромбоцитопению.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Антитела к тромбоцитам IgG, непрямой тест (Platelet antibodies IgG indirect)

Выявление антитромбоцитных антител: тест Карпаткина

Определение в крови антител к антигенам тромбоцитов, используемое для дифференциальной диагностики геморрагического синдрома и тромбоцитопении.

Синонимы русские

Антитела к гликопротеинам тромбоцитов, антитела при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре.

Синонимы английские

Anti-platelet antibodies, Platelet Abs.

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Антитела к тромбоцитам могут быть обнаружены при многих заболеваниях, в том числе при идиопатической тромбоцитопенической пурпуре, аллоиммунной тромбоцитопении новорождённых, системной красной волчанке (СКВ), бактериальных и вирусных инфекциях (ВИЧ, инфекционный мононуклеоз, сепсис), а также при приеме некоторых лекарственных средств. В настоящий момент описано несколько антигенов-мишеней для этих антител, в том числе гликопротеины GPIIb/IIIa, GPIb/IX, GP5 и рецептор тромбопоэтина.

Наличие антител к тромбоцитам связано как с количественными, так и с качественными изменениями тромбоцитов. С одной стороны, взаимодействие антител с антигенами приводит к разрушению тромбоцитов клетками ретикулоэндотелиальной системы в селезенке (и в меньшей степени в печени) и возникновению тромбоцитопении. С другой стороны, антитела, блокирующие гликопротеины тромбоцитов, нарушают процесс дегрануляции и адгезии тромбоцитов, в результате чего развивается тромбоцитопатия. Клиническим проявлением тромбоцитопении и тромбоцитопатии является повышенная кровоточивость разной степени выраженности - от незначительной петехиальной сыпи до обширного внутримозгового кровоизлияния.

Ведущее значение в диагностике заболеваний, протекающих с геморрагическим синдромом, принадлежит лабораторным методам. Антитела к тромбоцитам - один из тестов, входящих в алгоритм дифференциальной диагностики геморрагического синдрома. Этот тест имеет особое значение в следующих клинических ситуациях:

  1. При подозрении на сочетание аутоиммунной тромбоцитопенической пурпуры и заболеваний костного мозга. У пациентов с нарушенным тромбоцитопоэзом (например, при хроническом лимфолейкозе) наличие антител к тромбоцитам может ухудшать уже имеющуюся тромбоцитопению. Обнаружение антител к тромбоцитам в такой ситуации свидетельствует о том, что причиной тромбоцитопении является не только инфильтрация костного мозга опухолевыми клетками, но и аутоиммунное разрушение тромбоцитов, что имеет значение для выбора тактики лечения. Еще одним клинико-лабораторным признаком аутоиммунной тромбоцитопении является реактивный мегакариоцитопоэз в костном мозге.
  2. При наличии идиопатической тромбоцитопенической пурпуры, резистентной к препаратам первой и второй линии терапии. Пациентам, получающим лечение препаратами 3-й линии терапии, рекомендуется повторное определение антител к тромбоцитам и количества тромбоцитов для оценки эффективности лечения.
  3. Лекарственная тромбоцитопения. Применение многих лекарств ассоциировано с развитием тромбоцитопении. Для некоторых из них (гепарин, хинин/хинидин, тейкопланин) доказана аутоиммунная природа лекарственной тромбоцитопении. При возникновении тромбоцитопении на фоне приема одного из этих лекарственных препаратов анализ на антитела к тромбоцитам может быть необходим для решения вопроса о прекращении лечения этим препаратом.

Следует отметить, что исследование на антитела к тромбоцитам не является рутинным тестом при подозрении на идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, что связано в основном с его недостаточной специфичностью в отношении этого заболевания.

В настоящее время исследование на антитела к тромбоцитам - это дополнительный метод диагностики геморрагического синдрома и тромбоцитопении. Результат анализа оценивают с учетом данных других лабораторных исследований, в первую очередь коагулограммы.

ГлавнаяHelixbook Иммунологический тест определения полиспецифических агглютининов при гемолитических анемиях

Скрининговое лабораторное исследование, позволяющее выявить фиксированные на эритроцитах аутоантитела разных классов, которые играют основную роль в разрушении клеток при гемолитических анемиях.

Прямой антиглобулиновый тест, ПАГТ, прямой тест Кумбса, прямая реакция Кумбса.

Direct antiglobulin test (DAT) with polyspecific antihuman globulin (AHG), Direct Coombs Test, Direct Anti-human Globulin Test.

Общая информация об исследовании

Аутоиммунные гемолитические анемии характеризуются выработкой антител к эритроцитарным антигенам с последующим разрушением эритроцитов вследствие фагоцитоза или активации системы комплемента.

В зависимости от места, где происходит процесс разрушения эритроцитов, различают внутрисосудистый и внутриклеточный иммунный гемолиз. При внутрисосудистом гемолизе разрушение эритроцитов обусловлено прямым повреждающим действием антител при участии системы комплемента. Комплемент - это семейство сывороточных белков, которые разрушают меченные антителами клетки. Эффекторами внутрисосудистого гемолиза чаще всего являются аутоантитела класса IgM, реже IgG. Антитела фиксируют комплемент на мембране эритроцита с образованием мембраноповреждающего комплекса, формирование которого приводит к образованию большого количества пор в оболочке клетки, ее набуханию и разрушению. Антитела, вызывающие внутрисосудистый гемолиз, называют холодовыми, поскольку они наиболее эффективно связываются с антигенами эритроцитов при температуре 4-18 °С. В процессе внутриклеточного гемолиза участвуют макрофаги - специальные клетки, основная функция которых - поглощение и разрушение чужеродных и меченных антителами субстанций. Макрофаги имеют рецепторы к IgG и С3 компоненту комплемента, поэтому покрытые ими эритроциты захватываются макрофагами и разрушаются. Антитела, вызывающие внутриклеточный гемолиз, называют тепловыми, так как они наиболее эффективно связываются с антигенами эритроцитов при 37 °С.

Таким образом, в качестве лабораторных маркеров аутоиммунного гемолиза целесообразно использовать выявление фиксированных на эритроцитах антител классов IgM и IgG, а также С3 компонента комплемента. В зависимости от эффекта, который аутоантитела оказывают на эритроциты в пробирке, выделяют гемолизины (разрушают клетки) и агглютинины (вызывают склеивание эритроцитов между собой). На способности аутоантител in vitro, то есть в пробирке, вызывать агглютинацию эритроцитов и построено большинство лабораторных методик их выявления.

Современным методом постановки прямого антиглобулинового теста является реакция агглютинации в геле. Используемый в реакции полиспецифический антиглобулиновый реагент содержит антитела к иммуноглобулинy G и к С3 компоненту системы комплемента человека, а также может реагировать с IgA и IgM молекулами. В микропробирки с гелем, содержащим антиглобулиновый реагент, добавляют суспензию исследуемых эритроцитов и центрифугируют. При наличии на поверхности эритроцитов аутоантител они связываются с реагентом, что приводит к агглютинации эритроцитов между собой. В процессе центрифугирования происходит разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов. Неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля, и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета, а агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще.

Для чего используется исследование?

  • Для обнаружения антител к антигенам собственных эритроцитов, фиксированных на их поверхности.

Когда назначается исследование?

  • При выяснении причин гемолитической анемии (когда есть подозрение, что гемолиз обусловлен наличием аутоантител).

Что означают результаты?

Антиэритроцитарные антитела класса IgG и C3d компонент системы комплемента на поверхности эритроцитов не обнаружены.

Норма - клетки образуют компактный осадок на дне микропробирки.

Агглютинированные клетки образуют красный слой на поверхности или в толще геля.

Важные замечания

  • Положительный тест с полиспецифическим антиглобулиновым реагентом показывает, что эритроциты в живом организме покрыты антителами или комплементом. Для дифференциации класса иммуноглобулинов и компонентов комплемента необходимо использовать моноспецифические реагенты: анти-IgG, анти-IgA, анти-IgM, анти-C3, анти-C3b, анти-C3c, анти-C3d и анти-С4.
  • Важно отметить, что описанный лабораторный метод позволяет выявить только те аутоантитела, которые фиксированы на эритроцитах. Вместе с тем антитела могут находиться в сыворотке крови - для их выявления применяют непрямой антиглобулиновый тест. При этом исследуют не эритроциты, а сыворотку пациента. Для этого ее инкубируют с донорскими эритроцитами, на которых при наличии в исследуемой сыворотке антител в процессе инкубации фиксируются иммуноглобулины. Далее эти эритроциты исследуются по тому же принципу, что и прямой тест.

Также рекомендуется

Клинический (общий) анализ крови

Билирубин (общий, прямой, непрямой)

Кто назначает исследование?

Гематолог, трансфузиолог, терапевт, врач общей практики, ревматолог, педиатр.

Литература

  • Гематология: национальное руководство / под ред. О. А. Рукавицына. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2015. С. 155-157.

Williams Hematology. 9th edition. By: Kenneth Kaushansky, Marshall Lichtman, Josef Prchal, Marcel M. Levi, Oliver Press, Linda Burns, Michael Caligiuri. McGraw-Hill Education, 2016. Pages 832-836.

Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 716-719.

Читайте также: