Значение иммунохимического анализа в диагностике парапротеинемий

Добавил пользователь Валентин П.
Обновлено: 14.12.2024

При пролиферации клона плазматических клеток увеличивается синтез иммуноглобулина, представленного одним классом, подклассом и изотипом, в состав которого входят тяжелые и легкие белковые цепи одного типа. При электрофоретическом разделении белков сыворотки крови этот иммуноглобулин мигрирует в виде компактной полосы, которая определяется на фоне других белковых фракций. Такой иммуноглобулин называют моноклональным иммуноглобулином или парапротеином. При электрофорезе белков сыворотки его иногда называют М-пиком или М-градиентом. Парапротеин является онкомаркером при ряде гематоонкологических заболеваний.

Множественная миелома является классическим гематологическим заболеванием, которое обусловлено пролиферацией плазмацитов, секретирующих моноклональный иммуноглобулин (парапротеин) или его фрагменты. В большинстве случаев на момент диагноза концентрация парапротеина превышает 25 г/л.

При миеломе парапротеин в сыворотке крови чаще всего представлен IgG (60%), реже IgA (20%). Оставшиеся около 20% случаев приходятся на миелому Бенс-Джонса, связанную с продукцией свободных легких цепей каппа или лямбда (20%), которые могут быть обнаружены в моче. В 2-4% случаев миеломы может отмечаться биклональный парапротеин, представленный иммуноглобулинами разных классов или одного класса, но содержащий легкие цепи разных классов. Изменения концентрации парапротеина служит показателем эффективности лечения миеломы. Мониторинг концентрации ПП при миеломе на фоне терапии должен осуществляться каждые 3 месяца. Если содержание ПП снизилось ниже детектируемого, повторное измерение целесообразно проводить через 6 или 12 месяцев.

Макроглобулинемия Вальнедстрема представляет собой лимфому с продукцией моноклонального IgM. Лимфоплазмацитарные опухолевые клетки с характерным иммунофенотипом диффузно распределены в лимфатических узлах, селезенке и костном мозге. Высокая концентрация моноклонального IgM часто превышает 30 г/л и приводит к увеличению вязкости крови и ряду клинических проявлений, включающих спутанность сознания, слепоту, склонность к кровоточивости, сердечную недостаточность и гипертензию. При других разновидностях лимфом и хроническом лимфолейкозе парапротеины класса IgM отмечается у 20% больных, однако концентрация ПП обычно ниже, чем 30 г/л.

Моноклональный парапротеин может быть обнаружен при ряде неопухолевых заболеваний, в частности эссенциальной криоглобулинемии, парапротеинемической хронической полинейропатии, холодовой гемолитической анемии, АL-амилоидозе почек, и внутренних органов, болезни отложения легких цепей. Также парапротеин в сыворотке крови отмечается при болезни Кастелмана, POEMS синдроме и микседематозном лишае.

При скрининговых обследовниях выявляемость парапротеинемии резко увеличивается в популяции после достижения 50 лет и достигает 4-10% у лиц старше 65 лет. Однако большинство впервые выявленных случаев парапротеинемии в общей популяции представляют собой бессимптомные моноклональные гаммапатии невыясненного значения (МГНЗ). Концентрация парапротеина при МГНЗ существенно ниже 30 г/л и обычно не превышает 10-15 г/л. Кроме того, при МГНЗ парапротеин выявляется на фоне поликлональных иммуноглобулинов, т. е. угнетения нормального синтеза иммуноглобулинов не происходит. Термин “МГНЗ” указывает на случаи парапротеинемии без других признаков онкогематологического заболевания, которые не требуют ежегодного мониторинга, чтобы не пропустить момента озлакачествления процесса. При выявлении ПП у обследованных моложе 50 лет необходимы более частые повторные обследования, поскольку у них отмечается высокий риск развития ММ. Если концентрация ПП составляет более 15 г/л, вне зависимости от возраста рекомендуется проведение расширенного обследования, включающего электрофорез 24-часового образца мочи и иммунофиксацию каждые 3-6 месяцев, поскольку риск злокачественной трансформации очень высок.

Кроме того выделяют доброкачественную парапротеинемию, которая отмечается при сохранении парапротеина без прогрессирования в ММ или другое заболевание в течение 5 лет наблюдения. При транзиторной парапротеинемии концентрация парапротеина обычно ниже 3 г/л.

Значение иммунохимического анализа в диагностике парапротеинемий

ГлавнаяHelixbook Типирование парапротеина в сыворотке крови (с помощью иммунофиксации с панелью антисывороток IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, kappa, lambda)

Типирование парапротеина в сыворотке крови (с помощью иммунофиксации с панелью антисывороток IgG, IgA, IgM, IgD, IgE, kappa, lambda)

Типирование парапротеина в сыворотке крови (с помощью иммунофиксации с панелью антисывороток IgG, IgA, IgM, kappa, lambda) - определение вида патологического белка, обнаруженного в сыворотке крови, проводимое с использованием специфических антител.

Синонимы русские

Иммунофиксация белков сыворотки, иммунофиксация парапротеина.

Синонимы английские

Immunofixation blood test, serum immunofixation, immunofixation electrophoresis, IFE, immunoelectrophoresis, IEP.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
Не принимать пищу в течение 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Все белки в сыворотке крови различаются по размерам и заряду молекул, что определяет их разную подвижность в электрическом поле. На этом свойстве белков основано их разделение методом электрофореза на пять видов - фракций (альбумины, две фракции альфа-глобулинов, бета-глобулины и гамма-глобулины). Во фракцию гамма входят иммуноглобулины - специфические защитные белки иммунной системы человека, которые вырабатываются плазматическими клетками (подвид В-лимфоцитов). Молекула иммуноглобулина состоит из двух тяжелых и двух легких цепей. Существует три варианта тяжелых цепей - IgA, IgG или IgM - и два типа легких - каппа (kappa) и лямбда (lambda).

При некоторых опухолевых заболеваниях кроветворной системы патологически измененные плазматические клетки начинают бесконтрольно и в больших количествах вырабатывать одинаковые тяжелые или легкие цепи. В этих ситуациях при электрофорезе белков определяют так называемый моноклональный компонент в зоне гамма-фракции. Он представлен абсолютно одинаковым патологическим белком (парапротеином), который синтезируется одним клоном (то есть опухолевой популяцией) плазматических клеток.

Для того чтобы определить, чем именно представлен парапротеин, применяется метод иммунофиксации. Он основан на взаимодействии специфических антител с конкретными антигенами. В роли антигенов при этом выступают тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов, которыми представлен парапротеин, а антитела к ним содержатся в специальных диагностических сыворотках. На первом этапе проводится электрофорез белков сыворотки в специальном геле. При этом делается шесть электрофоретических разделений на одной пластинке геля - одно для контроля, а на остальные пять наносят антисыворотки определенной специфичности (всего используется пять сывороток - к трем тяжелым и к двум легким цепям). Примерно через час в зоне моноклонального парапротеина, прореагировавшего с родственной ему сывороткой, образуется преципитат (видимый осадок). Таким образом, зная, какая сыворотка вызвала преципитацию в зоне парапротеина, можно определить его тип.

Для чего используется исследование?

Для определения типа парапротеина сыворотки, что имеет значение в диагностике заболеваний, объединенных термином "моноклональные гаммапатии". К ним относятся множественная миелома, плазмоцитома, макроглобулинемия Вандельстрема, болезнь тяжелых цепей, болезнь легких цепей, амилоидоз, моноклональная гаммапатия неясного значения.

Когда назначается исследование?

При выявлении моноклонального компонента в сыворотке крови методом электрофореза, а также при наличии клинико-лабораторных данных (особенно высокая протеинурия в сочетании с ускоренной скоростью оседания эритроцитов), которые позволяют заподозрить заболевание, относящееся к группе моноклональных гаммапатий, даже если при стандартном электрофорезе парапротеин не определяется.

Что означают результаты?

Референсные значения: не обнаружено.

В норме моноклональный компонент при иммунофиксации не выявляется. При его наличии в отчете иммунофиксации белков сыворотки указывается тип парапротеина. Он может быть представлен целыми иммуноглобулинами, тогда в заключении пишется тип тяжелой и легкой цепей, например IgG lambda. В некоторых случаях моноклональный компонент представлен исключительно легкими цепями, соответственно, в заключении указывается только тип выявленной легкой цепи.

Что может влиять на результат?

При неправильном разведении исследуемого образца сыворотки преципитат может раствориться, приводя к ложноотрицательному результату.

ГлавнаяHelixbook Скрининг миеломной болезни и парапротеинемий (иммунофиксация сыворотки крови с пентавалентной сывороткой)

Скрининг миеломной болезни и парапротеинемий (иммунофиксация сыворотки крови с пентавалентной сывороткой)

Данный тест предназначен для обнаружения моноклонального иммуноглобулина (парапротеина) с помощью сочетания таких методов, как клинический электрофорез и иммунофиксация. В результате разделения белков сыворотки крови путем электрофореза парапротеин (также его называют М-пиком Или М-градиентом) претерпевает миграцию в виде компактной полосы, что делает его заметным на фоне других белков фракций. Метод иммунофиксации позволяет достоверно выявить моноклональный иммуноглобулиновый компонент и определить его абсолютное содержание в сыворотке крови.

Электрофоретическое разделение белков сыворотки крови, клинический электрофорез и иммунофиксация, скрининг болезни Рустицкого-Калера, скрининг миеломы, скрининг миеломатоза, скрининг ретикулоплазмоцитоза, скрининг генерализованной плазмоцитомы.

Serum protein electrophoresis , immunofixation electrophoresis, multiple myelomascreening, plasmacellscancerscreening, plasmacell myeloma screening, monoclonal gammopathy screening.

Единицы измерения

Г/л (грамм на литр).

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Диагностика миеломной болезни проводится с помощью симбиоза двух методов исследования - клинического электрофореза и иммунофиксации - и заключается в выявлении присутствия парапротеина в сыворотке крови для его последующего типирования. С помощью данного исследования можно выявить не только миеломную болезнь, но и другие лимфопролиферативные заболевания, а также амилоидоз, полинейропатию, гемолитические анемии, криоглобулинемию, поражения почек.

Основным признаком данных заболеваний с точки зрения лабораторной диагностики является увеличение синтеза иммуноглобулина. Метод электрофореза позволяет разделить белки сыворотки крови и выделить иммуноглобулин - в результате расщепления он выделяется на фоне других белковых фракций в виде мигрирующей полосы. Этот иммуноглобулин называется парапротеином (также его называют моноклональным иммуноглобулином, М-пиком или М- градиентом). Именно он является онкомаркером при наличии у пациента гематоонкологических заболеваний.

Клинические проявления миеломной болезни связаны с разрушением костей - это могут быть патологические переломы, боли в костях, анемический синдром, снижение гемоглобина в крови, синдром гипервязкости, тромбозы и кровотечения. Разрушение костей приводит к увеличению количества кальция в крови, что в свою очередь влечет за собой кальциевые отложения в почках, легких и на слизистой желудка. Также при миеломной болезни наблюдаются частые бактериальные инфекции у пациента - это связано с падением количества нормальных иммуноглобулинов и нарушениями процесса образования антител.

Наличие множественной миеломы напрямую связано с пролиферацией плазмацитов, способных секретировать парапротеин или его фрагменты. На момент диагноза концентрация моноклонального иммуноглобулина в сыворотке крови чаще всего превышает 25 г/л. Контроль и наблюдение за изменением уровня концентрации парапротеина позволяет проводить мониторинг состояния пациента и оценку эффективности лечения миеломы. При наличии заболевания контрольные анализы для наблюдения за изменением уровня концентрации парапротеинана на фоне терапии должны проводиться каждые 3 месяца.

При миеломе парапротеин в сыворотке крови в 60 % случаев представлен IgG, 20 % приходится на IgA. Эти 20 % относятся к определению миеломы Бенс-Джонса - в этом случае необходимо также проконтролировать продукцию свободных легких цепей (каппа или лямбда) и их наличие в моче. Достаточно редко (в 2-4 % случаев) при наличии миеломы может также отмечаться присутствие биклонального парапротеина.

Лимфома, при которой активно продуцируется моноклональный IgM, называется макроглобулинемией Вальденстрема. При данном типе лимфомы опухолевые клетки диффузно распределяются в селезенке, костном мозге и лимфоузлах. Увеличивается вязкость крови и проявляется ряд клинических симптомов: слепота, спутанность сознания, склонность к кровоточивости, гипертензия, сердечная недостаточность - это связано с повышением концентрации моноклонального IgM до 30 г/л и более. При других типах лимфомконцентрация парапротеинов класса IgM обычно не превышает 30 г/л, хотя они и обнаруживаются у 20 % пациентов.

Помимо перечисленного, моноклональный парапротеин может быть обнаружен при некоторых неопухолевых заболеваниях. Это может быть эссенциальная криоглобулинемия, парапротеинемическая хроническая полинейропатия, холодовая гемолитическая анемия, АL-амилоидоз почек и внутренних органов, болезнь отложения легких цепей. Также парапротеин в сыворотке крови обнаруживается при болезни Кастелмана, POEMS-синдроме и микседематозном лишае.

В случае если парапротеинемия не прогрессирует во множественную миелому или другое заболевание в течение 5 лет, речь идёт о доброкачественной парапротеинемии. В этом случае концентрация парапротеина обычно ниже 3 г/л.

Согласно статистике, парапротеинемия чаще всего выявляется у пациентов старше 50 лет. У лиц старше 65 лет выявляемость заболевания достигает 4-10 %. В большинстве случаев это бессимптомные моноклональные гаммапатии невыясненного значения (МГНЗ) - это парапротеинемия без других признаков онкогематологического заболевания. В этом случае не требуется постоянный мониторинг концентрации.

При выявлении парапротеинемии у пациентов моложе 50 лет необходимо проводить контрольные повторные обследования. Это связано с повышенным риском развития множественной миеломы. В случае обнаружения концентрации парапротеина выше 15 г/л необходимо провести ряд дополнительных исследований: электрофорез 24-часового образца мочи и иммунофиксация каждые 3-6 месяцев.

Диагностика причины клинической симптоматики (болей в спине, спонтанных переломов, частых бактериальных инфекций, полиневрита, гемолитической анемии, нефротического синдрома, кожной пурпуры, синдрома повышенного СОЭ, гиперкальциемии, амилоидоза внутренних органов, эндокринопатии, органомегалии).
Мониторинг уровня концентрации парапротеинов при моноклональнойгаммапатии невыясненного значения.
Оценка эффективности проводимой терапии при миеломе и других гаммапатиях.

Референсные значения: парапротеина (IgG, A, M, каппа/лямбда) не обнаружено.

Парапротеин в сыворотке крови присутствует в случае наличия у пациента:

транзиторной парапротеинемии;
моноклональной гаммапатии невыясненного значения;
доброкачественной парапротеинемии;
парапротеинемической полинейропатии;
криоглобулинемии;
холодовой гемолитической анемии;
AL-амилоидоза или болезни отложения легких цепей;
миседематозного лишая;
POEMS-синдрома (полинейропатии с органомегалией);
множественной миеломы;
макроглобулинемии Вальденстрема;
лимфомы и ХЛЛ (хронического лимфолейкоза);
болезни тяжелых цепей.

Отсутствие парапротеина в сыворотке крови позволяет практически полностью исключить вероятность диагноза "гаммапатия" (для подтверждения необходимо исключить присутствие белка Бенс-Джонса в моче).

Важные замечания

Интерпретация результатов исследования не является диагнозом и содержит информацию для лечащего врача для использования информации наряду с другими источниками (анамнеза, истории болезни, других исследований).

Также рекомендуется

58 Клинический и биохимический анализ крови - основные показатели

Кто назначает исследование?

Онколог, терапевт, гематолог, нефролог, уролог.

Литература

1. Лапин С.В. Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство"Человек", СПб- 2010.

2. Tietz Clinical guide to laboratorytests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006,1798 p.

3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden - 2011.

4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden - 2007.

5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2 nd ed./ Elsevier Science - 2006.

6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteriain Autoimmune Diseases / Human Press - 2008.

Определение экспрессии различных белков на поверхности клеток, основанное на высокоспецифической реакции антиген - антитело.

ИЦХ-анализ, иммуноцитохимия с антителами, иммуноцитохимическая оценка экспрессии белков, иммуноцитохимический тест.

Immunocytochemical (ICC) study, ICC tests, Immunocytochemical examination, Immunocytochemistry with antibody, Immunocytochemical study of antigen expressions.

Жидкостная цитология с последующим иммуноцитохимическим исследованием (ИЦХ).

Аспират из полости матки.

Жидкостная цитология - это метод, основанный на стандартизации технологии приготовления цитологических препаратов из жидкой клеточной суспензии. Существует несколько вариантов методик жидкостной цитологии, но все они позволяют сохранить структуру и архитектонику клеточных скоплений, при этом элементы крови, некроза не мешают просмотру и анализу клеток опухоли. В связи со сложностью морфологического строения опухолей и многообразия гистологических вариантов для точной верификации диагноза при цитологической диагностике применяют иммуноцитохимическое исследование.

ИЦХ исследование - это метод молекулярной иммунологической диагностики, используемый для оценки наличия специфического белка или антигена в клетках с использованием специфического антитела, которое связывается с ним, что позволяет визуализировать и анализировать под микроскопом. Данный метод позволяет проводить иммунологический анализ цитологического материала в условиях сохранения морфологии клеток. Результаты оцениваются качественно и количественно.

ИЦХ позволяет оценить, действительно ли клетки в конкретном образце экспрессируют данный антиген. В тех случаях, когда обнаружен иммуноположительный сигнал, становится возможным определять, где именно расположен антиген, степень его экспрессии.
Таким образом, иммуноцитохимическое исследование существенно расширяет возможности цитологической диагностики. Появляется возможность визуализации различных вне- и внутриклеточных маркеров, которые не определяются при обычном исследовании.
Существует много способов подготовки образцов клеток для иммуноцитохимического анализа. Каждый метод имеет свои сильные и уникальные характеристики, поэтому правильный метод может быть выбран для желаемого образца и результата.
Иммуноцитохимия на основе моноклональных антител является одним из наиболее ценных инструментов, доступных в клеточной биологии и патологии.

ИЦХ-анализ может проводиться как с моноклональными антителами, так и с поликлональнами. Важным, основным принципом является то, что с методологической точки зрения нет существенных различий между иммуноцитохимией на основе моноклональных и поликлональных антител. Специфичность первичного антитела является наиболее важной предпосылкой для надежной иммуноцитохимии.

Известно более 200 антител, используемых в качестве диагностических, прогностических и прогнозирующих биомаркеров. Вот несколько примеров:

BrdU - для идентификации реплицируемых клеток; используется для выявления опухолей, а также при исследованиях нейронов;
цитокератины - используются для идентификации карцином, но могут также экспрессироваться в некоторых саркомах;
CD15 и CD30 - используются при лечении болезни Ходжкина;
альфа-фетопротеин - для опухолей желточного мешка и гепатоцеллюлярной карциномы;
CD117 - для желудочно-кишечных стромальных опухолей (GIST) и опухолей тучных клеток;
CD10 - для карциномы почек и острого лимфобластного лейкоза;
простатический специфический антиген (PSA) - для рака предстательной железы;
Ber-EP4 - чувствительный эпителиальный маркер, используется, например, при дифференциальной диагностике реактивных и метастатических экссудатов при аденокарциноме (чувствительность - 96%, специфичность - 99%);.
рецепторы стероидных гормонов (эстрогенов, прогестерона, андрогенов) используются как диагностически (рак молочной железы, эндометрия, яичников, десмоид, доброкачественная патология молочной железы), так и прогностически при раке молочной железы (прогнозирование реакции на терапию - рецептор эстрогена);
DU-PAN-2 используется для выделения папиллярных карцином щитовидной железы от фолликулярных опухолей;
идентификация В-клеточных лимфом с использованием CD20;
идентификация Т-клеточных лимфом с использованием CD3.

Так, при раке молочной железы иммуноцитохимическое исследование позволяет определить гормональный фон, на котором возник опухолевый процесс, способность клеток к быстрому делению, чувствительность к химиопрепаратам и лучевой терапии. На основании цитологического заключения формируется вся дальнейшая тактика лечения, появляется возможность сделать терапию максимально эффективной при минимальных потерях. Использование метода позволяет выявить факторы, определяющие ответ опухоли на лечение. Исследование рецепторов эстрогенов и прогестерона, фактора пролиферативной активности Ki-67, онкопротеина C-erbB-2, белка р5, EGFR при раке молочной железы позволяет проводить эффективную целенаправленную таргетную терапию.

ИЦХ-анализ позволяет обнаружить даже единичные раковые клетки в лимфоузлах, костном мозге, биологических жидкостях, уточнить на догоспитальном этапе патогенез, определить прогноз заболевания, степень распространения опухолевого процесса и тактику лечения. 24% ИЦХ исследований проводится на пунктатах лимфатических узлов. ИЦХ исследования повышают достоверность определения гистогенеза новообразований в метастатически пораженных лимфатических узлах с 67 до 97 %.

Иммуноцитохимический анализ плевральных и перитонеальных выпотов в сложных диагностических случаях повышает результативность цитологического метода: чувствительность с 62 до 93 % и специфичность с 95 до 99 %.

При невыявленном первичном опухолевом очаге сочетание цитологического и ИЦХ исследований с использованием широкой панели моноклональных антител в 93% устанавливает локализацию опухоли.

При злокачественных недифференцированных новообразованиях иммуноцитохимические исследования позволяют диагностировать рак, меланому и лимфому с точностью до 90,3 %, 100 % и 87,5 % соответственно.

Также данное исследование позволяет избежать гипердиагностики опухолевого процесса при заподозренной патологии в результате рутинного цитологического исследования.

В настоящее время иммуноцитохимический метод является одним из самых мощных инструментов для определения наличия и локализации определенных веществ в микроскопических препаратах - клетках.

Для идентификации в клетках разнообразных молекулярных структур и соединений;
для установления локализации в клетках определенных веществ;
для определения источника метастаза или гистогенеза первичной опухоли;
для определения степени вероятности прогрессии или регрессии предраковых состояний, прогноза заболевания;
для определения степени распространенности опухолевого процесса;
для выбора тактики лечения;
для динамического наблюдения и контроля лечения;
для выявления группы риска по развитию онкологических заболеваний и выбора правильной тактики ведения пациентов.

При наличии предракового заболевания;
при дифференциальной диагностике доброкачественных и злокачественных новообразований;
при определении первичного очага метастазов;
при обследовании в рамках диагностики онкологического заболевания (например, при иммунофенотипировании злокачественных лимфом);
при всех случаях атипической цитологии;
перед, во время и после проведения лечебного курса.

Экспрессия определенных белков и ее интенсивность позволяют идентифицировать патологическое состояние, спрогнозировать риск развития онкологического заболевания, определить источник метастазов. Также результаты исследования помогают выбрать правильную тактику ведения пациента.

Результат исследования интерпретируется врачом с учетом всех значимых клинических, дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Скрининг парапротеинемий в сыворотке крови с помощью иммунофиксации в Барнауле

Читайте также: