Для аллергической диагностики туберкулеза у свиней применяют

Наставление
по применению туберкулинов для аллергической диагностики туберкулеза у млекопитающих и птиц
(утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 9 февраля 1978 г. взамен наставлений от 10 декабря 1970 г. и от 30 июля 1973 г.)

1. Для аллергической диагностики туберкулеза у сельскохозяйственных и других животных (включая птиц) применяют стандартные альттуберкулин для млекопитающих, сухой очищенный (ППД - протеин пурифиед дериват) туберкулин для млекопитающих и сухой очищенный (ППД) туберкулин для птиц.

Альттуберкулин для млекопитающих имеет вид прозрачной, просвечивающейся в проходящем свете, слегка маслянистой, коричневого или темно-коричневого цвета жидкости с характерным запахом без осадка, хлопьев и других примесей.

Сухие очищенные (ППД) туберкулины имеют вид пористой аморфной массы светло-коричневого цвета с сероватым оттенком.

Растворитель сухих очищенных (ППД) туберкулинов представляет собой стерильную бесцветную прозрачную жидкость с легкой опалесценцией.

2. Туберкулины и растворитель для сухих очищенных туберкулинов выпускают в ампулах или флаконах. Ампулы должны быть запаяны, а флаконы плотно закрыты пробками, закатаны алюминиевыми колпачками и упакованы в коробки.

Ампулы (флаконы) с растворителем вкладывают в каждую коробку с сухим очищенным туберкулином.

На каждой коробке должна быть этикетка с указанием наименования и товарного знака биопредприятия, изготовившего препарат, наименования препарата, даты его изготовления, номеров серии и госконтроля, срока годности, количества ампул (флаконов) в коробке, количества препарата в ампуле (флаконе), условий хранения, обозначения стандарта (ГОСТа) и номера ТУ.

На каждой ампуле (флаконе) должно быть указано наименование препарата и номер серии.

В каждую коробку должно быть вложено наставление по применению туберкулинов.

Срок годности альттуберкулина для млекопитающих - 5 лет, сухих очищенных (ППД) туберкулинов - 3 года со дня изготовления при хранении в условиях, указанных в этикетках на коробках с препаратами.

3. Каждую ампулу (флакон) с туберкулином и растворителем перед применением просматривают. При обнаружении в препаратах каких-либо примесей, плесени, хлопьев, при нарушении целостности стекла или укупорки, отсутствии надписи на ампуле (флаконе) их выбраковывают.

Препараты используют только в день вскрытия ампул (флаконов).

4. Для внутрикожного введения туберкулина используют специальные иглы для внутрикожных инъекций с двойной трубкой из нержавеющей стали (МРТУ 46-84-62) или иглы N 0612 и шприцы с бегунком емкостью 1-2 мл или безыгольные инъекторы. Для нанесения туберкулина на конъюнктиву глаза применяют глазные пипетки.

Инструменты, используемые для туберкулинизации, не разрешается применять для введения животным других веществ.

Шприцы, иглы и глазные пипетки перед и после их использования стерилизуют кипячением в течение 10 минут в дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих веществ. Безыгольные инъекторы стерилизуют в соответствии с наставлением по их применению.

Во время туберкулинизации животных инъекционные иглы сменяют перед каждым наполнением шприца туберкулином, а в паузах между инъекциями препарата конец шприца с иглой держат в ватном тампоне, смоченном 70%-ным этиловым спиртом.

5. Для диагностики туберкулеза применяют:

у млекопитающих животных (кроме свиней и обезьян) - сухой очищенный (ППД) туберкулин или альттуберкулин для млекопитающих;

у свиней - одновременно сухие очищенные (ППД) туберкулины для млекопитающих и для птиц;

у обезьян - сухой очищенный (ППД) туберкулин для млекопитающих;

у птиц - сухой очищенный (ППД) туберкулин для птиц.

6. Туберкулинизации подвергают животных начиная с 2-месячного возраста.

Не разрешается исследовать туберкулинами животных в течение 3 недель после вакцинации их против инфекционных болезней.

7. Сухие очищенные (ППД) туберкулины непосредственно перед применением растворяют специальным растворителем, высылаемым биопредприятием вместе с препаратом.

При проведении туберкулинизации животных (кроме свиней и обезьян) с использованием шприца с иглой или безыгольного инъектора марки "Овод" содержимое одной ампулы (флакона) с ППД-туберкулином для млекопитающих растворяют в одной ампуле (флаконе) растворителя. При пользовании безыгольным инъектором марки ИБВ-01 в одной ампуле (флаконе) растворителя растворяют содержимое двух ампул (флаконов) с туберкулином.

Для проведения туберкулинизации свиней в одной ампуле (флаконе) растворителя растворяют содержимое двух ампул (флаконов) с ППД-туберкулином для птиц, в другой ампуле (флаконе) растворителя - содержимое одной ампулы (флакона) с туберкулином для млекопитающих.

Для туберкулинизации птиц содержимое ампулы (флакона) с ППД-туберкулином для птиц растворяют в одной ампуле (флаконе) растворителя.

Для туберкулинизации обезьян содержимое одной ампулы (флакона) с ППД-туберкулином для млекопитающих растворяют в одной ампуле (флаконе) растворителя, затем 1 мл этого раствора смешивают с 49 мл растворителя (0,1 мл - в 4,9 мл).

8. Туберкулинизацию животных разрешается проводить только ветеринарным врачам и ветеринарным фельдшерам со специальным средним образованием под контролем ветврача.

Внутрикожный метод туберкулинизации

9. Туберкулин вводят внутрикожно:

крупному рогатому скоту, буйволам, зебу, зебувидному скоту, оленям (маралам) в области средней трети шеи;

свиньям - в области наружной поверхности уха в двух сантиметрах от его основания (с одной стороны головы вводят ППД-туберкулин для млекопитающих, с другой - ППД-туберкулин для птиц);

козам, овцам, собакам, обезьянам и пушным зверям (кроме норок) - в области внутренней поверхности бедра или локтевой складки;

норкам - интрапальпебрально в верхнее веко;

верблюдам - в кожу брюшной стенки в области паха на уровне горизонтальной линии седалищного бугра;

курам - в бородку;

индейкам - в подчелюстную сережку;

гусям, уткам - в подчелюстную складку;

фазанам, павлинам, попугаям, голубям, журавлям, цаплям, аистам, фламинго - в области наружной стороны голеностопного сустава, выше его на 1-2 см.

10. Перед введением туберкулина шерсть в месте инъекции выстригают (перья выщипывают), кожу обрабатывают 70%-ным этиловым спиртом.

Вводить туберкулин в кожу, имеющую травматические повреждения, а также уплотнения или абсцессы, поражения грибками, клещами, гельминтами, запрещается.

11. Туберкулины применяют в объеме 0,2 мл млекопитающим животным (кроме обезьян и норок) и 0,1 мл - обезьянам, норкам и птицам. При исследовании крупного рогатого скота и буйволов с помощью безыгольного инъектора марки ИБВ-01 туберкулин животным вводят в объеме 0,1 мл.

12. Учет и оценку реакции на внутрикожное введение туберкулина проводят у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, зебувидного скота, верблюдов и оленей через 72 часа после введения препарата; у коз, овец, свиней, собак, обезьян, пушных зверей - через 48 часов; у птиц - через 30-36 часов.

13. У животных реакция в месте инъекции туберкулина проявляется в виде разлитого отека тестоватой или мягкой консистенции, не имеющей, как правило, четких границ с окружающей тканью. Образование отека сопровождается повышением местной температуры, гиперемией и болезненностью воспаленного участка кожи. У некоторых животных реакция проявляется в виде появления плотной, безболезненной, отчетливо контурированной припухлости.

14. При учете внутрикожной реакции у каждого исследуемого животного пальпируют место введения туберкулина, при интрапальпебральном введении препарата (норкам) сравнивают веки левого и правого глаза.

При обнаружении изменений в коже в месте введения туберкулина у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, зебувидных, верблюдов, оленей измеряют кутиметром толщину кожной складки в миллиметрах и определяют величину ее утолщения сравнением с толщиной складки неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина.

15. Животных считают реагирующими на туберкулин:

крупный рогатый скот, буйволов, зебу, зебувидных, верблюдов и оленей - при утолщении кожной складки на 3 мм и более (независимо от характера реакции);

коз, овец, свиней, собак, обезьян, пушных зверей, кур и других птиц - при образовании припухлости в месте введения туберкулина, норок - при опухании века.

Глазной метод туберкулинизации

16. Глазную туберкулиновую пробу (офтальмопробу) применяют для диагностики туберкулеза у лошадей. В отдельных случаях эту пробу допускается применять у крупного рогатого скота одновременно с внутрикожной пробой.

Глазную туберкулинизацию проводят двукратно с интервалом в 5-6 дней между первым и повторным введением туберкулина. Препарат в количестве 3-5 капель наносят пипеткой на конъюнктиву нижнего века или на поверхность роговицы при оттянутом нижнем веке. При различных поражениях глаза и его конъюнктивы исследование животных офтальмопробой не разрешается.

17. Учет результатов реакции на туберкулин проводят через 6, 9, 12 и 24 часа после первого и через 3, 6, 9 и 12 часов после повторного введения туберкулина.

Реакция на туберкулин характеризуется выделением из внутреннего угла глаза слизисто-гнойного или гнойного секрета, накапливающегося вначале в конъюнктивальном мешке, а затем вытекающего в виде шнура. Одновременно наблюдается гиперемия конъюнктивы, а при сильной реакции и отек ее. При учете реакции необходимо внимательно осматривать конъюнктивальный мешок.

Порядок проведения исследования

18. Исследование животных на туберкулез методом туберкулинизации проводят в порядке и сроки, предусмотренные инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации туберкулеза животных, утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР.

19. На проведение туберкулинизации составляют акт, а при исследовании крупного рогатого скота, буйволов, зебу, зебувидных, верблюдов и оленей, кроме того, составляют опись исследованных животных.

В описи указывают наименование населенного пункта, вид животных и их владельцев (колхоз, совхоз, граждане и т.д.), а также инвентарный номер или кличку животного, гол, возраст, у реагирующих животных - величину утолщения кожной складки и характер реакции на туберкулин.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Наставление по применению туберкулинов для аллергической диагностики туберкулеза у млекопитающих и птиц (утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 9 февраля 1978 г. взамен наставлений от 10 декабря 1970 г. и от 30 июля 1973 г.)

Текст наставления опубликован в сборнике "Ветеринарное законодательство". Том III. - М.: Колос, 1981 г.

Этиология. Возбудитель - Micobacterium tuberculosis - тонкая, неподвижная, полиморфная, аэробная, кислотоустойчивая палочка, окрашивается по способу Циля - Нильсена. Известно три основных типа туберкулезных бактерий: человеческий (humanus), бычий (bovinus) и птичий (avium). Представители этих тн пов различаются по вирулентности для отдельных видов животных и человека. ; Свиньи восприимчивы к туберкулезным бактериям всех типов. Из лабораторных животных наиболее восприимчивы к туберкулезу морские свинки, они легко заражаются человеческим типом, но резистентны к птичьему типу. Кролики и бе- лые мыши восприимчивы к бычьему и птичьему типам возбудителя.

Туберкулезная палочка очень устойчива во внешней среде и к действию обеззараживающих веществ. В высушенных на воздухе кусочках пораженных легких микробы сохраняют вирулентность до 200 дней, в навозе - 7 мес, в воде - до 2 мес, в почве - более 2 лет. В масле, сохраняемом на холоде, бактерии погибают через 10 мес. Нагревание молока до 55° С убивает их через 4 ч, до 85° С - через 30 мин, кипячение - за 3-5 мин. 5-процентный раствор карбо- ловой кислоты оказывает губительное действие на бактерий через 24 ч, 5-про- центный раствор формальдегида - через 12 и раствор хлорной извести с содержаннем 5% активного хлора - через 3 ч.

Эпизоотология. Источник возбудителя - больные животные, выделяющие бактерии с мокротой, фекалиями и молоком, которые инфицируют корма, навоз, тер- риторию скотных дворов и пастбищ. Факторами передачи инфекции могут быть корма, подстилка, вода, навоз и другие предметы, загрязненные выделениями больных животных.

Свиньи заражаются туберкулезом при использовании общих с туберкулезным скотом и птицей выпасов и выгулов. Часто свиньи заражаются при поедании необеззараженного молока или боенских отходов от больных туберкулезом животных. Могут также заражаться от больного обслуживающего персонала или при поедании кормов, инфицированных больными людьми. Распространению болезни способствует скученное содержание свиней в сырых, тесных, плохо вентилируемых помещениях.

Патогенез. Туберкулезные бактерии попадают в организм животных через пищеварительный тракт или аэрогенным путем. В месте их внедрения (легкие, кишечник) развивается туберкулезное поражение - первичный очаг (аффект), из которого возбудитель с лимфой попадает в регионарный лимфатический узел, где также вызывает изменения. Поражение органа и регионарного лимфатического узла называют первичным комплексом. Первично пораженный орган может восстанавливаться, однако изменения в регионарном лимфатическом узле почти всегда сохраняются.

В резистентном организме попавшие в него туберкулезные бактерии окружаются эпителиозными клетками, из которых в дальнейшем образуются гигантские клетки, окруженные кольцом лимфоцитов. Между клетками появляется экссудат

свертывается фибрин. Формирующийся бессосудистый туберкулезный бугорок инкапсулируется. В нем под воздействием токсинов бактерий и из-за отсутствия питательных веществ тканевые клетки отмирают, образуется творожистая масса, пропитанная солями извести. В таком инкапсулированном бугорке (гранулеме) дальнейшее развитие процесса приостанавливается, туберкулезные бактерии погибают, животное выздоравливает.

В организме с пониженной резистентностью вследствие недостаточного инкапсулирования происходит расплавление туберкулезных узелков, бактерии попадают в здоровую ткань и вызывают образование новых мелких узелков, которые, соединяясь, образуют крупные туберкулы. При попадании бактерий в кровь возникает бактериемия с образованием большого количества узелков во многих органах и тканях - происходит генерализация процесса.

Наряду с образованием туберкулезных бугорков меняется и общая реактивность организма, вследствие чего развивается состояние аллергии и появляется способность давать характерные аллергические реакции. Сроки появления аллергии в зависимости от реактивности организма и активности инфекции - от 2 до 6 недель после заражения.

При доброкачественном течении процесса развивается латентная инфекция, которая выявляется с помощью аллергических реакций и не сопровождается какими-либо функциональными расстройствами. В случае генерализации туберкулезного процесса и обширных поражений различных органов и лимфатических узлов нарушаются газообмен и деятельность желудочно-кишечного тракта, токсины туберкулезных бактерий тормозят эритропоэз, что вызывает явления анемии. При нарушении функции отдельных органов животное погибает.

Клинические признаки. Инкубационный период - от 2 до 6 недель, определяется положительными аллергическими реакциями у заразившихся животных. Условно различают активный, или открытый, туберкулез, когда бактерии с бронхиальной слизью или фекалиями выделяются во внешнюю среду, и латентный туберкулез, когда бактерии инкапсулированы в очаге и наружу не выделяются.

У подавляющего большинства свиней заболевание протекает бессимптомно. В ряде случаев наблюдают повышение температуры тела, угнетение, ухудшение аппетита, увеличение подчелюстных, заглоточных и шейных лимфатических узлов, иногда в них образуются абсцессы, после вскрытия которых остаются свищи с выделением гнойно-творожистой массы. При поражении легких отмечают сначала сухой и болезненный кашель, затрудненное дыхание, рвоту, а при поражении кишечника - поносы; больные свиньи быстро худеют. Сравнительно редко поражаются кости и центральная нервная система.

Патологоанатомические изменения. При туберкулезном поражении легких в них обнаруживают множественные серовато-белые или желтые узелки величиной от булавочной головки и больше. В местах поражений легкие плотные и бугристые. При разрезе слившихся узелков в части из них отмечают творожистое перерождение и обызвествление. При поражении лимфатических узлов в них обнаруживают туберкулезные бугорки величиной от горошины до грецкого ореха. Пораженные подчелюстные и заглоточные лимфатические узлы могут иметь размер куриного яйца. Иногда лимфатические узлы содержат густую творожисто-гнойную массу, которая выделяется из узла при его самопроизвольном вскрытии. Туберкулы встречаются также на слизистой оболочке глотки, в кишечнике, в среДостенных и мезентериальных лимфоузлах.

Поражения регистрируют в селезенке, печени, почках, костях, на слизистой оболочке носа. У свиней, инфицированных возбудителем туберкулеза человеческого типа, изменения менее выражены, чем при заражении возбудителем бычьего типа. При заражении возбудителем птичьего типа процесс протекает более продуктивно. При этом у свиней чаще находят поражения в лимфатических узлах брыжейки и головы, реже в других органах.

Диагностика. Диагноз устанавливают на основании комплекса данных клинического и аллергического исследования животных, послеубойного осмотра внутренних органов и лабораторных (бактериологическое, биологическое, гистологическое) исследований. Для аллергической диагностики применяют одновремено сухой очищенный туберкулин для млекопитающих и сухой очищенный тубернИ лин для птиц в дозе 0,2 мл. Его вводят внутрикожно в области наружной поверщ ности уха в 2 см от его основания: с одной стороны головы вводят туберкулин для млекопитающих, с другой - туберкулин для птиц. Учет и оценку реакции проводят через 48 ч после введения препарата. Свиней считают реагирующими на туберкулин при образовании припухлости в месте его введения.

Первичный диагноз на туберкулез по туберкулиновой пробе обязательно Дож жен быть подтвержден данными послеубойного патологоанатомического осмотЯИ внутренних органов и лимфатических узлов животных, а также лабораторными исследованиями.

Иммунитет. У больных свиней образуется нестерильный (инфекционный) иммунитет, который продолжается до тех пор, пока в организме находятся тубеЯ кулезные бактерии. С их выделением или гибелью прекращается и иммунитяИ

Меры борьбы и профилактики. Борьба с туберкулезом животных основавном на охране благополучных хозяйств от заноса инфекции, систематических исследований животных с целью своевременного выявления больных, на оздоровлИ нии неблагополучных по туберкулезу хозяйств (ферм, стад) и охране людей ой заражения. Комплектовать стада разрешается только здоровыми животными вп благополучных по туберкулезу хозяйств и населенных пунктов. Всех свиней, поступивших в хозяйство, содержат в карантине 30 дней и в этот период исследувИ на туберкулез. Поскольку свиньи восприимчивы к туберкулезным бактериям всех трех типов, их не допускают на пастбища и в помещения, где находились болЯ иые туберкулезом животные (птица).

Свиноводческие фермы и летние лагеря должны быть огорожены, на их территорию не допускают животных других видов. Молочные продукты, пищевые отходы перед использованием в корм свиньям обеззараживают. Дли ухода за свиньями не допускают людей, больных туберкулезом.

Для своевременного выявления болезни взрослых свиноматок и хряков, также молодняк после отъема во всех племенных хозяйствах исследуют на туберкулез один раз в год, а на остальных свинофермах - в зависимости от эпизоотической обстановки.

В неблагополучных по туберкулезу свинарниках всех реагирующих па туберкулин свиней немедленно изолируют и сразу или после откорма сдают на у МН Остальных свиней с 2-месячного возраста через каждые 30-45 дней исследуют на туберкулез до получения подряд двух отрицательных групповых результатов, после чего эту группу животных признают здоровой.

В свинарниках, где обнаружили больных туберкулезом свиней, проводят текущую и заключительную дезинфекцию. Для этого применяют осветленный раствор хлорной извести, содержащий 5% активного хлора, или смесь З-процентных растворов гидроокиси натрия и формальдегида при температуре 35-40° С.

Аллергическая диагностика. Основным методом прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота является внутрикожная проба с ППД туберкулином для млекопитающих. В настоящее время туберкулин получают из культурального фильтрата микобактерий, выращенных на синтетической питательной среде, путем осаждения протеиновой фракции (PPD) трихлоруксусной кислотой и сульфатом аммония /А.С. Донченко, 1989; А.Н.Шаров, 1989; А.Х.Найманов, 1993; И.И.Румачик, 1993, 1997; Л.П.Ходун, 1997/.

Туберкулин, при внутрикожном введении, позволяет выявлять инфицированных животных задолго до появления других признаков заболевания. В тоже время эффективность метода во многом зависит от комплекса взаимосвязанных причин: степени распространения инфекции в стаде, характера течения туберкулеза, формы и вида персистирования микобактерий, от механизмов иммунного ответа, различия путей, доз и кратности инфицирования, времени года, физиологического состояния животных, их возраста.

В разных странах для аллергической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота применяют дозы от 2000 до 10000 ME туберкулина для млекопитающих. Выбор дозы зависит от эпизоотической ситуации и иммунологической реактивности животных в конкретном регионе. Оптимальной считают такую дозу туберкулина, которая выявляет наибольшее число животных, зараженных возбудителем туберкулеза и минимальное количество здоровых особей или инфицированных атипичными микобактериями.

Существует мнение о том, что при уменьшении дозы туберкулина ниже 10000 МЕ, часть зараженных животных может не реагировать и остается в стаде, что растягивает сроки оздоровления. Однако в стадах с сильным распространением болезни туберкулин в дозе 10000МЕ одномоментно не выявляет всех инфицированных животных, а средняя чувствительность теста составляет 70-77%. Вместе с тем, регулярная туберкулинизация с интервалом в 30-60 дней позволяет выявить практически всех инфицированных и больных животных. Истинная анергия отмечается не более, чем у 3-4% больных коров.

В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах допускается применение двукратной туберкулиновой пробы с целью максимального выявления реагирующих животных (гипердиагностика), которая ранее была обязательной при исследовании скота на туберкулез во всех категориях хозяйств. При учете реакций на первое введение через 72 часа нереагирующим животным повторно вводят туберкулин в той же дозе и в то же самое место и реакции учитывают через 24 часа.

Согласно рекомендаций (МЭБ, 1996), в странах ЕС доза туберкулина была снижена до 2000-2500 МЕ. Для Белоруссии, при улучшении эпизоотической ситуации, оптимальной дозой может быть 5000 МЕ, использование которой без существенного снижения чувствительности на 30-50% уменьшает число неспецифических реакций на туберкулин.

Аллергические реакции на туберкулин у животных могут быть обусловлены не только возбудителем туберкулеза, но и атипичными микобактериями. Обычно применяемая внутрикожная туберкулиновая проба не дает возможности дифференцировать парааллергические реакции у крупного рогатого скота. /А.С. Донченко, 1989; А.И.Завгородний, 1987; А.Н.Шаров, 1989; Ю.Я. Кассича, 1990; А.Х.Найманов, 1993; И.И.Румачик, 1993, 1997; Л.П.Ходун, 1997/.

Для прижизненной дифференциальной аллергической диагностики у животных и птиц применяется симультанная внутрикожная проба: введение туберкулина для млекопитающих как основного аллергена для выявления больных туберкулезом животных (у птиц - туберкулина для птиц), и другого аллергена (туберкулина для птиц, КАМа, других сенситинов), способного в большей степени выявлять особи, инфицированные другими (нетуберкулезными) видами микобактерий. Препараты вводят внутрикожно в симметричные участки шеи с разных сторон. Учет реакции проводят через 72 часа, сравнивая наличие и интенсивность реакций. При отсутствии в стаде туберкулезной инфекции интенсивность реакций у животных будет более выражена на КАМ или туберкулин для птиц, и, наоборот, - при наличии туберкулезной инфекции в стаде - на туберкулин для млекопитающих.

Для дифференциации парааллергических туберкулиновых реакций в ветеринарной практике уже давно используется симультанная проба с применением туберкулина для птиц. /Г.В.Чепик, 1980; И.И.Румачик, 1993, 1997/. Оценку результатов этой пробы проводится по количественному и качественному проявлению реакции на туберкулин как в целом по стаду, так и индивидуально по каждому животному. Животные, инфицированные возбудителем туберкулеза или атипичными микобактериями, реагируют на гомологичный туберкулин в большем количестве и интенсивнее. Преимущественное реагирование крупного рогатого скота только на ППД туберкулин для птиц (более 85%) и незначительное (до 15%) его реагирование на оба туберкулина, при более выраженной интенсивности реакций на туберкулин для птиц и отсутствие или наличии единично реагирующих животные только на ППД туберкулин для млекопитающих со слабо выраженными реакциями, давали основание для предварительного заключения об инфицированности скота данного стада атипичными микобактериями (возбудитель туберкулеза птичьего вида - M.avium -отнесен к III группе атипичных микобактерий по классификации Runyon (1959 г.).

И наоборот, если имеет место преимущественное реагирование скота на ППД туберкулин для млекопитающих, то можно предварительно судить об инфицированности (или заболевании) животных возбудителем туберкулеза (M.bovis или M.tuberculosis).

Если животные реагировали в одинаковой степени на оба туберкулина без какой-либо закономерности, то можно было предположить, что в стаде (на ферме) имеет место смешанная микобактериальная инфекция, т.е. инфицирование животных возбудителем туберкулеза бычьего или человечьего вида и одновременно атипичными микобактериями.

Комплексный аллерген из атипичных микобактерий (КАМ), разработанный и внедренный в практику в конце 70-х годов (А.Н.Шаров, 1979, 1980), получил широкое применение для дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в симультанной аллергической пробе. Симультанную аллергическую пробу с КАМ проводят в соответствии с наставлением. Ее применение рекомендовано через 30-45 дней после первого (или второго) планово исследования при условии выделения реагирующих на туберкулин животных. Хотя в приложении к инструкции (1988 г.) указывается на возможность проведения первичного исследования поголовья сразу симультанно, если ранее постоянно выявлялись реагирующие на туберкулин животные, но бактериологическим исследованием материала от них, диагноз не был подтвержден, а были выделены атипичные микобактерии.

Проводимые сравнительные испытания эффективности ППД туберкулина для птиц и КАМ в симультанной аллергической пробе у крупного рогатого скота явного предпочтения одному из них не дали. Эти аллергены могут в одинаковой степени быть использованы для дифференциации туберкулиновых реакций у скота. Однако обе методики - как с КАМ, так и с туберкулином для птиц - не лишены недостатков.

При математическом анализе результатов симультанной пробы и оценки достоверности интенсивности реакций с КАМ не принимаются во внимание животные, реагирующие только на КАМ и с одинаковой интенсивностью реакций на оба аллергена; при использовании методики симультанной пробы с туберкулином для млекопитающих не учитывались реагирующие только на туберкулин для млекопитающих, только на туберкулин для птиц и реагирующие на оба туберкулина в одинаковой степени. Учитывались только животные, реагировавшие одновременно на оба туберкулина с разной интенсивностью реакций. Такой методический подход более правильный.

Для массовой аллергической диагностики предложен также "Туберкулин очищенный для млекопитающих" Разработанный препарат обладает целым рядом преимуществ, в том числе и по стоимости. "Туберкулин очищенный для млекопитающих" за счет очистки методом ультрафильтрации и высокой специфической активности на 30% дешевле ППД туберкулина. Апробация препарата более, чем на 10000 головах крупного рогатого скота в хозяйствах с разной эпизоотической ситуацией показала, что при равной специфичности с ППД туберкулином Курской биофабрики он обладает достоверно большей специфической активностью, то есть полнее выявляет больных животных в неблагополучном стаде /А.П.Лысенко, Т.Н.Агеева, Г.В.Карпова и др.1997; А.Н.Притыченко, 2002/.

Особенностью аллергической диагностики туберкулеза у свиней является то, что у этого вида животных до сих пор применяется введение одновременно (симультанно) двух аллергенов: ППД туберкулинов для млекопитающих и для птиц. А поскольку в республике туберкулез у свиней отсутствует, то, естественно животные реагируют, в основном, на туберкулин для птиц. Это создает много искусственно надуманных, ничем научно и практически необоснованных ситуаций. В инструкции и наставлении по туберкулезу животных много в этом плане противоречивых пунктов, хотя диагноз на туберкулез у свиней устанавливается на основании п.3.3. Следует в то же время отметить, что у крупного рогатого скота при инфицировании его атипичными микобактериями, в том числе и возбудителем туберкулеза птичьего вида, никаких ограничений не устанавливается (п. 6.6 инструкции), даже молоко от таких животных (стад) идет на общих основаниях.

Анализ научно-практической работы по туберкулезу свиней позволил нам сделать заключение о том, что этот вид животных достаточно исследовать на туберкулез аллергически только одним туберкулином для млекопитающих и это не приведет к ущербу в диагностике и профилактике туберкулеза.

Техника аллергических диагностических исследований. В ветеринарии аллергический метод диагностики применяют при туберкулезе бруцеллезе, сапе, реже— при сибирской язве, листериозе, туляремии и др. Способы введения аллергена: внутрикожный (основной) по 0,1. 0,5 мл, накожный, подкожный, конъюнктивальный. При внутрикожной туберкулинизации аллерген вводят:

Крупному рогатому скоту, буйволам, оленям, зебу—в область средней трети шеи; быкам-производителям — в одну из подхвостовых складок;

Мелкому рогатому скоту — в подхвостовую складку, веко;

Свиньям — в область наружной поверхности уха на расстоянии 2 см от его основания (в одно ухо — ППД для млекопитающих, в другое — ППД для птиц);

Козам, овцам, собакам, обезьянам и пушным зверям (кроме норок) — в область внутренней поверхности бедра или локтевой складки, норкам — в верхнее веко (интрапальпебрально);

Курам — в бородку; индейкам — в подчелюстную складку;

Кошкам наносят на внутреннюю поверхность уха.

Используют тонкие иглы для внутрикожных инъекций (см. рис. 1) и шприцы на 1. 2 мл с бегунком или безыгольные инъекторы (рис. 2).

Рис. 2. Безыгольный инъектор:1 —рабочее сопло; 2— флакон с аллергеном; 3—регулировочный винт; 4—спусковой рычаг; 5— рукоятка

Инструментами, предназначенными для туберкулинизации, не разрешается вводить животным другие препараты. Шприцы и иглы до и после использования стерилизуют в течение 10 мин в дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих веществ.

Шерсть на месте инъекции предварительно выстригают и выбривают, кожу обрабатывают 70%-м этиловым спиртом. О правильности выполнения пробы судят по образованию бугорка размером с горошину на месте введения препарата. Реакцию учитывают у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, верблюдов и оленей через 72 ч; у коз, овец, свиней, собак, обезьян и пушных зверей — через 48 ч; у птиц — через 30. 36 ч.

При учете внутрикожной реакции пальпируют место инъекции (при пальпебральном способе сравнивают веки левого и правого глаза). При обнаружении изменений кожи в месте введения аллергена у крупного рогатого скота, буйволов, зебу, верблюдов, оленей определяют размер утолщения с помощью кутиметра (рис. 3).

Рис. 3. Определение с помощью кутиметра размера утолщения кожной складки при положительном результате внутрикожной пробы на туберкулез: вверху — кожная складка до введения туберкулина; внизу-через 72 ч после введения туберкулина

Животных считают положительно реагирующими на туберкулин в следующих случаях: крупный рогатый скот, буйволов, зебу, верблюдов и оленей — при утолщении складки кожи на 3 мм и более (независимо от характера реакции); коз, овец, собак, обезьян, пушных зверей, кур и других птиц — при образовании припухлости в месте введения туберкулина; норок — при опухании века.

Офталъмопробу применяют при исследовании лошадей на туберкулез и can, крупного рогатого скота — на туберкулез и только одновременно с внутрикожной инъекцией аллергена. Методом офтальмопробы животных исследуют двукратно с интервалом 5. 6 дней. 3. 5 капель аллергена наносят стерильной глазной пипеткой на конъюнктиву слегка оттянутого нижнего века или под третье веко.

Результаты первой офтальмопробы с маллеином учитывают через 3, 6, 9, 12 и 24ч, второй—через 3, 6, 9 и 12ч; первой офтальмопробы с туберкулином у лошадей и крупного рогатого скота — через 3, 6, 9, 12 и 24 ч, второй — через 3, 6, 9 и 12ч. При учете реакции осматривают конъюнктиву, открывая во всех случаях глаз животного.

По степени проявления реакцию на маллеин у лошадей подразделяют на положительную, сомнительную и отрицательную. Положительная реакция характеризуются гиперемией и отеком конъюнктивы, выделением из внутреннего угла глаза слизисто-гнойного или гнойного секрета, накапливающегося в конъюнктивальном мешке, а затем вытекающего в

Отрицательная реакция характеризуется слабым покраснением конъюнктивы, незначительным слезотечением или отсутствием каких-либо отклонений от нормы.

В качестве сомнительной реакции трактуют небольшое слезотечение или скопление гноя в углу глаза.

Положительная реакция на туберкулин у крупного рогатого скота и лошадей характеризуется выделением из внутреннего угла глаза слизисто-гнойного секрета, накапливающегося вначале в конъюнктивальном мешке, а затем вытекающего в виде шнура.

Для аллергической диагностики бруцеллеза у свиней применяют бруцеллин ВИЭВ. Аллерген вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины, ближе к основанию уха, в дозе 0,2 мл. На месте введения препарата образуется бугорок размером с горошину. При инъекции обязательно соблюдают правила асептики. Участок кожи перед уколом протирают ватой, смоченной 70%-м этиловым спиртом или 3%-м раствором борной кислоты. Реакцию на бруцеллин учитывают дважды — через 24 и 48 ч путем осмотра, а при неясно выраженной реакции — пальпацией места инъекции. При обнаружении припухлости на месте введения препарата реакцию оценивают как положительную.

Организация массовых аллергических исследований. Прежде чем приступать к массовым аллергическим исследованиям, необходимо продумать способы фиксации животных, обеспечивающие, с одной стороны, безопасность людей и животных в процессе работы, а с другой — точное соблюдение места инъекции и дозы аллергена, что очень важно для правильного учета аллергических реакций. Для этой цели подготавливают различные приспособления и инструменты, а также приглашают вспомогательный персонал, который предварительно инструктируют.

Чтобы массовое аллергическое исследование не стало фактором распространения болезни, тщательно готовят инструментарий: стерильные шприцы и иглы для туберкулинизации, глазные пипетки в необходимом количестве, дезраствор для обработки поля инъекции и использованных игл, ножницы для выстрига-ния шерсти, кутиметры, безыгольные инъекторы (предварительно проверенные на годность к работе и обработанные дезраствором).

Накануне аллергического исследования осматривают поголовье, обращая внимание на состояние кожи (конъюнктивы): на месте инъекции кожа должна быть без ран, язв, ссадин, узлов, утолщений, отеков и пр. Обязательно оценивают качество аллергического препарата (наличие наставления, этикетки, внешний вид, срок годности).

Очень важно правильно обрабатывать поле (при туберкулинизации используют только спирт-ректификат) и вводить препарат, а также точно соблюдать сроки и методы учета реакций.

После окончания аллергического исследования и учета реакций составляют акт с описью исследованных животных аналогично акту на проведение вакцинации.