Днк диагностика вируса папилломы

Молекулярно-биологическое исследование влагалищного отделяемого на вирус папилломы человека (Papilloma virus) может быть назначено при планировании беременности, бесплодии, выкидышах и патологиях вынашивания.

Проходить молекулярно-биологическое исследование отделяемого из уретры на вирус папилломы человека (Pailloma virus) рекомендуется раз в три года, начиная с 20–25-летнего возраста.

Молекулярно-биологическое исследование влагалищного отделяемого на вирус папилломы человека (Papilloma virus) требует правильной подготовки: за 2 суток до исследования нельзя вступать в половые контакты, проводить спринцевание, проводить антибактериальную терапию.

На результат исследования могут повлиять такие факторы, как прием лекарств, использование антисептиков, принятая накануне пища и даже стресс.

При выборе медцентра стоит обратить внимание на наличие собственной лаборатории — в таком случае, как правило, нет необходимости транспортировать биоматериал, а значит, результат приходит быстрее.

Вирус папилломы человека может быть причиной возникновения рака гениталий у женщин и плоскоклеточного рака у мужчин и женщин.

Существуют десятки видов вируса папилломы человека (ВПЧ). Часть из них не наносит никакого особенного вреда. Другие вызывают появление бородавок и папиллом на коже и слизистых. А самые опасные могут спровоцировать развитие онкологического заболевания, особенно у женщин. Именно поэтому ранняя и точная диагностика ВПЧ может спасти жизнь.

Что такое вирус папилломы человека (ВПЧ) и чем он опасен

Вирус может присутствовать в организме, но при этом никак не проявлять себя. Наша иммунная система способна долго сдерживать его. Но достаточно какого-либо сбоя в работе организма — тяжелого инфекционного заболевания, продолжительного стресса, воздействия алкоголя, никотина или наркотиков, — чтобы вирус активировался и прорвал защитный заслон.

Если врач обнаружит на вашем теле признаки деятельности вируса, он направит вас на обследование. Мало знать, что вирус как таковой присутствует в организме — гораздо важнее выяснить его тип, поскольку, как уже было сказано, ВПЧ может быть как относительно безвредным, так и смертельно опасным.

Анализ на вирус папилломы человека необходимо сделать и в том случае, если вы планируете беременность, а также при выявлении причин бесплодия, выкидышей и патологий вынашивания. Причем обследование должны пройти оба партнера — ВПЧ передается при незащищенных половых контактах очень легко, и если один из партнеров инфицирован, то и второй, наверняка, тоже.

Существует несколько методов лабораторной и инструментальной диагностики вируса папилломы человека. Они преследуют несколько целей: во-первых, выявить сам факт наличия вируса, во-вторых, узнать его разновидность, и в третьих — оценить нанесенный им ущерб, а также выяснить, не начался ли уже процесс перерождения безобидной кондиломы в злокачественную опухоль.

Кольпоскопическое исследование назначается женщинам для обнаружения кондилом, расположенных в области шейки матки. Исследование достаточно простое — при помощи специального микроскопа врач осматривает слизистые оболочки шейки матки и влагалища. Многократное (8–16-кратное) увеличение позволяет увидеть даже очень маленькие кондиломы. Результат обычно выдается на руки сразу после обследования.

Цитологическое исследование. Материалом для этого лабораторного исследования является мазок, который содержит клетки эпителия. Образцы клеток рассматриваются под микроскопом. Такое исследование позволяет заметить видоизмененные клетки, указывающие на вирусную инфекцию. Метод этот прост и дешев, но не очень точен — есть высокий риск ложноотрицательного результата. Результат анализа выдается через 5–7 дней и обозначается в бланке цифровым кодом. 1 — пораженных клеток нет, 2 — обнаружены клетки, измененные из-за воспалительных процессов, 3 — результат вызывает сомнения, необходимо дополнительное обследование, 4 или 5 — наличие пораженных клеток.

Гистологическое исследование обычно назначают в дополнение к цитологическому. Это лабораторный метод исследования биоптата, то есть маленького фрагмента тканей. Специалист рассматривает препарат в микроскоп и оценивает состояние пораженных клеток. Гистологическое исследование дает возможность определить характер новообразования и отличить кондилому от опухоли. Обычно результат можно получить на руки через 3 дня.

Как правило, после гистологического анализа назначают ПЦР-анализ.

ПЦР-диагностика — один из самых достоверных способов диагностики, который применяется для выявления многих бактерий и вирусов. При помощи ПЦР-диагностики можно выявить ДНК вируса даже в том случае, если количество возбудителя в крови крайне мало и он никак себя не проявляет. Точность метода приближается к 100%, однако на нее сильно влияет соблюдение техники проведения исследования. Поэтому ПЦР-анализ лучше проводить только в тех лабораториях, где строго следят за соблюдением всех стандартов. Материалом для исследования чаще всего становится мазок, но иногда исследуют околоплодные воды, мочу или кровь. Результаты исследования будут готовы через 1–2 дня, в некоторых случаях их можно получить даже в день обращения, поскольку само исследование как таковое занимает всего 4–5 часов.

ПЦР позволяет очень точно определить количество вируса в биоматериале. Конечная цифра обозначает количество геномных эквивалентов на 100 тысяч клеток. Если вирус вообще не обнаружен, то в бланке это будет указано. Если же вирус присутствует, в результатах обозначат его концентрацию.

• Lg 5 — высокая вирусная нагрузка.

Если любое из этих исследований даст положительный результат, врач, скорее всего, направит вас на повторный анализ. При современных методах лабораторных исследований риск ошибки низкий, однако ненулевой. Чаще всего ложноположительный результат бывает следствием загрязнения биоматериала и нарушения техники его забора, неправильно выбранного времени для исследования (например, вы прошли лечение и вирус был уничтожен, однако его следы в биоматериале еще можно обнаружить) или несоблюдения пациентом правил подготовки к анализу.

У пациентов вызывает много вопросов неоднозначная ситуация, при которой папилломы есть, тем не менее анализы не выявляют самого вируса. Так бывает, если в какой-то момент в прошлом вирус был активным и привел к формированию кондилом и папиллом, однако впоследствии иммунная система окрепла и подавила его деятельность. Но папилломы не могут рассосаться сами собой. В таком случае наилучшее решение — просто удалить папилломы и не забывать регулярно проходить обследование.

Основной биоматериал для проведения анализа на вирус папилломы человека — клетки эпителия, полученные методом мазка из уретры у мужчин и из цервикального канала — у женщин. Технически для проведения ПЦР-анализа возможно исследование крови, выделений из влагалища и уретры, околоплодных вод и мочи, однако на практике эти типы биоматериала практически не используются.

Для проведения гистологического исследования необходим биоптат, маленький образец тканей из пораженного участка, который отщипывают специальным прибором.

Мазок берут при помощи миниатюрной мягкой щетки-ершика, напоминающей щеточку от туши для глаз. Раньше для этой цели использовалась так называемая ложка Фолькмана — крошечная ложка на очень длинном тонком черешке, однако сегодня данный инструмент почти никто не использует.

Щеточку осторожно вводят в канал и вынимают вращательным движением. На ворсинках остаются клетки эпителия. После этого щеточку помещают в специальную стерильную емкость и отправляют на исследование.

Для того чтобы результат анализа был точным, к забору мазка нужно подготовиться. За 2 суток для проведения исследования нельзя вступать в половые контакты, пользоваться антибактериальным мылом для интимной гигиены, проводить спринцевание. Если мазок берется из уретры, забор биоматериала производится до мочеиспускания. Перед забором мазка желательно принять душ без моющих средств.

На результат могут повлиять такие факторы, как прием антибиотиков, пробиотиков и местных антисептиков. Если за последние два месяца вы принимали какие-либо препараты, обязательно предупредите врача об этом.

Забор биоптата из шейки матки — дело гораздо более серьезное. Как и при заборе мазка, за 2 дня до биопсии нельзя вступать в половые контакты, спринцеваться, пользоваться любыми местными антибактериальными средствами и тампонами. После биопсии как минимум 2–3 недели нельзя вступать в половые контакты, при кровотечении разрешено пользоваться только прокладками, но не тампонами. Запрещены существенные физические нагрузки, перегрев, купание в бассейне или открытом водоеме, любые препараты, разжижающие кровь (в том числе обычный аспирин) и любые вагинальные средства — гели, спреи, свечи и т.п.

Все описанные выше диагностические методы широко распространены, и сдать анализ на папилломавирусную инфекцию у женщин и мужчин можно практически в любой коммерческой или муниципальной лаборатории.

Многие люди предпочитают заплатить, чтобы избежать общения с государственными медучреждениями — и это их право. Впрочем, следует сказать, что, несмотря на явный недостаток комфорта и неудобство для пациентов, муниципальные поликлиники и диагностические центры в крупных городах прекрасно оснащены, и врачи, работающие там — специалисты высочайшего класса. Что, увы, не отменяет очередей, бюрократии и неудобного графика работы.

Если вы предпочитаете сдать анализ на вирус папилломы человека в частном медцентре, выбирайте крупное и известное учреждение, имеющее собственную лабораторию — это гарантия точности и соблюдения всех правил забора и обработки биоматериала. И, кроме того, в серьезных диагностических центрах результат можно получить быстрее, чем в маленьких компаниях. Небольшие центры часто отдают материал на исследование в сторонние лаборатории, с которыми сотрудничают на условиях аутсорса, а это заметно замедляет получение результата.

Стоимость исследования зависит и от уровня медицинского центра, и от его расположения. Мы приведем лишь средние для Москвы цены на анализы на вирус папилломы человека.

Кольпоскопия обойдется приблизительно в 700–1500 рублей. Цитологическое исследование стоит около 1100–2500 рублей, к этой сумме нужно прибавить стоимость забора мазка — 300–600 рублей.

Гистологическое исследование стоит 2000–3000 рублей, а забор биоптата — около 400 рублей.

Стоимость ПЦР-анализа на вирус папилломы человека с определением типа в московских лабораториях составляет 700–1900 рублей.

Сдавать анализ на вирус папилломы человека нужно регулярно, начиная с 20–25-летнего возраста. Особенно это касается женщин — не выявленный вовремя ВПЧ может привести к проблемам с зачатием, бесплодию, невынашиванию, дисплазии шейки матки и появлению злокачественных новообразований. Проходить обследование нужно раз в три года. Если вы входите в группу риска — то есть курите или употребляете алкоголь в больших количествах, часто меняете половых партнеров и болеете инфекционными заболеваниями — обследование должно проводиться раз в год.

Общие сведения

Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:

• наличие ВПЧ;
• штаммы, которыми инфицирован больной;
• количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом.
ВПЧ распространяется следующими путями:

• при незащищенных половых контактах;
• при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
• контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
• во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

1. Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
2. Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
3. Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
4. Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

• собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
• нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
• реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения.

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику.

Забор биоматериала

Расшифровка анализа ПЦР

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

• Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
• Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
• Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

Раку шейки матки на протяжении нескольких лет предшествуют предраковые поражения, которые именуются CIN-интраэпителиальными цервикальными неоплазиями трех степеней. СIN I не является предраком и имеет высокую степень регрессии, однако при наличии вируса ВПЧ CIN с высокой вероятностью переходит в CIN II и CIN III, истинные предраковые поражения.

Существует широкий спектр методов диагностики рака шейки матки и предраковых поражений:

• клинические;
• цитологические (Pap-test);
• расширенная кольпоскопия;
• определение ДНК ВПЧ с помощью ПЦР в режиме реального времени;
• определение вирусной нагрузки ВПЧ с помощью Digene-тест;
• жидкостная цитология;
• морфологическое исследование;
• онкомаркёры: определение онкобелков p16, ki67, mcm2, mcm7, Hsp27 и др;
• сканирование шейки матки в режиме реального времени (TruScreen).

Тестирование на ДНК ВПЧ относится к молекулярно-биологическим методам, используется в дополнении к цервикальному скринингу у женщин, начиная с 30-летнего возраста, а также в качестве сортировочного теста при неясных результатах цитологических исследований.

Молекулярно-биологические методы предоставляют информацию о развитии ВПЧ-инфекции, но не позволяют судить о наличии заболевания, поскольку факт инфицирования ВПЧ не всегда сопряжен с заболеванием. Два основных метода диагностики ДНК ВПЧ — полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени и метод гибридного захвата (Digine-тест). Оба метода практически не отличаются по чувствительности и специфичности, однако, сертифицирован и одобрен FDA только Digene-тест.

Технология Digene-теста основана на гибридном захвате и заключается в уникальном способе связывания вирусной ДНК с РНК-зондом, захвате полученного гибрида моноклональными антителами и хемилюминисцентной детекции образуемых комплексов.

По сути это качественный тест, который применяется для профилактического скрининга для ранней диагностики патологии шейки матки. Тест идентифицует 13 генотипов высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68) и 5 генотипов низкого риска (6, 11, 42, 43, 44).

Тест одобрен Федеральной службой РФ по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (ФСНСЗСР). Digene-тест выявляет клинически значимый уровень инфицирования вирусом папилломы человека, который приводит к развитию неоплазии шейки матки. Положительный результат теста выдается в единицах Digine. Отрицательный тест практически исключает CIN II и CIN III.

Обнаружение ДНК ВПЧ в качественном формате

Количественное определение вируса ВПЧ

Количественный анализ ДНК ВПЧ наиболее чувствителен на ранних этапах папилломавирусной инфекции, когда отсутствуют другие признаки инфицирования. Например, цитологические, клинические. Метод количественного определения используется в качестве скрининга, особенно в рамках национальных программ контроля рака шейки матки, а также для оценки эффективности терапии.

Количественные ПЦР-методы направлены на максимальную чувствительность выявления вирусной ДНК, однако, не всегда существуют прямые клинические корреляции.

Одним из критериев клинически значимой инфекции, которая с высокой степенью вероятности способна развиться в неоплазию, рассматривается вирусная нагрузка. Вирусная нагрузка 3 lg на 105 клеток является клинически малозначимой, поскольку сопровождается минимальным риском дисплазии и почти в 100% случаев заканчивается спонтанной регрессией. Вирусная нагрузка больше 5 lg на 105 клеток считается повышенной и сопряжена с высоким риском развития дисплазии. Снижение вирусной нагрузки на 1 lg за 6 месяцев говорит о транзиторной инфекции.

Прогностическая ценность вирусной нагрузки на сегодняшний день однозначно не определена.

Генотипирование вируса методом ПЦР позволяет определить тип вируса ВПЧ и его онкогенность. Этот метод подходит для выявления персистенции ВПЧ и позволяет отличить случаи реинфекции. О реинфицировании говорит изменение спектра генотипов, о персистентной инфекции — сохранение генотипа вируса через год после первого тестирования.

При инфицировании несколькими генотипами ВПЧ одновременно, прогноз течения заболевания менее благоприятный, а риск персистенции и риск развития РШМ по сравнению с инфицированием одним типом более высокий.

Выявление ВПЧ высокого риска свидетельствует о наличие папилломавирусной инфекции. ВПЧ высококанцерогенного риска имеют различный онкогенный потенциал. На долю самых опасных, 16 и 18, приходится около 70% всех случаев цервикального рака. Генотипирование на ВПЧ 16 и 18 позволяет выделить группу женщин, которые имеют повышенный риск развития цервикального рака.

Рекомендации ВОЗ по профилактике рака шейки матки

Методы:

• основной — цитологический;
• дополнительный — ДНК тесты.

1. Наиболее широкий охват женщин.
2. Одноразовый скрининг женщин, 35–40 лет.
3. Идеальный алгоритм скрининга: 25–65 лет сначала 2 года подряд, при отрицательных результатах каждые 3 года.
4. Использование ВПЧ-тестирования позволит увеличить промежутки между скринингами до 5 лет.
5. Использование ВПЧ-тестирования совместно с цитологическим методом: одновременно В качестве первичного метода ВПЧ-тестирование. В качестве вторичного метода — цитология.

Преимущества использования ВПЧ-тестирования

• ВПЧ-тестировние лучше использовать вместе с цитологическими методами диагностики, так как ВПЧ-тестирование обладает значительно более высокой отрицательной предсказательной ценностью, чем цитология.
• Анализ ДНК ВПЧ дает более интерпретируемый результат.
• В меньшей степени зависит от человеческого фактора.
• Проба для ВПЧ-теста пригодна для анализа дополнительных молекулярных маркёров.

Диагностика ВПЧ — это методы определения вируса в организме. Некоторые способы могут определить наличие папилломавируса в клетках, другие определить концентрацию и тип: высокого, низкого канцерогенного риска. Это позволяет судить об опасности патологии и необходимости лечения.

Механизм заражения ВПЧ

Известно более 170 типов ВПЧ. Некоторые вызывают доброкачественный папилломатоз кожи, другие ведут к развитию рака. Доказано, что вирус провоцирует рак шейки матки. Hpv не имеет отношения к внутрипротоковым папилломам молочных желез. Обследование на ВПЧ начинают, не дожидаясь развернутой клиники.

Механизм передачи вируса обусловлен контактом с носителем. Условие заражения – попадание на кожу и слизистую оболочку частиц ВПЧ в слущенных элементах эпидермиса.

Стадии развития ВПЧ:

1. Латентная: вирус ограничен базальным эпителием, проявлений нет.
2. Субклиническая: ткани модифицируются.
3. Клиническая: трансформируется морфологическое строение эпителиальных клеток, формируются бородавки, папилломы, кондиломы.

Активируется болезнь в периоды падения иммунитета: при затянувшейся инфекционной болезни, беременности, климаксе, патологии внутренних органов и систем. Диагностика в таких случаях эффективнее.

Методы диагностики ВПЧ

Как правило, больной обращается к врачу с целью удалить наросты на теле, а не для диагностики вируса. Образования портят внешний вид, доставляют психологический дискомфорт. Кондиломы на половых органах повреждаются при сношениях, вызывая зуд, боль, делая невозможной полноценную интимную жизнь. Некоторые штаммы несут высокий риск малигнизации образований (вкр), по этой причине диагностика проводится как можно раньше. Терапией должен заниматься венеролог. Лечение осуществляют гинекологи, косметологи, урологи, лор-врачи при папилломах в горле, во рту.

При осмотре кожи и слизистых выявление ВПЧ возможно только на стадии клинических проявлений. Первичная задача врача — дифференциация вирусных элементов от других болезней эпидермиса. Классический случай остроконечных кондилом не требует дифференциальной диагностики. Это не исключает проведения дополнительных методов обследования: необходима информация о типе вируса, его онкогенности. Бородавки требуется отличать от туберкулеза кожи, красного лишая; шипицы – от мозолей, потертостей, сифилисных элементов; нитевидные выросты – от родинки, фибромы на ножке. Вторая задача – распознать вероятную злокачественность образования. Может потребоваться дерматоскопия и другие специфические методы диагностики, консультация онколога.

Вирус папилломы, попадая в клетку кожи, активно делится. Начинается бессимптомный период заболевания. На этой стадии полимеразная цепная реакция уже может показать наличие вируса в организме. Метод базируется на установлении участков ДНК, специфичных для hpv, в образцах биоматериала — диагностика соскоба из уретры.

Расшифровка позитивных результатов — содержание генома вируса на 100 клеток:

• Lg менее 3 означает, что вирус найден в малой концентрации;
• Lg 3–5 показывает клинически значимое присутствие ВПЧ;
• Lg более 5 — высокое содержание ВПЧ.

• подтверждение присутствия ВПЧ;
• определение его типа;
• подсчет количества вируса.

Дайджин-тест — метод гибридного захвата. Выявляет специфические элементы ДНК вируса папилломы человека. Позволяет выявить генотипы ВПЧ по степени канцерогенности. Тест отличает высочайшая клиническая чувствительность, достоверно определяющая уровень инфицирования папилломавирусом, вероятность рака в будущем. Обследуются женщины старше 30 лет 1 раз в 3 года.

Алгоритм действий при положительном результате анализа:

• у женщин до тридцати лет — повторить тест спустя 9 месяцев для исключения транзиторного характера болезни;
• у пациенток старше тридцати лет — провести цитологическое исследование. В случае подтверждения пройти лечение.

• прогностическая ценность до 99%;
• объективная оценка результатов проводимой терапии;
• чувствительность более 95%;
• специфичность равнозначна цитологическому исследованию;
• доступность проведения;
• отсутствие долговременной сложной подготовки;
• образцы (мазок, соскоб) используются и для проведения цитологиии.

Выявить ВПЧ можно путем проведения пап-теста. Это часто используемое в гинекологии исследование соскоба с маточной шейки. Цель – обнаружить предраковые и раковые изменения.

Материал подвергается цитологической диагностике на присутствие признаков:

• атипии;
• дисплазии;
• злокачественных клеток.

Оценка стадий анормальных трансформаций клеток ВПЧ:

1. Нормальная цитологическая картина.
2. Начальные воспалительные изменения клеток, вариант нормы, но необходимо дополнительное исследование.
3. Есть клетки с аномальной структурой ядер, проводится повторный тест с гистологией материала.
4. Выявление клеток с порочными цитоплазмой, хромосомой и ядром, проводится дополнительное обследование.
5. Значительное количество злокачественных клеток.

Обнаружить ВПЧ можно при помощи ИФА-анализа. Он указывает на наличие в крови специфических веществ, которые производятся в ответ на активность инфекции. Первый этап инфицирования определяется по присутствию глобулинов класса М. Затем фиксируются ферменты класса G. Они указывают на хронизацию болезни. Метод диагностики позволяет отличить первичное заражение от рецидива. Количественно и качественно исследование проводится в лаборатории. Из минусов – высокая цена, невозможность определить тип ВПЧ, только антитела к нему.

Основан на методе ПЦР с расшифровкой итогов в реальном времени. Разносторонне оцениваются и сравниваются конкретные представители нормо- и условно-патогенной флоры с общим количеством микроорганизмов.

Какой метод выявления ВПЧ наиболее эффективен

Если нет кожных проявлений и есть подозрение на контакт с больным, обследование можно начать с качественного ИФА-анализа, который покажет, встречался ли организм с вирусом. С этой же целью проводят ПЦР качественный. Если анализ покажет присутствие ВПЧ или при наличии кожных проявлений, переходят к количественной ПЦР-диагностике, чтобы определить штамм, степень канцерогенного риска. Это доступное универсальное обследование, которое может применяться в качестве скрининга.

При выявлении онкогенных штаммов, отвечающих за развитие рака шейки матки, ануса, целесообразно перейти к исследованию клеток с помощью пап-теста. Диагностика позволяет быстро и относительно просто получить информацию о стадии атипии, принять срочные меры. Применяется при диспансеризации. Согласно медицинским стандартам, пап-тест проводится совместно с Digene. Последний подтверждает или опровергает диагноз при неопределенных результатах пап-исследования. Эффективными анализами признаются полимеразно-цепная реакция и дайджин.

Что влияет на достоверность

На достоверность показателей диагностики влияют два фактора: подготовленность пациента, качество проведения процедуры.

Как подготовиться к ПЦР:

• исключить половую жизнь на 2 дня;
• не применять антибактериальные средства и спринцевание накануне;
• не мочиться полтора часа мужчинам до забора материала;
• не пить антибиотики, пробиотики за 48 часов или предупредить врача о факте приема;
• не сдавать во время менструации, следует дождаться окончания кровотечения.

Пап-тест предполагает воздержание от применения тампонов с лекарствами, влагалищных свечей, спринцеваний, половых сношений за 2 дня. Исследование на ВПЧ не проводят во время критических дней, обострения хронических патологий, инфекций. С невыполнением этих требований связано до 30% ложноотрицательных результатов.

Другие факторы, влияющие на достоверность всех тестов на ВПЧ:

• неправильный забор материала;
• неверная транспортировка, хранение материала;
• недостаточная технически-материальная база лаборатории;
• несвоевременность исследования;
• невысокий уровень квалификации персонала, осуществляющего диагностику.

Через сколько времени будут готовы результаты анализа

Название анализа	Исследуемый материал	Срок готовности после сдачи
ПЦР	Соскоб урогенитальный	3 рабочих дня
Digene HPV Test	Эпителий	9 суток
Тест по Папаниколау	Соскоб из влагалища	4 дня
ИФА	Кровь и другие биологические жидкости	1-2 дня
Фемофлор	Мазок, соскоб урогенитальный	5 суток

Вирус папилломы человека определить можно массой способов. Главное — вовремя обращаться за диагностикой и лечением, не допуская развития последствий, угрожающих жизни больного. Проходить анализы на наличие ВПЧ в организме необходимо регулярно, игнорирование проблемы недопустимо.