Тест системы реагенты гепатит

Иммуносорбент – смесь синтетических и рекомбинантных HCV-антигенов, сорбированных в лунках планшета для ИФА 96-луночные разборные или цельные планшеты для ИФА из прозрачного бесцветного полистирола, сорбированные HCV-антигенами
Конъюгат (х51 концентрат) - моноклональные антитела мыши против IgG человека, меченные пероксидазой хрена Прозрачная жидкость сине-зелёного цвета
К+ - контрольный положительный образец инактивированный Прозрачная жидкость красного цвета
К- - контрольный отрицательный образец инактивированный Прозрачная жидкость жёлтого цвета
РИП - разбавитель исследуемых проб Прозрачная жидкость сине-фиолетового цвета
ФСР-Т (х25 концентрат) - фосфатно-солевой буферный раствор с твином-80 Прозрачная или опалесцирующая жидкость бесцветная или жёлтоватого цвета, допускается выпадение бесцветного кристаллического осадка
ЦБ – цитратный буферный раствор, содержащий Н2О2 Прозрачная бесцветная жидкость
ТМБ (х5 концентрат) – раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина в димексиде
Стоп-реагент – 1 М раствор кислоты серной
Набор №1 рассчитан на проведение 192 определений, набор №2 рассчитан на проведение 96 определений, включая контрольные.

Набор реагентов предназначен для выявления антител к вирусу гепатита С в сыворотке (плазме) крови человека и препаратах крови.
Принцип метода
В основе метода лежит принцип непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления антител класса IgG к антигенам вируса гепатита С.
При внесении исследуемых или контрольных образцов в лунки планшета, антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС), в случае их наличия в образце, связываются с антигенами, иммобилизованными на твердой фазе, образуя иммунный комплекс антиген-антитело. Не связавшиеся антитела удаляют промыванием лунок. Внесение пероксидазного конъюгата моноклональных антител к IgG человека приводит к образованию комплекса антиген-антитело-конъюгат, на поверхности лунок планшета. Избыток конъюгата удаляют промыванием. Для выявления образовавшегося комплекса в лунки добавляют бесцветный субстратный раствор, в состав которого входит водорода перекись и хромоген (ТМБ). В результате
ферментативной реакции из водорода перекиси выделяется кислород, который переводит хромоген в окрашенную форму. Ферментативную реакцию останавливают внесением раствора кислоты серной. Измеряют оптическую плотность (ОП), величина которой зависит от концентрации анти-ВГС в образце.

Подготовка реагентов для ИФА
Все компоненты перед использованием выдержать не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 °C. В случае выпадения кристаллов солей в ФСР-Т (х25 концентрат), прогреть его при температуре 37 °C до полного растворения осадка. Растворы готовить в зависимости от количества используемых стрипов иммуносорбента в соответствии с таблицей.
Рабочий раствор ФСР-Т хранить при температуре от 2 до 8 °C не более 3 сут. Рабочий раствор конъюгата и субстратный раствор готовить непосредственно перед применением. Не хранить. К+, К-, РИП и Стоп-реагент готовы к использованию.
После отбора необходимого количества оставшиеся концентраты реагентов и неиспользованные стрипы хранить плотно закрытыми в пакете в течение срока годности при температуре от 2 до 8 °C.

Подготовка к исследованию препаратов крови
Лиофилизированные препараты крови перед исследованием растворить в дистиллированной воде (если иное не указано в ФСП на препарат) и довести объем до номинального.
Все препараты иммуноглобулинов перед исследованием дополнительно развести рабочим раствором ФСР-Т до конечной концентрации белка:
- 10+1 мг/мл (для иммуноглобулинов внутривенного введения),
- 5+0,25 мг/мл (для иммуноглобулинов внутримышечного введения),
- 5+0,4 мг/мл (для иммуноглобулинов энтерального применения).
Растворенные препараты крови хранению не подлежат.

Проведение ИФА
Иммуносорбент перед использованием промыть 2 раза рабочим раствором ФСР-Т, заполняя лунки до краёв и удаляя промывающий раствор в ёмкость с дезинфицирующим раствором.
Во все лунки внести по 100 мкл РИП, добавить по 20 мкл контрольных или исследуемых образцов и перемешать пипетированием. При этом цвет раствора в лунках (за исключением К+) должен измениться с сине-фиолетового на сине-зеленый. При использовании 1 стрипа иммуносорбента контрольные образцы вносить каждый в 1 лунку. При использовании большего количества стрипов контрольные образцы внести не менее чем в 2 лунки каждый.
Планшет закрыть липкой лентой или крышкой и инкубировать при температуре 37 °C в течение 30-40 мин, затем промыть 5 раз как описано выше.
Во все лунки внести по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, планшет закрыть липкой лентой или крышкой и инкубировать при температуре 37 °C в течение 30-40 мин, затем промыть 5 раз как описано выше.
Во все лунки внести по 100 мкл субстратного раствора, выдержать в течение 10-15 мин при температуре от 18 до 25 °C в защищённом от света месте, затем добавить по 50 мкл стоп-реагента и не позднее чем через 5 мин учесть результаты ИФА.

Учет и интерпретация результатов

Провести измерение оптической плотности (ОП) раствора в лунках иммуносорбента с помощью анализатора иммуноферментного при двух длинах волн. Тест-фильтр – 450 нм, референс-фильтр – 620-680 нм. Допускается одноволновое измерение при 450 нм.
Результаты оценивать, если среднее значение ОП в лунках с К- (ОПср.К-) не превышает 0,150, в лунках с К+ - не менее 1,000.
Исследуемые образцы, ОП которых не выше критического значения ОПкрит., оценивать как отрицательные. Образцы, ОП которых выше ОПкрит., оценивать как положительные. Значение ОПкрит. вычислять по формуле:
ОПкрит. = ОПср.К- + 0,150

Входящие в набор реагентов контрольные образцы инактивированы. Однако исследуемая сыворотка и плазма крови людей, а также растворы, оборудование и материалы, находящиеся с ними в контакте представляют собой потенциально инфекционный материал, и обращаться с ним следует осторожно: при работе использовать резиновые перчатки; оборудование, находившееся в контакте с биологическими образцами и реагентами, дезинфицировать до и после работы спирта этилового раствором 70 %; все использованные материалы обеззараживать водорода перекиси раствором 6 % или хлорамина Б раствором 3 % в течение 2 ч, или автоклавированием при (2,0±0,1) кгс/см2 ((0,20±0,01)МПа), температуре (132±2) °C в течение 60 мин; при работе с растворами ТМБ и кислоты серной не использовать пипетки с металлическими частями и избегать попадания этих растворов на кожный покров. Загрязненные участки кожи и слизистые оболочки обильно промывать водой.

Экспресс-тест на гепатит С – иммунохимический метод выявления антител к вирусу. Принцип действия диагностической системы основан на цветных реакциях реагентов, нанесенных на тест-полоску. Если в исследуемом биоматериале – крови, слюне – присутствуют специфические иммуноглобулины, индикатор меняет цвет. Экспресс-тесты подходят для первичной диагностики гепатита С. Если результат положительный, проводят лабораторный скрининг, который включает ИФА и ПЦР.

Как работают быстрые тесты

Экспресс-анализ на гепатит С – укомплектованная тест-система, которая применяется для выявления антител к вирусу HCV. При заражении инфекцией в организме возникает иммунный ответ в виде синтеза специфических иммуноглобулинов классов IgG и IgM. Они начинают циркулировать в крови через 4-10 недель после попадания вируса в кровь.

Индикаторные полосы, панели и кассеты применяются для иммунохимического анализа. Его принцип действия основан на планарной хроматографии – методе разделения веществ в сорбенте, нанесенного на плоскую твердую подложку. Их адсорбция осуществляется за счет:

силы межмолекулярного взаимодействия (силы Ван-дер-Ваальса);
химического взаимодействия между всасывающим (адсорбентом) и всасывающимся (адсорбатом) веществами.

Если в исследуемом биоматериале присутствуют антитела к возбудителю гепатита С, тестовая полоска меняет цвет.

В быстрых тестах используются такие же реагенты, как и при проведении лабораторного иммуноферментного анализа (ИФА).

Экспресс-системы для диагностики гепатита отличаются высокой чувствительностью. При соблюдении рекомендаций по подготовке и проведению теста достоверность результатов достигает 97-99%.

Виды экспресс-тестов

Наборы для анализа на вирусный гепатит классифицируют по разным критериям:

Внешний вид. Диагностические системы выпускаются в виде тестовых полосок, панелей или кассет. Для обнаружения сразу нескольких болезней применяются комбинированные системы.
Исследуемый биоматериал. Чтобы выявить антитела к ВГС, используют биологические жидкости – кровь или слюну.

Наборы для диагностики гепатита С выпускаются разными производителями. Поэтому комплектация тест-систем может отличаться. В ее состав должны входить:

полоска, кассета или панель в герметичной упаковке;
растворный реагент;
скарификатор, пипетка или подушечка для забора десневой жидкости;
салфетка, пропитанная дезинфицирующим раствором;
инструкция по технике выполнения теста.

Тесты для выявления ВГС, ВИЧ, ВГВ и других патогенов следует покупать только в аптечных сетях.

Тест-системы для выявления гепатита С от разных производителей:

ИммуноХром-антиВГС-Экспресс – система для выявления IgG в плазме или цельной крови. Специфичность и достоверность теста достигает 99%. Упаковка стоит 250-260 рублей.
OraQuick – универсальный тест от компании OraSure Technologies. Выявляет антитела к вирусу гепатита и крови, и в слюне. Считывание результатов разрешено только через 15-20 минут после внесения реагента в биологическую жидкость. Стоимость теста на гепатит С составляет 1150-1200 рублей.
Профитест – тест-карточка от компании New Vision Solutions, которая прошла сертификацию по стандарту GMP и ISO 13485. Для выявления антител к ВГС используют цельную кровь или плазму. Позволяет получить результат в течение 10 минут. Цена одной упаковки составляет 130 рублей.
Креатив МП – ГЕПАТИТ С – одноэтапный тест для выявления возбудителя HCV-инфекции. Выявляет антитела не только в капиллярной крови, но и в плазме. Выпускается в виде бумажных полос с нанесенными частичками коллоидного золота, козлиными антителами к IgG и IgM, рекомбинантным антигеном HCV. Стоимость одной упаковки не превышает 20 рублей.
CITO TEST HCV – быстрый тест для диагностики гепатита С выпускается испанской компанией Certest Biotec. Производится в виде индикаторных полос, которые применяются для обнаружения HCV в сыворотке, плазме или цельной крови. Купить 1 упаковку теста из 3 полос можно на 280-300 рублей.

По статистике, у 45-60% ВИЧ-позитивных впоследствии обнаруживается гепатит. Поэтому инфекционисты рекомендуют использовать комбинированные тесты, выявляющие сразу несколько вирусных инфекций.

Что нужно для анализа

Тест для определения гепатита С прост в использовании. Для него потребуется только капля крови или слюна. Максимальная концентрация вируса достигается в крови, поэтому для первичной диагностики рекомендуется использовать соответствующие тесты.

Достоверность результатов теста зависит от правильности подготовки к исследованию:

за 1 час до забора крови или слюны запрещено употреблять пищу или питье;
перед процедурой нежелательно пользоваться гигиеническими средствами – зубной пастой, освежителем для ротовой полости;
за полчаса до сдачи крови отказываются от физической работы, избегают стрессов.

Причины ложноположительного или ложноотрицательного результата:

невыполнение условий подготовки к процедуре;

применение теста после истечения срока годности;

нарушение технологии забора биологической жидкости;

ранее или позднее внесение реагентов.

Категорически не рекомендуется выполнять тест на гепатит С в состоянии наркотического или алкогольного опьянения. В случае положительного результата рекомендуется повторить процедуру через 1-3 дня или обратиться к гепатологу.

Пошаговая инструкция

Тест для выявления антител к ВГС позволяет диагностировать гепатит С только спустя 8 недель после заражения. До этого времени иммунная система не успевает синтезировать достаточное количество иммуноглобулинов, которое можно выявить посредством иммунохимического метода.

Исследование рекомендуется выполнять в утренние часы натощак. Перед процедурой нужно убедиться в целостности упаковки тест-системы. За полчаса до исследования не рекомендуется употреблять даже воду.

Инструкция по проведению теста:

вымойте руки с мылом;
извлеките из упаковки кассету или индикаторную полосу;
приложите подушечку к десне на 3-5 секунд;
нанесите десневую жидкость на индикаторную панель;
капните реагент и подождите 10-15 минут;
оцените результат тестирования в соответствии с рекомендациями в инструкции.

В большинстве случаев 1 полоска на индикаторе указывают на отсутствие антител к возбудителю, а 2 – на их наличие. Отсутствие полосок свидетельствует о нарушении технологи выполнения экспресс-диагностики.

Исследование выполняют с утра натощак. Гепатологи советуют не курить и не употреблять кофе перед забором биоматериала. Выполняется процедура по такой схеме:

упаковку с тестом вскрывают;
дезинфицирующей салфеткой протирают будущее место прокола;
скарификатором делают прокол в пальце левой руки;
выступившую капиллярную кровь собирают пипеткой;
биологическую жидкость помещают в кассету или наносят на полоску;
добавляют несколько капель реагента;
по истечении 15-20 минут оценивают результаты.

Для исключения ложноотрицательных результатов рекомендуется выполнять тест дважды с периодичностью в 2-3 дня.

Кому нужно тестироваться

Гепатит С передается трансфузионным или инструментальным путем через кровь. У 2/3 пациентов он протекает в безжелтушной форме, что затрудняет своевременную диагностику. Поэтому быстрый тест на ВГС рекомендован людям, находящимся в группе риска:

медработникам, контактирующим с кровью;
инъекционным наркоманам;
детям, рожденным от больных матерей;
пациентам на гемодиализе.

Вероятность заражения гепатитом возрастает при частом переливании крови, инвазивных медицинских вмешательствах. Некачественная дезинфекция инструментов может стать причиной передачи HCV-инфекции в:

стоматологическом кабинете;
парикмахерской;
тату-салоне.

Людям, совместно проживающим с больными гепатитом С, следует проводить тест на ВГС не реже 1 раза в 2-3 месяца. Если по итогам тестирования антитела к вирусу обнаруживаются, запишитесь на прием к врачу.

Что делать, если результат положительный

Иногда положительный результат теста свидетельствует о нарушении техники забора биоматериала или несвоевременном внесении реагента. Поэтому гепатологи советуют выполнять экспресс-диагностику минимум 2 раза. Если и во второй раз результат позитивный, потребуется скрининг гепатита С, который включает:

иммуноферментный анализ;
полимеразную цепную реакцию.

Если в ходе ПЦР обнаруживаются РНК вируса, это свидетельствует о заражении. После сдачи дополнительных тестов назначают терапию медикаментами прямого антивирусного действия – Велпатасвиром, Софосбувиром, Даклатасвиром, Паритапревиром, Ледипасвиром. Продолжительность курса варьируется от 8 до 24 недель.

Преимущества и недостатки домашних тестов

Быстрый тест – удобный способ контроля состояния здоровья, исключающий необходимость посещения врача или лаборатории. Он обладает множеством преимуществ:

низкая стоимость;

высокая достоверность;

простота в применении;

быстрый результат;

анонимность.

Но у всех домашних тестов есть серьезный недостаток – невозможность выявления гепатита С во время серологического окна (когда прошло еще мало времени, и антитела пока не выработались). А у 5% пациентов с иммунодефицитными состояниями антитела к вирусу не возникают даже при выраженной симптоматике. Поэтому если тест дает негативный результат, но вы ощущаете ухудшение самочувствия, запишитесь на прием к врачу.

Описание

Регистрационное удостоверение № ФСР 2010/09794 от 30.12.10. г. ИФА -ВГС комплект №3

Комплект № 3 для подтверждения наличия антител к антигенам вируса гепатита С

Подтверждение наличия выявленных при скрининге антител классов G и M к отдельным антигенам ВГС в сыворотке (плазме) крови и препаратах крови человека, методом непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе.

Базовый вариант комплекта включает:

Иммуносорбент	рекомбинантные антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (core) и неструктурной (NS3, NS4, NS5) областями генома ВГС, сорбированные двумя группами – core-антиген и NS (NS₃+ NS₄ + NS₅) в лунках стрипов полистироловых планшетов с плоским дном для ИФА по 6 стрипов, по краю стрипов нанесена маркировка в виде полос: на стрипах с core-Ag – красного цвета, на стрипах с NS-Ag – синего цвета. Стрипы упакованы раздельно в пакеты из пленки полиэтиленовой.	core – 6 стр. NS – 6 стр.
Контрольный положительный образец (К + )	инактивированный; прозрачная или со слабой опалесценцией жидкость малинового цвета	1 фл. (0,5 мл)
Контрольный отрицательный образец (К – )	инактивированный; прозрачная или со слабой опалесценцией жидкость синего цвета	1 фл. (1,0 мл)
Конъюгат	антитела диагностические против IgG и IgM человека с пероксидазой хрена; прозрачная жидкость красного цвета	1 фл. (1,0 мл)
25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином [ФСБ-Т(х25)]	прозрачная или слегка опалесцирующая, бесцветная, пенящаяся жидкость; возможно выпадение осадка солей, растворяющегося при температуре 37 ºС в течение 30 мин	1 фл. (40 мл)
Раствор для разведения образцов (РРО)	опалесцирующая жидкость сине-фиолетового или красного цвета, допускается выпадение незначительного осадка	1 фл. (12 мл) 1фл. (6,0 мл)
Раствор для разведения конъюгата (РРК)	опалесцирующая жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком, допускается выпадение незначительного осадка	1 фл. (13 мл)
Цитратный буферный раствор с перекисью водорода (ЦБР)	прозрачная, бесцветная жидкость	1 фл. (13 мл)
Хромоген (ТМБ)	раствор тетраметилбензидина; прозрачная жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком или розового цвета	1 фл. (1,3 мл)
Стоп-реагент	прозрачная, бесцветная жидкость	1 фл. (12,5 мл)

Примечания. 1. Набор включает все реагенты, необходимые для постановки ИФА, кроме очищенной (дистиллированной или деионизированной) воды.

Набор может быть дополнительно укомплектован:

вспомогательными пластиковыми емкостями (4 шт.);

одноразовыми наконечниками для автоматических пипеток (16 шт.);

клейкой пленкой для планшетов (4 шт.).

Компоненты набора упакованы в коробку, в коробку вложена инструкция по применению.

По желанию потребителя базовая комплектация набора (число индивидуальных упаковок с реагентами и их объемы) может быть изменена.

Базовый вариант комплекта рассчитан на исследование 48 образцов, включая контрольные (на контрольные образцы используется 6 лунок – по 3 лунки на стрип).

Предусмотрена возможность проведения раздельных исследований с использованием необходимого количества стрипов:

Кол-во стрипов

одной группы/всего

1/2

2/4

3/6

4/8

5/10

6/12

Число исследуемых образцов

1-5

6-13

14-21

22-29

30-37

38-45

Основой тест-системы являются раздельно иммобилизованные на поверхности лунок антигены ВГС, соответствующие участкам белков, кодируемых структурной (core) и неструктурной (NS_3, NS₄,NS₅) областями генома ВГС.

Тест-система выявляет антитела к разным антигенам ВГС в сыворотке (плазме) крови человека вследствие их взаимодействия с антигенами, иммобилизованными на поверхности лунок планшета. Образующиеся комплексы антиген-антитело обнаруживаются с помощью конъюгата – антител против иммуноглобулинов человека, связанных с пероксидазой хрена.

Диагностическая специфичность и чувствительность 100 % при проверке на сыворотках стандартной панели ОСО 42-28-310-02П.

ИССЛЕДУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Образцы до исследования могут храниться при температуре от 2 до 8 о С до 7 сут.; более длительное хранение (до трех месяцев) – при температуре не выше минус 20 о С. Повторное замораживание образцов не допускается.

Образцы, содержащие частицы фибрина или иные видимые глазом примеси, перед исследованием осветлить центрифугированием (10-15 мин при 2500-3000 об/мин).

Для исследования образцов иммуноглобулинов человека исходные растворы развести ФСБ-Т в соотношении 1:10, лиофильно высушенные препараты крови предварительно восстановить согласно инструкции по их применению, затем развести ФСБ-Т в соотношении 1:10.

Для исключения ложноположительных результатов не рекомендуется анализировать сыворотки с микробным проростом, гемолизом, повышенным содержанием липидов.

Потенциальный риск применения набора – класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 6 июня 2012 г.).

С контрольными и исследуемыми образцами необходимо обращаться как с потенциально инфицированным материалом.

Стоп-реагент при попадании на незащищенную кожу и слизистые может вызывать химические ожоги. В случае попадания на кожу – немедленно промойте пораженный участок водой.

Оборудование, материалы и реагенты

Дозаторы пипеточные (пипетки полуавтоматические одно- и многоканальные переменного объема) для внесения реагентов в лунки планшета с погрешностью дозирования не более 5 % с наконечниками полипропиленовыми одноразовыми.

Ручные, или автоматические промыватели, или восьми- и двенадцатиканальные пипеточные дозаторы для промывания лунок планшета.

Спектрофотометр вертикального сканирования для измерения оптической плотности в лунках планшета при 450 нм и/или в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения в диапазоне 620-650 нм.

Центрифуга лабораторная на 2,5-3,0 тыс. об/мин, термостат на 37 о С, холодильник бытовой, фильтровальная бумага.

Вода очищенная (дистиллированная или деионизированная).

70 %-ный раствор спирта этилового или растворы иных дезинфектантов, разрешенных к применению СП 1.32322-08.

Все реагенты до начала анализа должны быть выдержаны не менее 30 мин при температуре от 18 до 25 о С. Иммуносорбент выдерживать в упакованном виде, для того чтобы избежать конденсации влаги внутри лунок.

2.1. Приготовление раствора для отмывки планшетов (ФСБ-Т)

При выпадении осадка солей в ФСБ-Т(х25) его необходимо прогреть перед разведением в термостате при 37ºС до полного растворения осадка.

ФСБ-Т(х25) развести водой очищенной в 25 раз, используя объемы концентрата и воды очищенной, указанные в табл. 1 для заданного числа стрипов

Кол-во стрипов	2	4	6	8	10	12
ФСБ-Т(х25), мл	7	13	20	27	33	40
Вода очищ., мл	до 175	до 325	до 500	до 675	до 825	до 1000

Раствор хранить при температуре от 2 до 8 о С не более 14 сут.

Раствор готовить за 10-20 мин до внесения в лунки планшета.

Конъюгат развести в РРК, используя объемы конъюгата и РРК, указанные в табл. 2 для заданного числа стрипов. Необходимый объем РРК перенести в одноразовую емкость и добавить конъюгат в указанном количестве, тщательно перемешать.

Кол-во стрипов	2	4	6	8	10	12
РРК, мл	2	4	6	8	10	12
Конъюгат, мкл

Объем конъюгата, вносимый в РРК; указывается для каждой серии тест-системы.

Стабильность рабочего разведения конъюгата при температуре от 18 до 25 о С не более 6 ч.

Готовить непосредственно перед использованием, избегая попадания прямых солнечных лучей.

ТМБ развести в ЦБР, используя объемы ТМБ и ЦБР, указанные в табл. 3 для заданного числа стрипов. Необходимый объем ЦБР перенести в одноразовую емкость и добавить ТМБ в указанном количестве, тщательно перемешать.

Кол-во стрипов	2	4	6	8	10	12
ЦБР, мл	2	4	6	8	10	12
ТМБ, мкл	200	400	600	800	1000	1200

Стабильность раствора хромогена при температуре от 18 до 25 о С не более 6 ч. в защищенном от света месте.

Примечание: Посуду и наконечники пипеток, контактировавшие с раствором хромогена, отмывать без применения синтетических моющих средств.

РРО перед использованием необходимо тщательно перемешать из-за возможного выпадения осадка. Иммуносорбент, К + , К – , стоп-реагент готовы к использованию.

После вскрытия упаковок неиспользованные реагенты допускается хранить в плотно закрытых упаковках при температуре от 2 до 8 о С до истечения срока годности.

Проведение ИФА

3.1. Извлечь из упаковки рамку планшета и необходимое число стрипов каждой группы. Неиспользованные стрипы допускается хранить в плотно закрытом пакете с влагопоглотителем при температуре от 2 до 8 о С до истечения срока годности.

Расположить стрипы в рамке, чередуя стрипы с core-антигеном и NS-антигеном в соответствии со схемой постановки.

core

К+

№6

№14

№22

№30

№38

К-

№7

№15

№23

№31

№39

К-

№8

№16

№24

№32

№40

№1

№9

№17

№25

№33

№41

№2

№10

№18

№26

№34

№42

№3

№11

№19

№27

№35

№43

№4

№12

№20

№28

№36

№44

№5

№13

№21

№29

№37

№45

3.2. В каждую лунку внести по 80 мкл (или 30 мкл) РРО.

3.3 В одну лунку (напр., А) стрипа с каждой группой антигенов внести 20 мкл (или 70 мкл) К + , в две лунки (напр., В и С) – по 20 мкл (или 70 мкл) К – , в остальные лунки – по 20 мкл (или 70 мкл) исследуемых образцов, , т.е. в соответствии с внесенным объемом РРО (п.1.3.2), затем тщательно перемешать пипетированием (не менее 3 раз) или на шейкере на малой скорости в течение 30 с (100об/мин), цвет РРО при этом должен измениться с сине-фиолетового на зеленый или с красного на желтый.

процедура 1 – 30 мин при 37 о С на шейкере (500 об/мин);

процедура 2 – 1 ч при 37 о С в термостате.

3.5. По окончании инкубации аспирировать содержимое лунок и промыть лунки планшета четыре раза, добавляя в каждую лунку не менее 400 мкл рабочего промывочного раствора. Время между заполнением и аспирацией (замачивание) должно быть не менее 30 сек.

Необходимо следить за полной аспирацией после каждого цикла отмывки (остаточный объем в лунках не должен превышать 10 мкл).

Полностью удалить влагу из лунок, перевернув планшет на сухую чистую фильтровальную бумагу.

Сохранность иммуносорбента между операциями 15 минут.

3.6. Перемешать рабочий раствор конъюгата и внести его по 100 мкл в каждую лунку. Планшет закрыть крышкой и выдержать в течение 30 мин в термостате при температуре 37 о С.

3.8. В каждую лунку внести по 100 мкл свежеприготовленного раствора хромогена, выдержать 30 мин при температуре от 18 до 25 о С в защищенном от света месте (планшет не закрывать) или в термостате при температуре 37 о С в течение 20 мин. (планшет закрыть чистой защитной пленкой).

3.9. В каждую лунку (в той же последовательности, в которой вносился раствор хромогена) внести по 100 мкл стоп-реагента и через 2-3 мин, но не позднее чем через 10 мин, учесть результаты.

Результаты ИФА учитывать при соблюдении следующих условий:

оптическая плотность в лунках с К + (ОП_К+) – не менее 0,5;

оптическая плотность в лунках с К – (ОП_К-) – не более 0,25.

В противном случае исследование повторить

Для каждой группы антигенов рассчитать критическое значение ОП (ОП_крит) по формуле:

где ОП_К-ср – значение ОП в лунках с К – соответствующего стрипа.

Результаты учитывать по каждой группе антигенов отдельно.

Образец учитывать как отрицательный (не содержащий антител к ВГС), если значение ОП в лунке с ним ниже ОП_Крит для каждой группы антигенов.

Образец учитывать как положительный (содержащий антитела к ВГС), если значение ОП в лунке с ним выше или равно ОП_крит по обоим группам антигенов или только по группе структурных антигенов (core) ВГС.

Для интерпретации результатов исследования сывороток можно использовать коэффициент позитивности (КП), который рассчитывается для каждого антигена по формуле:

Если КП больше 1, исследуемый образец расценивать как положительный. Результат анализа считать отрицательным при КП меньше 1 и неопределенным при КП≥1.

Срок годности набора – 1 год. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 о С в течение всего срока годности. Замораживание не допускается.

Набор транспортируют при температуре от 2 до 8 о С. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25 о С в течение 10 сут.

ИФА -ВГС комплект №3

Для учреждений здравоохранения.

ИФА -ВГС комплект №3

СВОДНАЯ ТАБЛИЦА ПРИГОТОВЛЕНИЯ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ РЕАГЕНТОВ

Кол-во стрипов	2	4	6	8	10	12
ФСБ-Т
ФСБ-Т(х25), мл	7	13	20	27	33	40
Вода очищ., мл	до 175	до 325	до 500	до 675	до 825	до 1000
Рабочий раствор конъюгата
РРК, мл	2	4	6	8	10	12
Конъюгат, мкл
Рабочий раствор хромогена
ЦБР, мл	2	4	6	8	10	12
ТМБ, мкл	200	400	600	800	1000	1200

Объем конъюгата, вносимый в РРК; указывается для каждой серии тест-системы.

Читайте также: