Вирус герпеса в культуре клеток
В последние годы в инфекционной патологии все большее значение приобретают герпес-вирусы (от греч. herpes — ползучий). Внимание, которое вирусологи и клиницисты проявляют в последние 25 лет к герпес-вирусным заболеваниям человека, связано
В последние годы в инфекционной патологии все большее значение приобретают герпес-вирусы (от греч. herpes — ползучий). Внимание, которое вирусологи и клиницисты проявляют в последние 25 лет к герпес-вирусным заболеваниям человека, связано с их значительной эпидемиологической ролью и социальной значимостью в современном мире. Неуклонный рост числа герпетических заболеваний у взрослых и детей обусловливает необходимость всестороннего изучения герпетической инфекции и разработки эффективных методов профилактики и лечения разнообразных форм этой инфекции. Среди вирусных инфекций герпес занимает одно из ведущих мест в силу повсеместного распространения вирусов, многообразия клинических проявлений, как правило, хронического течения, а также различных путей передачи вирусов.
Он входит в число наиболее распространенных и плохо контролируемых инфекций человека. Герпес-вирусы могут циркулировать в организме с нормальной иммунной системой бессимптомно, но у людей с иммуносупрессией вызывают тяжелые заболевания со смертельным исходом. По данным ВОЗ, смертность от герпетической инфекции среди вирусных заболеваний находится на втором месте (15,8%) после гепатита (35,8%).
Герпес-вирусы объединены в обширное семейство Herpesviridae и в настоящее время наиболее четко классифицированы. Семейство Herpesviridae включает в себя более 80 представителей, 8 из которых для человека наиболее патогенны (human herpes virus-HHV). Герпес-вирусы — филогенетически древнее семейство крупных ДНК-вирусов — подразделяются на 3 подсемейства в зависимости от типа клеток, в которых протекает инфекционный процесс, характера репродукции вируса, структуры генома, молекулярно-биологических и иммунологических особенностей: α, β и γ (табл. 1, по данным Н. Г. Перминова, И. В. Тимофеева и др., Государственный научный центр вирусологии и биотехнологий).
α-герпес-вирусы, включающие HSV-1, HSV-2 и VZV, характеризуются быстрой репликацией вируса и цитопатическим действием на культуры инфицированных клеток. Репродукция α-герпес-вирусов протекает в различных типах клеток, вирусы могут сохраняться в латентной форме, преимущественно в ганглиях.
β-герпес-вирусы видоспецифичны, поражают различные виды клеток, которые при этом увеличиваются в размерах (цитомегалия), могут вызывать иммуносупрессивные состояния. Инфекция может принимать генерализованную или латентную форму, в культуре клеток легко возникает персистентная инфекция. К этой группе относятся CMV, HHV-6, HHV-7.
γ-герпес-вирусы характеризуются тропностью к лимфоидным клеткам (Т- и В-лимфоцитам), в которых они длительно персистируют и которые могут трансформировать, вызывая лимфомы, саркомы. В эту группу входят вирус Эпштейна-Барр и HHV-8-герпес — вирус, ассоциированный с саркомой Капоши (KSHV). KSHV является наиболее близким по геномной организации Т-клеточно-тропному обезьяньему герпес-вирусу Саймири (HVS).
Герпес-вирусы ассоциированы с малигнизацией и способны (по крайней мере, EBV и HVS) трансформировать клетки in vitro. Все герпес-вирусы сходны по морфологическим признакам, размерам, типу нуклеиновой кислоты (двухцепочечная ДНК), икосадельтаэдрическому капсиду, сборка которого происходит в ядре инфицированной клетки, оболочке, типу репродукции, способности вызывать хроническую и латентную инфекцию у человека.
В эпидемиологическом плане наиболее интересны следующие сведения о герпес-вирусах: вирионы чрезвычайно термолабильны — инактивируются при температуре 50–52°С в течение 30 мин, при температуре 37,5°С — в течение 20 ч, устойчивы при температуре 70°С; хорошо переносят лиофилизацию, длительно сохраняются в тканях в 50-процентном растворе глицерина. На металлических поверхностях (монеты, дверные ручки, водопроводные краны) герпес-вирусы выживают в течение 2 ч, на пластике и дереве — до 3 ч, во влажных медицинских вате и марле — до их высыхания при комнатной температуре (до 6 ч).
Уникальными биологическими свойствами всех герпес-вирусов человека является тканевой тропизм, способность к персистенции и латенции в организме инфицированного человека. Персистенция представляет собой способность герпес-вирусов непрерывно или циклично размножаться (реплицироваться) в инфицированных клетках тропных тканей, что создает постоянную угрозу развития инфекционного процесса. Латенция герпес-вирусов — это пожизненное сохранение вирусов в морфологически и иммунохимически видоизмененной форме в нервных клетках регионарных (по отношению к месту внедрения герпес-вируса) ганглиев чувствительных нервов. Штаммы герпес-вирусов обладают неодинаковой способностью к персистенции и латенции и чувствительностью к противогерпетическим препаратам в связи с особенностями их ферментных систем. У каждого герпес-вируса свой темп персистенции и латенции. Среди изучаемых наиболее активны в этом отношении вирусы простого герпеса, наименее — вирус Эпштейна-Барр.
По данным многочисленных исследований, к 18 годам более 90% жителей городов инфицируются одним или несколькими штаммами по меньшей мере 7 клинически значимых герпес-вирусов (простого герпеса 1 и 2 типов, варицелла зостер, цитомегаловирусом, Эпштейна-Барр, герпеса человека 6 и 8 типов). В большинстве случаев первичное и повторное инфицирование происходит воздушно-капельным путем, при прямом контакте или через предметы обихода и гигиены (общие полотенца, носовые платки и т. п.). Доказаны также оральный, генитальный, орогенитальный, трансфузионный, трансплантационный и трансплацентарный пути передачи инфекции.
Герпес-вирусные инфекции широко распространены в мире и имеют тенденцию к неуклонному росту. Особенностью герпес-вирусной инфекции является возможность вовлечения в инфекционный процесс многих органов и систем, чем и обусловлено многообразие вызываемых герпес-вирусами заболеваний, варьирующих от простых кожно-слизистых до угрожающих жизни генерализованных инфекций. Важное свойство герпес-вирусов — это способность после первичного инфицирования в детском возрасте пожизненно персистировать в организме и реактивироваться под влиянием различных экзо- и эндогенных провоцирующих факторов.
Инфицирование человека указанными герпес-вирусами сопровождается клиническими симптомами соответствующего острого инфекционного заболевания в среднем не более чем у 50% людей, в основном у детей: внезапная эритема (вирус герпеса человека 6 типа), афтозный стоматит (вирусы простого герпеса 1 или 2 типов), ветряная оспа (вирус варицелла зостер), инфекционный мононуклеоз (вирус Эпштейна-Барр), мононуклеозоподобный синдром (цитомегаловирус). У остальных пациентов инфекция протекает бессимптомно, что особенно характерно для подростков и взрослых людей. Помимо биологических свойств штамма герпес-вируса, влияние на течение острых и рецидивирующих герпес-вирусных заболеваний оказывают индивидуальные (возрастные, половые, фило- и онкогенетические) особенности иммунного ответа инфицированного человека на многочисленные антигены вируса.
Часто, особенно при снижении иммунореактивности организма, герпес-вирусы выступают в качестве вирусов-оппортунистов, приводя к более тяжелому, с необычными клиническими проявлениями, течению основного заболевания. Вирусы простого герпеса 1 и 2 типов, а также ЦМВ входят в число возбудителей TORCH-инфекций. Они играют важную роль в нарушении репродуктивной функции человека, развитии серьезных заболеваний матери, плода, новорожденного и детей младшего возраста.
Вызываемые вирусами ВПГ, CMV, ВЭБ заболевания рассматриваются как СПИД-индикаторные в связи с их частым обнаружением при данной патологии. В 1988 г. они включены в расширенное определение случаев, подлежащих эпидемиологическому надзору по поводу СПИДа. Результаты исследований последних лет свидетельствуют о роли некоторых герпес-вирусов (ВГЧ-8, ЦМВ, ВЭБ и др.) в развитии ряда злокачественных новообразований: назофарингеальной карциномы, лимфомы Беркитта, В-клеточной лимфомы, рака груди, аденокарциномы кишечника и простаты, карциномы цервикального канала шейки матки, саркомы Капоши, нейробластомы и др.
Наибольшую угрозу для здоровья представляют герпетические нейроинфекции (летальность достигает 20%, а частота инвалидизации — 50%), офтальмогерпес (почти у половины больных приводит к развитию катаракты или глаукомы) и генитальный герпес.
Все методы индикации и идентификации вирусов основаны на следующих принципах:
- выявление вируса per se (электронная микроскопия);
- выявление и идентификация вирусов посредством взаимодействующих с ними клеток (накопление вирусов в чувствительных к ним клетках);
- выявление и идентификация вирусов с помощью антител (МФА, ИФА, РАЛ, ИБ, РН, РСК);
- выявление и идентификация нуклеиновых кислот (ПЦР, МГ).
Электронная микроскопия: быстрая диагностика позволяет обнаружить ГВ или их компоненты непосредственно в пробах, взятых от больного, и дать быстрый ответ через несколько часов. Возбудитель выявляют с помощью электронной микроскопии клинического материала при негативном контрастировании.
Серологические методы уступают по информативности и чувствительности другим способам лабораторной диагностики и не позволяют с достаточной степенью достоверности установить этиологию той или иной формы заболевания. Нарастание титров антител происходит
в поздние сроки (через несколько недель) после заражения или реактивации вируса, и в то же время оно может и не наблюдаться у иммунодефицитных лиц. Для установления 4-кратного нарастания титра антител к герпес-вирусной инфекции (показатель первичной инфекции) необходимо исследование парных сывороток. Серологические реакции (РСК, РН) обладают высокой специфичностью, но относительно низкой чувствительностью, а кроме того, сложны в постановке.
Широкое практическое применение получили иммунофлюоресцентный метод, ИФА, РАЛ, ИБ.
Наиболее точным методом диагностики герпес-вирусной инфекции является выделение вируса из различных клеточных культур.
Для обнаружения вируса герпеса используют молекулярно-биологические методы: полимеразную цепную реакцию и реакцию молекулярной гибридизации, которые позволяют выявить наличие вирусной нуклеиновой кислоты в исследуемом материале. ПЦР может считаться самой чувствительной и быстрой реакцией. Чувствительность метода дает возможность определить одну молекулу искомой ДНК в образцах, содержащих 10 клеток.
Лечение герпетической инфекции до настоящего времени остается сложной задачей. Хроническое течение процесса приводит к иммунной перестройке организма: развитию вторичной иммунной недостаточности, угнетению реакции клеточного иммунитета, снижению неспецифической защиты организма. Несмотря на разнообразие лекарственных препаратов, использующихся для лечения герпетической инфекции, лекарственных средств, обеспечивающих полное излечение от герпеса, не существует. Герпес-вирусная инфекция относится к трудно контролируемым заболеваниям. Это связано, в первую очередь, с разнообразием клинических поражений, развитием резистентности вируса к лекарственным средствам, наличием у герпес-вирусов молекулярной мимикрии. Поэтому для успешного лечения герпетической инфекции необходимо правильно подобрать противовирусный препарат, его дозу и длительность лечения, использовать комбинацию различных лекарств. В схемы терапии для повышения эффективности лечения необходимо также включать иммунобиологические препараты, способствующие коррекции иммунного статуса, а также патогенетические средства, облегчающие состояние пациента.
В настоящее время все антигерпетические средства подразделяются на 3 основные группы антивирусных препаратов (табл. 3).
Механизм действия химиопрепаратов (аномальных нуклеозидов: валтрекса, вектавира, фамвира, цимевена) связан с угнетением синтеза вирусной ДНК и репликации вирусов путем конкурентного ингибирования вирусной ДНК-полимеразы.
В препаратах-иммуномодуляторах (алпизарин, имунофан, ликопид, полиоксидоний) активно действующие вещества обладают иммуностимулирующими свойствами в отношении клеточного и гуморального иммунитетов, окислительно-восстановительных процессов, синтеза цитокинов.
Препараты-индукторы ИФН (амиксин, неовир, циклоферон) сочетают этиотропный и иммуномодулирующий эффекты действия. Препараты индуцируют образование эндогенных ИФН (α, β, γ) Т- и В-лимфоцитами, энтероцитами, гепатоцитами.
Особое место среди средств антигерпес-вирусной терапии занимает герпетическая вакцина для активации клеточного иммунитета, его иммунокоррекции в фазе ремиссии. Вакцинация преследует 2 цели: предупреждение первичной инфекции и возникновения состояния латентности, а также предупреждение или облегчение течения заболевания.
Однако, несмотря на наличие обширного списка антигерпетических препаратов, герпес остается до сих пор плохо контролируемой инфекцией. Это обусловлено и генотипическими особенностями возбудителя, и длительной персистенцией вируса в организме, и формированием штаммов, устойчивых к антивирусным препаратам. Максимальный клинический эффект может быть получен только при рациональной комплексной терапии лекарственных средств с различным механизмом действия.
Санкт-Петербургской группой ученых вирусологов и инфекционистов во главе с В. А. Исаковым предложена программа лечения и профилактики герпетической инфекции (табл. 4).
Преимущества комплексной терапии ГИ.
- Сочетанное применение противогерпетических химиопрепаратов и иммунобиологических средств обеспечивает синергидный эффект.
- Благодаря снижению дозы противовирусного ХПП уменьшается вероятность развития побочных эффектов, сокращается токсическое воздействие на организм больного.
- Снижается вероятность возникновения устойчивых штаммов герпес-вирусов к данному препарату.
- Достигается иммунокорригирующий эффект.
- Сокращается продолжительность острого периода болезни и сроков лечения.
Таким образом, терапия ГИ является сложной и многокомпонентной задачей.
По вопросам литературы обращайтесь в редакцию.
Т. К. Кускова, кандидат медицинских наук
Е. Г. Белова, кандидат медицинских наук
МГМСУ, Москва
Вирус герпеса размножается во многих различных тканевых культуральных системах, в монослоях эпителиальных клеток почек кролика, обезьяны, амниона человека, куриного эмбриона. Он также размножается в клетках Hela и фибробластах куриного эмбриона и человека. Могут быть использованы и культуры роговицы кролика. Бляшки развиваются в монослоях куриного эмбриона, амниона человека и клеток Hela.
Цитопатогенное действие может проявляться на 2-3 день, но в зависимости от дозы вирус может обнаруживаться и после заражения через 8 ч, когда отдельные клетки начинают округляться и появляются гигантские клетки, содержащие 100 ядрышек. В этот период можно видеть внутриядерные включения. Мы отмечаем три основных проявления ЦПД: пролиферацию и увеличение клеток, округление клеток без пролиферации и формирование гигантских клеток. Нами описан штамм вируса герпеса, который образовывал гигантские клетки.
В первичной культуре почки кролика ЦПД наступает после 12 ч заражения в 30-50% клеток монослоя и полностью через 2 дня.
В первичной эмбриональной культуре клеток куриного эмбриона вирус герпеса генитального происхождения образует бляшки. Визуально бляшки наблюдаются после 2-го дня и имеют размер от 2 до 3 мм. Для того чтобы они были лучше видны и подсчитаны, их можно покрасить нейтральным красным.
Считают, что самое раннее проявление вируса герпеса на клетку заключается в задержке митозов, которая наступает после заражения; через 6 ч наблюдается увеличение ДНК в ядрах. Фаза эклипса, в течение которой отсутствует инфекционность, длится около 12 часов, и вирус выделяется в среду через 15 часов.
Нами был использован МФА в клетках Hela, зараженных вирусом простого герпеса. Мы обнаружили флюоресцирующие образования различной локализации (большие и малые гранулы в ядре, грануляция и диффузная флюоресценция в цитоплазме или около ядерной мембраны). Специфический вирусный антиген обнаруживался МФА, если титр инфекционного вируса в клетках достигал 102'5 1О3'°ТСД5О/О, мл. Было изучено образование инфекционного вируса и вирусного антигена на протяжении 6-15 пассажей в клетках Hela, хронически инфицированных вирусом герпеса. Хроническая инфекция поддерживалась культивированием инфицированных клеток в среде, содержащей 40% человеческой сыворотки со специфическими антигенами. Методом флюоресцирующих антител доказано наличие внутриклеточного вируса и вирусного антигена в инфицированных клетках. Внеклеточный вирус в культуральной жидкости не обнаруживался.
В противоположность активной вирусной инфекции вирусный антиген обнаруживался в хронически инфицированных клетках даже при очень низких титрах внутриклеточного вируса.
P. Sandra и соавторы была показана различная адсорбционная способность клонированных штаммов вируса герпеса, размножающихся (ch+) и не размножающихся (ch ) в клетках куриного эмбриона (КЭ). При одинаковой множественности заражения (100 БОЕ) через 15 мин адсорбировалось 36% ch+ вируса и 50% ch , через 2ч - соответственно 67 и 90%.
Образование вирусных антигенов обоих вирусов было одинаковым в клетках почки кролика, однако в клетках КЭ ch+ вирус образовывал антигены в 8 раз больше. Различий в локализации антигенов, по данным иммунофлюоресценции, не обнаружено.
Многими авторами была изучена чувствительность клеток WI-38, первичных эмбриональных фибробластов, почки эмбриона человека, а также Нер-2 к вирусу герпеса. После однократного заражения культуры поддерживали в течение длительного срока. Через 3 недели только в клетках WI-38 наблюдался ЦПД. Чувствительность этих клеток к вирусу увеличивалась после их обработки диэтиламино-этилдекстраном. В инфицированных клетках обнаруживался комплементсвязывающий антиген.
Кроме того, заражали вирусом простого герпеса ретиналь-ные культуры новорожденных кроликов. Как показали исследования, этот вирус вызывает характерные ядерные изменения в ретинальных культурах и деструкцию нейронов, что может быть использовано при селекции клеточной чувствительности и характеристики биологической особенности вируса герпеса.
Некоторые штаммы вируса герпеса вызывают острую лити-ческую инфекцию культур ткани, а другие размножаются на тех же культурах ткани, формируя синцитий. С понижением окружающей температуры с 37°С до 33°С удается трансформировать острую герпетическую инфекцию в хронический процесс.
Культивирование вируса герпеса можно проводить также на куриных эмбрионах, заражая их в амниотическую полость, желточный мешок, на хорионаллантоисную оболочку или непосредственно в сам эмбрион.
При заражении на хорионаллантоисную оболочку можно наблюдать микроскопические изменения, представляющие собой очаги пролиферации с центральными некротическими участками.
Для куриных эмбрионов первые пассажи вируса герпеса чаще всего не вызывают специфической гибели, а последующие являются летальными для куриного зародыша через 3-5 дней после заражения.
Специфические внутриядерные вирусные включения можно обнаружить во всех органах инфицированных куриных эмбрионов, что считается патогномоничным для этой инфекции.
J. Parker и соавторы, А.Ф. Пухнер наблюдали, что штаммы вируса герпеса генитального происхождения, изолированные от больных с герпетическими поражениями гениталий, продуцировали на хорионаллантоисной оболочке развивающихся куриных эмбрионов большие атипичные некротические поражения. Штаммы вируса герпеса, изолированные ими от пациентов с герпетическими поражениями экстрагенитальной локализации, продуцировали через 24 ч на хорионаллантоисной оболочке куриных эмбрионов классические мелкие (1-2 мм) некротические участки поражения. Это может быть использовано для дифференциации штаммов вируса герпеса генитального и экстрагенитального происхождения, так как по морфологическим изменениям в культуре ткани и по ЦПД это сделать не удается .
После первичных цитологических находок в соскобах клеток, взятых у лиц с герпесом, вирус может быть изолирован в 43% случаев, при повторных цитологических находках - в 18% случаев, т.е. как в первые 10 дней после начальных цитологических изменений, так и после 20 дней заболевания герпесом.
W. Ashe и соавторы сообщили об изоляции вируса герпеса симплекс из слюнной железы людей.
У куриных эмбрионов, зараженных на хорионаллантоисную оболочку вирусом герпеса, вирусемия наблюдается в первые сутки после заражения и держится на высоком уровне вплоть до гибели куриного зародыша. Было показано, что при острой герпетической инфекции у куриных эмбрионов во время вирусе-мии вирус связан с эритроцитами с разной интенсивностью.
По данным P.M. Бикбулатова (1986), наибольшей цитомор-фологической чувствительностью к заражению ВПГ обладали из первичных культур ФЭЧ, ПЭЧ, из перевиваемых Vero, СОЦ.
Это может иметь определенное значение и для цитодиагностики ВПГ с использованием клеточных культур.
Им установлено, что ВПГ-инфекция клеточных культур сопровождается выраженными изменениями метаболизма клеток: активизацией окислительно-восстановительных митохондриаль-ных ферментов, увеличением энзимов белкового и углеводного обменов, выходом из клеток лизосомальных гидролитических ферментов и индукцией патологических митозов. Это позволяет думать, что с самых ранних этапов ВПГ-инфекции митохон-дриальный аппарат клетки активно реагирует на воздействие вируса и обеспечивает его энергией для проникновения и последующего биосинтеза.
В.Я. Кицаком (1984) приведено исследование этиологической и патогенетической роли ВПГ-2 в канцерогенезе. Показана трансформирующая активность вируса в культуре клеток, си-нергическое влияние персистентной герпетической инфекции на химический канцерогенез у мышей, усиление коканцероген-ного эффекта ВПГ-инфекции на химический бластогенез в условиях интоксикации организма животных, а также этиопатоге-нетическая связь герпеса гениталий с раком шейки матки человека. Им также установлена способность ВПГ-2 индуцировать трансформацию клеток хомячка, которая фенотипически проявляется в изменении совокупности функциональных морфологических свойств. Этот автор показал, что неопластическая трансформация клеток под влиянием ВПГ-2 является многоэтапным процессом и что молекулярно-генетический механизм индукции трансформации клеток связан с прямым онкогенным действием ВПГ-2.
Изоляция вируса герпеса производится на кроликах, мышах-сосунках, в культурах тканей и в куриных эмбрионах. Кроликов заражают интрацеребрально или в роговицу глаза. Мышей-сосунков заражают интрацеребральным путем, а куриные эмбрионы - в хорионаллантоисную оболочку. Наряду с этим производят инокуляцию вируса герпеса в культуры ткани, чувствительные к этой инфекции, включая ткань роговицы и клетки почки кролика, амнион человека или клетки Hela. Вирус герпеса вызывает в них цитопатические изменения - появление гигантских клеток с внутриядерными включениями. В противоположность этому вирусы герпеса Zoster и ветрянки не способны вызывать инфекционный процесс у белых мышей-сосунков, кроликов, на хорионаллантоисной оболочке куриного эмбриона и в клетках роговицы кролика.
Частота выделения вируса герпеса из гениталий больных зависит в определенной степени от использования различных методов изоляции вируса и колебалась, по нашим данным, от 70 до 95,4% случаев.
Для идентификации вируса герпеса применяется ряд серологических реакций. Наиболее широко используются реакции нейтрализации и реакция связывания комплемента (РСК). Кровь берут от пациентов в первые дни заболевания, дают свернуться и отделяют сыворотку. Повторно кровь для получения сыворотки берут через 2-3 нед, т.е. в период выздоровления. Если нельзя сразу исследовать сыворотку, то ее хранят в холодильнике при температуре -20°С.
Описание
Посев на культуре клеток (ВПГ, ЦМВ) — не только выявляет вирус, но и даёт информацию о его активности (агрессивности). Анализ результатов посева на фоне лечения, позволяет делать заключение об эффективности проводимой терапии.
Вирус простого герпеса (ВПГ), или герпес, бывает двух видов: вирус простого герпеса первого типа (ВПГ-1) и вирус простого герпеса второго типа (ВПГ-2). Обе формы вируса — высококонтагиозны.
Основной путь передачи герпеса: воздушно-капельный, контактный, половой, внутриутробный, гемотрансфузионный, при пересадке органов. Первичная герпевирусная инфекция и реактивация инфекции (в гораздо меньшей степени) в период беременности могут вызывать патологию беременности или внутриутробное инфицирование плода. Причиной внутриутробного инфицирования плода чаще бывает ВПГ-2, но не исключено заражение и ВПГ-1. Кроме того, роженицы могут передать вирус новорождённому при родах, что может вызвать неонатальный герпес — редкое заболевание с летальным исходом.
К типичным симптомам ВПГ-1 относят:
- высыпание на губах и слизистой оболочке рта группы скученных мелких пузырьков (везикул), наполненных прозрачным содержимым;
- воспалённость, отёчность кожи и слизистой в области высыпаний.
ВПГ-2 — относится к числу инфекций, передаваемых половым путем, которые могут вызвать генитальный герпес.
Распространяется, главным образом, половым путём при кожном контакте.
Вирус генитального герпеса Herpes simplex 2 типа поражает, преимущественно, покровные ткани (эпителий) шейки матки у женщин и полового члена у мужчин, вызывая боль, зуд, появление прозрачных пузырьков (везикул) на месте которых образуются эрозии/язвочки. Однако при оральных контактах возможно поражение покровной ткани губ и ротовой полости.
HSV и беременность
У беременных: вирус может проникнуть через плаценту в плод и вызвать у него врождённые дефекты. Герпес может вызвать также самопроизвольный аборт или преждевременные роды. Но особенно вероятна опасность заражения плода в процессе родов, при прохождении через шейку матки и влагалище при первичной или рецидивирующей генитальной инфекции у матери. Такое заражение на 50% повышает смертность новорождённых или развитие у них тяжёлых повреждений головного мозга или глаз. При этом определённый риск инфицирования плода существует даже в тех случаях, когда у матери ко времени родов отсутствуют какие-либо симптомы генитального герпеса. Ребёнок может заразиться и после рождения, если у матери или у отца имеются поражения, во рту, или получить вирус с материнским молоком.
Цитомегаловирус (или ЦМВ) — это разновидность из группы герпесвирусов (Herpesvirus), относящаяся к роду Cytomegalovirus подсемейства 3-herpesviridae. Встречается везде. Статистика частоты встречаемости очень вариативна — вероятно, из-за того, что у значительной массы носителей вируса заболевание протекает бессимптомно. Способов полного излечения от герпеса пока нет, т.е. заражённый человек остается носителем возбудителя на всю жизнь.
ЦМВ — это инфекция, сходная с герпесом или ветрянкой, только с гораздо более серьёзными и неожиданными последствиями — от повреждения внутренних органов до необратимых изменений ЦНС. Определить данное заболевание на ранних стадиях проблематично, его точный инкубационный период пока неизвестен. Проявления инфекции могут быть приняты за воспаление органов мочеполовой системы, обычные недомогания типа ОРВИ (острая респираторная вирусная инфекция) и прочие обычные болезни. Весьма часто ЦМВ приводит к возникновению многочисленных воспалений сразу в нескольких внутренних органах.
При беременности вирус не всегда передаётся от больной матери к ребёнку. Но если инфицирование ЦМВ произошло в период беременности или болезнь усилилась, то вероятность передачи заболевания плоду значительно возрастает.
Цитомегаловирусная инфекция передаётся половым путем, через слюну, материнское молоко, при беременности (от матери к ребёнку), через общую мочалку, полотенце, посуду и т.д.
Наиболее часто цитомегаловирусная инфекция проявляется как острая респираторно-вирусная инфекция. От больных поступают жалобы на общее недомогание, насморк, быструю утомляемость. Происходит увеличение и воспаление слюнных желёз, сопровождающееся беловатым налётом на языке и дёснах, а так же обильным выделением слюны.
У женщин и мужчин поражение мочеполовой системы даёт симптомы хронического не специфического воспаления. В этом случае, если не обнаружена вирусная природа патологии, лечение заболевания при помощи антибиотиков будет малоэффективно.
Самые серьёзные и опасные осложнения цитомегаловируса — это патология беременности, плода и новорождённого. Если произошло инфицирование плода во время беременности, то риск развития этой патологии будет максимальным. Однако, не стоит забывать, что проблемы могут возникнуть так же у беременных при активации латентной ЦМВ-ифекции, когда вирус попадает в кровь, впоследствии заражая плод. Согласно статистике, ЦМВ является наиболее частой причиной не вынашивания беременности. Внутриутробная цитомегаловирусная инфекция является причиной поражений центральной нервной системы (тугоухость и отставание в умственном развитии). В 20–30% случаев заканчивается смертью ребёнка.
Преимущества посева на культуре клеток
Главным преимуществом посева на культуре клеток является высокая точность исследования в случае положительного результата. Кроме того, по культуре клеток можно определять, вирусом герпеса какого типа — первого, второго или ЦМВ, была вызвана инфекция. Если результат лабораторной диагностики на культуре клеток окажется у вас положительным, можете быть уверенным, что у вас вирус герпеса.
Основным недостатком посева на культуре клеток является высокий процент ложноотрицательных результатов. Поскольку для посева вирус должен находиться в активном состоянии, если герпетический пузырёк или язвочка маленького размера или уже начинает заживать, то для нормального исследования количества вируса может быть недостаточно. При проведении диагностики позднее, чем через 48 часов после появления симптомов, высока угроза ложноотрицательного результата. Посев вируса на культуре клеток бывает еще менее достоверным при диагностике во время рецидивов (положительные результаты получают лишь в 30% случаев повторных вспышек герпеса).
Подготовка
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется взятие крови не ранее чем через 4 часа после последнего приёма пищи. Кровь берется в пробирку с ЭДТА.
Сбор мочи
Накануне сдачи анализа не рекомендуется употреблять в пищу овощи и фрукты, которые могут изменить цвет мочи (свёкла, морковь, клюква и т.п.), принимать диуретики.
Перед сбором мочи необходимо провести тщательный гигиенический туалет внешних половых органов. Собирают строго утреннюю порцию мочи, выделенную сразу же после сна. Женщинам не рекомендуется сдавать анализ мочи во время менструации; во избежание попадания в мочу выделений из влагалища, рекомендуется ввести во влагалище тампон.
За сутки до сдачи исключить приём алкоголя и половой акт.
Материал собирается в стерильный пластиковый контейнер. Собирается средняя порция утренней мочи. При первом утреннем мочеиспускании небольшое количество мочи (первые 3–5 сек) выпустить в унитаз, а затем, не прерывая мочеиспускания, собрать среднюю порцию мочи в чистую ёмкость. Продолжить мочеиспускание в унитаз. Ёмкость закрыть, промаркировать.
Нужно постараться максимально сократить срок доставки материала в лабораторию. Длительное хранение приводит к размножению бактерий.
Доставить контейнер с мочой в медицинский офис необходимо как можно скорее с момента взятия биоматериала. Моча в стерильном пластиковом контейнере для посева стабильна не более 2 часов при температуре 18–20°С, не более 6 часов при температуре хранения 4–8°С.
Подготовка ко взятию слюны:
- желательно собирать утром;
- зубы не чистить, не есть как минимум 4 часа;
- слюна собирается в стерильный контейнер.
Мазок из урогенитального тракта женщины
Сдача мазка не допускается в дни менструации. За трое суток до взятия необходимо отказаться от применения вагинальных свечей, тампонов, спермицидов, за сутки исключить половые контакты. Нельзя спринцеваться накануне проведения обследования. После УЗИ-исследования с применением вагинального датчика, кольпоскопии, биопсии должно пройти не менее 48 часов.
Мазок из урогенитального тракта мужчины
За 1–2 суток до взятия мазка, необходимо исключить половые контакты. Нельзя мочиться в течение 1,5–2 часов до процедуры.
Читайте также: