Для бактериологического исследования на сибирскую язву берут
Бактериологическая диагностика сибирской язвы осуществляется микроскопическим исследованием, получением культур, заражением опытных животных и реакцией преципитации по Асколи.
Материалом для исследования обыкновенно елужит ухо или толстые мазки крови периферических сосудов трупа животного и, если произведено вскрытие, — кусочек селезенки.
У свиней исследуются лимфатические узлы области поражения (ретрофарингеальные, мезентериальные), селезенка и особенно инфаркты в ней.
При микроскопическом исследовании свежего материала для сибиреязвенных бацилл характерно:
1) расположение в виде коротких, иногда и длинных цепочек с вдавленными внутрь или резко обрубленными обращенными друг к другу концами у отдельных палочек;
2) положительная окраска по Граму и
3) наличие капсулы.
Для более ясной видимости капсулы мазки окрашивают по методу Романовского — Гимза, Ольта, Ребигера и др. Хорошие результаты получаются и при окраске фуксином Циля или синькой Леффлера в течение 2—3 мин. с последующим легким и быстрым смыванием краски водой, б последнем случае палочки окрашиваются в синий цвет, капсула — в розовокрасный.
Наличие перечисленных морфологических признаков при микроскопическом исследовании материала от трупа позволяет лаборатории предварительно диагносцировать сибирскую язву для немед ленного принятия соответствующих мер на месте согласно существующей инструкции.
Микроскопическое исследование разложившегося материала не дает ясной картины: наряду с характерными бациллами сибирской язвы видны как бы изъеденные, с закругленными концами палочки, без капсулы или только с обрывками ее.
Одновременно с микроскопическим исследованием производится посев патологического материала на агар в чашках Петри. Высевы из материала с признаками разложения производят после предварительного прогревания приготовленной в физиологическом растворе эмульсии в течение 30 мин. при 70°. Выросшие через 18—24 часа изолированно расположенные колонии изучают микроскопически при малом увеличении и из характерных для Вас. anthracis колоний (завитки волос) приготавливаются мазки и окрашиваются по Граму. Из этих же колоний производят отвивки на косой агар и бульон для получения чистых культур и, если представляется необходимым, приготавливают эмульсию в физиологическом растворе для последующего заражения лабораторных животных.
Для окончательного подтверждения диагноза производят подкожное введение мышам или морским свинкам материала (кровь, часть сосуда уха с кровью или частицами подкожной ткани, часть колонии), эмульгированного в физиологическом растворе. Привитые животные при наличии в материале Вас, anthracis Обычно погибают через 1—3 дня.
При вскрытии у лабораторных животных обнаруживают студенистый инфильтрат в ткани на месте прививки и увеличение селезенки. Обнаружение у павших животных типичных бацилл с капсулами и получение чистых культур из крови сердца, пульпы селезенки и инфильтрата окончательно подтверждают диагноз.
При получении отрицательных или неясных результатов выделения культуры и заражения опытных животных, особенно при исследовании сильно разложившегося материала, необходимо, для выяснения диагноза, проводить реакцию преципитации по Асколи.
С этой целью 1,0—2,0 измельченного материала заливают в пробирке или колбочке 10 мл физиологического раствора и прогревают в водяной бане 10—15 мин. при 100°. Полученный экстракт фильтруют до полной прозрачности и осторожно наслаивают на иммунную преципитирующую противосибиреязвенную сыворотку, налитую в маленькую уленгутовскую пробирку. Появление сразу же или не позднее 15 мин. мутного беловатого кольца на границе двух жидкостей при отсутствии подобной реакции в контроле свидетельствует о наличии сибиреязвенной инфекции.
При бактериологической диагностике возбудителя сибирской язвы необходима диференциация его от антраксоподобных непатогенных бацилл.
В отличие от антраксоподобных бацилл характерным для Вас. anthracis является отсутствие гемолиза при росте на кровяном агаре (15—25%)
39. ВОЗБУДИТЕЛЕМ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ЯВЛЯЕТСЯ
1) Corynebacterium diphtheriae
2) Bacillus anthracis
3) Klebsiella pneumoniae
4) Bacteroides fragilis
5) Pseudomonas aeruginosa
Правильный ответ 2
40. МОРФОЛОГИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) овоидные грамположительные палочки
2) мелкие грамотрицательные палочки
3) изогнутые грамотрицательные палочки
4) крупные с обрубленными концами грамположительные палочки
5) грамположительные палочки, имеющие форму веретена
Правильный ответ 4
41. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) факультативный анаэроб
2) облигатный анаэроб
5) облигатный аэроб
Правильный ответ 1
42. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) требователен к питательным средам
2) не требователен к питательным средам
3) активно подвижен
4) окрашивается биполярно
Правильный ответ 2
43. В БУЛЬОНЕ ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ РАСТЕТ В ВИДЕ
1) зернистого осадка
5) нежной серой пленки
Правильный ответ 3
44. НА МПА БАЦИЛЛЫ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ РАСТУТ В ВИДЕ
2) слизистых колоний в S-форме
3) нежных, прозрачных, голубоватых колоний
4) черных округлых колоний с металлическим блеском
5) вообще не растут
Правильный ответ 1
45. СПОРЫ БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ МОГУТ СОХРАНЯТЬСЯ В ПОЧВЕ
1) не более месяца
2) не более года
3) неопределенно долго
4) погибают мгновенно
5) в почве не образуются
Правильный ответ 3
46. УСЛОВИЯ ОБРАЗОВАНИЯ СПОР БАЦИЛЛАМИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) +37°, приток О2, наличие питательных веществ
2) +42°, приток О2, наличие питательных веществ
3) +42°, отсутствие О2, дефицит питательных веществ
4) +18 – 30°, приток О2, наличие питательных веществ
5) +18 – 30°, отсутствие О2, дефицит питательных веществ
Правильный ответ 4
47. ОСНОВНОЙ ИСТОЧНИК ИНФЕКЦИИ ПРИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ
1) больной человек
3) овцы и крупный рогатый скот
Правильный ответ 3
48. ГЛАВНЫЕ ВХОДНЫЕ ВОРОТА ПРИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ
1) неповрежденная кожа
2) поврежденная кожа
3) конъюнктива глаз
4) слизистые оболочки дыхательных путей
5) слизистые оболочки ЖКТ
Правильный ответ 2
49. МЕТОД ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) кожно-аллергическая проба с антраксином
2) реакция иммобилизации с диагностической сывороткой
3) РИФ с исследуемой выделенной культурой
4) РИФ с исследуемым материалом
5) биологическая проба
Правильный ответ 4
50. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ДЛЯ ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ ОСНОВНОЙ ФОРМЫ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
4) экссудат карбункула
Правильный ответ 4
51. ИССЛЕДУЕМЫЙ МАТЕРИАЛ ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА ПРИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ
2) экссудат карбункула
5) всё вышеперечисленное
Правильный ответ 5
52. МАССОВОЕ ЗАБОЛЕВАНИЕ ЛЕГОЧНОЙ ФОРМОЙ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ – СВИДЕТЕЛЬСТВО
1) массового заболевания животных
2) низкого уровня охвата прививками
3) завоза из природного очага
4) вскрытия скотомогильника
5) биотеррористического акта
Правильный ответ 5
53. СИБИРСКАЯ ЯЗВА
1) антропонозная инфекция
2) зоонозная инфекция
3) воздушно-капельная инфекция
5) природно-очаговая инфекция
Правильный ответ 2
54. ОСНОВНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ ФОРМА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
Правильный ответ 2
55. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ПРИМЕНЯЮТ
1) живую вакцину EV
3) живую вакцину СТИ
4) эритроцитарный сибиреязвенный диагностикум
Правильный ответ 3
56. ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ИСПОЛЬЗУЮТ
2) сибиреязвенный бактериофаг
4) противосибиреязвенный иммуноглобулин
Правильный ответ 4
4) фактор патогенности
Правильный ответ 3
58. ПЕРВЫЙ СОЗДАТЕЛЬ ЖИВОЙ ВАКЦИНЫ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) Н.Н. Гинсбург, А.Л.Тамарин
2) С.С. Андреевский
3) Л.С. Ценковский
Правильный ответ 5
59. ВОЗБУДИТЕЛЬ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) крупные палочки
2) не образуют капсулу
3) не образуют спору
4) самые мелкие из всех микроорганизмов
5) не окрашиваются анилиновыми красителями
Правильный ответ 1
60. ВЕГЕТАТИВНЫЕ ФОРМЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) устойчивы к высоким температурам
2) устойчивы к обычным дезинфектантам
3) быстро гибнут при воздействии дезинфектантов и высоких температур
4) устойчивы к УФ-излучению
5) хорошо переносят высушивание
Правильный ответ 3
61. СПОРЫ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) устойчивы к антибиотикам
2) устойчивы к дезинфектантам
3) устойчивы к высоким температурам
4) хорошо переносят высушивание
5) все вышеперечисленное
Правильный ответ 5
62. СПОРЫ БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ НЕОБРАЗУЮТСЯ
2) при притоке кислорода
3) в организме больного
4) на питательных средах
Правильный ответ 3
63. БАЦИЛЛЫ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В ОРГАНИЗМЕ
1) образуют только капсулу
2) образуют только спору
3) образуют и капсулу, и спору
5) образуют L-формы
Правильный ответ 1
64. МЕТОДЫ ОКРАШИВАНИЯ СПОР БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
2) метиленовой синькой
3) специальные методы (Ожешко, Тружильё и др.)
4) водным фуксином
5) окрасить невозможно
Правильный ответ 3
65. НА МПА КОЛОНИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ РАСТУТ В ВИДЕ
5) слизистой массы
Правильный ответ 4
66. НА МПБ БАЦИЛЛЫ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ РАСТУТ В ВИДЕ
3) опрокинутой ёлочки
4) головы медузы
5) жемчужного ожерелья
Правильный ответ 2
1) бесспоровая форма
2) бескапсульная форма
4) некультивируемая форма
5) споровая форма
Правильный ответ 3
68. ФАКТОР ПАТОГЕННОСТИ БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
Правильный ответ 3
69. ОСНОВНОЙ ПУТЬ ЗАРАЖЕНИЯ ПРИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЕ
Правильный ответ 2
70. ПРИ ПРОНИКНОВЕНИИ ЧЕРЕЗ КОЖУ НА МЕСТЕ ВНЕДРЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В ИТОГЕ ОБРАЗУЕТСЯ
3) небольшое покраснение
4) пузырек с серозной жидкостью
Правильный ответ 2
71. РАБОТА С МАТЕРИАЛОМ, ПОДОЗРИТЕЛЬНЫМ НА ЗАРАЖЕНИЕ БАЦИЛЛАМИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ, ПРОВОДИТСЯ
1) в обычных лабораториях
2) в бак. лабораториях медицинских вузов
3) в специализированных лабораториях, имеющих специальное разрешение
4) только в полевых условиях
5) только в г. Москве
Правильный ответ 3
72. МЕТОД ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
Правильный ответ 4
73. ЦЕЛЬ ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ТЕРМОПРЕЦИПИТАЦИИ АСКОЛИ ПРИ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
1) изучение биохимической активности микроорганизмов
2) обнаружение сибиреязвенного антигена в исследуемом материале
3) обнаружение антител в сыворотке обследуемого
4) изучение антигенной структуры возбудителя
5) обнаружение токсина в сыворотке обследуемого
Правильный ответ 2
74. МАРКЕР ВОЗБУДИТЕЛЯ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ПРИ ПОСТАНОВКЕ РЕАКЦИИ ТЕРМОПРЕЦИПИТАЦИИ АСКОЛИ
1) протективный антиген
2) белковый капсульный антиген
3) полисахаридный соматический антиген
4) отёчный фактор
5) летальный фактор
Правильный ответ 3
75. МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ
5) все вышеперечисленные
Правильный ответ 5
76. СПОРЫ БАЦИЛЛ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В БОЛЬШИХ КОЛИЧЕСТВАХ МОЖНО ВЫЯВИТЬ В
Правильный ответ 4
77. ДЛЯ ПАТОГЕНЕЗА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ ХАРАКТЕРНО
1) прорастание спор в вегетативные клетки
2) гематогенное и/или лимфогенное распространение в организме
3) местный некроз и отек тканей
5) все вышеперечисленные
Правильный ответ 5
78. ОСНОВНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ ФОРМА СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В СЛУЧАЕ ПРИМЕНЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ, КАК СРЕДСТВА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ
Правильный ответ 2
Последнее изменение этой страницы: 2016-04-23; Нарушение авторского права страницы
[youtube.player]Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов
(утв. Министерством здравоохранения СССР 27 сентября 1984 г.)
Возбудитель сибирской язвы, попадая в почву, на протяжении многих десятилетий не только сохраняется, но и накапливается за счет многократных вегетаций и споруляций. При этом состояние инфицированности почвы представляет собой явление динамическое, подверженное изменчивости во времени количественном и качественном отношении под влиянием меняющихся условий окружающей среды. Наиболее благоприятными являются следующие физико-химические характеристики почв: температура не ниже 12-15°С, влажность в пределах 29-85%, рН - 5,3-7,3; наличие 1-14% гумуса, присутствие 14-38 мг фосфора # 6-18 мг калия на 100 г почвы. В зависимости от перечисленных и целого ряда других факторов (антропогенное воздействие, наличие актиномицетов-антагонистов, влияние ризосферы высших растений) происходит накапливание возбудителя сибирской язвы в почве или сохранение единичных микробов с измененными культурально-морфологическими свойствами и сниженной вирулентностью.
Возбудитель сибирской язвы преимущественно находится в почве на глубине от 1,2 до 2 м, так как именно на этом уровне осуществлялось в прошлом захоронение трупов сибиреязвенных животных. В результате ливневых паводковых потоков, эрозионных процессов или антропогенного воздействия возможен вынос возбудителя в поверхностный слой почвы, составляющий до 40 см и наиболее опасный в эпизоотическом и эпидемическом отношении. Кроме того, поверхностное загрязнение почвы происходит при падеже и вынужденном убое сибиреязвенных животных.
Систематическое бактериологическое исследование почвы в местах падежа, вынужденного убоя или захоронения сибиреязвенных животных является важным моментом в системе противоэпидемических мероприятий и позволяет осуществлять оперативное слежение за состоянием очагов сибирской язвы.
До настоящего времени отсутствуют унифицированные подходы к отбору проб почвы и соблюдению противоэпидемического режима при работе на участках, зараженных возбудителем сибирской язвы.
В настоящих методических рекомендациях излагаются методика отбора проб почвы с применением бура Малькова модифицированного авторами, меры личной профилактики, способы обеззараживания инструментария и остатков проб почвы.
Методика отбора проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов
Отбор проб почвы для бактериологического исследования на участках захоронения, в местах падежа или вынужденного убоя сибиреязвенных животных проводится по эпидемиологическим показаниям, а также при осуществлении динамического наблюдения за очагом. При контроле активности очага в местах захоронения отбор проб почвы следует проводить в летне-осенний период, наиболее благоприятный для вегетации возбудителя сибирской язвы. Необходимо максимально охватывать исследованиями весь участок очага как по площади, так и по глубине. Так как вероятность бактериологической находки возбудителя сибирской язвы в местах захоронения составляет 1-2%, число проб из одного очага должно составлять не менее 100.
Работа по отбору проб проводится в защитном костюме II типа с применением дезинфицирующих средств.
Бригада отборщиков проб почвы состоит из двух человек. К месту отбора проб она направляется на выделенном транспорте со специальной укладкой (приложение 1).
1. На территории очага выбирается участок размером от 8 до 16 в зависимости от площади захоронения.
2. Намечаются 5 точек отбора проб почвы (4 точки по углам и одна в центре) при отборе проб почвы на глубину до 2-х м или 6 точек (4 точки по углам и две в центре) при отборе проб на глубину до 1,6 м. При захоронении сибиреязвенных животных в траншеи отбор проб необходимо проводить в 5 или 6 точках (в зависимости от глубины отбора проб), расположенных по ходу траншеи.
3. Совком (ножом) производится расчистка намеченных точек отбора проб от мусора, листьев и травы.
4. Отбор проб почвы осуществляется при помощи модифицированного бура Малькова (приложение 2).
5. У места отбора проб почвы расстилается полиэтиленовая пленка размером не менее 100X100 см, над которой отобранная почва ссыпается в мешочки.
6. По эпидпоказаниям (при падеже или прирезке сибиреязвенного животного) определяется поверхностное загрязнение почвы возбудителем сибирской язвы путем отбора проб в каждой намеченной точке на глубине до 40 см. При этом количество проб составляет не более 20.
При динамическом наблюдении за очагом (в местах захоронения сибиреязвенных животных) отбор проб почвы производится на глубине 1,6-2 метров через каждые 10 см (рис. 1).
7. Вес каждой пробы, взятой в одной точке отбора, должен быть равен 40-50 г (2 столовых ложки).
8. Отобранные на каждой глубине из 5 или 6 точек пробы объединяются в один матерчатый мешочек, на котором простым карандашом отмечается глубина отбора пробы (10, 20, 30 см и т.д.). Полиэтиленовые мешочки не используются, так как это может привести к гибели возбудителя или изменению его свойств.
9. Пробу почвы для лабораторного исследования на наличие актиномицетов-антагонистов следует отбирать в одной из пяти точек на глубине 20 см весом 10 г в отдельный полиэтиленовый мешочек с целью создания благоприятных условий для сохранения и накопления актиномицетов-антагонистов.
10. Для определения химического состава почв пробу весом 100 г отбирают в матерчатый мешочек в одной точке на глубине 20 см на контрольном участке с однотипной структурой почв, расположенном в 100 м от скотомогильника.
11. Пронумерованные мешочки с пробами почвы для исследования на наличие возбудителя антракса помещают по 5-6 штук в металлические пеналы. В один из этих пеналов помещают пробу почвы, предназначенную для исследования на наличие актиномицетов. Пробу для химического анализа помещают в отдельный пенал.
12. После отбора проб остатки почвы, находящиеся на полиэтиленовой пленке, ссыпают в образовавшиеся шурфы. Сверху засыпают хлорной известью (200 г на каждый шурф) и увлажняют. Использованную полиэтиленовую пленку протирают ветошью, смоченной в 6% растворе перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.
13. Пеналы с наружной стороны обрабатывают 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.
14. Бур, лопатку и совок (нож) обжигают пламенем паяльной лампы, затем обрабатывают ветошью, смоченной 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства.
15. Отборщики обрабатывают обувь 6% раствором перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства и отправляются к месту стоянки транспорта, где снимают защитную одежду (маски, халаты, косынки) и помещают ее в клеенчатый мешок, обрабатывая руки в резиновых перчатках 6% раствором перекиси водорода с 0,5% моющего средства после каждой манипуляции. После снятия перчаток моют руки с мылом.
16. Пеналы оклеивают лейкопластырем, бур и лопатку помещают в чехол, выписывают направления.
Отобранные пробы почвы должны быть доставлены в лаборатории для исследования в течение 1-3 суток.
Примечание. В случае травмы с нарушением кожных покровов в процессе отбора проб почвы в очаге сибирской язвы необходимо промыть рану водой с мылом, обработать настойкой йода и наложить повязку. В дальнейшем предпринять меры по экстренной профилактике заболевания сибирской язвой.
При составлении "Рекомендаций" использованы:
1. Инструкция и методические указания по лабораторной и клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы у людей.
2. Организация мероприятий по профилактике сибирской язвы (методические рекомендации).
3. Методические указания по обнаружению возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах внешней среды. Утв. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 1.II # .79 г.
4. Инструкция о противоэпидемическом режиме работы с материалом, зараженным или подозрительным на зараженность возбудителями инфекционных заболеваний I-II групп.
5. Методические рекомендации по использованию актиномицетов-антагонистов для обеззараживания почв, загрязненных возбудителем сибирской язвы.
Зам. начальника Главного управления
карантинных инфекций Министерства
здравоохранения СССР
Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!
Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.
Методические рекомендации по отбору проб почвы для бактериологического исследования на наличие возбудителя сибирской язвы и актиномицетов-антагонистов (утв. Министерством здравоохранения СССР 27 сентября 1984 г.)
Текст методических рекомендаций приводится по изданию Министерства здравоохранения СССР (Москва, 1984 г.)
Рекомендации разработаны сотрудниками Ростовского-на-Дону государственного научно-исследовательского противочумного института Т.Ф. Богдановой, Ю.Г. Киреевым, В.И. Прометным, М.С. Осиповой, Г.М. Поповым, А.И. Беспаловым
[youtube.player]Цель занятия: изучить методы диагностики сибирской язвы. Материалы и оборудование: световой микроскоп, вакцина против сибирской язвы.
Место проведения занятия: лаборатория кафедры эпизоотологии.
Сибирская язва — остропротекающая болезнь сельскохозяйственных животных многих видов. Болеет и человек. Возбудитель — Bacillus anthracis.
При постановке диагноза на сибирскую язву используют весь комплекс диагностических методов — эпизоотологический анализ, клинические, патологоанатомические и лабораторные исследования.
Общий принцип эпизоотологического анализа, или обследовав ния, хозяйства изложен в занятии 6. Возбудитель сибирской язвы может распространяться через секреты и экскреты больных животных, продукты убоя, трупы, а также посредством кровососущих насекомых. Особенно опасны места захоронения трупов животных и стоячие водоемы.
Если болезнь возникла в период стойлового содержания животных, выясняют условия их кормления и происхождение кормов (споры сибирской язвы могут быть занесены с корнеплодами, сеном и мясокостной мукой); если в пастбищный период — обследуют участки, где паслись животные. Необходимо выяснить, велись ли вблизи фермы или пастбищ земляные работы, и собрать сведения за предельно большой срок о случаях появления сибирской язвы в данной местности.
Клиническое обследование животных начинают с измерения температуры тела (при сибирской язве она повышена). Болезнь выражается также отказом от корма, резким припуханием лимфатических узлов, отеком подчелюстного пространства, у дойных коров — Маститом. У свиней обнаруживают разлитую отечность тестоватой Консистенции в подчелюстном пространстве.
При патологоанатомическом исследовании отмечают характерные для сибирской язвы признаки: отсутствие трупного окоченения, сильное вздутие трупа, отеки в подкожной клетчатке, пенисто-кровянистые истечения из естественных отверстий, синюшную окраску видимых слизистых оболочек и кровоизлияния на них. Однако следует иметь в виду, что весь комплекс указанных изменений наблюдают не всегда, поэтому окончательный диагноз устанавливают только после лабораторного исследования.
Лабораторная диагностика при сибирской язве включает в себя микроскопию мазков из исходного патологического материала, выделение чистой культуры посевом на питательные среды, биопробу. При необходимости ставят реакцию преципитации, идентифицируют выделенные культуры культурально-биохимическими методами.
Для исследования на сибирскую язву в лабораторию направляют ухо, перевязанное у основания, или мазок крови, взятой из надреза уха; от трупов свиней — участки отечной соединительной ткани и заглоточные, а также другие лимфатические узлы с характерными патологоанатомическими изменениями. Если подозрение на сибирскую язву возникло при вскрытии трупа животного (кроме трупов свиней), вскрытие прекращают и на исследование направляют часть селезенки.
Мазки микроскопируют немедленно, результаты срочно сообщают в хозяйство, направившее материал. Мазки фиксируют этиловым спиртом с добавлением 3 % пероксида водорода, окрашивают по Граму, на капсулы — по методу Ребигера, Михина, Ольта или Романовского— Гимзы и на споры — по методу Пешкова, Ауески, Трихинелье и Златогорова. Если в лаборатории есть люминесцирующие сыворотки, используют метод флюоресцирующих антител.
Посевы из исходного материала делают в МПБ и на МПА или в бульон и на агар Хоттингера. Посевы инкубируют 18…24 ч при температуре 37 °С, при отсутствии роста выдерживают при той же температуре еще 48 ч.
После суточного роста сибиреязвенных бактерий МПБ остается прозрачным, на дне образуется рыхлый осадок, напоминающий комок ваты. При встряхивании пробирки бульон не мутнеет, осадок разбивается на мелкие хлопья. Мазки из бульонной культуры окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках обнаруживают цепочки, состоящие из сибиреязвенных палочек.
На плотных питательных средах возбудитель сибирской язвы образует плоские матово-серые шероховатые колонии. Центр колоний затемнен, периферия бахромчатая, с локонообразными отростками.
Для биопробы используют лабораторных животных, восприимчивых к сибирской язве: белых мышей, кроликов, морских свинок. Исследуемый материал суспендируют в небольшом объеме 0,9%-го раствора хлорида натрия, вводят двум белым мышам в дозе 0,2…0,5 мл под кожу спины ближе к корню хвоста или 0,5…1,0 мл двум морским свинкам подкожно в область живота. За животными, зараженными суспензией из исходного материала или культурой возбудителя, наблюдают в течение 10 сут. Зараженные животные гибнут через 1…3 сут, иногда позже. Трупы вскрывают, делают мазки и посевы на питательные среды из крови сердца, селезенки, печени, а также инфильтрата, образовавшегося на месте инъекции исследуемого материала.
Сроки исследований: микроскопического — в день поступления материала, бактериологического—до 3 сут, биологического (биопроба) — 10 сут.
Кожевенное сырье на сибирскую язву исследуют в реакции преципитации (РП). Перед ее постановкой свежий патологический материал предварительно выдерживают в термостате в течение 18…20 ч, несвежий сразу экстрагируют горячим или холодным способом. При этом следует учитывать, что в экстрактах, полученных горячим способом, меньше преципитиногенов.
При горячем способе экстрагирования кусочки исследуемого материала (1…2г) помещают в пробирку или колбу, заливают 0,9%-м раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и кипятят 30…40 мин на водяной бане. При холодном кусочки материала (1…2г) растирают в ступке с песком, переносят в колбу или баночку, заливают 0,9%-м фенолизированным раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 10 и оставляют на 16…18 ч при температуре 20 ± 2 °С.
Полученные экстракты фильтруют через асбестовую вату до ‘ прозрачности, при этом первые капли фильтрата удаляют.
РП ставят методом наслаивания или подслаивания.
При наслаивании в уленгутовскую пробирку наливают 0,2…0,3 мл прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между. Компонентами образовалась ясно выраженная граница (тонкая прямая линия). При подслаивании в уленгутовскую пробирку сначала вносят 0,2…0,3 мл экстракта, затем под него осторожно пастеровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.
Если при соединении компонентов резко выраженная граница между ними отсутствует, опыт повторяют. Одновременно ставят контроль преципитируюшей сибиреязвенной сыворотки со стандартным сибиреязвенным антигеном: при положительной реакции в течение 1…2 мин после соединения компонентов появляется характерное кольцо.
РП считают положительной, если через 1…2 мин и не позже чем через 15 мин на границе между компонентами появилось тонкое беловатое кольцо.
При отрицательном результате РП с экстрактом, полученным горячим способом, опыт повторяют с экстрактом, полученным холодным способом.
ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
1. Приготовить мазки из вакцинного штамма и промикроскопировать их.
2. Разработать схему дифференциальной диагностики сибирской язвы от коликов, тимпании, отравления.
[youtube.player]| Случаи, вызывающие подозрение на сибирскую язву | ||
| Эпизоотологические данные | Клинические признаки | Патологоанатомические изменения |
| Внезапная гибель животных при пастбищном содержании на ранее неблагополучной территории или после проведения земляных работ, сильного ливня или паводка | У овец — тяжелое дыхание дрожь, судороги, из носовых отверстий и полости рта выделяется кровянистая пена. У лошадей и крупного рогатого скота — озбуждение, сменяющееся угнетением, одышка, синюшность слизистых оболочек, температура до 41. 42 "С, гибель в судорогах | Быстрое разложение трупов, отсутствие их окоченения, наличие кровянистых истечений. В области нижнечелюстного пространства, щек, подгрудка, живота могут быть.тестоватые припухлости |
| Клинико-эпизоотологическое обследование хозяйства, комплексное лабораторное исследование животных и объектов внешней среды | ||
| Бактериологическое | Серологическое | Аллергическое |
| 1. Микроскопическое 2. Посев на питательные среды 3. Идентификация выделенной культуры по культуральным и биохимическим свойствам 4. Заражение лабораторных животных 5. Обнаружение возбудителя сибирской язвы в сырье животного происхождения и объектах внешней среды | РП по Асколи (при иссле довании кожевенного сырья, загнившего патматериала) РНГА, МФА, ELISA | использование сибиреязвенвенного аллергена для постановки прижизненного диагноза у свиней и оценки иммунитета у привитых против сибирской язвы лошадей, у крупного и мелкого рогатого скота |
По результатам лабораторных исследований диагноз на сибирскую язву считается установленным при получении одного из следующих показателей: 1) выделения из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя сибирской язвы, и гибели хотя бы одного лабораторного животных из двух зараженных исходным материалом или полученной культурой с последующим вьщелением ее из органов павшего животного; 2) отсутствии в посевах из исходного материала роста культуры, но гибели хотя бы одного лабораторного животного из двух зараженных и выделению из его органов культуры с признаками, характерными для возбудителя сибирской язвы; 3) положительной реакции преципитации при исследовании кожсырья и загнившего патологического материала.
Для дифференциации возбудителя сибирской язвы от микробов-сап-рофитов, близкородственных В. anthracis (В. cereus, В. mycoides, В. thuringiensis и др.), широко распространенных в природе, применяют методы, выявляющие фенотипические различия штаммов, в том числе определение характера роста на различных питательных средах, чувствительность к пенициллину и бактериофагу, образование капсул, тест на образование сибиреязвенного токсина, РП в геле, РИГА в комплексе с другими бактериологическими методами (микроскопия, культивирование, биопроба на лабораторных животных) и др.
Для выявления обсемененности спорами сибирской язвы различных объектов внешней среды разработаны Методические указания по индикации возбудителя сибирской язвы в объектах внешней среды и кормах с помощью твердофазного иммуноферментного метода.
В настоящее время для проведения более тонкого и углубленного эпи-зоотологического анализа вспышек болезни разработаны рестрикцион-ный анализ, молекулярная гибридизация, полимеразная цепная реакция (ПЦР).
При дифференциальной диагностике у коров необходимо исключить эмфизематозный карбункул, злокачественный отек, пастереллез (отечная форма) и пироплазмидозы, тимпанию незаразного характера, лейкоз. У овец — брадзот, инфекционную энтеротоксемию и пироплазмидозы; у свиней — рожу, чуму, пастереллез; у лошадей — злокачественный отек, сверхострое течение инфекционной анемии, пироплазмидозы, петехиальную горячку, кормовые отравления.
Основой дифференциальной диагностики является комплексный метод исследования, в котором результаты лабораторной диагностики имеют решающее значение.
Иммунитет, специфическая профилактика.У переболевших сибирской язвой животных развивается стойкий и продолжительный иммунитет. Основу профилактики и борьбы с сибирской язвой в настоящее время составляют средства специфической профилактики — вакцины. Длительно в нашей стране применялась вакцина СТИ, в настоящее время для создания активного искусственного иммунитета широко используют живую споровую лиофилизированную вакцину из штамма 55-ВНИИВВиМ и аналогичную жидкую вакцину. Иммунитет формируется через 10 дней после прививки и сохраняется более 1 года. Разработаны две формы сибиреязвенной вакцины из штамма 55-ВНИИВВиМ: концентрированная и суперконцентрированная, и способ их внутрикожного применения при помощи безыгольного инъектора (крупный рогатый скот, свиньи).
Возможно использование ассоциированных вакцин: против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула; против сибирской язвы и ящура; против сибирской язвы и клостридиозов овец; против сибирской язвы и оспы овец.
Разрабатываются также современные сибиреязвенные вакцины нового поколения с получением рекомбинантных штаммов, обеспечивающих формирование более длительного иммунитета.
Профилактика.Для предупреждения сибирской язвы проводят общие ветеринарно-санитарные мероприятия. Определяют эпизоотическую ситуацию местности, изучают распространение болезни в прошлые годы, чтобы, проанализировав данные, прогнозировать ее появление и осуществлять необходимые меры профилактики. Основные профилактические мероприятия в стационарно неблагополучных по сибирской язве хозяйствах перечислены на рисунке 1.1.
Лечение.Больных животных немедленно изолируют и лечат. Для лечения применяют гипериммунную противосибиреязвенную сыворотку, специфический гамма-глобулин, которые рекомендуется сочетать с инъекциями антибиотиков. Разработана и предложена схема комплексного применения антибиотиков при лечении сибирской язвы у животных разных видов. В период вспышки болезни используют антибиотики в следующих комбинациях: тетрациклин + стрептомицин, тетрациклин + эритромицин, тетрациклин + ампицилин для лечения (в течение 7. 10 дней) и профилактики (в течение 5. 7 дней).
Рис. 1.1. Профилактические мероприятия при сибирской язве
Эпизоотический очаг сибирской язвы — место нахождения источника или факторов передачи возбудителя инфекции в тех пределах, в которых возможна передача возбудителя восприимчивым животным или людям (участок пастбища, водопой, животноводческое помещение, предприятие по переработке животноводческой продукции и т. д.).
Стационарно неблагополучный пункт — населенный пункт, животноводческая ферма, пастбище, на территории которых обнаружен эпизоотический очаг независимо от срока давности его возникновения.
Почвенными очагами считаются скотомогильники, биотермические ямы и другие места захоронения трупов животных, павших от сибирской язвы.
Эпидемическим очагом сибирской язвы является эпизоотический очаг, в котором отмечено заболевание этой инфекцией человека.
Угрожаемой территорией считаются хозяйства, населенные пункты, административные районы, где имеется угроза заболевания животных или человека.
При получении заключения о наличии сибирской язвы администрация территории по представлению ветеринарной и санитарно-эпидемической службы устанавливает карантин. Основные мероприятия по ликвидации представлены на рисунке 1.2.
При отсутствии у животных осложнений после вакцинации карантин снимают через 15 дней со дня последнего случая падежа или выздоровления больного животного.
Меры по охране людей от заражения сибирской язвой.Сибирская язва у человека может возникнуть в результате заражения от больного животного, его трупа, употребления инфицированных продуктов животноводства (использование в пищу молока, мяса) или через зараженную сибиреязвенными спорами почву. Заражение может осуществляться контактным, трансмиссивным, алиментарным или воздушно-пылевым путем. Сибирская язва у человека чаще всего проявляется как инфекция наружных покровов, реже — в кишечной или легочной форме. Кожная форма болезни встречается в 95. 97 % случаев и характеризуется сравнительно легким клиническим проявлением.
Опасность заражения людей существует, поэтому вакцинации подлежат лица, по роду деятельности подвергающиеся риску заражения в процессе манипуляций с материалами, подозрительными на обсемененность возбудителем, или при работе с культурами возбудителя сибирской язвы. Обязательны госпитализация и лечение больных, а также санитарно-просветительская работа среди населения.
Рис. 1.2. Мероприятия по ликвидации сибирской язвы 
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
[youtube.player]Читайте также: