Хема тест на определение инфекции мочевыделительной системы инструкция

Комплексное лабораторное исследование, направленное на первичное выявление инфекционного процесса в почках и мочевыводящих путях.

Инфекции мочевыводящих путей и почек; уретрит, цистит, уретерит, пиелонефрит; скрининговое обследование.

Urinary tract and kidney infections; urethritis, cystitis, ureteritis, pyelonephritis; screening tests.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Первую порцию утренней мочи, среднюю порцию утренней мочи.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить (по согласованию с врачом) прием мочегонных препаратов в течение 48 часов до сбора мочи.
• Женщинам исследование рекомендуется производить до менструации или через 2-3 дня после её окончания.

Общая информация об исследовании

Почки и мочевыводящие пути относятся к выделительной системе и играют роль в поддержании гомеостаза в организме человека и выделении мочи. К основным жизненно важным функциям почек относятся экскреторная, регуляция водно-солевого обмена и кислотно-щелочного равновесия, эндокринная функция, регуляция артериального давления и эритропоэза. Мочевыводящие пути или органы мочевыделения включают в себя почечные чашечки, лоханки, мочеточники, мочевой пузырь, мочеиспускательный канал (уретру).

Для первичной диагностики инфекционных процессов в данных органах могут быть использованы следующие лабораторные диагностические тесты и методы: общий анализ мочи, микроскопия мочевого осадка и бактериологический метод посева мочи для верификации возбудителя инфекционного процесса. Исследование мочи рекомендуется проводить в двух порциях мочи, что позволяет первично предположить локализацию инфекционно-воспалительного процесса. Патологические изменения в первой порции мочи могут свидетельствовать о наличии воспалительного процесса в средних и нижних отделах мочеиспускательного канала (уретрита). Сдвиг показателей во второй порции может являться показателем патологического инфекционного процесса в верхних отделах уретры и мочевого пузыря, что приводит к уретриту или циститу. Изменения во второй порции мочи у мужчин характерны для воспалительных заболеваний простаты и семенных пузырьков. Также изменения в лабораторных параметрах позволяют предположить поражение мочеточников и почек с формированием уретерита и пиелонефрита соответственно.

Общий анализ мочи с микроскопией мочевого осадка представляет собой совокупность диагностических тестов, позволяющих оценить общие свойства мочи, её физико-химические свойства, содержание продуктов обмена веществ, выявить качественное и количественное содержание ряда органических соединений. Они позволяют судить о функциональном состоянии почек, мочевыводящих путей, об общих метаболических процессах, наличии инфекционных и воспалительных процессов.

О развитии воспалительных и инфекционных процессов в почках и мочевыводящих путях можно предположить по следующим показателям. Изменение прозрачности и цвета мочи до белесого оттенка или наличие белого осадка могут свидетельствовать о присутствии лейкоцитов, бактерий, грибов. Сдвиг кислотно-щелочной реакции мочи в щелочную сторону (рН 7,0-9,0) связан с инфекцией мочевыводящих путей, происходит он по причине того, что микроорганизмы гидролизуют мочевину.

Увеличение количества лейкоцитов, реже эритроцитов, в общем анализе мочи и при микроскопическом исследовании мочевого осадка является важным показателем поражений почек и мочевыводящих путей. В норме в моче здоровых людей встречается незначительное количество лейкоцитов. При лабораторном исследовании мочи выделяют два состояния: лейкоцитурию и пиурию, которые являются важнейшими патологическими признаками воспаления почек и мочевыводящих путей. Лейкоцитурия – это повышенное содержание лейкоцитов при сохранении прозрачности мочи. Пиурия отражается помутнением мочи и наличием лейкоцитов во всех полях зрения при микроскопии осадка мочи. Появление эритроцитов в моче (гематурия) также может сопровождать инфекции мочевыводящих путей и почек. Например, при пиелонефрите у трети больных может наблюдаться гематурия. Диагностически ценным является обнаружение у больного лейкоцитурии и бактериурии. При микроскопии осадка обнаружение лейкоцитарных, зернистых цилиндров могут быть признаками острого пиелонефрита, обострении хронического пиелонефрита, абсцесса почки.

Повышенное количество бактерий и нитритов в моче свидетельствует о наличии бактериальной инфекции почек и/или мочевыводящих путей. Важно отметить значение данных тестов в скрининговой диагностике хронического пиелонефрита. Это частое заболевание, которое в 30-40 % случаев может протекать бессимптомно, приводя к тяжелому течению, развитию осложнений и сложности подбора эффективного лечения.

У здоровых людей мочевыделительная система стерильна и минимальное количество бактерий с поверхности нижних частей уретры не превышает 1*10 4 /мл. Данное количество бактерий не превращает нитраты, присутствующие в нормальной моче, в нитриты. Следовательно, реакция на нитриты в норме отрицательная.

Бактериурия – это состояние, при котором отмечается содержание бактерий в моче более 1*10 5 /мл. Бактерии, обнаруженные в моче, чаще всего представлены грамотрицательной флорой. Они могут проникать в мочевыводящие пути путем восходящей инфекции или гематогенным путем. К ним относятся микроорганизмы, относящиеся к роду Klebsiella, Proteus, Enterobacter, Salmonella, Pseudomonas, Citrobacter, стафилококки, стрептококки, энтерококки. Часто обнаруживаются Escherichia coli. Восходящая инфекция часто осложняется развитием пиелонефрита. Данное заболевание чаще встречается у женщин, пожилых мужчин. У беременных женщин бактериурия выявляется в пять раз чаще, чем у небеременных. У 70 % беременных причиной пиелонефрита являются бактерии Escherichia coli. Усугублению и развитию восходящей инфекции мочевыводящих путей и почек способствует глюкозурия. Группами риска по развитию пиелонефрита являются больные уретритом, циститом, пиелоциститом, уретеритом, мочекаменной болезнью, пациенты после инструментального и хирургического вмешательства на мочевыводящих путях. В развитии инфекции почек и мочевыводящих путей также могут играть роль дрожжеподобные гриба рода Candida.

Необходимо отметить, что для диагностики бактериурии исследуется средняя порция первой утренней мочи. Важно проводить тщательный туалет наружных половых органов, использовать стерильную посуду для сбора мочи для исключения ложноположительных результатов. Такие бактерии, как гонококки, стрептококки и микобактерии туберкулеза не образуют нитритов. Следовательно, реакция на нитриты в данном случае будет отрицательна. У детей грудного возраста моча не содержит нитритов. Поэтому для подтверждения бактериальной инфекции рекомендуется использовать бактериологическое исследование мочи.

Бактериологическое исследование мочи (посев мочи на микрофлору) с использованием специфических питательных сред рекомендуется взрослым и детям для подтверждения инфекции почек и мочевыводящих путей, для выявления и выделения возбудителя инфекционного процесса. Это микробиологическое исследование, позволяющее определить состав микрофлоры исследуемой мочи, выявить условно-патогенные и патогенные микроорганизмы. Для подбора эффективной терапии против конкретного возбудителя производится последующее определение чувствительности к антибиотикам. При обнаружении микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору, или условно-патогенных микроорганизмов в титре менее диагностического чувствительность к антибиотикам и бактериофагам не определяется, так как это количество не является значимым и не требует лечения противомикробными препаратами.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики инфекционных процессов мочевыводящих путей: уретрита, цистита, уретерита;
• для диагностики инфекционных процессов почек: острого и хронического пиелонефрита, абсцесса почки;
• для определения возбудителя инфекционного процесса и подбора эффективной противомикробной терапии.

Когда назначается исследование?

• При симптомах инфекционно-воспалительных процессов почек и мочевыводящих путей: болезненное мочеиспускание, рези в нижней части живота, преобладание ночного диуреза над дневным, анурез, персистирующая субфебрильная температура утомляемость, слабость, головные боли, похудение, тошнота;
• при бессимптомном течении заболевания, при подозрении на вялотекущий или хронический инфекционный процесс;
• пациентам после инструментального и хирургического вмешательства на мочевыводящих путях;
• мужчинам с аденомой предстательной железы и простатитом;
• больным с мочекаменной болезнью;
• пациентам с хроническими заболеваниями, гипертонической болезнью, сахарным диабетом;
• детям с 4 лет в целях диспансеризации;
• пациентам старше 70 лет;
• женщины после преждевременных родов, выкидыша, аборта.

[youtube.player]

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

При обследовании детей с предполагаемой инфекцией мочевыводящих путей предпочтение отдают малоинвазивным методам, обладающим высокой чувствительностью. Сложность постановки диагноза инфекции мочевыводящих путей, прежде всего, отмечают у детей раннего возраста (новорождённых и первых 2 лет жизни) и на это существует несколько причин.

• Признаки инфекции мочевыводящих путей у детей раннего возраста неспецифичны, инфекция мочевыводящих путей без лихорадки может быть пропущена или выявлена случайно; у новорождённых инфекция мочевыводящих путей может ассоциироваться с бактериемией, менингитом.
• Идеально чистая моча у новорождённых и детей раннего возраста может быть получена только инвазивными методами: трансуретральной катетеризацией мочевого пузыря или надлобковой пункцией мочевого пузыря с последующей аспирацией образца мочи.

Диагностическая ценность симптомов и методов обследования

Многочисленными исследованиями показано, что среди причин острой лихорадки у детей от 3 лет до 20% занимают пневмония, бактериемия, менингит и инфекция мочевыводящих путей. Особое внимание следует уделять детям с лихорадкой до 39 °С и выше. R. Bachur и М.В. Harper (2001), обследуя 37 450 детей первых 2 лет жизни с лихорадкой, выявили бактериурию у 30% пациентов, при этом частота ложноположительных результатов не превышала 1:250. Лихорадка - клинический признак вовлечения паренхимы почки, то есть развития пиелонефрита.

Необходимо предполагать инфекцию мочевыводящих путей у каждого ребёнка с непонятным недомоганием и исследовать мочу у всех детей с лихорадкой.

Диагностика инфекции мочевыводящих путей должна быть основана на выделении культуры из специально собранной мочи. Идеальный метод - аспирационная пункция мочевого пузыря. Выявление бактериального роста из мочи, полученной путём пункции, в 100% случаев подтверждает инфекцию мочевыводящих путей (данный метод обладает 100% чувствительностью и специфичностью). Однако аспирационная пункция требует хорошо обученного персонала, достаточно неприятна для ребёнка и не может использоваться многократно.

Доказано, что для выделения бактерий моча должна быть собрана при свободном мочеиспускании в чистую ёмкость после тщательного туалета промежности. Отсутствие роста культуры из мочи, полученной при свободном мочеиспускании, однозначно исключает диагноз инфекции мочевыводящих путей. Ramage et al. (1999) показали, что при тщательном очищении промежности ребёнка чувствительность исследования проб мочи, полученной при свободном мочеиспускании, достигает 88,9%, специфичность - 95%. Недостаток метода свободного мочеиспускания - высокий риск контаминации, особенно у детей первых месяцев жизни. Необходимо помнить, что типичные контаминанты - незолотистый стафилококк, зеленящий стрептококк, микрококки, коринебактерии и лактобациллы.

Диагностические критерии бактериурии при пиелонефрите

Диагностически значимой следует считать бактериурию:

• 100 000 и более микробных тел/мл (колониеобразующих единиц/мл) в моче, собранной в стерильную ёмкость при свободном мочеиспускании;
• 10 000 и более микробных тел/мл мочи, собранной с помощью катетера; Heldrich F. et al. (2001) считают диагностически значимым не менее 1000 колониеобразующих единиц/мл мочи, полученной при катетеризации мочевого пузыря;
• любое число колоний в 1 мл мочи, полученной при надлобковой пункции мочевого пузыря;
• для детей первого года жизни, не получавших антибиотики, при исследовании мочи, собранной при свободном мочеиспускании, диагностически значима бактериурия: 50 000 микробных тел/мл мочи Е. coli 10 000 микробных тел Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosae.

Диагностика бактериального воспаления в органах мочеполовой системы у детей может быть проведена с помощью скрининг-тестов (тест-полосок), определяющих в моче эстеразу лейкоцитов и нитрит. Отсутствие эстеразы и нитрита одновременно позволяет исключить бактериальную инфекцию мочеполовой системы.

Чувствительность и специфичность скрининг-тестов при инфекциях мочевой системы (Stephen M. Downs, 1999)

[youtube.player]

XEMAtest инфекции в моче – это быстрый и простой анализ мочи вашего животного без походов в ветеринарную клинику!

Art Y420
ФООО ХЕМА, Россия

МОЖНО ПРИОБРЕСТИ ТОЛЬКО В ВЕТАПТЕКАХ:

Наличие в аптеке уточняйте по телефону.

ВЕТАПТЕКА №1: ул. М.Богдановича, 114
тел. (017) 352-50-00
ВЕТАПТЕКА ЦЕНТРАЛЬНАЯ: пр. Независимости, 91
тел. (017) 395-96-89

• Характеристики
• Отзывы

ХЕМА Тест на определение инфекции мочевыделительной системы у кошек и собак (1 шт)

XEMAtest инфекции в моче применяется для качественного и полуколичественного обнаружения соединений, содержание которых в моче имеет клиническое значение. Они представляют собой бумажные полоски в пластиковом футляре, на которых сорбированы реагенты, меняющие свой цвет при реакции с выявляемым веществом.

Результат анализа – изменение цвета индикаторной метки на полоске, который виден уже через несколько минут невооруженным глазом. С целью возможности полуколичественного определения того или иного соединения тест-полоска разделена на сегменты, окраска которых зависит от количества исследуемого вещества в моче. Примерную концентрацию можно узнать сравнивая тест-полоску с прилагаемой цветной шкалой.

XEMAtest инфекции в моче позволяет определить наличие в моче лейкоцитов, крови, гемоглобина и нитритов.

Содержание таких соединений отражает состояние функции почек и печени, а также наличие воспалительного процесса животного.

Преимущества XEMAtest инфекции в моче :
1. Легкость в проведения анализа.
Не требуется специальных условий и устройств. Тестирование выполняется путем погружения тест-полоски в мочу на 2-3 секунды.
2. Быстрый результат.
Считывать результат можно уже через 2 минуты.
3. Простота интерпретации результатов.
Изменение цвета на участках полоски визуально сравнивают с цветовой шкалой на соответствующий тест.

Все это делает возможным проведение анализа ВЛАДЕЛЬЦЕМ животного в ДОМАШНИХ УСЛОВИЯХ! Без дополнительных посещений ветеринарной клиники, а значит без стресса для животного, без очередей, ожидания результатов и финансовых затрат.

Когда стоит использовать XEMAtest инфекции в моче :
- для первичной диагностики патологий выделительной, эндокринной, половой систем;
- для мониторинга состояния животного и эффективности лечения при мочекаменной болезни, болезнях почек;
- для контроля за лечебной диетой;
- для контроля терапии диуретиками.

Важные замечания:
· Для анализа следует использовать среднюю порцию утренней мочи, собранную в стерильный контейнер. Анализ должен быть выполнен не позднее 3 часов после сбора мочи. Пробы хранить в холодильнике, не замораживать!
· Перед проведением теста прочтите инструкцию!
· Окончательный диагноз ставит врач – рассматривайте результаты теста, как предварительные!

* при подготовке страницы использовались материалы с сайта производителя

МОЖНО ПРИОБРЕСТИ ТОЛЬКО В ВЕТАПТЕКАХ:

ВЕТАПТЕКА №1: ул. М.Богдановича, 114
тел. (017) 268-50-00
ВЕТАПТЕКА ЦЕНТРАЛЬНАЯ: пр. Независимости, 91
тел. (017) 395-96-89

Поделитесь своим впечатлением от использования товара с другими посетителями магазина.

О чем писать в отзыве:

• пишите только о товаре (модели);
• опишите Ваше общее впечатление от товара (модели);
• какие функции оказались для Вас востребованы, а какие - нет;
• какие неудобства в использовании Вы испытали, какие преимущества товара (модели) открыли для себя;
• почему остановили свой выбор именно на этой модели.

Отзыв не будет опубликован, если:

• содержит ненормативную лексику или имеет оскорбительный характер;
• не содержит конкретики о модели;
• содержит недостоверную информацию;
• содержит рекламу, ссылки на другие интернет-ресурсы;
• содержит упоминание о конкретном продавце.

Отзыв публикуется:

• с задержкой, необходимой администратору для проверки;
• только при соответствии изложенным рекомендациям.

Отзыв отражает частное мнение автора, которое администрация магазина может не разделять.

Благодарим Вас за Ваше мнение!

Отзыв публикуется с задержкой, необходимой администратору для проверки. Отзыв публикуется только при соответствии изложенным выше рекомендациям.

Отзыв отражает частное мнение автора, которое администрация магазина может не разделять.

[youtube.player]

Как организовать дистанционное обучение во время карантина?

К мочевыделительной системе относят:

А) почки, легкие, мочевой пузырь, мочеточники;

Б) почки, мочеточники, мочевой пузырь, мочеиспускательный канал;

В) почки, кишечник, желудок, мочевой пузырь,

Г) почки, печень, мочевой пузырь, мочеиспускательный канал;

2.Первичная моча образуется в :

А) полости капсулы;

Б) извитом канальце;

В) мочевом пузыре.

3. Почки удаляют из организма:

А) углекислый газ;

Б) твердые продукты обмена;

В) конечные жидкие продукты обмена, чужеродные вещества (лекарства и яды).

4.Из организма взрослого человека через мочевыделительную систему в среднем выделяется воды за 1 сутки, в литрах:

5. В капиллярный почечный клубочек поступает кровь:

А) смешанная; Б)венозная; В) артериальная.

6. Почка состоит из :

А) коркового слоя, мозгового слоя, почечной пирамиды;

Б) мозгового слоя, почечной пирамиды, мочеточника.

7.Почки в теле человека находятся в :

А) грудной полости; Б) брюшной полости ближе к передней стенке;

В) полости таза; Г) частично в грудной и частично брюшной полостях.

8. Структурной и функциональной единицей почки является:

А) мозговое вещество; Б) почечная пирамида;

В) почечная чаша; Г) нефрон.

9. Сосуд, выносящий кровь из почки-это :

А) артерия; Б) артериола;

В) вена; Г) венула.

10. Причины, вызывающие заболевания почек:

А) возбудители инфекционных заболеваний, острая пища, алкоголь, переохлаждение;

Б) углекислый газ, острая пища, большая подвижность;

В) переутомление, употребление большого количества воды.

Выберите книгу со скидкой:

Подарочный набор "Кисти и краски(4 по цене 2)"

350 руб. 297.00 руб.

Рисование головы и рук

350 руб. 1087.00 руб.

3D-рисование. Гиперреализм Рисунки, которые оживают

350 руб. 553.00 руб.

Изобразительное искусство.3 класс. Рабочий альбом

350 руб. 148.00 руб.

История цвета. Как краски изменили наш мир (новое оформление)

350 руб. 1025.00 руб.

350 руб. 1087.00 руб.

Радиевые девушки. Скандальное дело работниц фабрик, получивших дозу радиации от новомодной светящейся краски

350 руб. 427.00 руб.

Совушки. Раскраски, поднимающие настроение (ПР)

350 руб. 96.00 руб.

350 руб. 1087.00 руб.

Совушки. Раскраски, поднимающие настроение

350 руб. 283.00 руб.

Котики. Раскраски, поднимающие настроение

350 руб. 283.00 руб.

В цветочном вальсе. Открытки-раскраски

350 руб. 225.00 руб.

БОЛЕЕ 58 000 КНИГ И ШИРОКИЙ ВЫБОР КАНЦТОВАРОВ! ИНФОЛАВКА

Бесплатный
Дистанционный конкурс "Стоп коронавирус"

• Панютина Ирина НиколаевнаНаписать 18924 06.05.2016

Номер материала: ДБ-069612

Добавляйте авторские материалы и получите призы от Инфоурок

Еженедельный призовой фонд 100 000 Р

06.05.2016 941

06.05.2016 900

06.05.2016 9603

06.05.2016 910

06.05.2016 1320

06.05.2016 482

06.05.2016 618

Не нашли то что искали?

Вам будут интересны эти курсы:

[youtube.player]

Возможность ПЦР-диагностики инфекций мочевыводящих путей, вызванных бактериальными возбудителями.

Инфекции мочевыводящих путей (ИМП) продолжают оставаться одними из самых распространенных бактериальных инфекций человека. Наиболее частыми возбудителями являются Escherichia coli, реже встречаются другие представители семейства Enterobacteriaceae, бактерии родов Staphylococcus, Enterococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Acinetobacter. Роль грамположительной флоры увеличивается при развитии хронических заболеваний или госпитальных инфекций. Более чем у 20% больных наблюдается ассоциация микробов, при этом грамотрицательные бактерии чаще сочетаются с грамположительными (например: E. сoli и E. faecalis).

ИМП у женщин встречаются гораздо чаще, чем у мужчин, что обусловлено анатомическим строением мочевыделительной системы. В год в среднем 8–15% взрослых женщин страдают от ИМП, тогда как встречаемость ИМП у мужчин той же возрастной группы примерно 1% в год. Серьезную проблему представляет ОИМП (осложненные инфекции мочевыводящих путей), к которым относятся заболевания, характеризуемые наличием функциональных или анатомических патологий в организме. Пациенты, страдающие ОИМП, более остальных склонны к быстрому развитию инфекционного процесса, который, в свою очередь, требует принятия быстрого решения о назначении адекватной терапии.

Диагноз ИМП ставится на основании клинических симптомов и результатов лабораторной диагностики. В качестве методов диагностики ИМП в клинических лабораториях используют проточные цитометры, микроскопию с окрашиванием по Граму, микробиологические методы исследования мочи. Посев мочи на наличие бактерий остается референсным методом исследования, давая представление о качественном и количественном составе микрофлоры, а также чувствительности выделенного микроорганизма к антибиотикам. Однако, данный метод является достаточно длительным и трудоемким, помимо того существует ряд возбудителей (анаэробная флора, L-формы микроорганизмов), культивирование которых представляет особенную сложность и часто не доступно для клинических лабораторий.

С диагнозом ИМП в микробиологическую лабораторию для рутинной обработки поступает большое количество анализов, требующих разработки и применения быстрых и чувствительных методов обнаружения бактерий в моче. В первую очередь это относится к таким группам пациентов, как беременные, пациенты с бессимптомной бактериурией, дети. Для сокращения времени выдачи результатов актуальной задачей является разработка нового скринингового метода, который позволит быстро выявить отрицательные образцы мочи и даст представление о видовом составе патогенов в исследуемом материале. В этой связи наиболее перспективным выглядит метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который позволяет быстро и точно проводить идентификацию бактерий путем анализа генетического материала микроорганизмов.

Целью данной работы была оценка возможности нового скринингового метода идентификации патогенов в моче путем количественной ПЦР в режиме реального времени и сравнение полученных результатов с микробиологическими методами исследования.

Материалы и методы

Микробиологические исследования. Образцы мочи поступали в микробиологическую лабораторию для посева на микрофлору. Посев производили на неселективную среду Уриселект 4 (Bio-Rad, США) для изолирования и подсчета микроорганизмов из мочевого тракта; прямой идентификации E. coli (розовые колонии), Enterococcus spp (синие колонии), Proteus mirabilis (коричневые колонии); предварительной идентификации KES-группы (Klebsiella, Enterobacter, Serratia). Также посев производили на 5% кровяной агар для выделения бактерий рода Streptococcus и определения гемолитических свойств микроорганизмов.

Культивировали при 37 °С в течение 24 часов при аэробных условиях. Выросшие бактерии, количество которых на чашке превышало 10*4 КОЕ/мл, считались возбудителями инфекции. При наличии роста проводили идентификацию выросших микроорганизмов методом MALDI ToF масс-спектрометрии с применением анализатора Autoflex III Smartbeam (Bruker Daltonics, Германия)и программного пакета MALDI Biotyper 3.1 (Bruker Daltonics, Германия).

Количественная ПЦР в режиме реального времени. Для определения концентрации микробной ДНК в исследуемом образце использовали плазмидные конструкции с клонированной последовательностью целевого продукта ДНК соответствующего возбудителя, растворенные в ТЕ-буфере (10mM Tris-HCl, pH 8,0; 1mM EDTA). Количество копий (геном-эквивалентов) плазмидной ДНК в стоковом растворе соответствовали концентрации 10*10 копий/мл. Затем путем 10-кратных разведений были приготовлены растворы с концентрацией ДНК 10*8—10*2 копий/мл, которые использовали для построения калибровочных кривых. Постановку ПЦР и интерпретацию полученных данных проводили на приборе iCycler IQ5 (BioRad, США) по следующей программе: 94 °С – 1,5 минуты, затем 40 циклов: 95 °С – 10 секунд (денатурация), 64 °С – 11 секунд (отжиг праймеров), 72 °С – 20 секунд (элонгация). Детекция продуктов прибором осуществляется автоматически в каждом цикле амплификации. На основе этих данных управляющая программа строит кривые накопления флуоресцентного сигнала по каждому из заданных для образцов каналу. Для расчета количества геном-эквивалентов соответствующих микроорганизмов в клинических образцах параллельно проводили реакцию амплификации с калибровочными образцами в концентрации от 10*8 до 10*2 копий/мл гена 16S rRNA.

Перерасчет количества геном-эквивалента в анализируемых образцах проводили с учетом копийности гена 16S rRNA для каждого детектируемого микроорганизма: Enterococcus sp, Streptococcus sp , Pseudomonas aeruginosae – 4 копии гена, Staphylococcus aureus – 5 копий, E. coli, Proteus sp, Serratia sp – 7 копий и Enterobacter sp – 8 копий гена. Все образцы, цикл выхода которых был ниже 35, считались отрицательными. По завершении всех действий программа автоматически рассчитывает точки пересечения кривых накопления флуоресцентного сигнала каждого образца с пороговой линией, строит калибровочную кривую и рассчитывает концентрацию ДНК в исследуемых образцах.

Результаты

Согласно результатам микробиологических посевов в 95 образцах мочи (95/200, 47,5%) роста микроорганизмов не наблюдалось, в 70 образцах (70/200, 35%) обнаружен один бактериальный возбудитель. В 35 образцах мочи (35/200, 17,5%) выявлены полимикробные инфекции, из них в 7 образцах (7/35, 20%) обнаружено более двух патогенов. В случаях мономикробной инфекции наиболее часто выявлялись Escherichia coli (27/70, 38,6%), Enterococcus faecalis (20/70, 28,6%) и Enterococcus faecium (8/70, 11,4%). В 4,3% (3/70) единственным выявленным возбудителем были коагулазонегативные стафилококки, в 2,9% (2/70) — Streptococcus spp. Бактерии KES-группы (Klebsiella, Enterobacter, Serratia) в моноинфицированных образцах обнаруживались в 10% случаев (7/70). В оставшихся образцах 4,3% выделенных возбудителей пришлось на долю Candida spp (2/70, 2,9%) и Pseudomonas mosselii (1/70, 1,4%). Среди образцов с полимикробными инфекциями в случаях выявления двух возбудителей доминировало сочетание E. сoli и E. faecalis (11/35, 31,4%). В 6 случаях обнаруживались сочетания бактерий E. coli/K. pneumonia (4/35, 11,4%), и E . faecаlis /Streptococcus spp. (2/35, 5,7%). При выявлении трех и более возбудителей сочетание E. coli / E. faecalis /Staphylococcus spp. было наиболее часто встречаемым (3/7, 42,9%).

Результаты ПЦР. Методом количественной ПЦР в режиме реального времени в 123 образцах (123/200, 61,5%) возбудителей не обнаружено. Из 77 положительных образцов (77/200, 38,5%) один бактериальный возбудитель выявлен в 48 образцах мочи (48/77, 62,3%), два возбудителя — в 16 образцах (16/77, 20,8%), три и более — в 13 образцах (13/77, 16,9%). Среди мономикробных образцов мочи согласно результатам ПЦР бактерии E. coli детектированы в 28 образцах (28/48, 58,3%), в 10 образцах (10/48, 21,8%) обнаружены бактерии рода Enterococcus, в 8 — бактерии группы KES (8/48, 16,7%), в 1 — Staphylococcus aureus (1/48, 2,1%), в 1 – Pseudomonas aeruginosa (1/48, 2,1%). При полимикробных инфекциях методом ПЦР сочетания E. coli и бактерий рода Enterococcus выявлены в 6 образцах (6/16, 37,5%). Сочетания E. coli и бактерий родов Enterobacter/Klebsiella, а также Enterobacter spp/Klebsiella spp и Enterococcus spp обнаруживались с одинаковой частотой – 3/16, 18,75%. При выявлении трех возбудителей одновременно доминирующим сочетанием было E. coli/Enterococcus spp/(Enterobacter spp/Klebsiella spp) – 7/13, 53,8%.

Обсуждение результатов

В последнее время появляется все больше информации об успешном применении метода ПЦР в качестве быстрой диагностики заболеваний, причиной которых являются бактериальные возбудители. В представленном исследовании рассмотрена возможность применения количественной ПЦР в режиме реального времени для быстрого обнаружения патогенов в моче пациентов с ИМП и бактериурией. Сравнение нового скринингового и традиционного культурального методов исследования мочи показало как сравнительное преимущество, так и ограничения в применимости обоих методов.

Основным недостатком стандартного бактериологического метода диагностики является длительность его исполнения, иногда превышающая 48 часов. В связи с долгосрочностью анализов зачастую пациентам назначается эмпирическая, часто неадекватная антибактериальная терапия либо до получения результатов идентификации патогена в моче, либо вообще без проведения каких-либо процедур, направленных на выявление возбудителя, а также установления его лекарственной чувствительности. Подобная терапия может увеличивать риск развития осложнений. Например, проведенные ранее исследования доказали, что каждый час задержки адекватной противобактериальной терапии пациентов с септическим шоком снижает уровень выживаемости на 8 %. Особенно критично данное положение у пациентов пожилого возраста, детей и лиц с иммунодефицитом.

В сравнении с культуральным методом получение результатов идентификации патогенов методом ПЦР занимает 4–5 часов, что может способствовать раннему назначению этиотропного лечения.

Важным критерием для постановки правильного диагноза является точность идентификации и подсчет количества микроорганизмов в клиническом материале. При подозрении на ИМП и бактериурию нередко в моче обнаруживается полиинфекция. Культуральный метод с применением селективных сред при полимикробной инфекции не лишен погрешностей в связи с невозможностью подбора оптимальных условий культивирования всех возбудителей инфекции, а проведение дополнительных биохимических тестов для определения видовой принадлежности бактерии является процессом трудоемким, дорогостоящим и долговременным.

Enterobacteriaceae. При дальнейшем исследовании культура была идентифицирована как Escherichia coli в первом случае и Klebsiella pneumoniae во втором методом масс-спектрометрии.

Традиционно, клинически значимым количеством патогенов в моче является 10*4 КОЕ/мл. В последние годы согласно рекомендациям Американского Сообщества Микробиологов (ASM, American Society for Microbiology) и European urinalysis guideline количество патогенов в моче ≥103 КОЕ/мл может интерпретироваться как причина возникновения ИМП или бактериурии, особенно если в моче присутствуют грамотрицательные бактерии (E. coli, Enterobacter spp, P. mirabilis, P. aeruginosa, Serratia marcescens, K. pneumoniae и др.). Мы также проверили значимость полученных данных, принимая во внимание содержание клеток в моче от 10*3 КОЕ/мл и выше.

Более значимые изменения в результатах наблюдались при исследовании полимикробных образцов с учетом снижения порога до 10*3. Частота обнаружения ДНК E. coli в смешанных образцах возросла с 21 до 29, тогда как результаты микробиологических посевов мочи не изменились. Значительно увеличилось количество детектированных бактерий рода Enterococcus (с 22 до 34 методом ПЦР), Enterobacter spp и Klebsiella spp (с 16 до 25 методом ПЦР) в полимикробных пробах. Также почти в 2 раза возросла частота обнаружения бактерий рода Serratia (с 3 до 7).

В 29 образцах при отсутствии роста микроорганизмов на питательных средах методом ПЦР-диагностики дополнительно было выявлено 42 патогена в количестве 10*3 – 10*4 геном-эквивалентов/мл. Из них 13 были мономикробные образцы и 16 - полимикробные. Среди моноинфицированных проб чаще всего выявляли представителей семейства Enterobacteriaceae (3 E. coli, 6 бактерий KES-группы), энтерококки детектировали в 3 случаях, стрептококки — в 2 случаях, P. aeruginosa – 1, и S. aureus – 1. При анализе 16 полимикробных образцов мочи дополнительно методом ПЦР выявлены бактерии семейства Enterobacteriaceae (E. coli – в 4 случаях, бактерии группы KES – в 9), Enterococcus spp – в 6 случаях, P. aeruginosa — в 3, S. aureus – в 2, Proteus spp — в 1 и стрептококки – в 1. Согласно данным, представленным в ASM

Опираясь на количественные данные, мы сопоставили количество КОЕ/мл, полученные при культуральном методе идентификации, и количество геном-эквивалентов/мл каждого микроорганизма, полученных при пересчете данных после ПЦР. В 11 случаях количество геном-эквивалентов E. coli в мл превышало количество КОЕ, выросших на чашках, на 1,5–2 порядка, других патогенов семейства Enterobacteriaceae — в 9 пробах, энтерококки — в 8 образцах мочи, Proteus spp — в 2, S. aureus и P. aeruginosa – в 1. Мы полагаем, что подобные результаты могут быть получены вследствие начала приема антибактериальных препаратов, назначенных до сдачи мочи на анализ и получения результатов выделения патогенов в моче. При наличии инфекции прием антибактериальных препаратов приводит к уменьшению количества заселяющих мочевыводящий тракт микроорганизмов, вследствие чего титр жизнеспособных клеток в моче при микробиологическом посеве будет ниже. Так как при выделении ДНК все бактериальные клетки подвергаются лизису, количество геном-эквивалентов рассчитывается, исходя из тотального количества ДНК в пробе, что не отражает жизнеспособности бактерий. Принимая во внимание, что моча является достаточно агрессивной средой, не пригодной для нормальной жизнедеятельности микроорганизмов, количество мертвых клеток в моче могло увеличится также вследствие несоблюдения правил хранения и транспортировки проб мочи с момента взятия материала до момента проведения анализа. Полагая, что бактерии могли погибнуть в моче вследствие длительной транспортировки или при неправильном хранении пробы, можно ожидать, что первоначальный титр жизнеспособных клеток в моче был выше, что дает основания рассматривать результаты ПЦР как истинные, а результаты посевов как ложноотрицательные или заниженные. Особенно актуальным остается этот вопрос при выявлении грамотрицательной флоры. В 12 образцах при наличии роста микроорганизмов на питательных средах методом ПЦР искомых патогенов обнаружено не было. В 8 случаях преобладала грамположительная флора: в 1 полимикробной пробе мочи, поступившей от беременной, были детектированы 2 патогена в количестве 10*4 КОЕ/ мл: E. faecalis и Streptococcus agalactiae, у 6 пациентов обнаружен энтерококк в титре от 10*4 до 10*5, в 2 пробах детектированы S. agalactiae 10*5 КОЕ/ мл.

[youtube.player]