Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота лабораторная диагностика

Вирус инфекционного ринотрахеита (ИРТ) КРС относится к семейству Herpesviridae, подсемейству Alphaherpesvirinae, роду Varicellavirus.

В антигенном отношении вирус ИРТ КРС не однороден, существуют варианты. Между вирусами ИРТ КРС и БА существует АГ родство. В организме животных вирус вызывает образование ВНА, КСА. Вирус обладает ГА свойствами в отношении мышиных эритроцитов.

Лабораторная диагностика влючает: 1) выделение вируса из патологического материала в культуре клеток и его идентификации в РН или РИФ; 2) обна­ружение антигена вируса ИРТ в патологическом материале РИФ; 3) выявление антител в сыворотке крови больных и переболевших животных (ретроспек­тивная диагностика) в РН или РНГА. Для лабораторной диагностики ИРТ используют набор диагностикумов инфекционного ринотрахеита крупного ро­гатого скота и набор эритроцитарного диагностикума для серодиагностики ИРТ крупного рогатого скота в РНГА.

Диагностику инфекционного ринотрахеита проводят параллельно с иссле­дованием материала на парагриппозную (ПГ-3), аденовирусную
(1 и 11), респираторно-синцитиальную инфекции и вирусную диарею. Схема проведения лабораторной диагностики ИРТ аналогична применяемой при диагностике аденовирусной инфекции.

Предварительный диагноз на инфекционный ринотрахеит крупного рога­того скота ставят на основании положительных результатов обнаружения ан­тигена в патологическом материале РИФ с учетом эпизоотологических и кли­нических данных, а также патологических изменений.

Окончательный диагноз ставят на основании совпадения результатов РИФ с выделением и идентификацией вируса; совпадения результатов РИФ с обнаружением антител в 30% и более вторых проб сывороток в титрах не ниже 1:2 в РН и 1:16 в РНГА и обнаружением 4-кратного и более увеличения титра антител в парных пробах сывороток. Предварительный диагноз ставят в ветеринарных лабораториях в течение 2-3 дней, окончательный — в течение 15-30 дней.

Выделение вируса.Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют патологический материал, взятый в течение первых 2-
3 дней болезни при вы­раженной клинической картине болезни или с диагностической целью непо­средственно при убое от животных с острой стадией заболевания.

От больных животных берут 15-20 проб: смывы со слизистой оболочки носовой полости, глаз, влагалища, препуция, пробы спермы. Для смывов ис­пользуют стерильные ватно-марлевые тампоны; смывы с препуциальной поло­сти и сперму берут в соответствии с Методическими указаниями по отбору проб, транспортированию и подготовке к вирусологическому исследованию спермы и смыва с препуциальной полости быков; пробы крови, не менее 5 мл, получают в первые 3 дня болезни и через 3 нед от тех же животных в сте­рильные пробирки. Тампоны с материалом помещают в стерильные пеницил линовые флаконы или пробирки с 2-3 мл стерильного физиологического рас­твора или раствора Хенкса, содержащего от 500 до 1000 ЕД/мл антибиотиков (канамицин, мономицин, неомицин, пенициллин, стрептомицин и др.).

После свертывания крови стерильно сливают 2-3 мл сыворотки и достав­ляют последнюю в лабораторию.

От животных, убитых с диагностической целью, берут с соблюдением пра­вил асептики кусочки легких с бронхом (на границе пораженного и здорового участков), селезенки, средостенные, бронхиальные и брыжеечные лимфатиче­ские узлы, миндалины, пораженные участки слизистых оболочек носовой и ро­товой полостей, трахеи, желудочно-кишечного тракта, а также пробу крови, от абортированных плодов — кусочки паренхиматозных органов. Кусочки ма­териала массой до 20 г помещают в стерильную посуду.

Консервирование патологического материала, доставка в лабораторию и его подготовка к исследованию такие же, как при диагностике аденовирусной инфекции.

Заражение животных. Делают очень редко с целью идентифика­ции вируса инфекционного ринотрахеита. Телятам 6-8-месячного возраста патологический материал вводят интраназально в вагину, под кожу и наносят на конъюнктиву. Если в исследуемом материале есть вирус, у зараженных животных развивается ринотрахеит с конъюнктивитом. От больных телят ви­рус выделяют главным образом из пораженной трахеи и гортани. У инфици­рованных животных развиваются симптомы, сходные с наблюдаемыми при естественном течении болезни. Первые клинические признаки болезни появля­ются через 20 ч после инфицирования и регистрируются 7-10 дней. Заражен­ные телята, как правило, выздоравливают и остаются вирусоносителями.

Выделить вирус из носовой полости, влагалища и с конъюнктивы удается с 5-го по 10-й день, а нейтрализующие антитела — с 5-8-го дня после зара­жения. Более высокий титр антител наблюдается после 35 дней, затем начи­нается медленное снижение.

Установлено, что максимальное количество вируса выделяется во время подъема температуры тела на 4-7-й день болезни и продолжается до 10- 14 дней.

Индикация и идентификация вируса.Обнаружение специфических телец-включений. В ядрах клеток эпителия пораженных слизистых оболочек носовой полости, вульвы, ва­гины и конъюнктивы находят специфические тельца-включения. Через 18-20 ч после заражения их можно обнаружить и в клетках зараженной культу­ры ткани, окрашенной гематоксилин-эозином. Биопроба.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

[youtube.player]

Экономический ущерб причиняемый ИРТ животноводству довольно значительный и определяется падежом животных (болезнь охватывает 5-100% животных стада, летальность достигает 3-18%), убытками в связи с вынужденным убоем, снижением и потерей молочной продуктивности, затратами на проведение ветеринарных мероприятий.

Возбудитель болезни — герпетический вирус, который в большом количестве содержится в слизистых оболочках верхних дыхательных путей, вульвы и вагины, в тканях препуция и пениса. Температура 56 градусов инактивирует вирус через 20минут, при температуре 37 градусов в течении 10дней, солнечные лучи убивают вирус через 48 часов. Раствор формалина 1:500 убивает вирус через 24часа. Ацетон, эфир, хлороформ и этиловый спирт убивает вирус моментально.

Эпизоотические данные. В естественных условиях к инфекционному ринотрахеиту восприимчив только крупный рогатый скот любого возраста. Заболеванию наиболее подвержен молодняк старше одного года. Основным источником заболевания являются больные животные и латентные вирусоносители. При попадание в неблагополучное хозяйство восприимчивые животные заболевают в течение 10-14 дней.

Распространение заболевания происходит контактно, интраназально, воздушно-капельно, со спермой, через инфицированные корма, предметы обихода, обслуживающий персонал, выгулы, загоны, прогонные трассы и пастбища, водоемы, транспортные средства. Распространению болезни способствуют скученное содержание скота и вольная случка. Особенно опасны быки-производители, переболевшие генитальной формой ИРТ.
В механическом разносе инфекции могут принимать участие даже невосприимчивые к ней виды животных, птица и насекомые.

Инфекционный риноторахеит наблюдается во все времена года, независимо от климатических условий. Однако наиболее часто ее вспышки происходят осенью, зимой и весной. Первые случаи ринотрахеита в хозяйстве обычно появляются приблизительно через 3 недели (чаще 1-3 месяца) после его заноса в хозяйство. После чего болезнь среди контактируемого поголовья быстро распространяется (2-3недели), охватывая практически все восприимчивое поголовье, и принимает размеры эпизоотии, продолжающейся обычно 4-6недель. В то же время в откормочных хозяйствах ИРТ может длится несколько месяцев, принимая хроническое течение.

Патогенез. Вирус ИРТ обладает выраженным тропизмом к эпителиальным клеткам органов дыхания и размножения. Вирус репродуцируется, вызывая гибель и слущивание клеток, в результате чего образуются эрозии в респираторном тракте; узелки и пустулы на слизистой половых органов. Адсорбируясь на лейкоцитах, вирус проникает в лимфатические узлы, а затем в кровь. Вследствие этого развивается угнетение и лихорадка. При прохождении гематоэнцефалитического и плацентарного барьера патологические изменения развиваются в мозге, плаценте, матке, плоде. Это приводит к гибели плода в последнем триместре стельности. ИРТ КРС зачастую протекает в ассоциации с парагриппом-3, вирусной диареей, пастереллезом, сальмонеллезом и др.

Клинические признаки. Клиническое проявление ИРТ у крупного рогатого скота зависит от путей проникновения, физиологического состояния и возраста животных.

Инкубационный период при экспериментальном заражении телят колеблется от двух до семи дней, а при спонтанной инфекции достигает 2-12 дней и более (до 40дней).

Различают острое, подострое и хроническое течение и следующие формы формы болезни: респираторную, генитальную, кератоконьюктивальную, менингоэнцефалитную и атипичную (энтеритная или эмфиземная).

Респираторная форма. Острое течение наблюдается главным образом у откормочного поголовья молодняка. Болезнь начинается с резкого повышения температуры тела до 40,5-41,7 градусов. Затем у животного появляется обильная саливация, серозное истечение из носа, иногда с незначительной примесью крови, гиперемия носового зеркальца и слизистой оболочки носовой полости. Дыхание у больного животного становится учащенным, поверхностным, во время движения больного животного отмечаем ярко выраженную одышку, которая обусловлена скоплением экссудата в носовой полости, гортани и трахеи, сухой кашель. Спустя сутки на гиперемированной слизистой оболочке носа могут появляться светлые зоны с мелкими очагами некроза и поверхностными, незначительными язвами. Истечение из носовой полости становится гнойным, а выдыхаемый воздух зловонным. У отдельных животных развивается коньюктивит, появляется понос, мутнеет роговица. У больного животного развивается общее угнетение, ухудшается или полностью пропадает аппетит, у коров снижается лактация, наступает истощение, у стельных животных могут быть аборты. Прогрессирует упадок сил, больное животное больше лежит и в последующем без посторонней помощи не может подняться. Смерть у больных ИТР обычно наступает от секундарной бактериальной бронхопневмонии. Выздоровевшие животные восстанавливают свои весовые кондиции только спустя несколько месяцев.
Острому течению болезни сопутствует ее быстрое распространение. В результате в течение первых 10 дней больными оказываются почти все поголовье неблагополучной группы. Летальность при остром течении достигает 2-10% и более.

Подострое течение ИРТ сопровождается меньшим охватом поголовья (10-15%) неблагополучного стада и невысокой летальностью (1-2%). При этом максимальный подъем энзоотической вспышки наступает к 15-му дню, затем наступает спад, и спустя 30-40 суток вспышка ИРТ почти прекращается.

ИРТ более доброкачественно протекает у лактирующих животных. Болезнь у них характеризуется коротким периодом (1-2дня) умеренной лихорадки. При этом слюнотечение и истечение из носовой полости незначительны и непродолжительны, животные спустя 10-15 дней клинически полностью выздоравливают, восстанавливая при этом свою молочную продуктивность.

Хроническое течение ИРТ обычно имеет место в конце энзоотии, являясь следствием перехода острых и подострых случаев болезни. Болезнь может продолжаться свыше 1,5 месяцев при меньшей выраженности симптомов. В случае осложнения ИРТ вторичной инфекцией выздоровление больного животного наступает медленнее.

Генитальная форма ИРТ у маточного поголовья проявляется отказом от корма, снижением продуктивности, гиперемией и отеком слизистой вульвы и влагалища. В дальнейшем появляются везикулы, пустулы и развивается пустулезный вульвовагинит с развитием язв. У быков патологический процесс локализуется на слизистой оболочке препуция.

Атипичная форма ИРТ характеризуется тем, что при ней, кроме характерных клинических признаков, у больных животных развивается подкожная эмфизема, которая распространяется вдоль живота и бедер. У больного животного в результате поражения кишечника возникает понос. Стельные животные нередко абортируют. К этой же форме относятся и те случаи ИРТ, когда болезнь проявляется только коньюктивитами.
После переболевания животные выделяют вирус в течение 2-4 недель.

Патологоанатомические изменения. Основные патологоанатомические изменения у больных ИРТ животных локализуются в носовой полости, гортани, глотке и трахее. Слизистая оболочка носовой полости гиперемирована и припухшая, слизистые глотки и гортани гиперемированы. При остром течении ИРТ на слизистых оболочках часто обнаруживают гнойно-фибринозные пленки, которые легко удаляются с поверхности слизистых оболочек, иногда слизистая оболочка бывает очагово некротизирована. Нередко слизистые оболочки глотки, гортани и трахеи покрыты гнойно-фибринозным экссудатом. Легкие и бронхи часто заполнены пенистой жидкостью. У отдельных павших животных выявляем эмфизему легких и бронхопневмонию. Часто у павших животных выявляем острое воспаление и изъязвление слизистой оболочки сычуга и в различной степени выраженное воспаление кишечника.

Селезенка слегка увеличена в размере и дряблая. Заглоточные, шейные, предлопаточные и в особенности медиастинальные и перибронхиальные лимфатические узлы увеличены, геморрагичны и отечны. В каждом случае при патвскрытии под капсулой селезенки, под эндокардом и эпикардом находим кровоизлияния. Сосуды головного мозга переполнены кровью.

Диагноз. Предварительный диагноз на ИРТ ставится на основании клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных. Окончательный диагноз ставится на основании лабораторных исследований.

Для прижизненной диагностики в вирусологическую лабораторию направляют от 5 до 8 проб истечений из носовой полости, глаз, каловые массы от животных с клиническими проявлениями заболевания, а также сыворотку крови от больных и переболевших животных; от вынужденно убитых, павших — кусочки носовой перегородки, трахеи, легких, печени, селезенки, мозга, регионарных лимфатических узлов, взятых в течение первых 2 часов после гибели; от абортированных плодов — паренхиматозные органы, плодные оболочки.

Для диагностики используют метод иммунофлюоресценции, РТГА, ИФА и ПЦР-диагностику.

Дифференциальный диагноз. ИРТ необходимо дифференцировать от вирусной диареи, ящура, злокачественной катаральной горячки, парагриппа-3, адено-вирусной и респираторно-синтоциальной инфекции, пастереллеза, хламидиоза.

Лечение. Лечение ИРТ как и других заболеваний животных должно проводится комплексно. В качестве специфических средств применяют гипериммунную сыворотку, сыворотку для лечения и профилактики инфекционных пневмоэнтеритов у телят, а также кровь и сыворотки животных-реконвалисцентов, сыворотку крови животных неспецифическую с содержанием антител к вирусу ИТР в титре не ниже 1:32. Данные препараты вводят больным животным подкожно в 2-3 точки в дозе 2мл/кг массы животного (но не более 200мл), интраназально по 2-4 в каждую ноздрю, интратрахеально в составе лекарственной смеси, а также аэрозольно в дозе 1-4 мл/м квадратный помещения.

С целью профилактики осложнений бактериальной микрофлорой используют антибиотики и сульфаниламидные препараты с учетом эффективности их действия на патогенную микрофлору верхних дыхательных путей больного животного. Антибиотики и сульфаниламидные препараты для лечения применяют в форме аэрозолей (групповой метод) и парентерально (индивидуальное лечение). Дополнительно используют общеукрепляющие и симптоматические средства, проводят аэрозольные дезинфекции помещений в присутствии животных хлорскипидаром, молочной кислотой, перекисью водорода и др.

При лечении генитальной формы назначают нитрофурановые и сульфаниламидные препараты, антибиотики в виде мазей и растворов. Запрещается использование для воспроизводства быков.

Эффективность лечебных мероприятий во многом зависит от обеспечения животных полноценным рационом кормления и создания нормальных условий содержания.

Иммунитет и специфическая профилактика.

Переболевшие ИРТ животные приобретают активный иммунитет. У животных, переболевших респираторной формой ИРТ, иммунитет более продолжительный (не менее 1,5-2лет), чем у животных переболевшим пустулезным вульвовагинитом.

Мероприятия по профилактике и ликвидации ИРТ.

Мероприятия по профилактике и ликвидации ИРТ в хозяйстве проводятся в соответствии с инструкцией о мероприятиях по профилактике иликвидации заболевания крупного рогатого скота инфекционным ринотрахеитом- пустулезным вульвовагинитом. (Утвержденной Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 26 июля 1984г.).

[youtube.player]

3. БОЛЕЗНИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

ВИРУСНЫЕ РЕСПИРАТОРНО-КИШЕЧНЫЕ ИНФЕКЦИИ

3.5. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ВИРУСНЫХ РЕСПИРАТОРНО-КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

РЕКОМЕНДОВАНЫ 25 июля 1978 г., б/н

1. Общие положения

1. Общие положения

1.1. Настоящие Методические указания распространяются на следующие вирусные респираторно-кишечные инфекции (пневмоэнтериты) крупного рогатого скота: инфекционный ринотрахеит (ИРТ), парагрипп-3 (ПГ-3), вирусную диарею (ВД), аденовирусную инфекцию (адено), респираторно-синцитиальную инфекцию (PC), грипп.

1.2. Лабораторная диагностика вирусных респираторно-кишечных инфекций заключается в:

- обнаружении антигена в патологическом материале методами иммунофлуоресценции (ИФ), реакции связывания комплемента (РСК), реакции диффузионной преципитации (РДП);

- выделении возбудителя из патологического материала в культуре клеток или на куриных эмбрионах и его идентификации в одной из серологических реакций: РСК, РДП, реакции торможения гемагглютинации (РТГА), реакции торможения гемадсорбции, (РТГАд), реакции нейтрализации (РН), реакции торможения непрямой гемагглютинации (РТНГА), ИФ;

- выявлении антител в крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в одной из серологических реакций: реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), РДП, РН, РТГА, РСК, реакции нейтрализации вирусных гемагглютининов (РНВГ).

1.3. Схема исследований при лабораторной диагностике вирусных респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота (см. стр.209, 210).

1.4. При лабораторной диагностике вирусных респираторно-кишечных инфекций крупного рогатого скота используют соответствующие каждой инфекции диагностические наборы, выпускаемые биологической промышленностью.

1.5. Диагностика вирусных пневмоэнтеритов проводится параллельно с исследованием материала на бактериальные и хламидийную инфекции.

1.6. Лабораторный диагноз на вирусные респираторно-кишечные инфекции ставится на основании положительных результатов обнаружения антигена в патологическом материале с помощью одной из серологических реакций (ИФ, РДП, РСК) или выделения и идентификации возбудителя в одной из реакций, указанных в схеме п.1.3, или установления четырехкратного прироста антител в крови переболевших животных.

Идентификация вируса (реакция)

Ретроспек-
тивная диагностика

исследуемый патологический материал

Слизистая носа, трахеи, легкие, головной мозг, органы абортированного плода

В культуре клеток:

Слизистая носа, трахеи, легкие, селезенка

В культуре клеток:

ПЭК, ПТ, ТБ, ЛЭК, СЭК

ИФ, РТГА, РГАд, РТГАд

Слизистая носа, кишечника, преджелудков, трахеи, легкие, почка

В культуре клеток:

В культуре клеток:

ИФ, РСК, РДП, РТНГА

Респираторно-
синцитиальная инфекция

Слизистая носа, трахеи, легкие

В культуре клеток:

На куриных эмбрионах

Обозначения: ПЭК - почка эмбриона коров; ПТ - почка телят; ТБ - тестикулы бычков; СЭК - селезенка эмбриона коров; ЛЭК - легкие эмбриона коров.

Диагноз на вирусные пневмоэнтериты считают установленным по результатам лабораторного исследования с учетом эпизоотологических и клинических данных и патологоанатомических изменений.

1.7. Для постановки лабораторного диагноза путем обнаружения антигена в патологическом материале требуется 2. 3 дня, с помощью выделения вируса и его идентификации - до 30 дней, а путем выявления прироста антител в крови животных - от 2 до 4 недель.

2. Взятие и подготовка материала для исследования

2.1. В лабораторию для исследования направляют патологический материал от больных животных, взятый в период максимального проявления у них клинических признаков (температурная реакция, угнетение, воспалительные процессы в верхних дыхательных путях, сопровождающиеся серозными или слизистыми истечениями из носовой полости, поносы, иногда аборты), или от вынужденно убитых или павших животных, взятый не позднее чем через 2 ч после их гибели.

2.2. От больных животных берут: 1) тампонами мазки со слизистой носовой полости (при ИРТ - со слизистой глаз, влагалища, препуция) для реакции иммунофлуоресценции и для выделения возбудителя; 2) фекалии - для выделения возбудителя и 3) пробы крови - для выявления в ней титра антител.

Тампоны с материалом помещают в пенициллиновые флаконы с 2…5 мл питательной среды для культуры клеток или раствора Хенкса, содержащие 1000 ЕД/мл пенициллина и 1000 мкг/мл стрептомицина.

Кровь в объеме не менее 5,0 мл берут в пробирки, после свертывания доставляют в лабораторию.

2.3. От павших и вынужденно убитых животных берут кусочки носовой перегородки, трахеи, легких, селезенки, почки, средостенные и брыжеечные лимфатические узлы и при поносах - кусочки тонкого отдела кишечника. От абортированных плодов берут кусочки паренхиматозных органов, околоплодную жидкость.

2.4. Флаконы с патологическим материалом доставляют в лабораторию в термосе со льдом.

2.5. В лаборатории флаконы с тампонами встряхивают 2. 3 мин, тампоны отжимают и удаляют, а содержимое флакона центрифугируют при 2 тыс. об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную пробирку, куда вносят по 500 ЕД/мл пенициллина и 500 мкг/мл стрептомицина, выдерживают при 4°С в течение 2. 4 ч и используют для заражения культуры клеток или куриных эмбрионов. Из осадка центрифугата готовят мазки для исследования методом иммунофлуоресценции.

2.6. Флаконы с фекалиями замораживают при температуре -20°С (в морозилке холодильника) в течение 18 ч, после чего оттаивают при 37°С и центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильную пробирку, вносят 1000 ЕД/мл пенициллина, 1000 мкг/мл стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина, выдерживают при 4°С в течение 2. 4 ч, дополнительно центрифугируют и используют для заражения культуры клеток или куриных эмбрионов.

2.7. Со слизистой носовой перегородки, трахеи, влагалища, бронхов и кишечника делают скальпелем соскобы, вносят их в центрифужную пробирку с 5 мл физиологического раствора и центрифугируют при 2 тыс. об/мин в течение 10 мин. Осадок клеток суспендируют в 0,5 мл того же раствора и готовят мазки на обезжиренных предметных стеклах для исследования методом иммунофлуоресценции.

Из кусочков легкого и лимфатических узлов готовят отпечатки на предметных стеклах или срезы толщиной 5 микрон для исследования тем же методом.

2.8. Из кусочков органов готовят 10. 20%-ную суспензию для выделения возбудителя и приготовления комплементсвязывающего и преципитирующего антигенов.

2.9. Для получения суспензии (с целью выделения вируса) ткань измельчают, растирают в ступке со стеклянным песком, разводят раствором Хенкса, содержащим антибиотики, центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают, выдерживают при температуре 4°С в течение 2. 4 ч и используют для заражения культуры клеток или куриных эмбрионов.

2.10. Для изготовления испытуемого комплементсвязывающего антигена ткань измельчают в ступке или специальном микроизмельчителе, разводят 1:5 содержащим антибиотики физиологическим раствором, рН 7,2. 7,4. Полученную 20%-ную суспензию замораживают при температуре -20°С в течение 16. 18 ч, быстро оттаивают при температуре 37°С, повторно растирают или гомогенизируют, а затем центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают и далее используют, как указано в п.5.1.

3. Обнаружение вирусных антигенов в патологическом материале методом иммунофлуоресценции

3.1. Метод иммунофлуоресценции для обнаружения вируса применяется при диагностике всех респираторно-кишечных инфекций, указанных в п.1.1.

3.2. Полученные мазки, отпечатки и срезы подсушивают на воздухе, фиксируют в ацетоне в течение 5 мин и окрашивают флуоресцирующими сыворотками, имеющимися в наборах диагностикумов. Каждой сывороткой окрашивают по 4 препарата из каждого органа.

3.3. Окрашивание препаратов ведут во влажной камере при температуре 37°С в течение 45 мин. Затем препараты споласкивают в трех сменах физиологического раствора, рН 7,2. 7,4, и в дистиллированной воде, подсушивают на воздухе. На препараты наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют их под люминесцентным микроскопом.

3.4. Для контроля специфичности свечения ставят реакцию подавления иммунофлуоресценции. Для этого на два препарата из органа, при исследовании которого получена положительная реакция иммунофлуоресценции, наносят соответствующую выявленному вирусу сыворотку в разведении 1:10 и выдерживают их в термостате во влажной камере в течение 30 мин.

Препараты споласкивают в трех сменах физиологического раствора, рН 7,2. 7,4, и окрашивают флуоресцирующей сывороткой.

3.5. Учет реакции. Положительным результатом исследования методом ИФ считается наличие специфической флуоресценции, которая характеризуется тем, что в препаратах, окрашенных флуоресцирующей сывороткой, ткань флуоресцирует тусклым зеленовато-серым цветом, а вирусный антиген при этом выявляется в виде ярких зеленовато-желтых различных по величине гранул или в виде диффузного свечения в цитоплазме или (при ИРТ, адено) в ядре.

В контрольных препаратах, обработанных последовательно специфической и флуоресцирующей сыворотками, специфическая флуоресценция должна отсутствовать.

Диагноз на вирусную респираторно-кишечную инфекцию ставят при обнаружении специфической флуоресценции не менее чем в трех полях зрения при наличии в каждом из них 3. 5 и более флуоресцирующих клеток или при наличии 15. 20% флуоресцирующих клеток при подсчете не менее 100 клеток в препарате. При выявлении меньшего числа флуоресцирующих клеток диагноз подтверждают исследованием антител в парных пробах сывороток крови больных животных или выделением возбудителя.

3.6. При исследовании материала от животных, привитых живыми вакцинами против инфекций, на которые проводятся диагностические исследования, положительные результаты ИФ во всех случаях следует подтверждать исследованием парных проб сывороток крови.

4. Обнаружение антигена вируса ИРТ в РДП

4.1. РДП ставят в агаровом геле.

4.2. Компоненты реакции: специфическая преципитирующая сыворотка; контрольная отрицательная сыворотка; исследуемый материал от больных животных; специфический антиген.

4.3. Агаровую среду готовят по прописи: агар - 1,0, физиологический раствор рН 7,4 - 100,0 мл. Агар расплавляют на водяной бане и разливают в чашки Петри по 25 мл или на обезжиренные предметные стекла. В слое застывшего агара при помощи штампа нарезают лунки - одну центральную и 6 вокруг нее на расстоянии 0,5. 0,7 см.

4.4. Постановка реакции. В центральную лунку вносят специфическую сыворотку, в лунки по окружности - испытуемый материал. Параллельно испытуемый материал исследуют с отрицательной сывороткой.

Контроли:

1) контрольный положительный антиген + специфическая сыворотка;

2) контрольный положительный антиген + отрицательная сыворотка.

Чашки Петри или предметные стекла помещают во влажную камеру, выдерживают при температуре 37°С в течение 18. 24 ч и затем при комнатной температуре в течение такого же времени.

4.5. Учет реакции. Реакцию считают положительной при условии образования ясно выраженной линии преципитации между лунками с исследуемым антигеном и специфической сывороткой, а также между контрольным положительным антигеном и специфической сывороткой при отрицательном результате с отрицательной сывороткой.

5. Обнаружение антигена адено в патологическом материале в РСК

5.1. Комплементсвязывающий антиген готовят из 20%-ной суспензии патологического материала, обработанной, как указано в п.2.10. Для этого к ней добавляют 1%-ный раствор гексаметафосфата натрия до конечной концентрации 0,05% и раствор 1 н. НСl для снижения рН до 4,1.

Смесь оставляют на 30 мин, а затем центрифугируют при 5 тыс. об/мин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость сливают, а осадок растворяют в 1/20 первоначального объема суспензии 0,1 М (моль/л) фосфатно-буферного раствора, рН 7,9, содержащего 0,85% хлористого натрия. Полученный раствор осветляют центрифугированием при том же режиме и исследуют в РСК с иммунными сыворотками к аденовирусу крупного рогатого скота.

5.2. Компоненты реакции: испытуемый антиген; два стандартных специфических антигена, относящиеся к двум антигенным подгруппам; отрицательный антиген; две специфических сыворотки, соответствующие антигенным подгруппам; нормальная сыворотка.

5.3. Испытуемый антиген исследуют в двукратных разведениях, остальные антигены и сыворотки - в удвоенном титре.

5.4. Постановка реакции. Реакцию ставят в пробирках в объеме 0,5 мл или используют микротитратор Такачи. РСК проводят в три этапа: титрование комплемента в чистом виде, титрование комплемента в присутствии антигенов и сывороток, главный опыт.

5.5. Для титрования комплемента во вспомогательном ряду пробирок готовят различные дозы по следующей схеме:

[youtube.player]

Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах встречается достаточно часто. При этом болезнь сопровождается серьезными экономическими убытками для фермы, резким упадком продуктивности стада, падежом животных, особенно молодняка. Поэтому каждый заводчик должен знать основные проявления развивающегося заболевания и способы его предотвращения.

Инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота

Что собой представляет болезнь?

Инфекционный ринотрахеит – это заболевание, которое поражает дыхательные пути и половые органы коров, а также может распространяться на центральную нервную систему. При отсутствии оперативных мер, инфекция вполне способна стать причиной летального исхода. Чаще всего болезнь протекает в острой форме. Особенно подвержены заражению молодые телята, возрастом до одного года.

Впервые ринотрахеит (Rinotracheitis infectiosa bovinus) был выявлен в 1950 году. Его обнаружил при обследовании скота американский ученый Миллер. Через 4 года заболевание с теми же признаками диагностировали в обследуемых стадах исследователи из США Шредер и Мойс. Они же проводили изучение природы заболевания. Но лишь в 1955 году недуг был изучен окончательно и получил свое официальное название.

На сегодняшний день ринотрахеит широко распространен в США, Африке, Австралии, большинстве стран Европы. Его возбудителем выступает особый вирус, который по своим внешним признакам и свойствам относится к герпесвирусам. Заражение происходит при попадании его в слизистую оболочку дыхательных путей или вульвы, а также в тканях препуция пениса. В отдельных случаях инфекция может дополнительно локализироваться в конъюнктиве глаза, в миндалинах или даже в мозге.

Стоит отметить, что такой вирус крайне устойчив к негативным условиям вредной среды, что еще более способствует его распространению. Под действием прямых солнечных лучей возбудитель погибает в течение двух суток. Едкий натрий способен убить инфекцию за полминуты. Этиловый спирт и хлороформ уничтожают микроорганизм мгновенно. Но, при комнатной температуре в 22 градуса возбудитель способен жить в помещении в течение 50 дней. Минусовые температуры, вплоть до экстремальных, практически не оказывают никакого влияния на вирус.

Справка. При попадании инфекции в стадо первые проявления болезни прослеживаются приблизительно через 2-3 недели. Заражение всего поголовья при отсутствии оперативных мер наступает еще через 3 недели.

Основным источником распространения вируса инфекционного ринотрахеита выступает зараженное животное. Заболеванию может подвергаться скот любого возраста, независимо от породной принадлежности. При этом инфицирование осуществляется следующими путями:

Болезнь распространяется при кучном содержании стада

1. При контакте больных и здоровых коров. Особенно быстро распространяется при кучном содержании стада.
2. Респираторным путем.
3. Через каловые массы. В процессе развития болезни возбудитель может скапливаться в кишечнике, откуда попадает во внешнюю среду. При попадании таких частиц в воду или корм происходит заражение здоровых коров.
4. Половым путем. При локализации болезни в репродуктивных органах инфекция передается при осеменении.
5. Через инвентарь для обслуживания скота, транспортные средства, одежду персонала.
6. В организме птиц, грызунов и насекомых. Причем болезнь может не развиваться у носителя, но при попадании в тело крупного рогатого скота снова становиться активной.

Не так давно было выявлено, что вирус может передаваться также и через клещей, которых животные приносят с пастбищ. Также возбудитель способен попадать в организм скота через зараженные стойла, выгоны, сохраняться длительное время в траве на пастбищах.

Наиболее благоприятным временем для развития болезни выступает период с середины осени по середину весны. Но и в летнее время случаи заболевания не являются редкостью.

При оседании на слизистых оболочках вирус постепенно проникает в их клетки и начинает активно размножаться. Вследствие этого пораженные ткани воспаляются, а через некоторое время начинают отмирать. Часть инфекции попадает в кровь. Здесь патоген прикрепляется к лейкоцитам и вместе с кровотоком распространяется по всему организму. При попадании в конъюнктиву дополнительно развиваются болезни глаз, включая панофтальмит и конъюнктивит.

Если кровь приносит возбудителя в головной мозг, велика вероятность развития в нем менингоэнцефалита. Данное заболевание опасно из-за ряда тяжелых последствий, включая и смертельный исход. Кроме того, если заражению подверглась стельная корова, то развитие вируса в организме заканчивается гибелью плода.

Признаки

При попадании в организм животного возбудитель проходит инкубационный период. Он может длиться от 3 дней до недели. По окончании этого периода у коровы резко поднимается температура, которая может достигать отметки в 42 градуса. В поведении животного явно прослеживается снижение активности и обще угнетение. В большинстве случаев развитие болезни в начальном этапе также сопровождается сильным кашлем, тяжелым дыханием, серозными тягучими выделениями из носа.

Все последующие симптомы ринотрахеита могут существенно отличаться в зависимости от формы заболевания, места локализации инфекции, наличия осложнений. В зависимости от этих факторов выделяются следующие виды болезни:

• респираторный;
• конъюнктивальный;
• менингоэцифалитный;
• генитальный;
• атипичный.

Проявляется остро, чаще всего развивается у молодняка. Как правило, респираторный ринотрахеит сопровождается такими симптомами:

• Температура не падает ниже отметки 40 градусов.
• Выделения из носовой полости становятся еще более обильными и из серозных переходят в гнойные. В них могут прослеживаться частицы крови.
• Параллельно развивается интенсивное слюновыделение.
• Развивающийся воспалительный процесс в слизистой дыхательных путей сопровождается выделением большого количества экссудата. Он скапливается в горле и носовой полости. В результате животное начинает дышать чаще, во время передвижений быстро появляется одышка.
• Появляется сильный кашель.
• На слизистой оболочке носа, а впоследствии и горла, образуются миниатюрные точечные язвы, которые развиваются на фоне некроза тканей.
• В поведении животного превалирует резкое снижение активности, постоянное лежание, снижение аппетита.
• Молочная продуктивность быстро падает и в течение 1-2 суток лактация полностью останавливается.

Молочная продуктивность быстро падает

При таком типе заболевания инфекция распространяется аэрогенным путем очень быстро. В течение 7-10 дней оно развивается практически у всего стада. Летальность данной формы болезни составляет около 10 %. При этом смерть у животного наступает от бронхопневмонии, которая развивается на фоне респираторного ринотрахеита.

Такая разновидность заболевания предполагает попадание вируса в слизистую оболочку глаза, где начинает активно развиваться. Как правило, он попадает туда уже из слизистой оболочки дыхательных путей. Вследствие этого, к вышеперечисленным симптомам также добавляются:

• воспаление конъюнктивы и формирование на ней отека;
• сильное покраснение кожи вокруг глаза, вследствие чрезмерного кровоснабжения;
• серозные выделения из слизистой глаза, которые могут переходить в гнойные, если на фоне действия вируса развивается вторичная патогенная микрофлора. Такие выделения могут подсыхать немного ниже глаз, образуя сухие серые или желтоватые струпья.

Справка. Конъюнктивальный вариант болезни недуга длиться от 3-4 дней до 3 недель.

Данная разновидность заболевания отличается наименьшим количеством клинических признаков. Развивается оно вследствие того, что инфекция через кровь попадает в ткани мозга, воспаляя его оболочку. Встречается такая форма достаточно редко и преимущественно у телят до 6 месяцев.

Температура тела при менингоэнцефалитном течение ринотрахеита практически не изменяется. Кашель, резкий упадок сил, серозные выделения также отсутствуют. Единственные характерные признаки, по которым можно выявить болезнь – это сильное возбуждение и проблемы с координацией у животного. Также из-за поражения центральной нервной системы может развиться паралич конечностей. Основная форма болезни может дополняться конъюнктивальной. Смерть, как правило, наступает в течение 4 дней после появления первых симптомов.

В данном случае основная локализация возбудителя сосредоточена в вульве у коров и на слизистой препуция у быков. Развиваясь во внешних половых органах, вирус становиться причиной развития пустулезного вульвовагинита у самок, и баланопостита у быков.

В первом случае прослеживаются следующие признаки:

• понижение объемов лактации;
• снижение аппетита;
• усиленное кровообращение под кожей в области влагалища, которое постепенно переходит в отек;
• вульва сильно опухает;
• корова не может стоять на месте, постоянно переступая задними ногами и пытаясь прогнуть спину;
• на слизистой оболочке гениталий появляются язвы, которые сверху покрыты темной пленкой.

При баланопостите симптомами выступают:

• Отечность и припухлость тканей препуция.
• Ярко выраженные болевые ощущения при мочеиспускании.
• В моче могут прослеживаться частицы крови, которые являются следствием внутренних кровоизлияний.
• По истечении некоторого времени на тканях препуция появляются небольшие пустулы, переходящие в язвы.

Что характерно, данная разновидность ринотрахеита может протекать субклинически. Симптомы при этом практически не выражены. Особенно опасно скрытое течение для беременных коров. В течение 3-5 недель инфекция из слизистой гениталий через матку попадает к плоду, в результате чего он быстро гибнет. В течение следующих 10 дней после этого происходит аборт.

Данная форма может сопровождаться большинством симптомов респираторной разновидности болезни, проявляться только конъюнктивитом или вовсе не иметь клинических признаков. Часто при ее течении может прослеживаться скопление воздуха в подкожном слое клетчатки на животе и бедрах. В отдельных случаях могут проявляться нарушения в работе кишечника. При заболевании стельного животного часто развитие заболевания влечет за собой гибель плода.

Диагностика

По своим клиническим проявлениям инфекционный ринотрахеит схож с множеством других респираторных заболеваний. Поэтому точно диагностировать развивающийся в организме вирус на основе общей картины и патологоанатомического изучения не представляется возможным. Единственный способ четко определить возбудителя – это проведение лабораторного исследования.

Проведение лабораторного исследования

Такая форма диагностики предполагает изучение материалов, взятых у больного животного. В этом случае выявить вирус можно двумя основными способами:

1. Поиск самого возбудителя в тканях и выделениях, взятых с тела. Для этого используются методы иммунофлюоресценции, иммуноферментный анализ. Также из-за того, что вирус является ДНК-содержащим, часто для его идентификации применяется ДНК-зонд, рассчитанный на поиск конкретной нуклеиновой кислоты вируса.
2. Ретроспективное исследование. В данном случае работа направлена на выявление не самого вируса, а антител, которые вырабатываются в крови для борьбы с ним. Для этого применяется сыворотка крови больной коровы, которую берут два раза с интервалом в 3 недели. Если вследствие серологической реакции во второй сыворотке обнаружено в 3-4 раза больше антител, значит, именно данный вирус является причиной патологических изменений.

В качестве материала для исследований могут выступать выделения из носа, глаз, гениталий животного. Если животное в результате болезни погибло, для исследования берут частицы слизистой бронхов, легких, носа, кусочки лимфатических узлов или селезенки. При обследовании мертвого скота пробы берут не позже 1 часа после его гибели.

Важно! В отдельном порядке проводится аллергическая проба на коже коровы.

Лечение

Лечение крупного рогатого скота при диагностировании инфекционного ринотрахеита проводится комплексно. Препараты подбираются с ориентацией на такие цели:

1. Борьба с возбудителем болезни.
2. Предотвращение развития вторичных заболеваний и осложнений.
3. Укрепление иммунитета и возвращение коровы к оптимальному состоянию.

Для борьбы с вирусом применяется гипериммунная сыворотка, а также сыворотка крови животных, которые недавно переболели ринотрахеитом. Содержащиеся в ней нетипичные антитела помогают животному более эффективно противостоять развивающемуся вирусу. Чаще всего такие средства вводятся под кожу животному в количестве 2 мл на 1 кг массы животного. Инъекция проводится в нескольких местах за раз, для более интенсивного распространения лекарства. Также допускается введение в носовую полость. В этом случае дозировка увеличивается до 2-4 мл препарата на килограмм веса. Такая доза вводится в каждую ноздрю.

Для борьбы с возбудителями вторичных заболеваний применяются сульфаниламидные препараты и антибиотики. Их либо вкалывают животному подкожно, либо распыляют в помещение с целью общей дезинфекции. Также в качестве аэрозоля в коровниках применяют растворы перекиси водорода и молочной кислоты. В виде мазей антибиотики и сульфаниламидные составы используют для лечения генитальной формы заболевания.

В дополнение к основному курсу лечения в целях укрепления организма скота ему обеспечивают сбалансированное кормление с различными минерально-витаминными добавками. Также прописываются общеукрепляющие препараты.

Профилактика

Для предотвращения заноса и распространения инфекции в хозяйстве следует строго придерживаться основных профилактических мер. К их числу относятся следующие моменты:

• Соблюдение основных санитарных условий содержания животных. Сюда входит предотвращение сквозняков в коровнике, достаточное утепление, регулярная уборка навоза, грязи и остатков корма.
• Правильное кормление, желательно индивидуально подобранное под нужды каждого животного. В идеале его необходимо дополнять витаминными добавками.
• Соблюдение карантина, сроком не менее 30 суток, для поступающих в хозяйство новых животных. За это время осуществляется диагностика коровы и инъекция всех необходимых прививок.
• Повышение иммунных механизмов в организме скота. Своевременная борьба с другими инфекционными заболеваниями, которые могут значительно снизить резистентность организма.
• Периодические дезинфекции помещений каустической содой. Горячий 4 % раствор в считанные секунды убивает возбудителя ринотрахеита. Также в качестве дезинфицирующего средства хорошо подходит раствор хлорной извести 20 %.
• Немедленная изоляция особей, у которых проявляются свойственные болезни клинические признаки.

Инактивированные вакцины используют исключительно для молочных и племенных ферм. Так же, как и в случае с живыми, инактивированные препараты вкалывают телятам дважды. После второго укола иммунитет развивается в течение 14 дней. Действует невосприимчивость к инфекции в течение 12 месяцев.

Заключение

Главной опасностью инфекционного ринотрахеита являются крайне быстрые сроки распространения. При этом последствия эпидемии данного заболевания могут привести к значительному уменьшению поголовья скота на ферме. Поэтому важно сосредоточить основные усилия на предотвращении развития болезни, а при выявлении первых клинических признаков, сразу же обращаться в ветеринарную службу за помощью.

[youtube.player]