Исследование микробиоценоза кишечника дисбактериоз культуральными методами

Просим уточнять время приёма конкретного анализа и график работы врачей в графе: "Как сдавать" и в "Расписании приёма врачей"

• 8(495) 380-20-19
• 8(495) 459-17-18
• 8-905-546-59-33
• 8-905-546-59-35
• 8-905-546-59-51

К оплате принимаются наличные и карты.

Бактериологический посев микрофлоры кишечника - что это такое и как сдать анализ

В человеческом организме присутствует множество разнообразных микроорганизмов. Основным местом их скопления у человека является кишечник. Их число оценивается в 10 14 - 10 18 разнообразных микробов, а их объём занимает больше половины толстого кишечника. Это огромное число.

Учёными установлено, что в здоровом состоянии у человека микрофлора кишечника представляет сложную и сбалансированную систему из бифидобактерий, лактобактерий и кишечной палочкой с нормальными ферментными свойствами. Основной функцией микрофлоры, живущей в симбиозе с человеком, является защита организма от токсинов и вредных бактерий, выработка ферментов, необходимых для пищеварения, участие в обмене веществ, и защита от аллергенов проходящих через пищеварительный тракт.

Однако, не всё так просто, кроме полезных микробов в кишечнике присутствуют микроорганизмы, которые могут нанести вред здоровью человека в случае понижения иммунитета на фоне болезни или по иным причинам, их называют условно-патогенными (золотистый стафилококк, энтеробактерии и др. ). Другой группой, присутствующей в кишечнике, являются сапрофиты (энтерококки, дрожжи, эпидермальный и сапрофитный стафилококки и др.). Третья группа – транзитные микроорганизмы, попадающие в кишечник из внешней среды. Если человек здоров, то они покидают организм без следа.

Пока флора кишечника в норме и иммунитет силён, то проблем с этими группами не возникает, однако в случае заболеваний можно столкнуться с разнообразными нарушениями микроэкологии кишечника – дисбактериозом, дисбиозом, микробиоценозом. В международной научной литературе и медицинской практике данные состояния называются - микроэкологическими нарушениями микрофлоры кишечника.

В Отраслевом стандарте "Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника" (ОСТ 91500.11.0004-2003), Министерства здравоохранения РФ дано определение дисбактериоза кишечника.

Его рассматривают как клинико-лабораторный синдром, возникающий при различных заболеваниях и клинических ситуациях, характеризующихся изменениями в составе нормальной микрофлоры и появлением других различных микроорганизмов, влияющих на метаболитические и иммунные функции организма.

Подобные изменения часто несут негативный характер и отрицательно сказываются на здоровье пациента. Для полноценной диагностики и определения причин нарушений используется бактериологическое исследование на дисбактериоз.

Как любая сложная система организм человека подвержен влиянию множества факторов, как внешних, так и внутренних, многие из которых могут негативно влиять на микрофлору провоцировать как лёгкие, так и серьёзные нарушения здоровья.

Самые распространённые причины дисбактериоза, которые позволяет диагностировать и в дальнейшем скорректировать лечащим врачом бактериальный посев:

• Инфекционные заболевания;
• Вредные условия труда;
• Неправильное питание;
• Приём ЛЮБЫХ лекарственных средств без назначения врача;
• Воздействие аллергенов;
• Иммунные заболевания;
• Разнообразные заболевания ЖКТ;
• Бактериальные вагинозы;
• Искусственное вскармливание , мастит у матери;
• Различные возрастные изменения микрофлоры.

Для каждого из состояний свойственно особенное количественное и качественное содержание микроорганизмов в кишечнике. Проще говоря, на основании того в каком количестве, и какие микробы содержатся в кишечнике, можно делать выводы о причинах того или иного нарушения.

После поступления в лабораторию материал проходит следующие этапы исследования:

1. Подготовка материала к посевам;

2. Посев фекалий в разнообразные, заранее подготовленные среды (девять различных сред), каждая из которых направлена на выращивание определённого вида микроорганизмов. В стандартное исследование входит определение : Кишечной палочки(нормальной, со сниженной ферментативной активностью, гемолизирующей ), Лактозонегативных энтеробактерий: Родов Протей; Клебсиелла; Цитробактер; Энтеробактер; Гафния; Серрация; Псевдомонады. Патогенных энтеробактерий : Родов Шигелла; Сальмонелла. Кокковые формы: Родов Стафилококки; Энтерококки; Стрептококки. Дрожжеподобных грибов Candida. Бифидобактерий. Лактобактерии.;

3. Оценка специалистом лаборатории количества и вида микроорганизмов проводится в течение 5 дней. Такой срок связан с необходимостью выделения и определения разных микроорганизмов в разный период, т.к. им нужны разные температуры и время для роста;

4. При обнаружении патогенных (вредоносных) и условно-патогенных микробов проводится дополнительное исследование на их восприимчивость к различным бактериофагам, антибиотикам и противогрибковым препаратам. Если у пациента не выделены микроорганизмы, требующие постановки чувствительности к бактериофагам, антибиотикам, противогрибковым препаратам, исследование не проводится;

5. После всех этих действий результаты анализа выдаются заказчику;

Т.к. бактериологический посев является многоэтапным исследованием, связанным со сроком выделения и определения различных микроорганизмов , то для проведения полноценного анализа требуется неделя.

На бланках указаны данные о норме содержания тех или иных микроорганизмов и их количестве в поступившем материале. Там же вы найдёте дополнительную информацию.

Однако, напоминаем, что правильно интерпретировать результат бактериологического посева на дисбактериоз в совокупности с другими анализами, историей болезни пациента и составить полную картину о заболевании с последующим назначением коррекции или лечения микрофлоры кишечника должен только квалифицированный врач.

[youtube.player]

В статье представлен современный взгляд на проблему дисбактериоза кишечника у детей, методы диагностики и их трактовка. Представлены собственные исследования характера микрофлоры кишечника по содержанию Ig-расщепляющей (протеолитической) активности фекалий у 133 детей с хронической гастродуоденальной патологией. Показано, что метод может быть полезным для характеристики кишечной микробиоты.

The article presents a modern approach to the problem of intestinal dysbiosis in children, methods of diagnosis and treatment. Presented own research into the nature of intestinal microflora on the content of Ig-cleaving (proteolytic) activity of fаeces in 133 children with chronic gastroduodenal pathology. It is shown that the method may be useful for the characterization of intestinal microbiota.

В настоящее время не вызывает сомнений тот факт, что изменение количественного и качественного состава микрофлоры кишечника практически всегда сопровождает любое неблагополучие в пищеварительной системе. Не отвечая критериям самостоятельной нозологической единицы, дисбактериоз кишечника является как следствием, так и одним из звеньев патогенеза патологии желудочно-кишечного тракта. С одной стороны, дисбактериоз кишечника всегда вторичен, поскольку возникает при любом изменении внутренней среды кишки вследствие действия патогенных факторов или прямого влияния на кишечную микрофлору. С другой стороны, дисбактериоз кишечника сам может приводить к повреждению кишечного эпителия, тем самым нарушая процессы пищеварения и усугубляя клиническое течение заболеваний желудочно-кишечного тракта.

В настоящей статье мы коснемся преимущественно диагностики нарушений микроэкологии толстого кишечника.

Толстая кишка представляет собой биотоп с высокой степенью обсемененности. В ней обнаружено более 400 видов микроорганизмов. Показано преобладание анаэробной микрофлоры, представленной на 90% бактероидами и бифидобактериями (главная флора). Аэробы составляют 10% — кишечные палочки, лактобациллы, энтерококки и др. (сопутствующая флора). Остаточная флора, составляющая менее 1% от общего количества микроорганизмов, представлена клебсиеллами, протеем, дрожжами, клостридиями, энтеробактером и цитробактером и др. Необходимо отметить одну особенность микрофлоры толстого кишечника — по мере продвижения от проксимальных отделов к дистальным увеличивается ее обсемененность. В проксимальном отделе общее число микроорганизмов составляет 10 8 -10 9 , а в прямой кишке — 10 11 -10 12 в 1 г кала. Более 90% массы кала приходится на бактерии. Нормальная микрофлора кишечника колонизирует как просвет кишечного тракта, так и поверхность слизистой оболочки кишки, формируя при этом пристеночную или мукозную микрофлору (М-микрофлора) и полостную микрофлору (П-микрофлора). Основную защитную функцию выполняет мукозная микрофлора [1, 2, 3, 4].

На сегодня существуют следующие методы лабораторной диагностики дисбактериоза кишечника [2, 4]:

1. Бактериологический анализ (определение состава фекальной микрофлоры, отражающей микробный состав лишь дистальных отделов кишечника — наиболее доступный метод, однако недостаточно точный).

2. Биохимический экспресс — метод определения протеолитической активности супернатантов фекалий.

3. Высоковольтный электрофорез на бумаге для обнаружения β-аспартилглицина, β-аспартиллизина, β-аланина, 5-аминовалериановой и γ-аминомасляной кислот и др.

4. Ионная хроматография, определяющая в фекалиях биогенные амины, желчные и карбоновые кислоты, ароматические соединения.

5. Газожидкостная хроматография для определения в фекалиях летучих жирных кислот.

6. Микроскопия фекального мазка.

В результате многолетнего изучения кишечной микрофлоры Р.В. Эпштейн-Литвак и Ф.Л. Вильшанская (1970) разработали методы лабораторной диагностики дисбактериоза, основанные на бактериологическом исследовании кала. Эти методы до сих пор существуют практически в неизмененном виде и широко применяются. Но у данного метода есть недостатки. Бактериологическое исследование кала отражает микробный состав полостной флоры лишь дистальных отделов кишечника. Обычно метод предоставляет информацию о 15-20 видах микробов. Число культивируемых кишечных анаэробных бактерий не превышает 7-50% от предполагаемого их истинного количества. В тени остается около 500 видов анаэробов и состав тонкокишечной микрофлоры. Невозможно идентифицировать бактериологическим методом простейших, грибы и вирусы. К тому же данный метод не дает качественной характеристики микробиоценоза. Хочется отметить, чтобы выделить всеми доступными современной медицине методами все возможные виды микрофлоры и составить их развернутую бактериологическую характеристику, потребовалось бы не менее одного года [5, 6]. В литературе также имеются сообщения, подтверждающие низкую диагностическую ценность исследования кала на дисбактериоз [7].

Ниже приведена классификация дисбактериоза кишечника, предложенная И.Б. Куваевой и К.С. Ладодо в 1991 году [8]. Данная классификация базируется на данных бактериологического исследования кала и клинической симптоматике, которая, как правило, неспецифична.

Классификация дисбактериоза кишечника по И.Б. Куваевой и К.С. Ладодо (1991)

Первая степень	Латентная фаза дисбиоза: проявляется только в снижении на 1-2 порядка количества защитной микрофлоры — бифидобактерий, лактобацилл, а также полноценных кишечных палочек — до 80% от общего количества. Остальные показатели соответствуют физиологической норме (эубиозу). Как правило, начальная фаза не вызывает дисфункций кишечника и возникает как реакция организма практически здорового человека на воздействие неблагоприятных факторов, таких как, например, нарушение режима питания и др. В этой фазе возможно вегетирование в кишечнике незначительного количества отдельных представителей условно-патогенной флоры. Клинических проявлений дисбактериоза в этой фазе нет.
Bторaя степень	Пусковая фаза более серьезных нарушений характеризуется выраженным дефицитом бифидобактерий на фоне нормального или сниженного количества лактобацилл или сниженной их кислотообразующей активности, дисбалансом в количестве и качестве кишечных палочек, среди которых нарастает доля лактозонегативных или цитрат-ассимилирующих вариантов. При этом на фоне дефицита защитных компонентов кишечного микробиоценоза происходит размножение либо плазмокоагулирующих стафилококков, либо протеев, либо грибов рода Candida. Вегетирование в кишечнике протеев или плазмокоагулирующих стафилококков в этой фазе развития дисбактериоза чаще транзиторное, чем постоянное. Функциональные расстройства пищеварения выражены неотчетливо — спорадически жидкий стул зеленоватого цвета с неприятным запахом, со сдвигом рН в щелочную сторону, иногда, напротив, задержка стула, иногда отмечается тошнота.
Третья степень	Фаза агрессии аэробной флоры характеризуется отчетливым нарастанием содержания агрессивных микроорганизмов — при этом размножаются до десятков миллионов в ассоциации золотистые стафилококки и протеи, гемолитические энтерококки, наблюдается замещение полноценных эшерихий бактериями родов Klebsiella, Enterobacter и др. Эта фаза дисбактериоза проявляется дисфункциями кишечника с расстройствами моторики, секреции ферментов и всасывания. У больных отмечается учащенный разжиженный стул, часто зеленого цвета, снижение аппетита, ухудшение самочувствия, дети становятся вялыми, капризными.
Четвертая степень	Фаза ассоциативного дисбиоза характеризуется глубоким разбалансированием кишечного микробиоценоза с изменением количественных соотношений основных групп микроорганизмов, изменением их биологических свойств, накоплением токсических метаболитов. Характерно вегетирование энтеропатогенных серотипов E.coli, сальмонелл, шигелл и других возбудителей острых кишечных инфекций. Возможно размножение клостридий. Эта фаза дисбиоза характеризуется функциональными расстройствами пищеварительной системы и нарушениями общего нутритивного статуса, дефицитом массы тела, бледностью кожных покровов, снижением аппетита, частым стулом с примесью слизи, зелени, иногда крови, с резким гнилостным или кислым запахом.

Несмотря на введение в микробиологическую практику новых усовершенствованных методов исследования, до сих пор четкой границы между микробиоценозом кала здоровых и больных лиц так и не выявлено. Каловый микробиоценоз является сложным и динамичным. Состав и количество бактерий широко варьируют.

В последних исследованиях, посвященных анализу микробиоценоза кала, используется метод флуоресцентной гибридизации ДНК in situ (FISH). Количественный анализ бактериального состава и интенсивности свечения в центральных участках образца фекалий, на поверхности и в слизи позволили различить особенности биологической структуры кала здоровых и больных. Особенностью данных исследований является то, что исследуются не гомогенизированные образцы, а цилиндрические образцы кала, полученные от больных, так как при гомогенизации бактерии равномерно распределяются в образце, чего не бывает в естественных условиях [9].

Существуют и другие методы диагностики дисбактериоза кишечника, основанные на определении метаболитов кишечной микрофлоры [2]. Эти соединения разделены на 4 группы. В первую группу входят индикан, n-крезол, фенол. Индикан расщепляется индол-положительными микробами, n-крезол, фенол — анаэробными и аэробными микроорганизмами. Вторая группа включает H₂, СН₄, СО₂, С₂-С₆ жирные кислоты. Это метаболиты строгих анаэробов. Третью группу составляют деконъюгированные желчные кислоты — метаболиты бактероидов, бифидобактерий, клостридий, стрептококков и энтеробактерий. Аммиак входит в четвертую группу, является метаболитом грамположительных и грамотрицательных анаэробов, энтеробактерий и стрептококков.

Для определения метаболитов кишечной микрофлоры используются такие методы, как газо-жидкостная, высокоэффективная жидкостная хроматография, к сожалению, не всегда доступные в повседневной клинической практике.

В настоящее время идентифицирован ряд факторов кишечной микрофлоры, обеспечивающих персистенцию и колонизацию симбионтной и условно-патогенной микрофлоры. К таким факторам относятся ферменты, которые формируют устойчивость некоторых представителей кишечной микрофлоры к действию секреторных антител [10]. Накоплены данные о том, что ферменты, способные расщеплять секреторные иммуноглобулины слизистых оболочек, способствуют колонизации эпителия патогенными бактериями. В связи с этими фактами в последнее время были предложены и апробированы скрининговые биохимические методы оценки состояния микробиоценоза кишечника по уровню протеолитической, Ig-расщепляющей активности супернатантов фекалий [6, 11, 12]. Эти методы диагностики дисбиоза основаны на том, что различные таксономические виды бактерий, колонизирующие разные отделы кишечника, обладают неодинаковой протеолитической способностью. Как правило, индигенная микрофлора кишечника человека и его фекалий, в частности бифидо- и лактофлора, обладает выраженной сахаралитической, нежели протеолитической активностью. Возрастание суммарной протеолитической активности супернатантов фекалий тесно связано с увеличением количественного содержания многих видов условно-патогенных бактерий в кишечнике или с возрастанием доли бактерий, продуцирующих протеолитические энзимы, колонизирующих стенку кишечника. IgА-протеазы — секретируемые факторы бактериальной природы. Они представляют собой специфические энзимы, расщепляющие IgА на классические Fab- и Fc-фрагменты, лишая его тем самым антительных свойств [10].

Протеолитическая активность, в том числе иммуноглобулин-расщепляющая активность, выявлена у многих видов патогенных и условно-патогенных бактерий, грибов и простейших, способных колонизировать кишечник. Выделены IgA-протеиназы у представителей семейства энтеробактерий: Proteus spp, Serratia marcescens, Klebsiella ozaenae, Klebsiella pneumonie, E. Coli, Shigella spp., Salmonella spp. Грамположительная кокковая микрофлора кишечника — S. aureus, S. epidermidis, Enterococcus faecalis — также способна к продукции Ig-расщепляющих протеиназ [12, 13]. IgA-протеиназы индуцируют грибы рода Candida. Изучены протеолитические ферменты, являющиеся факторами вирулентности, у таких простейших, как Lamblia intestinalis [14]. Некоторые представители фекальной микрофлоры здоровых людей: Streptococcus faecalis, Staphyloccocus spp. Propionibacterium acnes, Cl. perfringens, Cl. bifermentas, Cl. sporogenes, Cl. ramnosum, Bacteroides spp. Bifidobacterium spp. — также обладают протеолитической активностью [12, 13]. Вероятно, эта способность вносит свой вклад в вирулентность нормальной микрофлоры, которая, как известно, появляется при дисбактериозе кишечника наряду со снижением антагонистических свойств.

Возрастание суммарной протеолитической активности тесно связано с увеличением количественного содержания многих видов условно-патогенных бактерий в кишечнике и/или с возрастанием доли бактерий, продуцирующих протеолитические энзимы, колонизирующих стенку кишечника [11, 12].

Способность продуцировать IgА протеиназы характерна в основном для патогенных микроорганизмов и является тем условием, которое обеспечивает существование микробов на слизистых поверхностях [10].

Патогенность микробных протеиназ обусловлена не только их деградирующей активностью в отношении антител, но и способностью непосредственно повреждать эпителиальные клетки слизистых оболочек и активировать гемокоагуляционные механизмы в очаге воспаления [15, 16, 17]. Некоторые из бактериальных протеиназ способны снижать жизнеспособность энтероцитов кишечника и повреждать защитный барьер слизистых [18, 19]. Протеолитическая активность исследовалась при патологических состояниях. Так, изучен протеолитический потенциал фекалий при колитах, болезни Крона, в детском возрасте — при кишечной инфекции и дисбактериозах [11, 12, 20, 21, 22, 23]. Было показано, что положительные протеолитические (казеинолитические) пробы, причем высокой степени активности, чаще выявлялись в группе детей с превалирующим выделением различных видов условно-патогенных бактерий и выраженными изменениями микроэкологии кишечника [11]. Протеолитическая активность фекалий нарастала с увеличением содержания в фекалиях гемолитических E. Coli, бактерий рода Proteus, Staphyloccocus и их ассоциаций с псевдоманадами, клебсиеллами, серрациями, гафниями и грибами рода Candida. Во всех случаях, когда в микрофлоре находили бактерии рода Proteus в количестве 5 lg КОЕ/г и выше, протеолитическая активность супернатантов была высокой.

Особый интерес представляет исследование, в котором изучалась Ig-расщепляющая активность микрофлоры кишечника по профилю протеиназ в норме и при патологических состояниях [12]. Выявлено, что условно-патогенная микрофлора обладает более выраженным агрессивным потенциалом, обусловленным Ig-протеолитической активностью по сравнению с бифидофлорой. Уровень иммуноглобулин — расщепляющей активности фекалий у детей с нарушениями микроэкологии кишечника — был выше, чем у детей с эубиозом.

Таким образом, методы, позволяющие оценить уровень протеолитической активности фекалий, косвенно характеризуют возникающий дисбаланс в составе не только фекальной, но и пристеночной тонко- и толстокишечной микрофлоры, показывают ее качественные изменения.

Нами проведено исследование Ig-расщепляющей (протеолитической) активности фекалий у 133 детей с хронической гастродуоденальной патологией. Для изучения активности протеиназ, дети были разделены на 3 группы. Первую группу (55 больных) составили дети с неэрозивными гастродуоденитами, вторую группу (31 больной) — больные эрозивными гастродуоденитами, третью — дети с язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (33 человека). Результаты представлены в таблице 2.

Активность протеолитических ферментов у детей с гастродуоденальной патологией

Протеоли-тическая активность ферментов

Группы детей с гастродуоденальной патологией

[youtube.player]

Микробиологическое исследование, которое позволяет оценить состав микрофлоры кишечника – концентрацию и соотношение "полезных", условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в кале, определить специфическую активность основных пробиотиков в отношении выявленных микроорганизмов и их чувствительность к бактериофагам и антибиотикам. К нормальной микрофлоре кишечника ("полезные" бактерии) относятся лактобактерии, бифидобактерии, энтерококки, кишечные палочки (типичные), анаэробная флора (бактероиды). Условно-патогенная флора – это энтеробактерии, неферментирующие бактерии, стафилококки, анаэробные бактерии (клостридии), грибы. Патогенными микроорганизмами являются сальмонеллы, шигеллы, патогенные эшерихии. При выявлении патогенных и/или условно-патогенных микроорганизмов будет определена их чувствительность к антимикробным препаратам (антибиотикам и бактериофагам) и пробиотикам. При обнаружении микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору, чувствительность к антибиотикам и бактериофагам не определяется, т.к. не имеет диагностического значения.

Дисбиоз кишечника, определение пробиотиков-антагонистов.

Синонимы английские

Intestinal dysbiosis, antagonistic activity of probiotics and bacteriophage sensitivity test, Intestinal dysbacteriosis.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Дисбактериоз (дисбиоз) кишечника – это нарушение состава и количественного соотношения бактериальных и грибковых микроорганизмов желудочно-кишечного тракта. В норме слизистая оболочка ЖКТ является средой обитания так называемых комменсальных микроорганизмов, обеспечивающих целый ряд защитных функций в обмен на микронутриенты, используемые человеком. Большинство кишечных комменсалов относятся к родам Lactobacillus, Bifidobacterium и Bacteroides (облигатные бактерии), хотя состав и количество микроорганизмов сильно варьируются в зависимости от отдела ЖКТ. Так, желудок характеризуется наименьшей плотностью бактерий, среди которых преобладают Lactobacillus, Streptococcus и Helicobacter pylori. В тонкой кишке обнаруживается до 10 3 -10 6 КОЕ/мл бактерий, преимущественно Streptococcus и Lactobacillus. Наибольшая плотность комменсальных микроорганизмов наблюдается в толстой кишке (10 8 -10 9 КОЕ/мл), где преобладают Bacteroides, Clostridium, Fusobacterium и Bifidobacterium. Комменсальные микроорганизмы находятся в динамическом взаимодействии с кишечным эпителием и, таким образом, являются механическим препятствием для инвазии патогенов. Кроме того, они секретируют ряд противомикробных соединений (например, дефензины). Бактерии-комменсалы способны регулировать иммунный ответ слизистых оболочек кишечника и в некоторых случаях подавлять воспалительные, в том числе аллергические, реакции. Нарушение баланса микробиоты возникает в результате длительного или бесконтрольного лечения антибактериальными препаратами, при нарушении моторики ЖКТ (послеоперационный период, прием слабительных препаратов), мальабсорбции (хронический алкоголизм, хронический панкреатит) и при некоторых других состояниях. Дисбактериоз может приводить к развитию заболеваний ЖКТ и других органов. Так, в настоящее время получены данные о его роли в патогенезе болезни Крона, неспецифического язвенного колита и целиакии, а также синдрома хронической усталости и атопического дерматита.

Основным способом диагностики дисбактериоза является микробиологический метод, при котором производят качественную и количественную оценку облигатных, условно-патогенных и патогенных микроорганизмов в кале. На основании результатов исследования делают вывод о дефиците облигатных микроорганизмов или об избыточном росте условно-патогенных или патогенных бактерий. Микробиологическое исследование – это один из наиболее специфических и чувствительных методов исследования, применяемых при диагностике дисбактериоза. Следует, однако, помнить, что бактериологический состав кала (он используется в качестве биоматериала) несколько отличается от бактериологического состава слизистой оболочки кишки. Кроме того, результат теста может зависеть от многих других факторов, таких как недавнее употребление антибактериальных препаратов, продуктов, богатых пробиотиками, или слабительных средств.

С учетом растущей устойчивости условно-патогенных и патогенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам все большую роль в терапии дисбактериоза играют альтернативные методы лечения с помощью пробиотиков. Пробиотики – это группа препаратов, содержащих бактерии-комменсалы, или дрожжевые грибы. Считается, что они защищают организм от избыточной условно-патогенной и патогенной микробиоты. Совокупность защитных свойств пробиотиков в отношении какого-либо микроорганизма называется антагонистической активностью и может быть определена с помощью микробиологического исследования. В ходе анализа оценивается антагонистическая активность основных используемых в гастроэнтерологической практике пробиотиков. Определение антагонистической активности пробиотиков проводят перед назначением указанных препаратов для лечения дисбактериоза. Оно может быть дополнено анализом на чувствительность выявленных микроорганизмов к антибиотикам и бактериофагам.

Результат анализа оценивают с учетом дополнительным лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики и лечения дисбактериоза кишечника, контроля его лечения;
• чтобы установить причины кишечных расстройств;
• для подбора рациональной терапии антибиотиками.

Когда назначается исследование?

• При обследовании пациента после длительного курса лечения антибактериальными препаратами;
• при обследовании пациента с указанием на бесконтрольный прием антибактериальных препаратов и слабительных средств в анамнезе;
• при выявлении устойчивости условно-патогенных и патогенных микроорганизмов к антибактериальным препаратам;
• при обследовании пациента с хроническим панкреатитом, хроническим алкоголизмом и другими состояниями, сопровождающимися мальабсорбцией;
• при хронической диарее;
• после долгого лечения антибиотиками, глюкокортикостероидами, иммунодепрессантами, химиотерапевтическими препаратами;
• при аллергических заболеваниях, которые плохо поддаются лечению (например, атопическом дерматите);
• после воздействия химических веществ или ионизирующей радиации – если есть симптомы дисфункции кишечника;
• при длительном периоде выздоровления после острых кишечных инфекций.

[youtube.player]

В отечественной практике диагностика и микробиология неотделимы друг от друга. Анализ кала даёт представление о составе флоры в толстой кишке. На этом диагностика дисбактериоза обычно заканчивается. Мамы собирают кал у грудничка, доктор ставит диагноз, составляется диета, подбираются смеси. Всякий, ощутивший зуд в заднем проходе, может попробовать аналогичный алгоритм действий. Однако, дисбактериоз оказывает тотальное влияние не только на ЖКТ. Алопеция, себорея порой служат симптомами либо являются прямым следствием дисбактериоза.

Не всякий образованный человек понимает, что причины избранных болезней берут начало в ЖКТ. Тяжёлый дисбактериоз служит причиной рака, прочих заболеваний, исключение – СПИД. В западных школах медицины на протяжении десятков лет утверждают, что диагностика одной толстой кишки не имеет практического смысла. Это состояние воспринимается следствием прочих заболеваний. В РФ доказали, что дисбактериоз у кормящей мамы ведёт к немедленному пополнению списка больных новорождёнными младенцами (на третьи сутки максимум).

Микрофлора

Установлено, что совокупная численность микробов (500 видов) в человеке достигает десяти в 14 степени, что на порядок больше, нежели количество клеток, составляющих организм. Подавляющая часть флоры обитает в кишечнике, общим весом 1-2 кг. Традиционный бактериологический анализ затрагивает 10-15 видов из массы. Реальная картина происходящего в кишечнике отличается от результата анализа.

Типичные признаки, сопровождающие заболевание, к примеру, стафилококковый дисбактериоз кишечника, чётко описаны. Многие заболевания недостаточно изучены. Метеоризм при дисбактериозе наблюдается у большого количества пациентов. Но выделение газов происходит регулярно, человек на любой стадии развития постоянно выделяет водород и метан. Диагностика показывает – штаммы, не являющиеся частью нормальной микрофлоры, провоцируют обширное газообразование, сравнительно с нормой. Механизм вздутия слабо изучен, штаммы, его вызывающие, не определены до настоящего времени.

Получается, человек, исследуя океан и Луну, не знает многого о собственном теле. Не всякая мать сможет объяснить необходимость прикладывания ребенка к груди уже через 2 часа после родов. Таким образом происходит переход к формированию нормальной микрофлоры кишечника новорождённого.

Не удивительно, что диагностика находится на низком уровне. При анализе необходимо учитывать разницу показателей у детей до года и детей старшего возраста. Игнорирование информации приведёт к неправильному диагнозу. Полное формирование микрофлоры заканчивается в 2 года.

Причин нарушению баланса изучено немало. К примеру, приём антибиотиков после операции. Лишь каждый десятый признан абсолютно здоровым в подобных условиях.

Методики исследования

Постоянно появляются новые методики исследования. К примеру, в 2001 году Hopkins предложил использовать молекулярно-генетический способ гибридизации 16 SrPHK. С высокой точностью определяются виды (что важно), но трудоёмкость и сложность подбора реактивов затрудняют исследования. Молекулярный метод основан на выявлении участков ДНК взаимодействующих видов при помощи электрофореза (либо отличающимся способом).

Сегодня ГХ-МС позволяет получить информацию о сотнях видов. Гораздо больше, чем любая методика. Точное определение возбудителей важно для выбора лечения. В результате выявляются патологии: выпадение волос, лишний вес, дерматиты, жжение в заднем проходе. Распознается набор штаммов, влияющий на развитие патологических состояний. В подобных случаях важна точная диагностика, для недопущения развития заболевания.

Данные о фагочувствительности при помощи ГХ-МС заполучить чрезвычайно сложно. Сбор показаний зависит от чувствительности оборудования. В обычных условиях культура проращивается, уничтожается определённым образом (к примеру, при помощи грибов). Исследование включает улавливание специфичных веществ, служащих результатом успешной борьбы, позволяет составить прогноз заболевания, предоставляет информацию, эффективен ли воздействующий фактор.

Бактериологический анализ

Из горла берут мазок при выявлении заболеваний дыхательной системы, кровь сдают для оценки биохимических показателей, напрямую показывающих, здоров человек либо болен. Диагностика при дисбактериозе кишечника основывается на исследовании кала. По-другому проверить, что творится в недрах ЖКТ, затруднительно. На западе посев на питательные среды считают методом ненадёжным по перечисленным причинам.

Правильный способ диагностического забора кала.

1. Нужна герметичная стеклянная посуда, иначе воздух убьёт анаэробные бактерии (облигатная часть флоры).
2. Маленькая посуда – воздух под крышкой уничтожит бифидобактерии и лактобациллы.
3. Немедленно после сбора кала в количестве минимум 1 грамма следует плотно закупорить сосуд.
4. Хранить анализ следует при температуре +4 градуса в течение четырёх часов. Получается, для выполнения условия банка должна оказаться на столике в лаборатории немедленно.

На западе трезво оценивают возможности лаборантов. Известно: открытие пенициллина произошло благодаря подобному нарушению. Александр Флеминг не выдержал идеальные условия выращивания опасного стафилококка. Вместе со штаммом на питательной среде поселился пенициллин.

Забор кала предоставляет информацию о микрофлоре определённой части толстой кишки. Желательно анализу подвергать мукозную часть флоры, не полостную, как часто происходит в случае исследования фекалий. Непосредственно в слизистой происходят процессы формирования витаминов, всасывание микроэлементов. Кроме прочего, бактерии в экскрементах преимущественно мертвы.

По указанным причинам традиционный посев фекалий не является лучшим методом.

Суть заключается в посеве экскрементов на питательную среду. Бактерий множество, для каждого вида среда индивидуальна. По скорости роста штамма делаются выводы о начальной численности, оперируя таблицами норм. Сверяясь с данными, выставляется диагноз (отклонения популяции в меньшую либо большую сторону).

В заключение производится анализ обнаруженной условно-патогенной флоры на чувствительность к антибиотикам, назначается эффективный курс лечения. В комплексе, подобными мероприятиями ограничивается бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника.

Газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией предоставляет преимущество в диагностировании, занимающее до 5 часов. Происходит в десятки раз быстрее, нежели выращивать экскременты. Методика не ищет живые бактерии, нацелена на обнаружение метаболитов микрофлоры, упрощающего процесс сбора анализов. Удешевляется сама операция, поскольку необходимость закупать дорогостоящую (преимущественно, патогенную) микрофлору отсутствует. Сложность резко снижается.

Врачи давно полагали, что существуют следы жизнедеятельности микроорганизмов, выбрасываемые в окружающую среду. Избыточный удельный вес результатов в испражнениях говорит о развитии определённого состояния. Результат интересен: в экскрементах присутствует полостная флора, и полный спектр метаболитов! Следовательно, живущие внутри организма виды бактерий (и грибов) определятся по следам метаболизма.

Рассказывая о гибели группы Дятлова, Ракитин говорил: по набору изотопов можно немало узнать о рабочем веществе реактора. Аналогия наблюдается в случае с микроорганизмами. Отходы жизнедеятельности сильно отличаются друг от друга, спутать затруднительно. Род определяется с точностью, определение вида допускает малую погрешность.

Георгий Осипов лестно отзывается о ГХ-МС. В первую очередь приводит доводы в пользу стоимости оборудования, упоминает о дешевизне расходных материалов. Не забывает про точность метода (до 2%). Завершающим доводом становится широкий спектр микроорганизмов, подверженных идентификации. Фактически, составляется полнейшая копрограмма, чрезвычайно сложная и затратная для получения традиционными методами.

Неотъемлемой частью методики является постоянство метаболитов. Доказано – за последние 2,5 млрд. лет процесс жизнедеятельности бактерий практически не менялся. Ошибочно полагать, что методика нова. Упоминания встречаются с 70-х годов XX века, первые серьёзные исследования проведены на базе РАМН в 90-е.

Проводится химическая реакция (к примеру, метанолиз) для выделения из пробы нужных компонентов. Превращение жирных кислот в метиловые эфиры лежит в основе анализа. Для указанного соблюдаются нужные условия, подготовка пробы занимает определённое время. Композиция эфиров представляет жидкость либо газ, вводимый в аппаратуру. Разделение производится на капиллярной колонке.

Получается гистограмма, где маркеры разделены расстоянием. Площади пиков интегрируются, выступая исходными данными дальнейших расчётов. Для любой молекулы сформированы признаки, используемые при идентификации. База данных покупается отдельно, исследование стоит денег. Возможности метода немало зависят от наличия информации. Недостаток веществ в базе данных делает невозможным идентификацию.

Спектр действия ГХ-МС крайне широк. Типичная база содержит признаки 1000 и более видов. Сообразно представленным данным, вычисляется плотность популяции штаммов.

ПЦР-диагностика

Лабораторная диагностика дисбактериоза не ограничивается двумя методиками. Потому что у врачей всегда должен быть выбор. Когда нет конкуренции, отсутствует и прогресс. Полимеразная цепная реакция работает с ДНК. Изобретена в 1983 году Кэри Мюллисом.

В заданных условиях происходит копирование имеющегося участка молекулы. Реакция проходит в пробирке под действием специальных ферментов. Зная последовательность нуклеотидов, легко предсказать результат. Постепенно открылись методы, минимизирующие число мутаций, результат анализа становится достоверным.

Длина копируемого участка ограничена, составляет 3000 звеньев. Для сравнения – геном человека кодируется при помощи 3 млрд. пар. В науке метод ПЦР часто используют для внесения намеренных мутаций в код ДНК. Это проверенный способ криминалистов вынести вердикт, сильно влияющий на решение суда. Сходство генов – надежное доказательство вины либо невиновности.

Какой анализ выбрать

У пациента клиники нет выбора. Сегодня диагностика проводится исключительно бактериологическая. На фоне дисбактериоза, осложнённого диареей, ожидание в течение 1 недели невыносимо. Как питаться больному ребёнку? Что делать взрослому?

Настоятельно рекомендуем внимательно собирать о симптомах нужную информацию. Если возникает аллергия из-за дисбактериоза, записывайте данные о местах возникновения дефектов. К примеру, аллергический вид крыльев носа указывает на дефицит витамина В. Покраснение в районе волосяной части головы – симптом себореи.

Как избежать

Диагностика по клиническим признакам сложновыполнима. Поможет информация о консистенции кала, цвете, запахе. Если грибковый дисбактериоз вызвал стоматит, немногие знают, с чего начинать лечение. Попутно с типичными в подобных случаях препаратами проводится диагностика баланса микрофлоры кишечника. Заодно оказывается помощь желудку.

На сайте представлена исчерпывающая информация по дисбактериозу, способная оказать весомую помощь. Полезно употреблять в пищу клетчатку, олигосахариды. Упоминалось о роли народных средств: пейте травы. Рост патогенной флоры подавляется при помощи ягод:

• земляника, черноплодная рябина, черника, малина, чёрная смородина помогают в отношении сальмонелл и стафилококка;
• абрикосы, клюква уничтожают микробы гниения;
• голубика, брусника борются с Candida.

Включайте указанные продукты в рацион, практикуйте введение прикорма при дисбактериозе детям, формируя иммунитет. Детям младшего возраста дают отжатые соки. При лактазной недостаточ­ности сделайте акцент на бифидобактерии., растущие на молочном сахаре, играющие роль источника лактазы (либо заменителя). Покупайте ферменты отдельно, в аптеке.

Упорно продолжайте кормление грудью младенцев (не из бутылочки), правильным образом формируя внутреннюю микрофлору ребёнка. При запорах делайте акцент на продукты питания:

Диарея устраняется известными народными средствами. Употребляют продукты с танином: заварка (запивается водой), сушёная черника, корки лимона и граната, горошины чёрного перца, столовая ложка крахмала. Полезно употреблять сыр, творог, добавлять кальций к ежедневному рациону.

[youtube.player]