Наставление по лабораторной диагностике орнитоза хламидиоза птиц
Орнитоз (хламидиоз птиц, пситтакоз) является зооантропонозным заболеванием, т.е. общим для человека и животных.
Орнитоз у людей вызывает внутриклеточный паразит - хламидия пситтаци. Это очень устойчивый микроорганизм, который в окружающей среде может сохраняться до 2-3 недель.
Передают инфекцию домашние и дикие птицы (индюшки, куры, гуси, попугаи, канарейки, голуби, воробьи, дикие гуси и множество других).
Возбудитель быстро погибает при гниении, при 60°С - в течение 10 минут, в сухом состоянии до 5 недель, при комнатной температуре и солнечном свете до 6 дней, в воде - 17 дней, в помете птиц - 4 месяца и более.
Инкубационный период хламидии пситтаци составляет примерно 7-10 дней. Чаще всего у больного развивается так называемая хламидиозная, или орнитозная, пневмония, при которой поражаются бронхи и легкие.
Человек заражается от больных домашних и диких птиц при контакте с ними, а также от носителей орнитозной инфекции или объектов внешней среды, которые инфицированы возбудителем орнитоза.
Хламидия пситтаци попадает в организм человека воздушно-капельным путем. Больные птицы выделяют бактерии, которые оседают на их перьях, окружающих предметах, в пыли. Например, когда уличные голуби машут крыльями, они подбрасывают возбудителей в воздух. Если при этом если не закрыть лицо, то можно случайно вдохнуть целое облако микробов.
Заразиться можно если подкармливать птиц с руки, подбирать выпавшие перья и насыпать корм в скворечник.
При контактном пути передачи человек заражается через поврежденные слизистые оболочки и кожные покровы. Также заболевание может возникнуть при употреблении недостаточно качественно обработанных (загрязненных) пищевых продуктов.
Симптомы заболевания орнитозом начинаются проявляться остро - с сухого кашля, высокой температуры (около 39 °С), слабости, головной и мышечной боли. Также появляются признаки ларингита - ощущение осиплости или даже полная потеря голоса. Больной становится апатичным, перестает есть. С 5-7 дня появляются боли грудной клетке, одышка, кашель с кровянисто-слизистой мокротой.
При алиментарном пути передачи возбудитель попадает в желудок и двенадцатиперстную кишку. Он внедряется в клетки кишечника, повреждая его стенки. При этом больного могут беспокоить тошнота, рвота, жидкий стул.
Летальность при орнитозе не высокая (2-3%), но могут возникать рецидивы и переход болезни в хроническую форму.
Человек, болезнь которого вызвана хламидией пситтаци, не представляет опасности заражения для окружающих.
Чаще всего болезнь поражает тех, у кого ослаблен иммунитет.
К группе риска заражения респираторным хламидиозом относятся:
- дети, у которых иммунитет еще не сформировался полностью, поэтому он не способен защитить организм от инфекции;
- лица пожилого возраста, так как с возрастом защитные силы организма снижаются. В первую очередь это объясняется понижением продукции антител, из-за чего восприимчивость к инфекции повышается;
- лица с заболеваниями иммунной системы (ВИЧ-инфицированные, онкологические больные).
На сегодняшний день случаев заболевания среди населения областного центра не зарегистрировано. Однако, чтобы снизить риск заражения необходимо обратить внимание на следующие методы профилактики:
- избегание контакта с дикими, домашними и синантропными птицами, которые представляют собой потенциальный источник хламидийной инфекции;
- изоляция больных лиц с признаками респираторного заболевания;
- использование средств индивидуальной защиты (маски);
- проветривание и дезинфекция помещения и объектов, с которыми контактировал больной;
- укрепление общего иммунитета.
Помните! Болезнь легче предупредить, чем лечить. Следите за состоянием своего здоровья и в случае появления признаков инфекционного заболевания, недомогания, температуры и/или других симптомов заболевания, немедленно обращайтесь к врачу.
| Версия для печати | Версия для MS Word | Эпидемиологический надзор |
(c) Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Сахалинской области, 2006-2020 г.
Адрес: 693020, г. Южно-Сахалинск, ул. Чехова, 30-А
[youtube.player]ОРНИТОЗ ДЕКОРАТИВНЫХ ПТИЦ
Шилова Е.Н. Садчикова С.В.
ГНУ Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт
В последнее время обилие дикой и синантропной орнитофауны, постоянные миграции перелетных птиц, широко развитое птицеводство, в том числе утиное и индюшиное, популярность охоты на диких птиц и содержание экзотических и декоративных птиц, контрабанда экзотической птицы приводят к эпизоо-тологическим и эпидемиологическим предпосылкам возникновения вспышек орнитоза в России [1,2].
Данное заболевание регистрируется у многих видов птиц и является опасным для человека.
Возбудителем орнитоза, согласно современной классификации, является Chlamydophila psittaci (OIE, 2008). Исторически данное заболевание называли пситтакоз, или попугайная болезнь, т.к. источниками возбудителя для человека наиболее часто являются разные виды попугаев.
У попугаев отмечается наиболее характерное клиническое проявление орнитоза. Острое течение наблюдается, главным образом, у молодняка. Заболевание начинается снижением аппетита, сонливостью, повышением температуры, затем появляются понос, слабость ног, параличи. Заболевание продолжается 1-2 недели. Большинство больных птенцов гибнет (2-5% попугаев). У амазонских попугаев также наблюдают поражение центральной нервной системы. У австралийских попугаев часто бывает односторонний или двусторонний конъюнктивит и кератоконъюнктивит. У волнистых попугаев часто наблюдают симптомы синусита [1].
У человека заболевание может проявляться атипичной пневмонией, энтеритом, перитонитом, энцефалитом.
В настоящее время, множество людей приобретают в качестве домашних питомцев мелких, средних и крупных попугаев, а также других экзотических птиц, которые часто ввозятся в РФ контрабандой, без ветеринарных сопроводительных документов и реализуются через, так называемые, "птичьи рынки". Между тем, вакцин для профилактики орнитоза не разработано.
Исследования, проведенные в Ветеринарно-диагностическом центре УрНИВИ РАСХН (г. Екатеринбург) показывают, что выявление латентных носителей возбудителя среди таких птиц нередки: так, в 20082009 гг. из 419-ти исследованных в ПЦР проб материала от попугаев выявлена 41 положительная (что составляет 9,8% от исследованных).
Согласно наставлению N° 13-7-2/1573 Министерства сельского хозяйства по лабораторной диагностике орнитоза (хламидиоза) птиц, утвержденного Департаментом ветеринарии 26.04.99 г., лабораторные исследования на хламидиоз птиц включают:
- выявление специфических антител в сыворотке крови больных птиц в РСК (РНСК) или ИФА;
- обнаружение хламидий или антигенов хламидий в патологическом материале методом световой или люминесцентной микроскопии;
- выделение хламидий на куриных эмбрионах или лабораторных животных с последующей их идентификацией;
- выявление ДНК хламидий в патологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
В современных условиях менее трудоемким, достаточно быстрым и точным методом исследования на инфекционные заболевания является ПЦР-диагностика.
Для получения точных результатов важно правильно отобрать пробы и своевременно доставить их в лабораторию.
При диагностике орнитоза методом ПЦР у птиц отбирают:
- для прижизненного исследования - соскобы с конъюнктивы и клоаки, помет птиц (стерильными инструментами в стерильную посуду).
- при постмортальной диагностике - биоптаты (кусочки паренхиматозных органов).
Жидкости для исследования отбирают в объеме 20 куб.см, из тканей и органов вырезают кусочки размером 3х3х3 см (толщина кусочков может быть меньше).
Материалы доставляют в лабораторию в день взятия или на следующий день, хранят при температуре +2-5°С. Допускается хранение материала в течение 30 дней при - 20°С.
При групповом содержании птицы возможно брать общие пробы кала. Мы полагаем целесообразным включать в одну пробу не более 5 особей. Это гарантирует исследование материала от каждого животного и облегчает проведение противоэпизоотических мероприятий в случае лабораторного подтверждения диагноза.
При получении положительных результатов в ПЦР групповой пробы, необходимо провести исследование индивидуальных проб, отобранных специалистами государственной ветеринарной службы.
Для профилактики возникновения орнитоза декоративную птицу необходимо исследовать на орнитоз один раз в год методом ПЦР (ВЛДЦ ГНУ УрНИВИ, г. Екатеринбург), включая птиц в зоомагазинах, на выставках, а также птиц, принадлежащую частным владельцам.
Также целесообразно проводить исследования птицы на орни-тоз при приобретении новых птиц в период карантинирования и перед продажей.
Действующие ветеринарно-санитарные правила по профилактике и ликвидации орнитоза (СП 3.1. 092-96; ВП 1211-96) предусматривают противоэпизоотические мероприятия в отношении больной и подозрительной в заболевании промышленной птице [3]. В настоящее время большинство владельцев дорогих попугаев не соглашаются при отсутствии клинических признаков заболевания избавляться от своих птиц, положительно реагирующих на орнитоз, несмотря на их опасность для человека как хламидиозоносителей.
Поэтому, при выявлении положительных результатов на орнитоз в ПЦР у клинически здоровых птиц, можно рекомендовать их изоляцию и проведение химиотерапевтической обработки под наблюдением ветеринарных врачей.
Можно применять декоративным птицам один из следующих антибиотиков:
- Доксициллин, орально, 25-50 мг/кг живого веса/ сут. на 1-2 приема, курсом 14-21 день.
- Тетрациклин, орально, 40 мг/кг живого веса/сут. 14-21 день.
- Энрофлоксацин (Байтрил, Энроксил, Энрофлон) 1 раз/день, орально или внутримышечно 2,5-5 мг/кг живого веса/сут. (0,10,2 мл 2,5% раствора на кг.), курс 14-21 день.
- Эритромицин 40-50 мг/кг живого веса/сут., разделить на 2 приема, курс 14-21 дн.
Не используются антибиотики пенициллинового ряда, т.к. они не уничтожают, а лишь задерживают развитие хламидий.
Оральное применение препарата предполагает скармливание корма с антибиотиком, при этом необходимо учитывать поедаемость корма.
При введении препаратов с питьевой водой необходимо, чтобы птица получала для питья только эту воду.
Крупные попугаи и другие декоративные птицы могут отказываться потреблять корм или воду с антибиотиками, поэтому при обработке ручных птиц целесообразно лечение проводить индивидуально.
Антибиотики можно выпаивать в виде оральных растворов пипеткой или шприцом без иглы. Можно обработку антибиотиками проводить в начале курса лечения инъекционно в течение недели (байтрил, энроксил), затем этот же препарат продолжить применять орально.
При скармливании препарата групповым методом, в случае, когда в одной клетке содержится несколько птиц, необходимо контролировать потребление корма всей птицей.
После проведения курса лечения (т.е. через 2-3 недели), необходимо отобрать пробы для повторного исследования в ПЦР. При получении повторного положительного результата птица подлежит уничтожению.
При появлении клинических признаков болезни на любом этапе проведения лечения птицу также необходимо уничтожить.
На протяжении всего курса лечения необходимо проводить ежедневную санитарную обработку клетки с растворами следующих дезинфектантов: виркон, вироцид, сабисепт, септуксин, экоцид, Ника-Экстра-М.
Таким образом, карантинные и ограничительные мероприятия, ранняя диагностика, надзор со стороны государственной ветеринарной службы, использование антибиотиков с профилактической и лечебной целью, соблюдение ветеринарно-санитарных правил позволят взять под контроль эпизоотический процесс при орнитозе декоративных птиц и предупредить заболевание людей.
Список литературы
- Инфекционная патология животных./ Под ред. А.Я. Самуйлен-ко, Б.В.Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С.Воронина. - Т.2. - М.: ИКЦ "Академкнига", 2006. - С. 321-330.
- Обухов И.Л. Лабораторная диагностика инфекционных болезней методом ДНК-амплификации при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР)/ И.Л.Обухов, К.Н. Груздев // Сб. науч. тр. ВГНКИ - 1995- Т. 57 - С.36-45.
- Обухов И.Л. Орнитоз./ И.Л.Обухов, Ю.Д. Караваев, К.Н. Груздев и др. // Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Сб. сан. и вет. правил. М.: 1996 г.-с. 152155.
- Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals (mammal, birds and bees). Sixth Edition.- Volume 1.- OIE:2008, Р.431-442
Реферат: Орнитоз регистрируется у многих видов птиц и является опасным для человека.
Исследования, проведенные в Ветеринарно-диагностическом центре УрНИВИ РАСХН (г. Екатеринбург) показывают, что выявление латентных носителей возбудителя среди декоративных птиц нередки. В современных условиях менее трудоемким, достаточно быстрым и точным методом исследования на инфекционные заболевания является ПЦР-диагностика. Действующие ветеринарно-санитарные правила по профилактике и ликвидации орнитоза (СП 3.1. 092-96; ВП 1211-96) предусматривают противоэпизоотические мероприятия в отношении больной и подозрительной в заболевании птице.
Ключевые слова: орнитоз, хламидии, ПЦР, противоэпизооти-ческие мероприятия, антибиотики.
ORNITOSIS OF THE DECORATIVE BIRDS
Shilova E.N., Sadchikova S.V.
Urals scientific-research veterinary institute
Ornitosis is registrated at many kinds of birds and is dangerous for men.
Investigations which were carried out in the Veterinary-diagnostic centre of the Urals state scientific-research institute of the veterinary medicine (Yekaterinburg) show that discovering of the latent carriers of the causal agents among decorative birds are not rare. In the modern conditions which are less capacious quick enough and exact method of the investigation on the infectious diseases is the PCR-diagnostics. The active sanitary-veterinary rules in the prophylaxis and liquidation of ornitosis provide unti-epizootic measures concerning the ill and suspicious in the incidence birds.
Key-words: ornitosis, chlamidia, unti-epizootic, measurements, antibiotic.
Сведения об авторах Ответственная за переписку с редакцией: Шилова Евгения Николаевна, зав. отделом инфекционной патологии ГНУ УрНИВИ, кандидат ветеринарных наук, доцент 620142, г.Екатеринбург, ул.Белинского, 112а, Тел. (343)257-20-44, факс (343)257-82-63
Садчикова Софья Владимировна, м.н.с. Ветеринарного лабо-раторно-диагностического центра ГНУ УрНИВИ, аспирант 620142, г.Екатеринбург, ул.Белинского, 112а,
[youtube.player]ХЛАМИДИОЗЫ - разнообразные по патогенезу и клиническим проявлениям распространенные заболевания человека и животных.
Хламидии - грамотрицательные бактерии с облигатным внутриклеточным паразитизмом. Биологическое своеобразие хламидий, выражающееся в энергозависимом паразитизме и уникальном цикле развития, определяет самостоятельное положение этих микроорганизмов в системе прокариотов.
Хламидии выделены в отдельный порядок Chlamydiales, включающий одно семейство Chlamydiaceae, содержащее один род Chlamydia, состоящий из 3 видов: C. trachomatis, C. psittaci, C. pneumoniae.
Вид C. trachomatis - микроорганизмы, вызывающие заболевания, главным образом, у человека (антропонозные хламидиозы). Они обусловливают разнообразную патологию урогенитального тракта, глаз и связанную с ней хламидийную инфекцию иной локализации.
Вид С. psittaci - включает микроорганизмы, первично поражающие животных. У человека они могут вызвать зоонозные хламидиозы (орнитоз, генерализованные инфекции, связанные с сельскохозяйственными и домашними животными).
Вид C. pneumoniae - включает микроорганизмы, вызывающие респираторную патологию, передающуюся от человека к человеку. Возбудитель недостаточно изучен.
Хламидии имеют две стадии жизненного цикла: одна - инфекционная стадия, элементарного тельца (ЭТ). Эта форма приспособлена к внеклеточному существованию; другая - ретикулярное тельце (РТ) - внутриклеточная практически неинфекционная стадия, лабильна, обладает выраженной метаболической активностью. ЭТ имеют размеры 0,3 мкм, содержат нуклеоид, в клеточной стенке имеется слой - аналог пептидогликана грам/- бактерий. Эта форма проникает в клетку при фагоцитозе. Из поверхностных мембран клетки хозяина вокруг этой маленькой частицы образуется вакуоль и ЭТ превращается в крупное ретикулярное тельце (диаметр 0,5-1 мкм). Внутри образованной вакуоли РТ многократно делится. В конечном счете вся эта вакуоль через 8-12 циклов деления заполняется этими частицами и превращается во включение (микроколонию). На последней операции образуется ЭТ нового поколения. Затем мембрана, ограничивающая микроколонию, повреждается и хламидии выходят в цитоплазму и далее за пределы клетки. Помимо ЭТ и РТ имеются промежуточные или переходные формы хламидий, которые образуются на двух стадиях цикла развития, на ранней при преобразовании ЭТ в РТ и на поздней - РТ в ЭТ.
Хламидии чувствительны к антибиотикам тетрациклинового ряда, макролидам (эрит-ромицин, рифампицин).
Хламидии имеют сложную антигенную структуру. Выделяют три основных антигенных комплекса. Родоспецифический термостабильный, липополисахаридный комплекс, характерный для представителей рода, видоспецифические и типоспецифические термолабильные белковые фракции. Видоспецифический антиген определяет принадлежность штаммов к соответствующему виду. Типоспецифические антигены позволяют дифференцировать различные серовары (серотипы) хламидий внутри вида.
Вид C. psitacci объединяет возбудителей болезней птиц: орнитоз и пситаккоз (инфи-цировано до 140 видов птиц) и некоторых млекопитающих (экзогенные аборты, пневмонии и др.). Возбудитель передается человеку от птиц и животных, вызывает разнообразную форму патологии (поражения легких, заболевания нервной системы, гепатолиенальный синдром). Среди генерализованных форм летальность достигает 20%.
Вид C. trachomatis имеет наибольшую социально-медицинскую значимость. Он весьма неоднороден и представлен 15 серотипами, относящимися к 3 биоварам.
Биовар 1 - возбудитель трахомы, известный с древности. Это хронический кератоконьюнктивит, протекающий с воспалением коньюнктивы и роговицы, образованием рубцов и слепотой. До настоящего времени в ряде стран трахома интенсивно распространена. На территории бывшего союза ликвидирована в 60-е годы. В мире поражено трахомой 400 млн. человек.
Биовар 2 - возбудитель венерической лимфогранулемы. Заболевание передается половым путем. Развивается гнойный паховый лимфаденит. Активно циркулирует в Юго-Восточной Азии. Выделяется и у нас (завозные случаи).
Проблема заболеваний мочеполовых органов, вызываемых C. trachomatis за последние десятилетия приобрела чрезвычайно важное значение, что связано с высоким распространением данного вида инфекции и значительным числом развивающихся после нее осложнений. Крайне высок удельный вес хламидиозных уретритов и цервицитов среди таковых другой природы, а также различных форм восходящей генитальной хламидийной инфекции. Так, восходящая инфекция C. trachomatis может приводить к развитию эндометрита.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА
1. Бактериоскопический метод - выявление хламидий, их морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом материале).
Материал - соскобные препараты с доступных исследованию слизистых оболочек мочеполового тракта ( уретра, шейка матки и т.п.) и других органов (конъюнктива, прямая кишка и пр.) при экстрагенитальных формах. Из материала готовят мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе. Цитоплазматические включения хламидий (тельца Гальберштедтера-Провачека) содержат или крупные ретикулярные тельца или мелкие элементарные тельца. По цвету и внутренней структуре отличаются от ядра клетки и цитоплазмы. Метод характеризуется сравнительно низкой чувствительностью, позволяет диагностировать 10-20% случаев урогенитальной инфекции; при хламидийной патологии глаз чувствительность 90-100%.
Применение люминисцирующих поликлональных и моноклональных антител для выявления антигенов хламидий в цитоплазматических включениях в соскобных препаратах урогенитального тракта значительно увеличивает чувствительность и специфичность метода. Используется как прямой, так и непрямой иммунофлуоресцентный метод. При люминесцентной микроскопии антигены хламидий выявляют на красном или оранжевом фоне (при контрастировании синькой Эванса или родамином) цитоплазмы эпителиальных клеток в виде внутриклеточных включений ярко-зеленого цвета. По информативности и чувствительности уступает только бактериологическому методу.
При диагностике орнитоза и других зоонозных хламидиозов бактериоскопический метод не применяется.
2. Бактериологический метод. Выделение хламидий из инфекционного материала проводится заражением куриных эмбрионов, лабораторных животных или клеточных культур с последующей индикацией возбудителя. Материал тот же, что и при бактериоскопии. При орнитозе - кровь или мокрота. Кровь из вены (не менее 5 мл) исследуют в первые 7-10 дней заболевания, мокроту - до 14 дня заболевания. Для удаления сопутствующей микрофлоры добавляют антибиотики, не действующие на хламидии. (стрептомицин, нистатин, гентамицин). При заражении куриного эмбриона исследуемый материал вводят в желточный мешок 6-7 суточного развивающегося эмбриона. Обычно заражают 8-10 эмбрионов на 1 исследуемую пробу. При отсутствии специфической гибели эмбрионов спустя 4-10 суток после заражения под контролем бактериоскопии делают до 3 слепых пассажей.
Идентификация. Первичную идентификацию хламидий проводят на основании обнаружения типичных цитоплазматических включений, содержащих элементарные, ретикулярные тельца, и выявлении в их составе родоспецифического антигена (мазки-отпечатки из желточных мешков куриных эмбрионов - окраска по Маккиавелло, прямая и непрямая РИФ). При выделении хламидий в культурах клеток (HeLa), идентификация основана на выявлении в зараженных клетках типичных цитоплазматических включений (микроскопия с окраской по Гимзе), и родоспецифического антигена (РИФ). Оценку заражения клеток проводят через 48 - 72 часа.
При диагностике орнитоза кроме культур клеток можно заражать лабораторных животных в мозг или внутрибрюшинно.
3. Серологический метод. Антитела выявляют в сыворотке крови (исследуют 2-3 раза с интервалом 10-14 дней) и секретах половых органов. Используют для диагностики РСК, РПГА, РИФ, ИФА. Диагностически значимыми являются титры 1:32-1:64 при урогенитальных хламидиозах, 1:160 - при генерализованных инфекциях. Наиболее достоверным является нарастание титра антител в 4 и более раза. Специфические Ig M и Ig A обнаруживаются в секретах половых желез в титрах >1:8, Ig G - >1:256.
4. Кожно-аллергическая проба. Используется при диагностике орнитоза с орнитозным аллергеном. Внутрикожная проба становится положительной с первых дней заболевания у 87-95% больных, сохраняясь до года и более.
МИКОПЛАЗМЫ. МИКОПЛАЗМОЗЫ
В настоящее время описано свыше 100 видов М., отнесенных к трем порядкам. Наибольшее значение в патологии человека имеют М. семейства Micoplasmataceae. В состав этого семейства входят 2 рода:
1. Mycoplasma (более 70 видов);
2. Ureoplasma (2 вида).
Среди микоплазм имеются как свободноживущие (сапрофиты), так и поражающие млекопитающих, птиц, насекомых, а также растения. Размер М. 0,15 - 0,3 мкм. Они полностью лишены клеточной стенки и ее дериватов. Однако они способны размножаться на бесклеточных питательных средах, где образуют характерные колонии.
Клетки М. полиморфные - шарообразные, мелко зернистые, звездчатые, нитевидные. Размножение - бинарное деление, возможна фрагментация нитей, почкование. Имеются микоплазмы, обладающие скользящей подвижностью (подобно амебе), некоторые обладают жгутиками.
М. окружена 3-хслойной липопротеиновой мембраной, которая состоит из стериновых липидов, что отличает их от других прокариотов и сближает с эукариотами. Отсюда потребность микоплазм в стироле для роста и синтеза мембран. ЦПМ выполняет одновременно функции клеточной стенки и собственно мембраны и несет ряд важнейших физиологических функций: регулирует процессы метаболизма, энергетический обмен, рецепцию токсинов, обеспечивает адсорбцию эритроцитов, сперматозоидов, эпителиальных и др. клеток.
Отсутствие клеточной стенки определяет отличительные свойства микоплазм: чрезвычайную пластичность, полиморфизм, чувствительность к лизису под влиянием осмотического шока, алкоголя, детергентов, фильтруемость через мембранные фильтры, устойчивость к антибактериальным препаратам, действующим на клеточную стенку.
На агаризованных питательных средах М. образуют небольшие колонии похожие на яичницу-глазунью (10-200 мкм) в зависимости от вида.
Недостаток белков - ферментов ограничивает число метаболических путей, поэтому микоплазмы крайне чувствительны к питательным средам, в состав которых обязательно должны входить: пуриновые и пиримидиновые основания, аминокислоты, витамины, липиды, в том числе стероиды.
Паразитируя в организме хозяина, они потребляют эти вещества непосредственно из тканей организма-хозяина.
Заболевания, вызываемые микоплазмами - микоплазмозы относятся к одним из наиболее часто встречающихся заболеваний. Это ОРЗ до 10% всех случаев (основные возбудители M. pneumoniae и M. hominis); пневмонии - около 20% всех пневмоний (M. pneumoniae, hoominis); внереспираторные проявления респираторного микоплазмоза: миокардиты, перикардиты, неврологические проявления (неврит, менингоэнцефалит и др.), нефрит, отит, синусит.
Урогенитальные микоплазмозы занимают значительное место среди болезней, передающихся половым путем. Основные возбудители: М. hominis, M. genitalium, M. fermentans. Микоплазменная инфекция у мужчин может быть причиной уретритов, простатитов, у женщин - вагинитов, цевицитов, осложнений беременности (самопроизвольные выкидыши, преждевременные роды, послеродовой сепсис). С микоплазменной инфекцией многие связывают нарушение репродуктивной функции мужчин и женщин.
ОБЩАЯ И ЧАСТНАЯ ВИРУСОЛОГИЯ
[youtube.player]
УТВЕРЖДАЮ Заместитель руководителя Департамента ветеринарии В.В.Селиверстов 30 июня 1999 г. N 13-7-2/643
1. Общие положения
1. Общие положения
1.1. Лабораторные методы исследования на хламидийные инфекции животных включают:
- выявление специфических антител в сыворотке крови больных животных в РСК (РДСК) или ИФА;
- обнаружение хламидий и их антигенов в патологическом материале методом световой или люминесцентной микроскопии;
- выделение хламидий на куриных эмбрионах в культуре клеток или лабораторных животных с последующей их идентификацией;
- выявление ДНК хламидий в патологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
1.2. В лабораторию для исследования на хламидийные инфекции направляют:
- сыворотку крови в количестве 3-5 см от абортировавших или подозрительных по заболеванию животных, а также во всех случаях, предусмотренных действующей инструкцией. Кровь от абортировавших животных берут дважды: в период клинического проявления болезни и повторно, от них же, через 14-21 день. Сыворотки направляют в лабораторию в количестве 1-2 см . Сыворотки хранят при температуре минус 20°С и исследуют одномоментно. Сыворотки гемолизированные или контаминированные бактериальной и грибковой флорой непригодны;
- патологический материал (соскобы с конъюнктивы, гениталий, фекалии) берут только одноразовыми или стерильными инструментами в одноразовые пластиковые пробирки с крышками или в стерильные пробирки (флаконы) с резиновыми пробками с физраствором в количестве 1 см и доставляют в лабораторию в емкости со льдом в течение 24 часов. Хранить материал можно не более 7 суток при 4°С и 10-12 мес при температуре минус 20°С;
- пробы эякулята или замороженной спермы, полученные от производителей, подозрительных по заболеванию. Пробы эякулята направляют для исследования в количестве 1 см ; замороженную сперму в количестве не менее 2 гранул доставляют в лабораторию в контейнере с жидким азотом или в пробирке с сухим льдом;
- патологический материал от павших или убитых больных животных (кусочки паренхиматозных органов, лимфатических узлов и семенников), от абортировавших животных (кусочки плаценты);
- абортированные плоды целиком или паренхиматозные органы и сычуг плода.
Патологический материал отбирают в стерильные, герметически закрывающиеся флаконы не позднее двух часов после гибели, убоя животного или аборта.
Флаконы с патматериалом помещают в термос со льдом, а абортированные плоды во влагонепроницаемую тару и в тот же день, но не позже 24 часов, доставляют в лабораторию с соблюдением мер, исключающих распространение возбудителя инфекции.
2. Серологические исследования
2.1. Серологические исследования на хламидийные инфекции основаны на выявлении специфических антител в сыворотке крови животных в реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента (РДСК) и методом иммуноферментного анализа (ИФА), у абортировавших животных - на установлении нарастания титра антител в 4 и более раз.
Животных, вакцинированных против хламидийного аборта, серологически не исследуют в течение 1 года после вакцинации.
2.2. В РСК, РДСК используют следующие компоненты:
- комплементсвязывающий группоспецифический хламидийный антиген;
- контрольный антиген;
- позитивную (иммунную) сыворотку крови овец, содержащую группоспецифические хламидийные антитела;
- негативную (отрицательную) сыворотку крови овец;
- комплемент (свежая, консервированная или лиофильно высушенная сыворотка крови морской свинки);
- гемолизин (сыворотка крови кролика, иммунизированного эритроцитами барана);
- эритроциты барана;
- испытуемые сыворотки;
- физиологический раствор, рН 7,0-7,2.
Специфический и контрольный антигены, позитивную и негативную сыворотки изготавливают биофабрики, выпускающие их в специальных наборах.
Антиген разводят в дистиллированной воде и применяют в РСК, РДСК в рабочих титрах, указанных на этикетке.
2.3. Гемолизин в РСК и РДСК используют в удвоенном титре (например, при титре гемолизина 1:1000 его берут 2:1000).
2.4. Эритроциты барана отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500-3000 об./мин в течение 10-15 мин до полной прозрачности надосадочной жидкости.
Для РСК применяют 2,5%-ную, для РДСК - 3%-ную взвесь эритроцитов из осадка.
Перед работой взвесь эритроцитов и гемолитическую сыворотку в рабочем разведении смешивают в равных объемах, полученную гемолитическую систему ставят в термостат при 37°С на 20-30 мин для сенсибилизации. Во время работы гемолитическую систему хранят при комнатной температуре или в холодильнике при 2-4°С.
2.5. Для серологического исследования пригодны лишь свежие испытуемые сыворотки. Допускаются к исследованию и однократно замороженные, а также сыворотки, консервированные борной кислотой (2% к объему) или мертиолятом (1:10000).
Мутные, проросшие или гемолизированные сыворотки для исследования непригодны.
2.6. Физиологический раствор для разведения компонентов (0,85% раствор химически чистого хлорида натрия в дистиллированной воде, рН 7,2-7,4) готовят и кипятят в течение 5 минут за день или в день постановки реакции.
2.7. Постановка реакции связывания комплемента (РСК).
2.7.1. Реакцию ставят в объеме 1 см (по 0,2 см каждого компонента).
Комплемент титруют каждый раз перед постановкой главного опыта на позитивной и 1-2 испытуемых сыворотках.
2.7.2. Титрование комплемента. Сухой биофабричный комплемент растворяют физиологическим раствором до первоначального объема, указанного на этикетке, и готовят основное разведение 1:20.
Каждую сыворотку, разведенную 1:5 (1 см сыворотки + 4 см физиологического раствора) инактивируют при 58-60°С 30 мин, разливают по 0,2 см в два ряда пробирок штатива Флоринского. Титрование комплемента начинают с дозы 0,02 см до 0,2 см с интервалом по 0,02 см . Для этого в дополнительный ряд пробирок вносят разведенный 1:20 комплемент в десятикратном объеме в дозах 0,2; 0,4; 0,6 и т.д. до 2,0 см и добавляют в каждую пробирку недостающее до 2 см количество физиологического раствора, т.е. 1,8; 1,6; 1,4 и т.д. Затем из первого разведения комплемента переносят по 0,2 см в первые пробирки всех сывороток, из второго разведения соответственно во вторые и т.д. (это можно выполнять аппаратом Флоринского с мерными пипетками по 0,2 см ).
Первые ряды пробирок с позитивной и испытуемыми сыворотками (взятыми из опыта) разливают специфический антиген в рабочем разведении в антигенные ряды по 0,2 см , а во вторые ряды - по 0,2 см физраствора. Пробирки встряхивают и ставят в водяную баню на 60 мин при 37-38°С.
Затем во все пробирки разливают гемолитическую систему по 0,4 см , встряхивают и ставят в водяную баню на 20 мин при 37-38°С (схему титрования комплемента см. в таблице 1).
СХЕМА ТИТРОВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (ПО ПЕРВОМУ РЯДУ ПРОБИРОК)
Читайте также: