Особенности биологического метода диагностики инфекционных заболеваний

Микроскопический. С помощью микроскопии нативного патологического материала определяют вид возбудителя заболевания по форме, взаиморасположению и способности окрашиваться определенными кра­сителями.

Бактериологический. Этот метод основан на выделении чистой культуры возбудителя заболевания и его идентификации (определение вида микроба).

Серологический. Метод основан на определении специфических антител в крови больных или переболевших инфекционными заболева­ниями к соответствующим возбудителям с помощью различных реакций (агглютинации, пассивной гемагглютинации, связывания комплемента, преципитации и других).

Биологический. В основе этого метода лежит заражение лабораторных животных исследуемым материалом от больного с целью воспроизведения у них инфекционного заболевания или последующего выделения возбудителя.

Аллергический. С помощью этого метода обнаруживают повышен­ную чувствительность макроорганизма к определенным возбудителям инфекционных заболеваний или продуктам их жизнедеятельности. Для аллергических проб используют препараты, которые называются аллергенами.

Молекулярно-генетический. С помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяют в исследуемом материале наличие возбудителя инфекционного заболевания по специфичным для него последовательностям нуклеотидов.

ПРИЗНАКИ, ПРИМЕНЯЕМЫЕ ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ (для определения вида микроба)

Морфологические - форма, величина и характер расположения микробов друг к другу.

Тинкториалные - способность микробов окрашиваться различ­ными красителями.

Культуральные - особенности роста микробов на жидких и плотных питательных средах.

Биохимические - способность микроорганизмов потреблять различные вещества (углеводы, белки и другие) с образованием характерных конечных продуктов, или наличие у микроорганизмов различных ферментов (уреаза, цистиназа и другие).

Антигенные - особенности химического состава микробных клеток (антигенной структуры), выявляемые с помощью специфических диагностических иммунных сывороток,

Чувствительность к специфическим фагам - способность бактерий лизироваться эталонными специфическими фагами.

Биологические свойства. Токсигенность - способность продуци­ровать экзотоксин. Чувствительность к определенным колицинам или тип синтезируемых колицинов.

Определение понятий "микроорганизмы" и "вид"

Микроорганизмы - это невидимые простым глазом живые существа, включающие в себя представителей всех царств жизни - плазмиды, вирусы, прокариоты (эубактерии и архебактерии) и эукариоты. Они стоят на низших ступенях эволюции и играют важную роль как в общей экономике природы, так и в патологии человека, животных и растений.

Вид - совокупность микроорганизмов, имевших общий корень происхождения, сходный генотип (более 80% гомологии ДНК) и макси­мально близкие фенотипические признаки и свойства.

Метод люминесцентной микроскопии.

Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ светиться под действием коротковолновых лучей света. При этом длина волны излучаемого при люминесценции света всегда будет больше, чем длина волны света, возбуждающего люминесценцию. Так, если освещать объект синим светом, то он будет испускать лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цветов.

Препараты для люминесцентной микроскопии окрашивают специаль­ными (светящимися) люминесцентными красителями - флуорохромами (например, раствор акридинового оранжевого 1:5000 - 1:10000). Лучи света от сильного источника (обычно ртутной лампы сверхвысокого давления) пропускаются через сине-фиолетовый фильтр. Под действием этого коротковолнового излучения окрашенные акридиновым оранжевым бактерии начинают светиться красным или зеленым светом. Для того, чтобы синий свет, вызывающий люминесценцию, не мешал наблюдению, над окуляром микроскопа ставят "запирающий" желтый светофильтр, задерживающий синие, но пропускающие желтые, зеленые и красные лучи.

В результате при наблюдении в микроскопе на темном фоне будут видны микробные клетки, светящиеся желтым, зеленым или красным цветом. При окраске акридиновым оранжевым дезоксирибонуклеиновая кислота (ядерное вещество) будет светиться ярко-зеленым цветом, а находящаяся в цитоплазме рибонуклеиновая кислота - красным цветом.

Метод люминесцентной микроскопии позволяет изучать живые нефиксированные бактерии, окрашенные сильно разведенными растворами красителей, не причиняющих вреда микробным клеткам. По характеру свечения могут быть дифференцированы отдельные химические вещества, входящие в состав микробной клетки. Метод с большим эффектом может -быть использован для ускорения диагностики ряда заболеваний.

Флуоресцирующими красителями можно обрабатывать диагностические сыворотки, содержащие антитела к определенным бактериям. Краситель, например, изотиоцианат флуоресцеина, химически соединяется с глобулинами иммунной сыворотки и таким образом как бы избиратель­но метит антитела.

Люминесцирующие сыворотки могут быть использованы для идентификации выделенных культур бактерии и для ускоренной индикации патогенных микробов во внешней среде и в выделениях больных.

Сущность иммунофлуоресцентного метода исследования заключается в том, что из исследуемого материала готовят мазок и после высушивания и фиксации обрабатывают его люминесцирующей сывороткой. При наличии в исследуемом мазке гомологичных бактерий, вследствие адсорбции на них меченных флуоресцирующим краси­телем антител, в люминесцентном микроскопе на темном фоне препарата обнаруживается специфическое яркое желто-зеленое свечение по периферии бактериальных клеток. Центральная часть клеток не светится. Присутствующие в препарате посторонние микробные клетки не светятся.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

[youtube.player]

Инфекционные болезни — это заболевания, вызванные проникновением в организм бактерий, грибков или вирусов. Самая важная часть диагностики инфекций — это определение возбудителя и его концентрации. Для этих целей используются разнообразные лабораторные методы, которые позволяют выяснить, чем именно и как давно атакован организм, а в некоторых случаях — спрогнозировать эффективность лечения тем или иным препаратом.

Особенности диагностики инфекционных заболеваний

В клинической практике данный тип заболеваний встречается очень часто. Именно они, по данным Всемирной организации здравоохранения, становятся причиной 26% всех смертей. В список самых распространенных инфекционных заболеваний входят инфекционная пневмония и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, гепатит, ВИЧ, туберкулез, малярия, воспаления органов половой системы и мочевыводящих путей, гистоплазмоз, ротавирусные инфекционные заболевания, ветряная оспа, герпес, вирус папилломы человека и еще несколько десятков болезней. Хотя бы раз в жизни каждый из нас сталкивается с инфекционными заболеваниями и необходимостью быстрой постановки диагноза.

Все инфекционные болезни делятся на пять типов — прионные, вирусные, бактериальные, протозойные и грибковые поражения. Далее будут рассмотрены последние четыре типа как наиболее распространенные. Разные возбудители иногда могут вызывать одно и то же заболевание. В частности, пневмония может быть результатом как вирусной, так и бактериальной инфекции. Лечение зависит не от проявлений, а от возбудителя болезни. Противовирусные препараты бесполезны в борьбе с бактериями и грибками, антибиотики не действуют на вирусы. Поэтому основная задача лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — выявление типа возбудителя.

Способы лабораторной диагностики инфекционных болезней можно разделить на два типа: неспецифические и специфические методы.

К неспецифическим относятся общий анализ крови и исследование соотношения ее белковых фракций, печеночные пробы, общий анализ мочи и кала. Эти методы не дают информации о виде возбудителя, но позволяют узнать, в какой мере болезнь затронула органы и системы организма, что именно в их работе нарушено и насколько далеко зашел процесс.

Специфические — вирусологический и бактериологический методы, микроскопическое исследование возбудителей, анализы на антигены и антитела — направлены непосредственно на обнаружение возбудителя.

Современная медицина располагает множеством методов выделения возбудителей бактериальной инфекции:

Бактериоскопический . Исследуется окрашенный специальным образом мазок.

Бактериологический . Биоматериал высеивается в питательную среду, и через некоторое время специалист исследует колонию бактерий, выросшую в ней.

Биологический . Направлен на определение патогенности микроорганизмов.

Серологический . Выявляет антитела и антигены в сыворотке крови — особые вещества, которые вырабатываются организмом при контакте с возбудителем определенной болезни.

Чаще всего для исследований используют кровь или сыворотку крови, реже — слюну, мочу, кал, клетки эпителия (мазок и соскоб) и другой биоматериал.

В лабораторной диагностике вирусных заболеваний используются:

Вирусологическое исследование . Световая и электронная микроскопия дает возможность выявить наличие вирусных включений и сами вирусы и идентифицировать их.

Серологическое исследование для обнаружения антител и антигенов. Этот метод дает возможность быстро выявить агрессора, как и в случае с бактериальными инфекциями. Для диагностики используются разнообразные способы исследования материала — реакции гемадсорбции, гемагглютинации или метод непрямой иммунофлюоресценции. Имунноблоттинг, в частности, позволяет выявлять антитела сразу к нескольким инфекциям и считается современным и точным диагностическим методом.

Молекулярно-генетические методы . Последнее слово в лабораторной диагностике. Позволяют обнаружить вирус даже тогда, когда его концентрация ничтожно мала — то есть на самых ранних стадиях. Самым известным из этих методов является ПЦР, при которой фрагмент вируса многократно копируется до тех пор, пока специалист не получит достаточно материала для определения типа вируса и его изначальной концентрации.

Для выявления вирусов обычно требуется сделать анализ крови.

Так называют инфекции, вызванные простейшими паразитами, например, амебами. Малярия, амёбиаз, токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз, сонная болезнь — вот неполный список самых распространенных протозойных инфекций. Лабораторная диагностика таких заболеваний включает в себя следующие методы:

Микроскопический . Простейшие паразиты выявляются путем исследования под микроскопом окрашенных образцов биоматериала. Самый простой и надежный метод для многих возбудителей.

Культуральный . Посев биоматериала в питательную следу для дальнейшего исследования размножившихся простейших. У этого метода есть существенный недостаток: результатов нужно ждать долго, сам процесс может занять не менее 5-6-ти дней.

Серологический . Используют редко ввиду малой информативности.

Аллергический . Также не является распространенным. Кожные аллергопробы делают для того, чтобы подтвердить лейшманиоз и токсоплазмоз. Это вспомогательный диагностический метод.

В качестве биоматериала для исследований в основном используется кровь, иногда — – кал или моча.

Микроскопическое исследование . Препарат окрашивается и рассматривается под мощным микроскопом. Посредством иммунофлюоресцентной микроскопии исследуется проба, помеченная флюоресцеинами — специальным красителем. Наиболее быстрый способ выявления грибка по сравнению с другими методами.

Культуральный . Происходит посев пробы на питательную среду и дальнейшее исследование полученной в результате колонии грибков.

Серологический . Используется для выявления грибковых поражений, однако для микозов он считается не особенно точным.

Гибридизация нуклеиновых кислот . Самый современный способ выявления грибковых инфекций, его применяют для идентификации основных возбудителей системных микозов. Из культуры извлекается РНК и вносится особым способом помеченная молекула ДНК. Если в пробе наличествует один из основных патогенных грибков, ДНК объединится с его РНК, создав легко различимую структуру. Несомненным преимуществом метода является возможность определить инфекцию на самых ранних стадиях.

Биоматериалом для исследований являются клетки кожи, волос и ногтей, клетки слизистых оболочек (мазок или соскоб), мокрота, моча, секрет простаты, сперма, грудное молоко.

Современные методики диагностики инфекций позволяет выявить их на начальном этапе, Чем раньше болезнь будет обнаружена, тем проще ее вылечить. Поэтому сдавать анализы на инфекции желательно регулярно, даже если вы ни на что не жалуетесь и не замечаете никаких перемен в самочувствии.

Пе­ред сда­чей био­ма­те­ри­а­ла для ис­сле­до­ва­ний иног­да тре­бу­ет­ся опре­де­лен­ная под­го­тов­ка. Так, кровь обыч­но сда­ют с ут­ра, на­то­щак, а пе­ред за­бо­ром маз­ка не ре­ко­мен­ду­ет­ся при­ни­мать душ. Эти тре­бо­ва­ния очень важ­ны: они обес­пе­чи­ва­ют точ­ность ре­зуль­та­та, по­это­му узнай­те у вра­ча за­ра­нее о под­го­то­ви­тель­ных ме­рах и точ­но сле­дуй­те всем его ре­ко­мен­да­ци­ям.

[youtube.player]

Методы заражения животных.Дозы, определяющие вирулентность, зависят не толь­ко от вида и штамма микроорганизма, но и от вида и возраста подопытного животного, а также от способа заражения. Поэтому для получения сравнимых ре­зультатов исследования проводят на животных одного вида, пола и массы. При работе с бактериями использу­ют 18—24-часовую культуру, так как в более старых культурах присутствует много погибших клеток. Лабораторных животных используют также для:

1. вы­деления микроорганизмов из исследуемого материала, особенно в тех случаях, когда возбудитель не может быть обнаружен методом посева, например при вирус­ных заболеваниях, риккетсиозах и др.;

2. для выделения чистой культуры патогенного микроорганизма из мате­риала, загрязненного другими микроорганизмами;

3. для изучения действия микробных токсинов (определение DLM-токсина, определение дермонекротического дейст­вия и т. д.);

4. для экспериментального воспроизведения некоторых инфекций. Последнее часто используют для изучения эффективности антибиотиков, химиотерапевтических и иммунобиологических препаратов.

При выборе вида лабораторного животного необходимо учитывать степень его восприимчивости к изучаемому возбудителю инфекции.

Для экспериментального заражения чаще использу­ют белых мышей, крыс, морских свинок и кроликов. Для некоторых специальных исследований служат обезьяны, кошки, собаки, лошади, крупный и мелкий рогатый скот, дикие животные (хомяки, суслики, дикие крысы, полев­ки), птицы (куры, голуби и т. д.), а также куриные эм­брионы. Перед опытом животных взвешивают, марки­руют, при проведении некоторых опытов термометрируют. При манипуляциях с животными их иммобилизуют с помощью специальных приспособлений или фиксируют мелких животных руками, работая с помощником или без него. Инструменты, предназначенные для работы с животными, стерилизуют кипячением.

Существуют следующие способы заражения: подкож­ный, внутрикожный, накожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, пероральный (через рот), интраназальный (через нос в дыхательный тракт), вве­дение в глаз, введение в центральную нервную систему. При внутрикожном или накожном способе зара­жения шерсть на месте введения или нанесения материа­ла удаляют выстриганием, выщипыванием или депилированием.

Вскрытие и микробиологическое исследование погиб­ших животных.Вскрытие следует производить непосред­ственно после гибели животного, чтобы избежать про­никновения микроорганизмов из кишечника в кровь и другие органы. При отсутствии такой возможности тру­пы сохраняют на холоде. Вскрытие производят на спе­циальном столе в отдельной комнате. На столе должно находиться все необходимое для вскрытия и бактерио­логического исследования секционного материала: доска или кювета, залитая парафином,— для фиксации живот­ного, газовая горелка или спиртовка, сосуд со спиртом и ватой на дне, в котором находятся простерилизованные инструменты (ножницы, скальпель, хирургический и анатомический пинцеты и пр.), стерильные ватные тампоны, бактериальная петля, стерильные пастеровские пипетки, предметные стекла, чашки Петри, пробирки с питательными средами. Выбор сред зависит от вида микроорганизма, который считают причиной гибели жи­вотного.

Все наблюдения, сделанные во время вскрытия, про­токолируют. Отмечают вид животного, номер, время и место заражения, материал, применяемый для зараже­ния, время гибели, обнаруженные изменения и т. д. Во время вскрытия необходимо следить за тем, чтобы жид­кость и кусочки тканей и органов не попали на стол. После каждой манипуляции инструменты промывают водой или спиртом и прожигают.

Вскрытие состоит из следующих этапов: 1) фиксация животного; 2) осмотр наружных покровов; 3) вскрытие; 4) ис­следование грудной полости; 5) вскрытие и исследование брюшной полости.

Отмечают цвет, величину и консис­тенцию каждого органа. Из измененных органов (или из всех, в зависимости от цели эксперимента) делают высев на питательные среды, мазки и мазки-отпечатки. Для посева прижженную поверхность органа надрезают сте­рильным скальпелем, из глубины органа вырезают ма­ленький кусочек, часть его помещают в питательную среду, а из другой делают мазки-отпечатки, приклады­вая срезанную часть к стеклу. Обязательно делают по­сев крови из сердца. Для этого прижигают раскаленным скальпелем верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают прожженный участок, кровь при этом поднимается в капилляр. Кровь из капилля­ра выдувают в питательные среды и делают из нее мазки.

После окончания вскрытия производят тщательную уборку рабочего места. Труп животного сжигают или автоклавируют. Инструменты стерилизуют кипячением или автоклавируют. Доску или кювету протирают спиртом и прожигают или заливают на сутки дезинфицирую­щим раствором. Мазки фиксируют в пламени или жид­ким фиксатором, окрашивают и изучают.

III. План практической работы

1. Провести обнаружение бактериальных структур, являющихся факторами патогенности

а) капсулы бактерий в готовых мазках

б) жгутиков бактерий – зарисовать различные варианты расположения жгутиков (монотрих, лофотрих, амфитрих, перитрих).

в) корд-фактора у патогенных микобактерий

При культивировании микобактерий на предметных стеклах, погруженных в жидкую среду на основе цитратной крови, микроколонии вирулентных штаммов вырастают в виде переплетающихся кос – тяжей, вследствие наличия корд-фактора. Для их обнаружения стекла окрашивают по методу Циля-Нильсена и проводят иммерсионную микроскопию (метод микрокультивирования по Прайсу).

2. Учесть результаты определения факторов патогенности стафилококка: гемолизина, лецитиназы и плазмокоагулазы.

Гемолизин (экзофермент, по механизму действия мембранотоксин) определяют путем посева испытуемой культуры на чашки Петри с кровяным агаром. Посевы инкубирую при 37°С в течение 24 часов. Вокруг колоний гемолитических микроорганизмов образуются зоны полного (β) или неполного, зеленящего (ά) гемолиза.

Для обнаружения лецитиназы производят посев исследуемой культуры на питательный агар с лецитином (желточный агар). Вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском.

Плазмокоагулаза выявляется при посеве испытуемой культуры в 0,4 мл стерильной цитратной плазмы крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 2-5 ч. В случае образования фермента происходит свертывание плазмы (образование геля), а в контроле она остается жидкой (золь).

3. Учесть результаты определения токсигенности дифтерийной палочки, зарисовать.

4. Зарисовать схему этапов проведения биологического метода диагностики инфекционных заболеваний.

5. Заполнить таблицы по теме занятия

6. Решить ситуационные задачи

УИРСУчесть результаты чувствительности микрофлоры зева к антибактериальным препаратам, заполнить таблицу.

[youtube.player]

Биологический метод заключается в выделении чистой культуры возбудителя путем заражения лабораторных животных исследуемым материалом от больного и последующим бактериологическим исследованием трупа животного.

Биологический метод проводится с использованием чувствительных лабораторных животных. Для экспериментального заражения чаще использу­ют белых мышей, крыс, морских свинок и кроликов. Для некоторых специальных исследований служат обезьяны, кошки, собаки, лошади, крупный и мелкий рогатый скот, дикие животные (хомяки, суслики, дикие крысы, полев­ки), птицы (куры, голуби и т. д.), а также куриные эм­брионы. При выборе вида лабораторного животного необходимо учитывать степень его восприимчивости к изучаемому возбудителю инфекции. Для получения сравнимых ре­зультатов исследования проводят на животных одного вида, пола и массы.

Лабораторные животные используются не только с целью выделения и накопления чистой культуры, но и для изучения клинической картины заболевания и для учета реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой.

Существуют следующие способы заражения: подкож­ный, внутрикожный, накожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, пероральный (через рот), интраназальный (через нос в дыхательный тракт), вве­дение в глаз, введение в центральную нервную систему. При внутрикожном или накожном способе зара­жения шерсть на месте введения или нанесения материа­ла удаляют выстриганием, выщипыванием или депилированием.

Вскрытие следует производить непосред­ственно после гибели животного, чтобы избежать про­никновения микроорганизмов из кишечника в кровь и другие органы. Все наблюдения, сделанные во время вскрытия, про­токолируют. Отмечают вид животного, номер, время и место заражения, материал, применяемый для зараже­ния, время гибели, обнаруженные изменения и т. д. Во время вскрытия необходимо следить за тем, чтобы жид­кость и кусочки тканей и органов не попали на стол. После каждой манипуляции инструменты промывают водой или спиртом и прожигают. Отмечают цвет, величину и консис­тенцию каждого органа. Из измененных органов (или из всех, в зависимости от цели эксперимента) делают высев на питательные среды, мазки и мазки-отпечатки. Для посева прижженную поверхность органа надрезают сте­рильным скальпелем, из глубины органа вырезают ма­ленький кусочек, часть его помещают в питательную среду, а из другой делают мазки-отпечатки, приклады­вая срезанную часть к стеклу. Обязательно делают по­сев крови из сердца. Для этого прижигают раскаленным скальпелем верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают прожженный участок, кровь при этом поднимается в капилляр. Кровь из капилля­ра выдувают в жидкие питательные среды и делают из нее мазки. После окончания вскрытия производят тщательную уборку рабочего места. Труп животного сжигают или автоклавируют. Инструменты стерилизуют кипячением или автоклавируют. Доску или кювету протирают спиртом и прожигают или заливают на сутки дезинфицирую­щим раствором. Мазки фиксируют в пламени или жид­ким фиксатором, окрашивают и изучают.

Биопроба — метод контроля биологических препаратов (вакцин, сывороток), основанный на их введении лабораторным животным с целью оценки токсичности, пирогенности и иммунологической активности.

III. План практической работы

1. Провести обнаружение бактериальных структур, являющихся факторами патогенности

а) капсулы бактерий в готовых мазках

Для обнаружения капсул используют метод Бурри-Гинса: на первом этапе тушь, обтекая капсульные бактерии, создает черный или коричневый фон (соответствующий цвету туши) на котором хорошо видны неокрашенные бактерии, которые на втором этапе окрашиваются фуксином в красный цвет, а капсула остается бесцветной. Таким образом, капсулы бактерий хорошо видны на темном фоне в виде прозрачных, белых ореолов вокруг красных бактерий.

б) жгутиков бактерий — зарисовать различные варианты расположения жгутиков (монотрих, лофотрих, амфитрих, перитрих).

По количеству и расположению жгутиков различают монотрихи — один жгутик, перитрихи — жгутики по всей поверхности бактериальной клетки, лофотрихи — пучок жгутиков на одном конце клетки, амфитрихи — единичные жгутики или пучки жгутиков на разных полюсах клетки.

в) корд-фактора у патогенных микобактерий

При культивировании микобактерий на предметных стеклах, погруженных в жидкую среду на основе цитратной крови, микроколонии вирулентных штаммов вырастают в виде переплетающихся кос — тяжей, вследствие наличия корд-фактора. Для их обнаружения стекла окрашивают по методу Циля-Нильсена и проводят иммерсионную микроскопию (метод микрокультивирования по Прайсу).

2. Учесть результаты определения факторов патогенности стафилококка: гемолизина, лецитиназы и плазмокоагулазы.

Гемолизин (экзофермент, по механизму действия мембранотоксин) определяют путем посева испытуемой культуры на чашки Петри с кровяным агаром. Посевы инкубирую при 37°С в течение 18-24 часов. Вокруг колоний гемолитических микроорганизмов образуются зоны полного (β) или неполного, зеленящего (α) гемолиза.

Для обнаружения лецитиназы производят посев исследуемой культуры на питательный агар с лецитином (желточный агар). Вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском.

Плазмокоагулаза выявляется при посеве испытуемой культуры в 0,4 мл стерильной цитратной плазмы крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 2-5 ч. В случае образования фермента происходит свертывание плазмы (образование геля), а в контроле она остается жидкой (золь).

3. Учесть результаты определения токсигенности дифтерийной палочки, зарисовать.

Полоску фильтровальной бумаги, пропитанной антитоксической противодифтерийной сывороткой, накладывают на поверхность прозрачного сывороточного агара в чашке Петри. Культуры дифтерийной палочки сеют бляшками на расстоянии 0,6-0,8 см от полоски фильтровальной бумаги и 1-1,5 см друг от друга. Исследуемые и контрольную (токсигенную) культуры дифтерийной палочки чередуют с одной стороны полоски фильтровальной бумаги, а напротив, с другой стороны полоски сеют одноименные культуры (дубли). Чашку инкубируют при 37 ◦ С в течение 24-48 часов. Затем проводят учет. Положительной реакция считается при наличии тонкой линии преципитата между полоской фильтровальной бумаги и ростом бактерий в виде бляшки, отрицательной — при её отсутствии. Реакция считается специфичной, если контрольная (токсигенная) культура дала положительный результат.

4. Зарисовать схему этапов проведения биологического метода диагностики инфекционных заболеваний.

5. Заполнить таблицы по теме занятия

6. Решить ситуационные задачи

УИРС.Учесть результаты чувствительности микрофлоры зева к антибактериальным препаратам, заполнить таблицу.

IV. Примеры ситуационных задач

Ситуационная задача № 1

Больной А, 18 лет, поступил в инфекционное отделение с карбункулом затылочной области. При проведении бактериологического исследования выделена чистая культура этиологического агента инфекционного заболевания. При изучении факторов патогенности выделенной чистой культуры выявлена зона опалесценции на желточном агаре и зона полного просветления на кровяном МПА. Дайте характеристику данного микроорганизма.

1. лецитиназа положительный
2. лецитиназа отрицательный
3. плазмокоагулаза положительный
4. уреаза положительный
5. гемолитический (β-гемолиз)

В инфекционное отделение детской областной больницы поступил ребенок 6 лет с подозрением на дифтерию. В ходе бактериологического исследования выделена чистая культура дифтерийной палочки (Corynebacterium diphtheriae). При проведении реакции преципитации в агаровом геле с антитоксической противодифтерийной сывороткой определяется зона преципитации. Сформулируйте заключение:

1. исследуемая культура дифтерийной палочки лецитиназа положительна
2. исследуемая культура дифтерийной палочки токсигенна
3. исследуемая культура дифтерийной палочки коагулаза положительна
4. исследуемая культура дифтерийной палочки не токсигенна

Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний

1. Антибиотики и антимикробная терапия

2. Основные группы химиопрепаратов и антибиотиков

3. Механизмы действия антибактериальных препаратов на микроорганизмы

4. Побочное действие антибиотиков

5. Механизмы антибиотикорезистентности микроорганизмов

6. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам

8. Формы симбиоза

9. Классификации инфекционных заболеваний и форм инфекций

10. Периоды и исходы инфекционного заболевания

11. Патогенность и вирулентность, единицы вирулентности

12. Основные факторы патогенности микроорганизмов

13. Микробные токсины

14. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний

Общие условия выбора системы дренажа: Система дренажа выбирается в зависимости от характера защищаемого.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Механическое удерживание земляных масс: Механическое удерживание земляных масс на склоне обеспечивают контрфорсными сооружениями различных конструкций.

Папиллярные узоры пальцев рук - маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

[youtube.player]

Раннее выявление инфекционных больных имеет важное значение для своевременного начала лечения пациентов и проведения противоэпидемических мероприятий в очаге инфекции.

Выявление инфекционных больных может быть активным и пассивным. Активное выявление осуществляется медицинскими работниками при проведении подворных обходов, профилактических осмотров и обследовании контактных лиц в очаге инфекционных болезней. При пассивном выявлении пациент за медицинской помощью обращается сам или по инициативе родственников.

В анамнезе заболевания выясняется динамика болезни от появления первых симптомов до исчезновения их. Уточняется начало заболевания, особенно при наличии лихорадочного синдрома, - острое при гриппе, менингите, сыпном тифе; постепенное при брюшном тифе, бруцеллезе. Выясняется цикличность течения болезни, выраженность общеинфекционного синдрома и органных поражений.

При выяснении эпидемиологического анамнеза, обращается внимание на наличие контакта пациента с больными со схожей клинической картиной с целью установления источника заражения, а также с больными высоко контагиозными заболеваниями (корь, ветряная оспа) с целью предупреждения занесения внутрибольничных инфекций.

В анамнезе жизни важно уточнить перенесенные ранее инфекционные заболевания, особенно с прочным постинфекционным иммунитетом (корь, ветряная оспа, которые повторно не встречаются), а также сделанные профилактические прививки, в частности против дифтерии (при наличии у пациента пленчатой ангины) или полиомиелита (при наличии парезов и параличей).

При наличии у больного кожных высыпаний в аллергологическом анамнезе выясняются аллергические проявления в прошлом на пищевые продукты и лекарственные препараты, перенесенные в прошлом аллергические заболевания.

После выяснения анамнестических данных приступают к объективному обследованию больного с целью выявления ведущих клинических синдромов: наличие лихорадки (гипертермии), кожных высыпаний (экзантема), увеличения лимфатических узлов (полиаденопатия), печени и селезенки (гепатоспленомегалия), менингеального синдрома и др.

В начале объективного обследования необходимо оценить тяжесть заболевания с учетом общеинфекционного синдрома и органных поражений.

Наиболее частым проявлением инфекционных заболеваний является лихорадка. Важно определить не только высоту ее, но и характер колебаний в течение суток. По степени повышения температуры тела различают субфебрильную температуру (37-38 о С); умеренно высокую, или фебрильную (38-39 о С); высокую, или пиретическую (39-41 о С) и сверхвысокую, или гиперпиретическую (выше 41 о С).

По характеру колебаний температуры в течение суток различают следующие типы температурных кривых:

-постоянная лихорадка по высоте может быть умеренно высокой или высокой с пределами колебаний в течение суток около 1 о С (брюшной тиф, сыпной тиф, чума);

-послабляющая (ремиттирующая ) лихорадка, характеризуется суточными колебаниями температуры выше 1 о С (2-2,5 о С) и встречается при гнойных заболеваниях, паратифах А и В, Ку-лихорадке;

-гектическая, или истощающая, лихорадка проявляется большими суточными размахами в 3-5 о С со снижением температуры тела до нормальной и субнормальной (сепсис, тяжелые формы туберкулеза);

-перемежающаяся, или интермиттирующая, лихорадка – чередование лихорадочных приступов и периодов нормальной температуры (малярия);

-волнообразная (ундулирующая) лихорадка проявляется постепенным нарастанием температуры изо дня в день до высоких цифр с последующим снижением ее с повторным формированием отдельных волн (бруцеллез);

-неправильная (атипическая) лихорадка проявляется незакономерными суточными колебаниями (менингит, сибирская язва);

-извращенная (инвертированная) лихорадка характеризуется более высокой утренней температурой по сравнению с вечерней (туберкулез).

При осмотре кожи обращается внимание на ее температуру (горячая, холодная), тургор, окраску, наличие сыпи. Сыпь на коже (экзантема) может быть различной по величине, форме, интенсивности, локализации, динамике элементов.

Различают экзантему первичную (розеола, пятно, эритема, петехия, папула, везикула, пустула, волдырь) и вторичную (чешуйка, пигментация, язва, корка, рубец).

Розеола – пятнышко бледно-розового цвета, не выступающее над уровнем кожи, диаметром 1-5 мм, исчезающее при растяжении кожи, а затем появляющееся вновь. Розеола может быть округлой (брюшной тиф) или овальной (сыпной тиф) формы, с четкими или нечеткими (размытыми) краями. Множественные розеолы около 1 мм в диаметре определяются как точечная сыпь (скарлатина).

Пятно имеет такую же окраску, как и розеола, но больший диаметр (5-20 мм), не выступает над уровнем кожи. В зависимости от размеров элементов различают мелкопятнистую (5-10 мм) и крупнопятнистую (более 10 мм) сыпь. Эта сыпь характерна для кори, краснухи, клещевых риккетсиозов.

Эритема – обширные участки гиперемированной кожи, образовавшиеся при слиянии крупных пятен (на лице при кори).

Геморрагия – кровоизлияние в кожу. Они бывают в виде точек (петехии) или пятен различной величины и формы, не исчезающие при растяжении кожи. В зависимости от времени от момента появления элемента цвет его может быть красным, синевато-красным, фиолетовым, зеленым, желтым (менингококцемия).

Папула – узелок, слегка возвышающийся над кожей, диаметром от 2 до 10 мм. При сочетании папулы с розеолой образуется розеолезно-папулезная сыпь (тифопаратифозные заболевания) или с пятном – пятнисто-папулезная сыпь (клещевые риккетсиозы, корь). Разрешается папула без образования рубца.

Везикула – пузырек с прозрачным (серозным) содержимым, диаметром от 1 до 5 мм (ветряная оспа). При вскрытии его образуется эрозия, при подсыхании – корочка.

Пузырь (булла) – образование, аналогичное везикуле, но диаметр его от 5 до 10-15 см (полиморфная экссудативная эритема).

Пустула – пузырек с гнойным содержимым. При обратном развитии образуется гнойная корочка и рубчик (ветряная и натуральная оспа).

Волдырь (уртикарная сыпь) – экссудативный неполостной элемент, возвышающийся над уровнем кожи, овальной или округлой формы, бледно-розового или светло-красного цвета, диаметром от нескольких миллиметров до 10-20 см. Волдырь держится от нескольких минут до нескольких часов и исчезает бесследно. Уртикарная сыпь характерна для аллергических заболеваний (сывороточная болезнь).

Вторичные элементы большого диагностического значения при инфекционной патологии не имеют, и мы не останавливаемся на их характеристике.

Энантема – это элементы высыпаний на слизистых оболочках и имеют значение в диагностике кори (пятна Филатова-Коплина), герпетической инфекции.

При исследовании лимфатических узлов пальпаторно обращают внимание на их величину, болезненность, подвижность, спаянность с кожей и подлежащими тканями. Так, генерализованная лимфаденопатия (полилимфаденит) характерна для ВИЧ-инфекции, инфекционного мононуклеоза. Регионарный лимфаденит выражен при ангине, чуме, туляремии.

Далее проводится объективное обследование пациента по органам и системам: костно-мышечная система, органы дыхания и кровообращения, пищеварительная и мочеполовая системы, нервно-психическая сфера, органы чувств. Схема объективного обследования инфекционного больного проводится согласно правилам, принятым в терапии, иногда с некоторыми особенностями. Так, обследование инфекционного больного с резко выраженным общеинфекционным синдромом начинается с выяснения состояния сердечно-сосудистой системы, а не органов дыхания, чтобы избежать ортостатического коллапса.

Оценивая полученные объективные данные в постановке предварительного диагноза необходимо определить ведущий клинический синдром – общеинфекционный (лихорадка, интоксикация), лимфаденопатии (увеличение регионарных и других лимфатических узлов), синдром ангины, гепатолиенальный (увеличение печени и селезенки), диареи (гастрит, энтерит, колит), менингеальный (наличие менингеальных симптомов на фоне лихорадки и интоксикации) и др.

После изучения анамнестических данных, результатов объективного обследования формируется предварительный диагноз, который следует подтвердить лабораторными и инструментальными методами.

Лабораторные методы исследования подразделяются на общеклинические, биохимические, специфические (прямого обнаружения возбудителя и косвенного доказательства наличия возбудителя в организме).

Общеклинические методы – это исследование общего анализа крови, спинномозговой жидкости, мочи, кала. Так, при бактериальных инфекциях чаще всего в крови выявляется нейтрофильный лейкоцитоз, повышенная СОЭ; при вирусных – лейкопения с относительным лимфацитозом, нормальная СОЭ. Обнаружение плазмодиев малярии в эритроцитах верифицирует диагноз малярии. Величина и характер цитоза ликвора (нейтрофильный или лимфоцитарный) помогает предположить бактериальную или вирусную природу менингита (гнойный или серозный). Микроскопическое исследование кала имеет основное значение в диагностике гельминтов, протозойных колитов.

Биохимические методы исследования дают возможность выявить обменные сдвиги в организме больного (особенно при вирусных гепатитах) – активность трансфераз, уровень билирубина, белка и белковых фракций сыворотки крови и др.

Основное значение в лабораторной диагностике инфекционных болезней имеют специфические методы исследования, включающие в себя две группы исследования:

1. Методы прямого обнаружения возбудителя в материале, взятом от больного (бактериоскопический, бактериологический, вирусологический, паразитоскопический).

2. Методы косвенного подтверждения присутствия возбудителя в организме больного (серологический и аллергологический).

Материалом для специфического исследования является кровь, ликвор, слизь из зева и носа, рвотные массы, промывные воды желудка, кал, моча, пунктаты и биоптаты различных органов. Ценность результатов лабораторных исследований зависит от соблюдения правил забора, хранения и доставки в лабораторию материала, забранного от больного. Бактериоскопически в крови можно обнаружить менингококки, лептоспиры, в ликворе – менингококки, в отделяемом из язв на коже – возбудителей чумы и сибирской язвы, в кале – холерные вибрионы. Микроскопия широко используется для диагностики паразитарных болезней (малярия, токсоплазмоз, лейшманиоз).

При посеве материала на питательные среды (бактериологический метод) выделяется чистая культура возбудителя с определением его чувствительности к антибиотикам (брюшной тиф, дизентерия, холера, сальмонеллез). Забор материала при этом методе следует производить в ранние сроки заболевания и до назначения этиотропного лечения.

Биологический метод (заражение лабораторных животных исследуемым материалом) используется в диагностике чумы, туляремии, ботулизма и др.

Одним из дополнительных методов диагностики является аллергологический, позволяющий выявить специфическую сенсибилизацию организма путем постановки кожных проб с аллергенами (бруцеллин, токсоплазмин, дизентерин, туберкулин). Аллерген вводится внутрикожно во внутреннюю поверхность средней трети предплечья. Реакция оценивается через 24-48 часов и считается положительной, если на месте инъекции образуется папула, в диаметре превышающая 1 см.

В качестве инструментальных методов диагностики инфекционных болезней используются эндоскопические (гастрофиброскопия, колоноскопия, ректороманоскопия), ультразвуковое исследование (УЗИ) различных органов, рентгенологические и радиоизотопные методы, ядерно-магнитно-резонансная томография (ЯМРТ), пункционная биопсия, диагностическая лапароскопия и др.

Следует подчеркнуть, что диагноз инфекционного заболевания ставится в первую очередь на основе клинико-эпидемиологических данных, а параклинические данные (лабораторные и инструментальные) имеют вспомогательное значение.

Контрольные вопросы

1. Какие имеются особенности выяснения анамнестических данных у инфекционных больных?

2. Перечислите типы температурных кривых.

3. Какие бывают виды экзантем?

4. Что относится к общеклиническим и биохимическим методам исследования?

5. Что включают в специфические методы исследования?

6. Какой биологический материал забирается от пациента при кишечных и респираторных инфекциях?

7. Виды серологических методов исследования.

8. При каких заболеваниях ставятся внутрикожные пробы с аллергенами?

9. Назовите инструментальные методы исследования, применяемые в инфектологии.

|	следующая лекция ==>
Основы учения об иммунитете	|	Инфекционными больными

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

[youtube.player]