Сыворотки для идентификации возбудителей инфекций

В диагностике инфекционных заболеваний широко используют­ся иммунные реакции для идентификации микроорганизмов (бактерий и вирусов) или токсинов. Для постановки таких реакций необходимы специфичес­кие диагностические сыворотки.

1.1. Агглютинирующие сыворотки.

Агглютинирующие сыворотки получают путем иммунизации кроли­ков взвесью убитых микроорганизмов или их антигенов с последующим взятием у них крови и приготовлением сыворотки. Агглютинирующие сыворотки применяют для идентификации микроорганизмов в реакции агглютинации. Недостатком таких сывороток является то, что они спо­собны давать групповые реакции агглютинации, т.к. они содержат ан­титела к бактериям, имеющим общие антигены. Поэтому, в настоящее время большинство сывороток используется адсорбированными , Ад­сорбированные сыворотки содержат только типовые или видовые ан­титела, соответствующие определенному типу или виду антигена. Для получения таких сывороток применяют метод Кастеллани - метод ад­сорбции. Этот метод заключается в истощении сыворотки на групповые агглютинины путем насыщения ее родственными гетерогенными бакте­риями. При этом происходит адсорбция групповых антител, а специ­фические антитела остаются в сыворотке. Таким путем можно получить монорецепторные сыворотки - сыворотки, содержащие антитела толь­ко к одному антигену, и поливалентные сыворотки, дающие реакции аг­глютинации с двумя-тремя родственными бактериями, имеющими об­щий антиген. Титром агглютинирующей сыворотки называется то ее на­ибольшее разведение, при котором идет реакция агглютинации.

Агглютинирующие сыворотки широко применяют, например, при диагностике заболеваний, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами и другими представителями семейства энтеробактерий.

1.2. Преципитирующие сыворотки.

Преципитирующие сыворотки получают иммунизацией кроликов ан­тигенами бактерий, их экстрактами и токсинами. Титром преципитирующей сыворотки называется то максимальное разведение антигена, при котором идет реакция преципитации. Преципитирующие сыворотки вы­пускаются с высоким титром - не менее 1:100000. Это связано с тем, что антиген, определяемый в реакции преципитации, имеет мелкодис­персную структуру и в единице объема его может содержаться больше, чем в таком же объеме сыворотки - антител.

Специфические преципитирующие сыворотки применяются при ди­агностике инфекционных заболеваний (сибирская язва, чума, туляре­мия, дифтерия, и др.), в судебно-медицинской экспертизе для определе­ния видовой принадлежности белка, в санитарной практике для обнару­жения соответствия белковых веществ в продуктах (при подозрении на фальсификацию).

Реакция преципитации может быть поставлена в виде кольцепреци-
питации или реакции преципитации в геле.

Гемолитические сыворотки получают путем иммунизации кроликов
взвесью эритроцитов барана. Титром сыворотки называют то ее макси­мальное разведение, которое в присутствии комплемента вызывает ге­молиз 3% взвеси эритроцитов барана. Гемолитические сыворотки ис­пользуют для титрования комплемента и при постановке реакции свя­зывания комплемента в индикаторной системе.

Иммунные противовирусные сыворотки получают путем иммуниза­ции различных животных в зависимости от вида вируса. Например, сы­воротку против аденовирусов получают иммунизацией кроликов, сыво­ротку против вируса гриппа - иммунизацией белых хорьков и т.д.

Диагностические противовирусные сыворотки используются для оп­ределения вида или типа вируса в РТГА, РСК., РН.

1.5.Люминесцирующие сыворотки.
Люминесцирующие сыворотки представляют собой иммунные сы­воротки, содержащие специфические антитела, меченые флюоресциру­ющими красителями. При приготовлении люминесцирующих сыворотокпроводят присоединение к глобулиновой фракции иммунной сывороткиразличных флюорохромов путем прочной химической связи. Люминес­цирующие сыворотки используют при постановке РИФ.

1.6. Анпшглобулиновые сыворотки.

Антиглобулиновые сыворотки (АГС) содержат антитела к иммуног­лобулинам сыворотки человека или кролика - в зависимости оттого, ка­кая иммунная сыворотка используется в реакции. АГС получают путем иммунизации животных иммуноглобулинами человека или кролика. Такие сыво­ротки используют для постановки непрямой РИФ, реакции ИФА, реак­ции Кумбса.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Больница заказала в аптечной фирме препараты, используемые для диагностики инфекционных заболеваний. Эти препараты позволяют выявить наличие у пациента состояния инфекционной аллергии. Назовите эти препараты.

А. Диагностические сыворотки

24. Для серопрофилактики и серотерапии инфекционных заболеваний используют иммунные сыворотки. Какой вид иммунитета формируется с их помощью?

А. Искусственный активный

*В. Искусственный пассивный

С. Естественный активный

D. Естественный пассивный

Е. Видовой наследственный

25. Активность сывороток или количество антитоксинов выражается в международных единицах. Титрование антитоксических сывороток производится разными методами. Назовите, какая реакция используется в методе, предложенном Рамоном?

D. Связывания комплемента

26. Пациенту с травмой ноги проведена первичная хирургическая обработка раны и назначена специфическая экстренная профилактика столбняка. Какой препарат используют для создания пассивного антитоксического иммунитета?

А. Убитая вакцина

В. Нормальная сыворотка

D. Химическая вакцина

*Е. Иммунная сыворотка

Для идентификации возбудителя в бактериологической лаборатории используют диагностические сыворотки. Дайте характеристику этим сывороткам.

А. Гомологичные нормальные

В. Гомологичные иммунные

С. Гетерологичные нормальные

*D. Гетерологичные иммунные

Е. Гомологичные аутоиммунные

29. Из иммунных сывороток, в целях концентрации антител, снижения чужеродности и уменьшения аллергического действия, получают, освобождая их от балластных белков различными методами, иммунобиологические препараты. Как они называются?

Пациент жалуется на слабость, субфебрильную температуру, ухудшение аппетита, обильный пот и кашель. Микроскопия мокроты выявила наличие туберкулезных палочек. Назовите наиболее распространенный механизм передачи инфекции при туберкулезе.

31. Больному дифтерией ввели препарат и через несколько минут у него появилась отдышка, частый пульс, упало артериальное давление. Назовите биологический препарат, который мог быть наиболее вероятной причиной возникшего осложнения?

А. Плацентарный гамма- глобулин

*В. Антитоксическая сыворотка

Д. Корпускулярная вакцина

32. В микробиологической практике для различных целей используются большое количество биологических препаратов. Какие из перечисленных биопрепаратов не могут быть применены для лечения?

С. Антитоксические сыворотки

33. Рекомбинантный вирус планируется использовать в качестве препарата для производства вакцин. К какому типу принадлежит данная вакцина?

34. Врач поставил клинический диагноз инфекционного заболевания и для подтверждения его, направил кровь пациента на исследование. Каким методом лабораторной диагностики бактериолог должен подтвердить или опровергнуть первоначальный диагноз?

36. При выращивании дифтерийной палочки в жидкой питательной среде накапливаются токсины белковой природы, обладающие высокой иммуногенной активностью, избирательно поражающие определенные органы и ткани. К какой группе токсинов их можно отнести?

37. В биологической пробе на белых мышах определяют показатель, который называется ЛД 50% (летальная доза).Для оценки какого признака он используется?

А. Силы действия токсина

38. У больного врач диагностировал острую гонорею. Из анамнеза стало известно, что он ранее перенес гонорею и излечение было полным. К какой категории инфекций можно отнести это новое заболевание?

Е. Вторичная инфекция

39. С 2005г. регистрируется высокий уровень заболеваемости птичьим гриппом, как в странах Азии так и Европы. На Украине он зарегистрирован в Крыму. Как называются вспышки инфекций, распространяющиеся на такие большие территории?

С. Эндемические инфекции

40. Для определения вирулентности микроорганизма, получения его чистой культуры, изучения защитного действия химиопрепаратов используют экспериментальное заражение животных? Как называется этот метод исследования в микробиологии?

41. Некоторые микроорганизмы способны внедряться только в определенные органы и ткани и вызывать там специфическое воспаление. Как называется такое свойство микроорганизмов?

42. В качестве источника инфекции могут быть как больные люди, так и животные. По этому принципу инфекции классифицируются. Как называются инфекции, которыми болеют животные и от которых заражается человек?

43. В хирургическом отделении больницы регистрируются на протяжении двух недель случаи послеоперационных осложнений, вызванных золотистым стафилококком, у которого при изучении обнаружены множественная лекарственная устойчивость и дополнительные факторы патогенности. Анализируя ситуацию врач сделал заключение, что в отделении имеет место инфекция, которая называется:

44. У студента, имевшего контакт с больным инфекционным гепатитом А во время празднования дня рождения в студенческом общежитии (пользование общей посудой) внезапно появились симптомы болезни, в т.ч. пожелтение кожи и склер. Врач поставил диагноз без труда на основании типичных симптомов. Назовите период заболевания, при котором они четко проявляются?

*В. Период разгара болезни

45. После перенесенной кори у ребенка развилось воспаление легких, вызванное золотистым стафилококком. Как можно назвать указанную форму инфекции?

СЫВОРОТКИ иммунные (син. антисыворотки) — препараты крови животных или человека, содержащие антитела; используются для диагностики, лечения и профилактики различных заболеваний.

Изучение иммунных сывороток тесно связано с развитием гуморального направления в иммунологии, разрабатываемого с середины 80-х гг. 19 в. В 1890 г. Э. Беринг и С. Китасато обнаружили в сыворотке крови кроликов, иммунизированных столбнячным токсином, антитоксины, нейтрализующие этот яд. В 1891 г. П. Эрлих открыл антитела (см.) к токсинам растительного происхождения. Благодаря работам Э. Ру и Г. Н. Габричевского противодифтерийная сыворотка получила широкое применение при лечении дифтерии (см.). В 1894 г. Р. Пфейффер и В. И. Исаев описали лизис холерных вибрионов в организме животного под действием специфической иммунной сыворотки (см. Исаева — Пфейффера феномен).

Ж. Борде, изучая в лаборатории И. И. Мечникова действие противохолерной сыворотки, установил, что холерный вибрион под ее влиянием теряет свою подвижность. В 189(5 г. Грубер и Дархем (М. Gruber, H. Е. Durham) показали, что в результате иммунизации животных сыворотки их крови приобретали свойства агглютинировать соответствующие микробы. Так были открыты антитела — агглютинины. В 1897 г. Краус (R. Kraus) установил, что сыворотки крови иммунизированных животных действуют на фильтраты соответствующих бульонных культур: в прозрачном фильтрате выпадает осадок (преципитат). В 1899 г. Ф. Я. Чистович первым получил преципитины к белкам животного происхождения.

В 1898 г. Ж. Борде открыл у морских свинок, иммунизированных кроличьими эритроцитами, антитела — гемолизины и гемагглютини-ны. В 1900 г. И. И. Мечников, впрыскивая морским свинкам эмульсию селезенки или брыжеечных лимф, узлов кролика, получил специфические сыворотки — антилейкоцитар-ные сыворотки. Вскоре были выделены сыворотки против других клеток организма. Т. о., получение иммунных сывороток основано на свойстве антигенов (см.) вызывать в организме образование антител (см.).

Иммунные сыворотки получают от иммунизированных животных или человека, а также от реконвалесцен-тов, в крови к-рых содержатся антитела после перенесенной инф. болезни (сыворотки реконвалесцентов). G. могут содержать так наз. нормальные антитела, напр, аллоантитела, или изоантитела, образующиеся у человека или животного в течение жкзни и не зависящие от искусственной иммунизации (см.). В результате многократной иммунизации получают С., содержащие антитела в высоких титрах — гипериммунные сыворотки. Различают диагностические и лечебно-профилактические сыворотки.

Содержание

Диагностические сыворотки

Диагностические сыворотки, как правило, содержат антитела в более высоком титре, чем лечебно-профилактические. Их получают как от мелких лаб. животных (кроликов, морских свинок), иммунизированных убитыми микроорганизмами, антигенами, анатоксинами, так и от крупных (коз, лошадей, баранов), если необходимо большое количество сыворотки. Диагностические С. применяют в различных иммунол. реакциях для установления вида, подвида или серотипа (серовара) возбудителя инф. болезни, определения различных антигенов в биол. жидкостях. При этом используют С., содержащие антитела, называемые в зависимости от характера иммунол. реакции. Так, в реакции агглютинации — агглютинины, в реакции преципитации — преципитины, в реакции связывания комплемента — комплементе вязывающпе антитела, в иммунофлюоресценции — флюоресцирующие антитела, в иммунорадиомет-рическом методе (см. Радиоиммуно-логический метод) — антитела, меченные радиоактивным изотопом, в иммуноферментном методе (см. Энзим-иммунологический метод) — антитела, меченные ферментом, в электронно-микроскопической иммуногистохимии — антитела, меченные ферментом или ферритином, и т. д. Поэтому в зависимости от характера иммунол. реакции различают агглютинирующие, преципитирующие, флюоресцирующие, гемолитические, меченные изотопами, ферментами, и другие диагностические сыворотки.

Среди диагностических С. различают антимикробные, к к-рым относятся антибактериальные и антивирусные, а также антитоксические С.

Антибактериальные сыворотки обычно используют как агглютинирующие. По степени специфичности их разделяют на неадсорбированные (нативные) и адсорбированные (поливалентные, содержащие антитела к нескольким антигенам или нескольким детерминантным группам антигена, и монорецепторные). Неадсорбированные сыворотки содержат перекрестно реагирующие антитела, т. к. различные микробы могут иметь сходные антигены. К ним относятся сыворотки, предназначенные для обнаружения нек-рых сальмонелл (напр., S. typhi, S. paratyphi, S. typhimurium, S. enteritidis, S. anatum, S. newport, S. choleraesuis), шигелл и эшерихий. Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки используют для постановки развернутой реакции агглютинации с целью идентификации микробов (см.). При этом для точной с-ерол. идентификации возбудителя (см. Серологические исследования) важно учитывать, чтобы реакция шла до титра или половины титра сыворотки. Неадсорбированные сыворотки из-за своей относительно невысокой специфичности находят меньшее применение, чем адсорбированные.

Адсорбированные поливалентные сыворотки способны агглютинировать несколько родственных бактерий, имеющих общий антиген. Адсорбированные монорецепторные сыворотки содержат антитела только против определенного антигена, т. е. они обладают высокой специфичностью (диагностические типоспецифические сыворотки). Их получают избирательной адсорбцией антител (см. Кастеллани метод). Адсорбированные сыворотки используют в реакции агглютинации (см.) на предметном стекле, чаще для идентификации возбудителей, относящихся к сем. Enterobacteriaceae, напр, для идентификации энтеропатоген-ных эшерихий применяют поливалентные и типовые ОК-сыворотки, для определения принадлежности возбудителя к роду сальмонелл — агглютинирующую адсорбированную поливалентную сальмонеллезную О-сыворотку (групп А, В, С, Д, Е), для определения серол. группы и серотипа возбудителя — отдельные адсорбированные О-, а затем Н-сыворотки. Для определения в исследуемом материале антигенов, напр, ботулинических токсинов или

О-брюшнотифозного антигена, используют соответствующие антитела сыворотки, сорбированные на эритроцитах,— так наз. антительные эритроцитарные диагностикумы (см. О-агглютинация).

Антивирусные диагностические С. используют в различных реакциях иммунитета, напр, реакции торможения гемагглютинации (см. Гемагглютинация), реакции связывания комплемента (см.), реакции иммунофлюоресценции (см.) и др. К антивирусным сывороткам в зависимости от вида вируса предъявляются особые требования. Разнообразие источников антивирусных сывороток связано с наличием в них неспецифических ингибиторов, к-рые могут подавлять и маскировать рецепторы вирусов. Антивирусные сыворотки очищают от термолабильных ингибиторов прогреванием при t° 56° в течение 30 мин., а от термостабильных ингибиторов ферментированием, воздействием углекислотой и др. в зависимости от природы вируса. Кроме этого, определяют наличие неспецифических агглютининов. С целью подавления бактериофагов применяют антифаго-вые С. В лаб. практике их добавляют к питательным средам для освобождения бактерий от их бактериофагов.

Из антитоксических диагностических сывороток наиболее часто используют сыворотки для обнаружения ботулинических токсинов в реакции нейтрализации in vivo (см. Ботулизм, лабораторная диагностика) и идентификации токсина возбудителя дифтерии в реакции преципитации (см. Дифтерия).

Преципитирующие сыворотки используют в реакциях преципитации (см.) для определения растворимых антигенов микробного, растительного или животного происхождения, определения аутоантител, С-реактив-ного белка, для диагностики инф. болезней, выявления видовой принадлежности белка крови, обнаружения определенных веществ в продуктах при подозрении на фальсификацию.

Флюоресцирующие (люминеецп-рующие) сыворотки представляют собой глобулиновую фракцию иммунной сыворотки крови животных, меченную флюоресцирующими красителями — флюорохромами (см.). Их применяют для обнаружения микробов методом прямой иммунофлюоресценции (см.) в патол. материале и при экспериментальных исследованиях. С аналогичной целыо используют также меченные флюорохромами антиглобулиновые и антикомплемента рные сыворотки при непрямой иммунофлюоресценции.

В клин, иммунологии широко применяют диагностические сыворотки для определения группы крови (см.), проведения тканевого типиро-вания, для характеристики иммунол. статуса организма. Группы крови по системе АВО определяют с помощью стандартных гемагглютинирующих сывороток, приготовленных из крови человека. Они специфичны, т. к. содержат определенные аллоантитела — альфа-, бета- или альфа 4- бета-антитела. Сыворотка крови группы АВ (IV) этих антител не содержит.

Для определения резус-принадлежности крови нек-рых больных, беременных и первично обследуемых доноров используют стандартную сыворотку анти- Bh0(D), а также сыворотку для пробы Кумбса (см. Кумбса реакция) ,приготовленную из крови животных (кроликов, коз, баранов), иммунизированных белком сыворотки крови человека. Для дополнительного исследования крови донора применяют сыворотки анти- rh'(C) и анти-гЬ"(Е), сыворотки, содержащие два антитела — анти-ВЬ0 (С -f- D) или анти-Rho (D -f- Е) или три антитела — анти-Rh^ (С + D + Е).

Для тканевого типирования при аллогенных трансплантациях и гемотрансфузиях (см. Иммунитет транс плантационный, антигены гистосов местимости, т. 20, доп. материалы) используют так наз. тестовые HLA- и NA-, NB-реактивы. HLA-реактив получают от лиц, сенсибилизированных соответствующим антигеном (напр., сыворотка крови женщин, сенсибилизированных в период беременности, или сыворотки крови иммунизированных доноров). Антитела определяют с помощью лимфоцитотоксической пробы (см. Лейкоцитарные тесты) или реакции лейкоагглютинации (см. Агглютинация).

В таблице 1 дан перечень основных диагностических иммунных сывороток, их получение, применение в клинической иммунологии, форма выпуска.

Лечебно-профилактические сыворотки

К ним относятся антитоксические, антибактериальные, антивирусные сыворотки, а также иммуноглобулины. Антитоксические сыворотки получают методом гипер-иммунизации крупных животных (обычно лошадей) путем парентерального введения нарастающих доз анатоксинов, затем соответствующих экзотоксинов (см. Антитоксины). Антитоксические сыворотки применяют для пассивной иммунизации (см.).

Антитоксические сыворотки используют для лечения и профилактики токсинемических инфекций, в основе к-рых лежит действие на организм экзотоксинов бактерий — возбудителей столбняка, ботулизма, дифтерии, газовой гангрены, стафилококковых инфекций. Антитоксическими сыворотками являются и сыворотки, содержащие антитела против ядов змей, пауков, ядов растительного происхождения. Антитела антитоксических сывороток нейтрализуют действие соответствующих токсинов, обеспечивая тем самым леч.-проф. эффект.

Антитоксические сыворотки, полученные от гипериммунизированных животных, очищают и концентрируют (с целью удаления неактивных балластных белков); контролируют их физические свойства, стерильность, апирогенность, безвредность, специфическую активность, количество белка, значение pH и наличие остаточного сульфата аммония. Специфическая активность антитоксических сывороток выражается в международных единицах (ME). За единицу принимают минимальное количество сыворотки, к-рое нейтрализует стандартную единицу токсина. Для сывороток, еще не хшеющих международных стандартов, утверждены национальные стандарты — антитоксические единицы (АЕ).

Определение специфической активности антитоксических сывороток производят двухэтапным титрованием. На первом этапе устанавливают опытную дозу токсина с помощью стандартной антитоксической сыворотки. На втором этапе определяют активность испытуемой антитоксической сыворотки посредством опытной дозы токсина (см. Антитоксины).

Стандартные образцы антитоксических сывороток проходят контроль в Государственном НИИ стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. А. Тарасевича и рассылаются производственным предприятиям, выпускающим сыворотки. Стандартные сыворотки соответствуют принятым международным стандартам, что облегчает возможность сопоставления свойств сывороток, изготовленных в разных странах.

Антибактериальные сыворотки получают из крови лошадей или волов, гипериммунизированных соответствующими убитыми бактериями или их антигенами. Они не нашли широкого применения с лечебными или профилактическими целями из-за наличия более эффективных антимикробных средств. Из антибактериальных сывороток иногда применяют гетерогенные иммуноглобулины (противосибиреязвенный гамма-глобулин и противолептоспирозный гамма-глобулин).

Антивирусные сыворотки (гетерогенные иммуноглобулины) получают из крови животных, иммунизированных вакцинными штаммами вирусов или соответствующими вирусами. Их очищают методом спиртового осаждения при низкой температуре. Наиболее широкое применение получил гамма-глобулин против клещевого энцефалита, антирабический гамма-глобулин и др. (см. Иммуноглобулины).

Иммуноглобулины, полученные из крови человека (гомологичные иммуноглобулины), являются, за исключением нормального иммуноглобулина, иммуноглобулинами направленного действия. Преимуществом гомологичных иммуноглобулинов перед гетерологичными является слабая реактогенность и более длительное циркулирование антител в организме (в течение 30— 40 дней). Получают гомологичные иммуноглобулины путем фракционирования этиловым спиртом при температуре ниже нуля (по методу Кона). Наибольшее значение в клин, практике имеют иммуноглобулины с максимально сниженной анти комплементарной активностью, к-рые используют для внутривенного введения. Таким препаратом является иммуноглобулин нормальный человеческий для внутривенного введения. В иммуноглобулиновых препаратах для внутривенного введения стремятся удалить способность Fc-области молекул иммуноглобулинов активировать систему комплемента, а также предотвратить агрегацию молекул иммуноглобулинов. Применяется при различных формах иммунологической недостаточности (см.).

Среди различных иммуноглобулинов направленного действия, или гамма-глобулинов направленного действия, выделяют антирезус-ный иммуноглобулин — aHTn-Rh0(D), к-рый используют для иммунопрофилактики гемолитической болезни новорожденных (см.). Его вводят первородящим резус-отрицательным женщинам в послеродовой период или после аборта; при повторных беременностях у таких женщин рождаются здоровые резус-положительные дети. Источником получения препарата может быть гипериммун-ная плазма доноров, а также плазма женщин, сенсибилизированных резус-антигеном естественным путем во время повторных беременностей.

Иммуноглобулином направленного действия является также анти-лимфоцитарный (гетерогенный) иммуноглобулин, входящий в состав ан тилимфоцитарной сыворотки (см.), содержащей различные антитела к лимфоидным клеткам, преимущественно к лимфоцитам. Наибольшей иммунодепрессивной активностью обладает антилимфоцитарная сыворотка, полученная путем иммунизации животных клетками тимуса и лимфоцитами грудного лимф, протока. Она широко используется при трансплантации жизненно важных органов, в первую очередь почки.

Антиретикулярную цитотоксическую сыворотку (сыворотку Богомольца) получают из сыворотки крови лошади, иммунизированной тканью селезенки или костного мозга человека. Она содержит антитела-цитотоксины, активные по отношению к клеткам этих органов. Применение антиретикулярной цитотокси-ческой сыворотки особенно целесообразно при длительно не заживающих язвах и ранах, а также при наличии медленно рассасывающихся воспалительных очагов.

В табл. 2 дан перечень основных препаратов иммуноглобулинов и антитоксических сывороток, источник их получения, применение и способ введения.

Получение иммунных сывороток включает: подготовку соответствующего иммуногена, т. е. вещества, стимулирующего продукцию антител; иммунизацию животных; контроль полученных сывороток. Для получения сывороток против таких гаптенов, как фармакол. препараты или низкомолекулярные гормоны, применяют в качестве иммуногена, или иммунизирующего препарата, конъюгат гаптен-носитель. Степень чистоты белковых иммуногенов проверяют с помощью иммунохимических и физико-химических исследований. Иммунизация является одним из наиболее вариабельных процессов при получении сывороток, т. к. доза иммуногена может влиять на свойства (напр., специфичность) образующихся анти-* тел. Малые дозы вводимого антигена позволяют экономить расход имму-ногенных препаратов, индуцируют появление авидных антител в высоком титре. При небольших дозах антигена в организм вводятся и небольшие количества посторонних примесей, в результате чего не образуются побочные антитела. Для стимуляции антителообразования иммуногены смешивают с адъювантами (см.), напр, адъювантом Фрейнда. Помимо стимулирующей функции, адъюванты выполняют и депонирующую функцию в отношении иммуногена. Кроме дозы антигена, важно также учитывать степень его чистоты, способ, сроки и последовательность введения. Выбор животного зависит от предполагаемого количества сыворотки. Получение сыворотки от кроликов, являющихся хорошими продуцентами антител, требует содержания большого количества таких животных. В большом количестве сыворотку можно получить от лошадей или других крупных животных.

Для определения в сыворотках количества антител и для характеристики активности диагностических сывороток, напр, агглютинирующих иммунных сывороток, производят их титрование. Титр агглютинирующих иммунных сывороток определяют как предельное разведение сыворотки крови, при к-ром обнаруживается реакция агглютинации. Обычно готовят разведения сыворотки, возрастающие в геометрической прогрессии (двукратные). Для характеристики активности сыворотки крови, как правило, учитывают результат реакции в каждом разведении или суммарно во всех разведениях по количеству условных положительных единиц.

Таблица 1. ПЕРЕЧЕНЬ ОСНОВНЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ИММУННЫХ СЫВОРОТОК, ИХ ПОЛУЧЕНИЕ, ПРИМЕНЕНИЙ В КЛИНИЧЕСКОЙ ИММУНОЛОГИИ И ФОРМА ВЫПУСКА

Получение сыворотки и иммунологическая реакция, в которой она используется

Реакция иммуноблотинга

Разработана на основе ИФА. Является самым специфичным и чувствительным методом иммунохимического анализа. Иммуноблотинг (от англ Ыо* — промокать, пягно) сочетает ИФА с электрофорезом. Применяется для выявления спектра антител к антигенным смесям Относится к экспертным (подтверждающим) реакциям диагностики ВИЧ-инфекции.

Принцип метода на примере выявления антител к ВИЧ Реакция проводится в несколько этапов:

1) Антигены, экстрагированные из исследуемого объекта — ВИЧ (белки-р гликопротеины-др), подвергаются электрофорезу в полиакриламидном геле — разделению антигенов на фракции по молекулярной массе.

2) Гель покрывают нитроцеллюлозной мембраной, и на неё при помощи электрофореза переносятся фракции антигена.

Нитроцеллюлоза ведёт себя подобно промокательной бумаге Мембрану разрезают на полоски (стрипы).

3) Стрип с нанесёнными на него антигенами ВИЧ погружают в сыворотку обследуемого и затем отмывают от несвязавшегося материала.

4) Сгрипы инкубируют антиглобулиновой сывороткой, меченой пероксидазой, отмывают.

5) Добавляют субстрат и отмечают число окрашенных фракций (пятен), которые соответствуют зоне локализации комплекса АГ-АТ.

Этот тип иммунологической реакции основан на способности специфических антител — антитоксинов подавлять биологическую активность экзотоксинов бактерий.

Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vitro

1) Реакция флокуляции. Феномен флокуляции — помутнение — внешнее проявление образования комплекса экзотоксин (анатоксин) + антитоксин в оптимальных количественных соотношениях ингредиентов.

2) Выявление токсигенности возбудителя дифтерии в РП в геле по Оухтерлоне (см. раздел «РП).

Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой (in vivo)

1. Реакция нейтрализации на животных применяется:

- для определения специфической активности анатоксинов (дифтерийный, столбнячный и др.) по стандартной антитоксической сыворотке и по опытной дозе токсина. Активность анатоксинов выражается в единицах связывания (ЕС), ЕС -количество анатоксина, которое целиком связывается с ШЕ/мл антитоксической сыворотки;

- для идентификации бактерий (возбудители газовой анаэробной инфекции, столбняка, ботулизма и др.) по стандартной антитоксической сыворотке;

- для титрования антитоксических сывороток (противодифтерийная, противостолбнячная и др.) по стандартному токсину. Титрование — это определение количества антитоксинов в 1 мл сыворотки. Специфическая активность сывороток выражается в международных антитоксических единицах (МЕ). 1МЕ —минимальное количество сыворотки, которое способно нейтрализовать определенную дозу токсина, выражающуюся в стандартных единицах: смертельных, некротических или реактивных дозах, в зависимости от вида токсина и способа титрования.Титрование антитоксических сывороток может производиться следующими методами:

Метод Эрлиха. Титрование антитоксических сывороток по известной смертельной (опытной) дозе токсина.

Проводится в 2 этапа:

1) определение опытной дозы токсина. Смертельная доза — это количество токсина, которое в смеси с 1МЕ стандартной сыворотки вызывает гибель 50 % взятых в опыт животных;

2) к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина, инкубируют 45 минут и вводят животным. По результатам производят расчет титра сыворотки.

Метод Ремера. Титрование антитоксических сывороток по известной некротической дозе токсина. Проводится в 2 этапа:

1) определение опытной некротической дозы токсина путём внутрикожного введения морской свинке различного количества токсина со стандартной сывороткой. Некротическая доза токсина — это его минимальное количество, которое в смеси с 1/50МЕ стандартной сыворотки вызывает на месте внутрикожного введения некроз на 4-5-и день;

2) к различным разведениям испытуемой сыворотки добавляют опытную дозу токсина и вводят внутрикожно морской свинке.По результатам производят расчёт титра сыворотки. Так титруется противодифтерийная сыворотка.

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет