Возбудитель ротавирусной инфекции микробиология
Внешний вид вирусных частиц напоминает колесо с широкой ступицей, короткими спицами и четко очерченным ободком, поэтому их стали называть ротавирусами (лат. rotа — колесо). Рисунок 1. Слизистая оболочка толстой кишки при ротавирусном гаст
 |
| Рисунок 1. Слизистая оболочка толстой кишки при ротавирусном гастроэнтерите. Минимально выраженный катаральный колит. х 100. |
Ротавирусы представляют собой род семейства Reoviridae, который объединяет большое количество сходных по морфологии и антигенной структуре вирусов, вызывающих гастроэнтерит у человека, млекопитающих и птиц. Систематическое изучение ротавирусов человека началось с 1973 года, когда они были обнаружены при электронной микроскопии ультратонких срезов биоптатов слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки, полученных от больных острым гастроэнтеритом детей Австралии (Р. Бишоп и соавторы). В том же году Т. Флеветт обнаружил сходный вирус в копрофильтратах больных гастроэнтеритом методом электронной микроскопии при негативном контрастировании препаратов.
Вирусные частицы имеют диаметр от 65 до 75 нм. При проникновении контрастирующего вещества в вирион выявляется электронно-плотный центр диаметром 38 — 40 нм, который представляет собой так называемую сердцевину, окруженную электронно-прозрачным слоем. Внешний вид вирусных частиц напоминает колесо с широкой ступицей, короткими спицами и четко очерченным ободом, поэтому их стали называть ротавирусами (лат. rota — колесо).
Ротавирусы имеют две белковые оболочки — наружный и внутренний капсиды. Сердцевина содержит внутренние белки и генетический материал, представленный двунитчатой фрагментированной РНК. Геном ротавирусов человека и животных состоит из 11 фрагментов, которые могут быть разделены при электрофорезе в полиакриламидном геле (ПААГ) или агарозе. В составе ротавирусов обнаружено четыре антигена; основной из них — это групповой антиген, обусловленный белком внутреннего капсида. С учетом группоспецифических антигенов все ротавирусы делятся на пять групп: A, B, C, D, E. Ротавирусы одной группы имеют общий групповой антиген, который выявляется иммунологическими реакциями: иммуноферментный анализ, иммунофлюоресценция, иммунная электронная микроскопия и др. Большинство ротавирусов человека и животных относятся к группе A.
| Источником инфекции при ротавирусном гастроэнтерите является инфицированный человек — больной манифестной формой заболевания или бессимптомно выделяющий ротавирусы с фекалиями |
Источником инфекции при ротавирусном гастроэнтерите является инфицированный человек — больной манифестной формой заболевания или бессимптомно выделяющий ротавирусы с фекалиями. Вирусы в фекалиях заболевших появляются одновременно с развитием клинических симптомов, наибольшая концентрация их в кале (до 109 — 1011 вирусных частиц в 1 г) регистрируется в первые 3 — 5 дней болезни. В эти дни больные представляют наибольшую эпидемиологическую опасность для лиц, контактирующих с ними. Наиболее частым источником заболевания для детей первого года жизни являются инфицированные ротавирусом матери; для взрослых и детей более старшего возраста — дети, в основном из детских коллективов. Возможность заражения человека от животных не доказана.
Патогенез ротавирусной инфекции характеризуется проникновением вируса в эпителиоциты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта, преимущественно тонкой кишки, что приводит к их повреждению и отторжению от ворсинок. Вследствие этого на ворсинках тонкой кишки появляются функционально и структурно незрелые энтроциты с низкой способностью синтезировать пищеварительные ферменты. При ротавирусном гастроэнтерите это проявляется снижением уровня дисахаридаз, развивается вторичная дисахаридазная недостаточность, при которой в просвете тонкой кишки накапливаются нерасщепленные дисахариды, что создает повышенное осмотическое давление и приводит к выводу в просвет кишечника воды и электролитов из тканей организма. Это является основной причиной диареи и дегидратации и определяет основные клинические проявления болезни.
Ротавирусный гастроэнтерит как инфекционное заболевание имеет циклическое течение. Инкубационный период продолжается чаще всего от 12 — 24 часов до двух суток. Клиническая картина ротавирусного гастроэнтерита характеризуется в основном острым началом, однако в ряде случаев может иметь место продромальный период длительности от 12 до 48 — 72 часов. В этот период больные отмечают недомогание, общую слабость, повышенную утомляемость, снижение аппетита, головную боль, познабливание, урчание и неприятные ощущения в животе, умеренно выраженные катаральные явления: заложенность носа, першение в горле, легкий кашель.
В клинической картине ротавирусного гастроэнтерита в период развернутых клинических проявлений ведущими являются синдромы гастроэнтерита и интоксикации. Выраженность диареи и обусловленной ею той или иной степени дегидратации организма, а также токсикоза, продолжительность этих симптомов в значительной мере определяет тяжесть течения заболевания.
Синдром гастроэнтерита характеризуется развитием диареи, снижением аппетита, появлением урчания и болей в животе, тошноты и рвоты. Наиболее типичен для ротавирусного гастроэнтерита обильный водянистый пенистый стул желтого или желто-зеленого цвета. У больных с легким течением заболевания стул может быть кашицеобразным. Как правило, патологические примеси в стуле отсутствуют. Боль локализуется преимущественно в верхней половине живота или является диффузной, она может быть разной интенсивности. Почти всегда она сопровождается громким урчанием в животе.
Синдром интоксикации появляется в самом начале заболевания. Слабость, зачастую резкая, является наиболее частым проявлением этого синдрома; реже отмечается головная боль. При более тяжелом течении имеют место головокружение, обморочное состояние, коллапс. Обращает на себя внимание следующая особенность ротавирусного гастроэнтерита: два ведущих в клинической картине болезни синдрома развиваются в процессе заболевания не всегда однонаправленно; у некоторых больных на фоне сравнительно слабо выраженных диспепсических явлений могут наблюдаться резко выраженные симптомы общей интоксикации, особенно слабость.
Повышение температуры тела не всегда может отмечаться при ротавирусном гастроэнтерите, особенно у взрослых. У некоторых больных может быть озноб без повышения температуры. В то же время нередко в разгар заболевания выраженность лихорадочной реакции варьируется от субфебрильных цифр и выше и может достигать 38 — 39°С как у детей, так и у взрослых.
Важным в диагностическом плане для ротавирусного гастроэнтерита считается сочетание двух ведущих клинических синдромов с симптомами поражения верхних дыхательных путей. Катаральный синдром встречается приблизительно у 50% больных и проявляется в виде гиперемии и зернистости слизистых оболочек мягкого неба, небных дужек, язычка, задней стенки глотки, а также насморка, заложенности носа, кашля, болей в горле. В ряде случаев катаральные симптомы наблюдаются уже в продромальном периоде, до проявления симптомов гастроэнтерита.
В разгар болезни отмечается изменение функционального состояния сердечно-сосудистой системы, чаще у пациентов с более тяжелым течением и при наличии сопутствующих заболеваний органов кровообращения. У большинства пациентов отмечается тенденция к артериальной гипертензии, тахикардия, определяется глухость сердечных тонов при аускультации. У больных с тяжелым течением заболевания, как правило, возникают обмороки и коллапсы из-за выраженных расстройств гемоциркуляции, в генезе которых наряду с токсическими воздействиями существенное значение имеет гиповолемия. Потери жидкости и электролитов вследствие рвоты и диареи могут быть значительными и приводят к развитию дегидратации. Клинические проявления дегидратации зависят от ее степени. При легком и среднетяжелом течении ротавирусного гастроэнтерита отмечается жажда, сухость во рту, слабость, бледность (дегидратация I — II степени), при тяжелом течении наряду с этими симптомами наблюдаются также осиплость голоса, судороги мышц конечностей, акроцианоз, снижение тургора кожи, уменьшение диуреза (дегидратация III степени).
В связи с развитием при ротавирусном гастроэнтерите возможных осложнений, главным образом циркуляторных расстройств, острой сердечно-сосудистой недостаточности, нарушений гомеостаза, выделяют группы больных повышенного риска, в которые включают новорожденных, детей младшего возраста, лиц пожилого возраста, а также больных с тяжелыми сопутствующими заболеваниями. Описанные в литературе и наблюдавшиеся нами случаи ротавирусного заболевания с летальным исходом относятся именно к этим группам.
Выделяются две основные клинические формы ротавирусного заболевания — гастроэнтерическая и энтерическая. Симптомы только острого гастрита (гастритический вариант) встречаются в 3 — 10% случаев. Функциональные и морфологические нарушения со стороны желудочно-кишечного тракта, возникающие при ротавирусном гастроэнтерите в случае наличия у пациентов фоновой гастроэнтерологической патологии, нередко способствуют развитию таких осложнений основного заболевания, как обострение сопутствующих болезней: хронического гастрита, энтероколита, панкреатита, часто в сочетании с выраженными явлениями дисбактериоза кишечника, требующими коррекции при лечении.
При ротавирусном гастроэнтерите гемограмма изменяется следующим образом: в остром периоде заболевания с высокой частотой выявляются лейкоцитоз с нейтрофилезом и повышенная СОЭ. В периоде реконвалесценции картина крови обычно нормализуется полностью. Изменения урограммы у большинства больных имеют кратковременный характер и проявляются чаще всего небольшой протеин-, лейкоцит- и эритроцитурией; в редких случаях в моче появляются гиалиновые цилиндры в незначительном количестве. При тяжелом течении заболевания нарушения функции почек могут быть более выраженными, с повышением уровня мочевины крови, олигоурией или анурией, снижением клубочковой фильтрации. На фоне проводимой терапии указанные изменения быстро исчезают и при повторных обследованиях не отмечаются.
В качестве примера, иллюстрирующего особенности клинического течения ротавирусного гастроэнтерита, приводим выписку из истории болезни.
Лечение: обильное питье солевых растворов, парентеральная регидратационная и дезинтоксикационная терапия — трисоль 1000 мл внутривенное капельное введение, внутрь ферментные препараты: абомин, панкреатин, тансол, карболен. Течение заболевания без осложнений. На третий день болезни — субфебрильная температура, оставалась слабость; боли в животе прекратились. Стул кашицеобразный до пятого дня от начала заболевания. Полное выздоровление наступило на седьмой день болезни.
Дифференциальный диагноз у больных ротавирусным гастроэнтеритом проводят с другими острыми кишечными инфекциями как вирусной так и бактериальной этиологии, прежде всего в тех случаях, когда в клинической картине на первый план выступает синдром гастроэнтерита: с вирусными диареями различной этиологии (аденовирусы, коронавирусы, астровирусы, калицивирусы, вирус Норфолк, энтеровирусы Коксаки и ЕСНО); с гастроинтестинальной формой сальмонеллеза, с гастроэнтеритическим и гастроэнтероколитическим вариантами острой дизентерии, с пищевыми токсикоинфекциями, вызванными условно-патогенными бактериями; с холерой.
Обнаружение специфических антител и нарастание их титра в сыворотке крови больных и переболевших ротавирусным гастроэнтеритом при помощи серологических реакций с целью текущей диагностики на практике в настоящее время широкого распространения не получило и используется в основном для ретроспективного анализа различных эпидемиологических ситуаций.
Методы обнаружения вирусспецифической РНК, которые можно назвать высокочувствительными и специфичными, имеют, однако, ряд недостатков, ограничивающих их практическое применение (необходимость наличия специальной аппаратуры, реактивов, квалифицированного персонала и др.) Наиболее простой метод в этой группе — электрофорез ротавирусной РНК в полиакриламидном геле. Этот метод, позволяющий идентифицировать штаммы вирусов, вызвавшие заболевание, и дать характеристику штаммов, циркулирующих на данной территории, в основном применяется при эпидемиологических исследованиях.
 |
| Рисунок 2. Слизистая оболочка толстой кишки при ротавирусном гастроэнтерите. Минимальное содержание плазматических клеток в собственной пластинке, увеличение в ней числа макрофагов. х 400 |
В клинической практике врач нередко сталкивается с обстоятельствами (сомнительные результаты вирусологических и серологических исследований, случаи микст-инфекций), когда возникает необходимость в применении дополнительных методов для верификации диагноза. С этой целью может быть использован доступный для практического здравоохранения интрументальный метод исследования — ректороманоскопия с аспирационной биопсией слизистой оболочки толстой кишки. При гистологическом, морфометрическом и гистохимическом исследованиях биоптатов при ротавирусном гастроэнтерите выявляются характерные изменения в виде поверхностного минимально выраженного катарального колита с незначительной дистрофией эпителия (рис. 1), снижения числа серотонинсодержащих желудочно-кишечных эндокриноцитов (ЕС-клетки) в эпителиальном пласте кишечных желез, умеренной инфильтрацией собственной пластинки плазматическими клетками и увеличением в ней числа макрофагов (рис. 2). Эти особенности имеют дифференциально-диагностическое значение, поскольку отличаются указанным показателем от других острых кишечных инфекций, что может быть использовано в диагностически сложных случаях.
Здравоохранение в настоящее время не располагает препаратами, обладающими специфическим антиротавирусным действием, поэтому терапия ротавирусного гастроэнтерита является патогенетической. Основные ее цели — борьба с дегидратацией, токсикозом и связанными с ними наиболее часто встречающимися при ротавирусном гастроэнтерите нарушениями функции жизненно важных органов — сердечно-сосудистой системы и органов мочевыделения, степень выраженности которых во многом определяет тяжесть течения заболевания и его прогноз.
Для правильного выбора характера и объема проводимой регидратационной терапии в первую очередь необходимо установить степень дегидратации у того или иного пациента. При эксикозе I — II степени следует ограничиваться пероральной регидратационной терапией (препараты регидрон, глюксолан и др.). При дегидратации III степени целесообразно прибегать к комбинированной парентеральной и пероральной регидратации. Для парентеральной регидратации применяют растворы трисоль, квартасоль, ацесоль и др. С целью дезинтоксикации и улучшения гемодинамики при среднетяжелом и тяжелом течении заболевания показаны коллоидные растворы (гемодез, полиглюкин и др.).
| Для ротавирусной инфекции характерно сочетание гастроэнтерита, интоксикации и симптомов поражения верхних дыхательных путей |
Современными представлениями о патогенезе диарейного синдрома при ротавирусном гастроэнтерите обусловлено и назначение соответствующих средств, способствующих нормализации состояния пищеварительного тракта, а также диеты. Учитывая нарушения активности ряда пищеварительных ферментов, в частности лактазы, рекомендуется исключить в острый период заболевания из пищевого рациона больных молоко и молочные продукты. Кроме того, по этой же причине целесообразно ограничивать и пищу, богатую углеводами. В связи с вышеизложенным, в острый период необходимы энзимные препараты (панзинорм-форте, фестал и др). Кроме того, в остром периоде заболевания могут быть использованы адсорбирующие и вяжущие средства, способствующие ускоренному формированию стула (смекта, карболен и др.) также возможно применение хилака-форте. Высокой частотой дисбактериозов кишечника различной степени выраженности у больных ротавирусным гастроэнтеритом обусловлена необходимость применения в комплексной терапии бактерийных биологических препаратов. Лучшая терапевтическая эффективность при ротавирусном гастроэнтерите отмечена при применении лактосодержащих бактерийных биологических препаратов (ацилакт, лактобактерин и др.), что, по-видимому, связано с заместительным действием бактериальной лактазы, содержащейся в лактобактериях. В последние годы в комплексной терапии ротавирусного гастроэнтерита начал применяться комплексный иммуноглобулиновый препарат (КИП), который разработан и выпускается в МНИИЭМ им. Г. Н. Габричевского. Это первый отечественный иммуноглобулиновый препарат для энтерального применения. КИП характеризуется повышенной концентрацией антител к микроорганизмам, возбудителям острых кишечных инфекций, в том числе ротавирусам, сальмонеллам, шигеллам, эшерихиям и др. Применение КИП в комплексной терапии больных ротавирусным гастроэнтеритом оказывает отчетливый положительный терапевтический эффект, существенно сокращая продолжительность интоксикации и диареи, что открывает новые возможности в лечении этого заболевания.
Литература
1. Букринская А. Г., Грачева Н. М., Васильева В. И. Ротавирусная инфекция. М., 1989.
2. Дроздов С. Г., Покровский В. И., Шекоян Л. А., Машилов В. П. и др. Ротавирусный гастроэнтерит. М., 1982.
3. Новикова А. В. и др. Архив патологии, 1989, №6.
4. Щербаков И. Т. и др. Архив патологии, 2995, №3.
5. Юшук Н. Д., Царегородцев А. Д.. Лекции по инфекционным болезням. М., 1996.
Ротавирусы являются наиболее частыми возбудителями гастроэнтеритов у детей. Они вызывают также гастроэнтериты у молодых животных (обезьян, крупного рогатого скота, лошадей, собак, овец, оленей, кроликов, мышей и др.). Наиболее хорошо изучены вирус диареи телят Небраски (NCDV), вирус эпизоотической диареи мышат, вирус обезьян (SA11), вирус, выделенный из кишечника
Рис. 41. Вирионы ротавируса.
а — электронно-микроскопическое изображение; б — схема строения вириона: 1— сердцевина; 2— внутренний капсид;
3— наружный капсид*
овец и крупного рогатого скота. Все вирусы имеют сходную морфологию и содержат общий антиген.
Морфология. Название рода происходит от'лат. rota — колесо, поскольку при электроной микроскопии вирионы имеют вид колеса, благодаря наружному капсиду в форме обода и капсомерам внутреннего капсида в виде радиальных спиц (рис. 41). Вирион имеет диаметр 70—75 нм и состоит из сердцевины диаметром 33—40 нм, содержащей двунитчатую РНК и внутренние белки, и двух кап-сидов с икосаэдральной симметрией — внутреннего и наружного. Часто встречаются частицы, лишенные наружного капсида диаметром 60 нм, а также пустые частицы, лишенные сердцевины; и те и другие не обладают инфекционной активностью. В препаратах ротавирусов обнаруживаются трубчатые структуры, связанные с морфоге-незом вируса.
Химический состав и физико-химические свойства.Вирионы содержат РНК и белки. Липиды отсутствуют. Углеводы содержатся в составе гликопротеидов. Плавучая плотность двухкапсидных частиц в хлориде цезия 1,36— 1,38 г/см 3 , коэффициент седиментации 525 S. Плавучая плотность пустых частиц 1,29 г/см 3 .
Геном представлен одиннадцатью уникальными фрагментами двунитчатой РНК с молекулярной массой от 0,2 • 10 6 до 2 • 10 6 и общей молекулярной массой 11 • 10 6 При электрофорезе в полиакриламидном геле фрагменты располагаются четырьмя группами, содержащими 4,2,3 и 2
-фрагмента соответственно. Каждый фрагмент кодирует
-индивидуальный белок. Первичная структура генома установлена. Продуктами 4,9,11-го генов являются белки наружного капсида, 1,2, 6-го генов — белки внутреннего кап-сида, 5,7,8,10-го — неструктурные белки.
Белки и антигены. Среди белков наружного капсида находится белок VP7, продукт 9-го гена, являющийся протективным антигеном и основным антигеном участвующим в РН. Этот белок является типоспецифическим антигеном. В наружном капсиде локализуется также белок VP3, продукт 4-го гена, обусловливающий гемагглютини-рующую активность вируса и взаимодействующий с клеточными рецепторами. Этот белок нарезается трипсино-подобными ферментами клетки на две субъединицы (с молекулярной массой 88- 10 3 -^60+28• 10 3 ). Нарезание этого белка вызывает протеолитическую активацию вируса и необходимо для возникновения инфекции. Общим антигеном и антигеном, определяющим подгрупповую специфичность, является белок внутреннего капсида, продукт 6-го гена, VP6. Среди белков сердцевины находится РНК-зависимая РНК-полимераза.
Все вирусы человека и животных имеют общий антиген, выявляемыйв ИФ, ИЭМ,РСК и др., и разделяются на
-'3 подгруппы, которые дифференцируются в ИФА. Типо-специфические антигены, находящиеся в составе наружного капсида, позволяют дифференцировать 4 серотипа вирусов человека и животных.
Устойчивость к физическим и химическим факторам.Ротавирусы устойчивы к эфиру и детергентам, кислым значениям рН (3,0), обычным дезинфектантам. Особенно устойчивы в фекалиях, сохраняя инфекционную активность при комнатной температуре до 7 мес. Прогревание при температуре 50°С в присутствии детергентов, замораживание и оттаивание инактивирует вирус.
Репродукция. Ротавирусы человека не культивируются в обычных условиях и лишь с большим трудом происходит их адаптация к росту в культуре клеток (первичные или вторичные культуры клеток почек зеленых мартышек). Применяют ряд приемов, увеличивающих интенсивность репродукции: добавление в культуральную среду трипсина, вызывающего протеолитическую активацию вируса; центрифугирование клеток после инфициро-вания и т. д. В этих условиях обнаружено ЦПД, заключающееся в появлении округлившихся клеток и их агрегатов, отторгающихся от стекла.
Ротавирусы животных размножаются в культурах клеток, поэтому они изучены лучше, чем ротавирусы человека, и многие данные относительно репродукции ротавиру-сов получены на этих моделях.
Патогенез. Путь заражения фекально-оральный. Вирус размножается в клетках эпителия ворсинок тонкого кишечника, находящихся на вершине ворсинок. Разрушение клеток приводит к уменьшению количества ферментов, расщепляющих дисахариды (мальтозу, сахарозу и лактозу). В связи с этим в двенадцатиперстной кишке накапливаются дисахариды и нарушается процесс всасывания простых Сахаров.По мере образования инфекционного потомства вирусные частицы движутся с содержимым кишечника в дистальном направлении. Переходя в толстую кишку, дисахаридь' и простые сахара создают повышенное осмотическое давление, которое препятствует всасыванию воды из кишечного содержимого и приводит к поступлению в кишечник воды из тканей организма. Попадающие в толстую кишку моносахариды расщепляются кишечными бактериями до низкомолекулярных жирных кислот, увеличивающих осмотическое давление и обостряющих процесс. В результате воспалительных процессов в слизистой оболочке кишечника усиливается перистальтика, что обусловливает понос.
Клиника. Инкубационный период от 15 ч до 3—5 дней. Болезнь начинается остро. Появляются понос, рвота, тошнота, боли в животе. Часто бывает только тошнота и затем понос. Испражнения обильны, водянистые, пенистые, ярко-желтого цвета, иногда мутно-белой окраски. Отмечается повышение субфебрильной температуры, слабость, головная боль. Болезнь длится 5—7 дней.
^ Иммунитет. Инфекция сопровождается появлением ^специфических антител. На первой неделе заболевания — . антитела класса IgM, через 2—3 нед — антитела класса IgG. Уже к 6 годам жизни антитела обнаруживаются у 60—90% детей. Однако гуморальный иммунитет не предупреждает развитие заболевания; большое значение приобретают секреторные антитела IgA и другие факторы. местного- иммунитета. Пассивный иммунитет защищает детей первых шести месяцев жизни от инфекции, которая в этом возрасте обычно протекает бессимптомно.
Эпидемиология. Ротавирусный гастроэнтерит является преимущественно заболеванием раннего детского возраста. В основном болеют дети в возрасте от 6 мес до 2 лет, инфекция часто встречается у новорожденных, но не всегда сопровождается клиническими симптомами. Регистрируются вспышки. в детских коллективах, семейные и внутрибольничные, в такие периоды болеют и дети старших возрастов и взрослые. Заболевание имеет сезонность (январь, февраль), но спорадические случаи встречаются в течение всего года. В развивающихся странах ротави-русная инфекция является основной причиной смертности детей раннего возраста.
Источником инфекции является только человек. Больные выделяют большое количество вируса с фекалиями (в 1 г обнаруживается до 10'° вирусных частиц). Ин-фицирование происходит при контакте с загрязненной фекалиями средой. Однако, не исключен и воздушно-капельный путь передачи инфекции. Относительно высокая устойчивость вируса во внешней среде затрудняет предупреждение контаминации окружающей среды.
Лабораторная диагностика. Лабораторная диагностика основана на обнаружении возбудителя в фекалиях и выявлении иммунологических сдвигов путем обследования парных сывороток больных.
Материалом для исследования являются фекалии. Фекалии отбирают стерильно и доставляют в лабораторию в контейнерах со льдом. Готовят 10—20% суспензию фекалий на растворе Хенкса. После осветления на низкой скорости надосадочную жидкость обрабатывают антибиотиками.
Быстрая диагностика. Быстрая диагностика основана на выявлении вирусных частиц или антигенов в фекалиях больных с помощью методов ЭМ, ИЭМ, РИА и ИФА. В качестве иммунных сывороток используют гипериммунные сыворотки лабораторных животных (кро
ликов, морских свинок), иммунизированных ротавирусами животных (SA 11 или вирус диареи телят Небраски), или сыворотки больных, в стадии выздоровления.
Поскольку большие количества вируса выделяются с фекалиями, вирусные частицы можно выявить при прямой ЭМ экстрактов фекалий. При взятии материала на 1—3-й день после начала заболевания получают максимальное число положительных ответов (до 100%), на 3—5-й день — до 50%, на 5—8-й день — до 25%.
При ИЭМ гипериммунную сыворотку смешивают с экстрактом фекалий больного, смесь инкубируют при комнатной температуре, а затем при температуре 4°С, после чего центрифугируют для осаждения специфических вирусных агрегатов. Осадок ресуспендируют в нескольких каплях дистиллированной воды и материал контрастируют с помощью фосфорновольфрамовой кислоты. В препаратах видны компактные агрегаты, состоящие из вирусных частиц, окруженных ореолом антител.
Вирусный антиген в экстрактах фекалий можно определить с помощью твердофазных РИА и ИФА. Чувствительность этих методов примерно одинакова. Их преимуществом перед методом ЭМ является возможность исследования большого количества проб и точный количественный учет результатов. С помощью этих реакций, а также РСК и РПГ выявляются в основном группо-и подгруппоспецифические антигены, общие для рота-вирусов человека и животных, в то время как в РН выявляются типоспецифические антигены.
Быструю диагностику можно провести также путем выявления вирусных РНК в экстракте фекалий с помощью метода МГ при использовании в качестве зонда плаз-миды, содержащей гены ротавируса, а также путем электрофореза РНК, выделенной из экстракта фекалий, в по-лиакриламидном геле. Фрагменты РНК выявляют путем окрашивания геля бромидом этидия. Этот метод более чувствителен, чем ЭМ.
Серологическая диагностика. Прирост антител в парных сыворотках больных определяют с помощью антигенов ротавирусов животных, близких в антигенном отношении ротавирусу человека, вируса диареи телят Небраски и обезьяньего вируса SA11. Эти вирусы адаптированы к культуре клеток и дают выраженный цитопатический эффект. Антитела выявляют в РН в культуре ткани, РСК, РТГА с эритроцитами человека группы 0 или эритроцитами морской свинки. Сыворотки предварительно
обрабатывают каолином и 50% эритроцитарной
Профилактика и лечение. Профилактика основана на эпидемиологических мероприятиях, общих для всех ки-шечных инфекций. Лечение симптоматическое. Целесообразна вакцинация детей раннего возраста убитыми вакцинами.
Орбивирусы выделены из общей экологической группы арбовирусов и представляют многочисленную группу вирусов, передающихся клещами, комарами, москитами. Они образуют 17 серологических групп, имеются также несгруппированные вирусы. Все они вызывают болезни с природной очаговостыо. Наряду с вирусами, патогенными. для человека (вирус Колорадской лихорадки, вирус Кемеровской лихорадки), патогенность большинства вирусов для человека не доказана.
Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:
Название рода связано со своеобразием морфологии вирионов (лат. rota - колесо).
Возбудитель был обнаружен впервые в 1973 г. в эпителиальных клетках слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки детей с острым гастроэнтеритом.
Культивирование и репродукция. Ротавирусы человека в отличие от ротавирусов животных плохо адаптируются к культуре клеток. Однако их культивируют в роллерных культурах первичных и перевиваемых почечных клеток зеленых мартышек. ЦПД характеризуется уплотнением и округлением клеток, объединением их в конгломераты, соединенные между собой тяжами. Процесс репродукции ротавирусов протекает так же, как и у других реовирусов.
Антигены. По антигенному составу ротавирусы человека и животных очень близки между собой. Их перекрестные антигенные связи позволяют использовать ротавирус телят (Небраски) и обезьян в качестве антигена для серологической диагностики ротавирусной инфекции, а также для получения диагностических сывороток. По антигенным свойствам ротавирусы разделены на 3 подгруппы и 4 серотипа. Перекрестные антигенные связи между ротавирусами, рео-вирусами и орбивирусами не обнаружены. Гликопротеин наружного капсида ротавирусов определяет их гемагглютинирующие свойства и типовую антигенную специфичность.
Патогенез. Ротавирусы являются возбудителями гастроэнтеритов новорожденных и детей более старшего возраста. У взрослых наблюдаются легкие формы заболевания. Первичная репродукция вируса происходит в цитоплазме энтероцитов тонкой кишки. При этом микроворсинки щеточной каймы клеток укорачиваются, становятся неровными или полностью исчезают. Нарушается процесс всасывания простых Сахаров. Воспалительные явления усиливают перистальтику кишечника, что способствует развитию диарейного синдрома и появлению рвоты.
Иммунитет. В организме больных вначале появляются антитела класса IgM, которые через 2-3 недели сменяются IgG. Существенное значение в местном иммунитете принадлежит секреторным иммуноглобулинам IgA. Вируснейтрализующие антитела класса IgG способны проходить через плаценту. Они играют определенную роль в создании пассивного иммунитета в первые 6 мес. после рождения ребенка. Комплементсвязывающие антитела быстро исчезают после перенесения заболевания, вируснейтрализующие сохраняются десятилетиями.
Эпидемиология. Источником заражения являются больные с острой и бессимптомной формами инфекции, а также вирусоносители. Механизм заражения фекально-оральный. Наиболее опасны больные в первые 3-5 дней заболевания, когда в фекальных массах накапливается максимальное количество вируса. Через 7-8 дней после начала заболевания выделение вируса прекращается. Ротавирусы обладают сравнительно высокой устойчивостью к физическим и химическим факторам внешней среды. Ротавирусы вызывают в 40-60% случаев острый гастроэнтерит у детей в возрасте от 1 года до 6 лет, а также внутрибольничные вспышки гастроэнтерита в палатах для новорожденных. Реже заболевание регистрируется у подростков 10-12 лет. По данным ВОЗ, во всем мире от ротавирусного гастроэнтерита ежегодно погибают от 1 до 3 млн. детей.
Профилактика проводится в ряде стран путем иммунизации детей инактивированной вакциной.
Лабораторная диагностика. Проводится путем выявления вируса в фекальных массах больных в 1-ю неделю заболевания, с од- ной стороны, и регистрации нарастания титра антител в парных сыворотках от больных - с другой. Ротавирусы обнаруживаются в фекальных массах в 100% случаев в первые дни заболевания с помощью иммунной электронной микроскопии. Вирусный антиген в фекалиях выявляют иммуноферментным и радиоиммунным методами, в реакции иммунофлюоресценции, а также с помощью нуклеиновых зондов. Вирусы могут быть выделены в культурах клеток в первые дни болезни. Серологическую диагностику проводят в реакциях нейтрализации вируса в культуре клеток, РСК, а также в РТГА с эритроцитами человека группы 0. В качестве диагностикума используют ротавирусы обезьян или телят.
Читайте также: