Бруцеллез наставление по диагностике бруцеллеза животных

ДИАГНОСТИКА БРУЦЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ (обзор литературы)

Бруцеллез (Brucellosis) – инфекционная болезнь, вызывающая первичный остросептический инфекционный процесс у половозрелых и особенно у беременных восприимчивых животных и первично латентный инфекционный процесс у неполовозрелого молодняка. Бруцеллезом заболевают все виды сельскохозяйственных животных.

На протяжении своей истории у этой болезни было много разных названий, в том числе мальтийская и средиземноморская лихорадка, а также волнообразная лихорадка (благодаря рецидивирующему характеру лихорадки, возникающей во время болезни).

Бруцеллы – мелкие (0,3—2 мкм) палочки с закругленными концами, овальной, шарообразной или палочковидной формы. При некоторых условиях окружаются капсулой, неподвижны, спор не образуют. Грамотрицательны. По Романовскому — Гимзе окрашиваются в слабо-фиолетовый цвет. В препарате чаще всего расположены беспорядочно. Культивируются в аэробных условиях при оптимальной температуре 36°С и рН 6,8—7,2. При температуре выше 45°С и ниже 6°С роста не наблюдается.

Бруцеллы проникают из внешней среды в организм через слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы, конъюнктиву, а также через поврежденную кожу.

Бруцеллы способны довольно долго сохраняться во внешней среде. В зависимости от температуры они живут в почве до 3—4 мес, в воде — 4—5 мес, на белье, загрязненном выделениями больного, в мясе — до 1 мес, в молоке — до 40 дней, в сливочном масле — 10—29 дней. При воздействии высокой температуры быстро гибнут: при 60°С через 30 мин, при кипячении почти моментально.Более устойчивы к низким температурам: при 5—8°С сохраняют жизнеспособность на протяжении 35 дней.

Из эпизоотологических данных учитывают благополучие местности по бруцеллезу, факты приобретения животных из других хозяйств. При клиническом обследовании животных обращают внимание на наличие абортов, задержание последов, эндометритов, а у самцов - бурситов, орхитов.

Для бактериологического исследования в лабораторию посылают: абортированный плод целиком с плодовыми оболочками или в исключительных случаях желудок плода с содержимым, перевязанный со стороны пищевода и двенадцатиперстной кишки, паренхиматозные органы плода и плодовые оболочки. В крайнем случае, на исследование можно послать слизь и другие выделения из матки абортировавшего животного.Кроме того, в лабораторию направляют содержимое гигром (бурситов), абсцессов, влагалищную слизь, молоко.

Лабораторная диагностика бруцеллеза проводится согласно нормативным правовым и методическим документам, определяющим порядок организации и проведения лабораторной диагностики бруцеллеза для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней.

Бактериологическую диагностику бруцеллеза проводят в случае аборта или при появлении у животных других признаков (бурситы, гигромы, орхиты, эпидидимиты и прочие), вызывающих подозрение на данное заболевание.

Серологическая диагностика бруцеллеза заключается в обнаружении специфических антител в сыворотке крови животных в реакции агглютинации (РА) в пробирках, реакции связывания комплемента (РСК), реакции длительного связывания комплемента на холоде (РДСК), реакции иммунодиффузии с 0-полисахаридным антигеном (РИД), пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал антигеном (роз бенгал проба - РБП) и в молоке коров - кольцевой реакции (КР) и других реакциях, утвержденных в установленном порядке.

При проведении плановых диагностических исследований животных на бруцеллез в благополучных по этой болезни зонах обычно применяют реакцию агглютинации (РА) или Роз бенгал пробу (РБП). При этом, особенно в весеннее время, при исследовании сыворотки крови отдельных незараженных и не вакцированных против бруцеллеза животных с бруцеллезными антигенами могут быть получены неспецифические результаты реакций. Обычно появление таких реакций обусловлено глубокой беременностью, стрессами, прививками против других болезней или носительством близкородственных в антигенном отношении грамотрицательных микроорганизмов (пастерелл, сальмонелл, кампилобактерий,иерсиний и др.), а также рядом других причин.

Диагностика бруцеллеза включает лабораторные (бактериологическое, серологическое и молекулярно-генетическое) исследования материала и аллергических (у свиней) исследованих в хозяйствах.

Плановые серологические исследования являются основным методом выявления больных и подозрительных по заболеванию животных.

Молекулярно-генетическое исследование (ПЦР) проводят в случае аборта и при появлении у животных других клинических признаков, вызывающих подозрение на бруцеллез, а также при получении положительных и сомнительных результатов серологического исследования на бруцеллез животных, не иммунизированных противобруцеллезными вакцинами, из хозяйств, благополучных по данному заболеванию.

При взятии проб крови, молока и патологического материала, а также проведении лабораторных исследований необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями.

Таким образом, учитывая эпизоотологические, клинические и патологоанатомические данные, окончательная диагностика осуществляется на основании лабораторных исследований.

Во всех случаях аборта проводят бактериологическое исследование плода (желудок) и ставят биопробу. Основной метод прижизненной диагностики бруцеллеза – серологический (РА, РСК, РДСК, РБП – розбенгалпроба и КР с молоком). Кроме того, у овец, коз и свиней используют аллергическую пробу. Бактериологические исследования проводят в случае аборта или появления других признаков бруцеллеза..

При постановке диагноза исключают кампилобактериоз, хламидиоз, инфекционный эпидидимит, лептоспироз, сальмонеллез, незаразные болезни с симптомами аборт.

Список используемых источников

Асонов Н.Р. Микробиология.:учебник / Н.Р. Асонов - М.: Колос, 2017. - 352 с.

Воронин Е.С. Ветеринарная микробиология и иммунология.:учебник / Е.С. Воронин - М.: КолосС 2013 – 671 с.

Кисленко, В.Н. Ветеринарная микробиология и иммунология :учебник / Кисленоко В.Н., Н. М. Колычев. - М. : КолосС - Ч.2: Иммунология 2012. – 115 c.

Филдс Б.Н. Вирусология:учебник / Б.Н. Филдс - Москва, 2011. – 492 с.

Бруцеллез (Brucellosis) — инфекционная, хронически протекающая болезнь домашних, некоторые виды диких животных и человека, характеризующаяся поражением многих систем жизнеобеспечения, нарушением функций сосудистой, пищеварительной, мочеполовой систем и системы воспроизводства.

Изучая причины мальтийской лихорадки, английский врач Д. Брюс в 1886 – 1887 гг. установил, что виновником ее является специфический микрококк, названный им Micrococcus melitensis. Дальнейшие исследования показали, что источником возбудителя мальтийской лихорадки являются козы, пораженные инфекцией, а причиной заражения людей — потребление молока от таких коз. Несколько позже Micrococcus melitensis был выделен у овец.

В1897 г. датские ученые Банг и Стриболд установили, что массовые аборты у коров вызывает микроорганизм, названные B. abortus bovis. В 1914 г. Траум обнаружил очень сходный микроорганизм, названный Br. abortus suis, при массовых абортах у свиней.

Для диагностики бруцеллеза в 1897 г. Райтом была предложена серологическая реакция агглютинации, а в 1922 г. Берне разработал внутрикожную аллергическую пробу, облегчающую распознавание болезни.

Долгое время мальтийская лихорадка у людей и массовые аборты у домашних животных считались самостоятельными заболеваниями. В 1918 – 1920 гг. Ивенс, Мейер и Фезье, изучая биологические свойства возбудителя мальтийской лихорадки и массовых абортов у крупного рогатого скота, обнаружили их чрезвычайную близость. Эти исследования явились основанием объединить указанных возбудителей, в том числе и возбудителя массовых абортов у свиней, в одну родовую группу под наименованием Brucella (в честь Брюса), а вызываемые ими заболевания именовать бруцеллезом.

В России начало изучения бруцеллеза было положено работами Е. И. Марциновского (1911), но детальному изучению заболевание подверглось в различных местностях СССР лишь с 1935 г. Большой вклад в изучение бруцеллеза сельскохозяйственных животных внесли отечественные ученые: С. Н. Вышелесский, П. Ф. Здродовский, П. А. Вершилова, М. К. Юсковец, Е. С. Орлов, Р. А. Цион, А. П. Бессонов и др. Были всесторонне изучены биологические свойства возбудителя, усовершенствованы методы диагностики, показаны значение в борьбе с бруцеллезом вакцинальной профилактики и пути ее совершенствования.

Клинические признаки бруцеллеза у крупного рогатого скота

Длительность инкубационного периода 2 – 3 недели. Первым показателем развившегося инфекционного процесса служит появление в крови инфицированных животных агглютининов в постепенно нарастающих титрах.

У коров основным клиническим признаком бруцеллеза является аборт и реже рождение нежизнеспособного приплода. Коровы, заразившиеся до покрытия, в большинстве случаев приносят нормальный приплод. Аборт чаще всего происходит на 5 – 8-м месяце. За 1 – 2 дня до наступления аборта у коров отмечается припухание наружных половых органов, выделение из влагалища бесцветной или буроватой жидкости и набухание вымени. После аборта происходит задержка последа и развивается эндометрит, сопровождающийся обильными слизисто-гнойными или гнойно-фибринозными выделениями. При тяжело протекающем эндометрите повышается температура тела, снижаются удои, отмечается потеря веса, убыстряется СОЭ; умеренный лейкоцитоз. Эндометритам нередко сопутствуют серозные или серозно-катаральные маститы. В процессе могут вовлекаться яичники и фаллопиевы трубы, что приводит к нарушению полового цикла и временному или стойкому бесплодию.

У отдельных животных в связи с абортом или независимо от него можно наблюдать развитие серозных бурситов или серофибринозных артритов. Последние в большинстве случаев возникают в суставах передних конечностей — запястном, путовом, коленном, локтевом. У быков бруцеллез, хотя и редко, сопровождается развитием орхитов и эпидидимитов.

Лабораторная диагностика бруцеллеза основана на результатах бактериологического и серологического исследований. Бактериологическое исследование в основном применяют при первичной постановке диагноза на бруцеллез в ранее благополучных хозяйствах.

В лабораторию направляются пробы крови (сыворотки) для серологического исследования, абортивный плод с плодными оболочками, околоплодную жидкость, истечения из родовых путей или желудок плода, кусочки печени, селезенки, пробы молока (последние порции). При убое животных берут паренхиматозные органы, лимфатические узлы, пораженные суставы, у самцов — семенники. Объектом исследования могут быть молочные продукты (брынза, сыр, масло), объекты внешней среды.

При массовых диагностических исследованиях ставят пробирочную РА, роз бенгал пробу (РА на стекле), РСК, РДСК, кольцевую реакцию с молоком (КР). Диагностикумы для этих исследований, а также бруцеллин ВИЭВ для аллергической диагностики готовятся на Щелковском биокомбинате.

По данным К. В. Шумилова до 1952 года борьба с бруцеллезом крупного рогатого скота в нашей стране сводилась к проведению диагностических исследований и удалению из стад больных животных, без применения противобруцеллезных вакцин. В связи с осложнением эпизоотической ситуации в 1953 году в систему противобруцеллезных мероприятий была включена иммунизация животных вакциной из штамма B. abortus 19.

Вакцину из штамма B. abortus 19 применяли до 1970 года. За 20 лет применения вакцины многие хозяйства, даже области, были оздоровлены от болезни. Однако в регионах с широким распространением бруцеллеза эффективность оздоровительных мероприятий оказалась низкой. В первую очередь, это было обусловлено высокой агглютиногенностью вакцины. Агглютинины и комплементсвязывающие антитела, вырабатывающиеся в ответ на введение вакцины, сохраняются в организме животных до 5 – 8 лет и затрудняют дифференциацию иммунизированных животных от больных бруцеллезом.

С 1971 по 1974 год вакцину из штамма B. abortus 19 использовали только на телках 5 – 8 месячного возраста. С 1974 года и по настоящее время в России в комплексе противобруцеллезных мероприятий применяются вакцины из штаммов B. abortus 82 и 19. Живая сухая вакцина против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма № 82 отличается от вакцины из штамма 19 слабым серологическим ответом с быстрым снижением уровня гуморальных антител, что позволяет при помощи серологических реакций дифференцировать вакцинированных животных.

За 30 лет работы с применением вакцины из штамма B. abortus 82 и смены пяти поколений коров к 2004 году (К. В. Шумилов) количество неблагополучных по бруцеллезу пунктов и заболевших животных значительно сократилось.

Сухая живая вакцина против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма B. abortus 75/79-АВ разработана сотрудниками ВГНКИ и Алтайской НИВС с использованием культуры штамма 75/79, выделенного от коровы, ранее иммунизированной вакциной из штамма B. abortus 82. После многократных пассажей выделенного штамма через организм морских свинок и телок и целенаправленной селекции на питательных средах, был получен новый вакцинный штамм 75/79-АВ. Вакцины не обладает абортогенными свойствами, что дает возможность проводить иммунизацию маточного поголовья независимо от сроков стельности. Вакцина является слабоагглютиногенной; агглютинины и комплементсвязывающие антитела регистрируются у привитых животных в течение трех месяцев после иммунизации, что делает возможным их исследование по истечении указанного срока. У животных, иммунизированных вакциной, выраженный иммунитет сохраняется в течение года, что позволяет за указанный срок оздоравливать неблагополучные хозяйства от бруцеллеза.

Штамм B. abortus КВ 17/100, находящийся в R-форме, получен путем целенаправленной селекции по культуральным, морфологическим, биохимическим и антигенным свойствам из вакцинного штамма B. abortus 104М, находящегося в S-форме. Адъювант-вакцина не индуцирует синтез S-бруцеллезных антител в диагностических титрах у животных, не сенсибилизированных бруцеллами. Адъювант-вакцина индуцирует синтез S-бруцеллезных антител у крупного рогатого скота с латентной формой бруцеллеза, что позволяет за счет быстрого удаления из стад таких животных, ускорить оздоровление хозяйств, неблагополучных по бруцеллезу.

Адъювант-вакцина не абортогенна и может быть использована для иммунизации маточного поголовья крупного рогатого скота независимо от сроков стельности.

Наставление
по применению бруцеллина ВИЭВ для аллергической диагностики бруцеллеза у мелкого рогатого скота и свиней
(утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 24 декабря 1969 г. взамен Наставления от 11 июля 1968 г.)

1. Бруцеллин - стерильный биологический препарат, представляет собой прозрачную, слегка опалесцирующую желтовато-коричневую жидкость, содержащую специфические вещества, извлеченные из бруцелл.

2. Бруцеллин расфасовывается во флаконы. При встряхивании и переворачивании флакона препарат не должен просачиваться через пробку. На каждом флаконе должна быть этикетка (или надпись) с обозначением наименования биопредприятия, изготовившего бруцеллин, наименования биопрепарата и его количества во флаконе, даты изготовления, срока годности, доз для применения, номера серии и контроля.

Бруцеллин во флаконах с нарушенной целостью, без этикетки, с наличием посторонних примесей (плесень, комочки, хлопья, муть и пр.), а также подвергавшийся замораживанию к применению непригоден. Бруцеллин должен быть использован в день вскрытия флакона.

3. Бруцеллин пригоден для применения в течение 18 месяцев со дня изготовления при условии хранения в темном, сухом помещении при температуре 2-16°.

4. Бруцеллин применяют для аллергической диагностики бруцеллеза у овец и коз методом пальпебральной пробы и у свиней методом внутрикожной пробы в соответствии с инструкцией о мероприятиях по профилактике и ликвидации бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

Исследовать животных на бруцеллез с применением бруцеллина разрешается только ветеринарным врачам или ветфельдшерам с законченным средним специальным образованием под наблюдением ветеринарного врача.

5. Бруцеллин вводят овцам и козам под кожу нижнего века левого глаза в дозе 0,5 мл (пальпебральная проба). Голову животного прочно фиксируют, затем шприцем емкостью 5 мл, снабженным бегунком через короткую тонкую иглу (N 0415-0813), бруцеллин вводят под кожу на 1 см ниже края века со стороны наружного угла глаза.

Животных с заболеванием глаз или с густым шерстным покровом в области век метят. Им вводят бруцеллин в одну из-под хвостовых складок внутрикожно в дозе 0,2 мл.

Свиньям бруцеллин вводят внутрикожно в дозе 0,2 мл (через иглу для внутрикожного введения) с наружной стороны ушной раковины левого (или правого) уха, ближе к его основанию. На месте введения препарата образуется уплотненный бугорок размером с горошину.

При инъекции обязательно соблюдение правил асептики. Участок кожи перед уколом протирают ватой, смоченной в спирте или 3%-ном растворе борной кислоты. Иглы и шприцы перед началом работы стерилизуют кипячением. Для каждого животного используют стерильную иглу.

6. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина появляется воспалительная реакция в виде плотной или тестоватой припухлости, обычно хорошо видимой при осмотре; у свиней, кроме того, могут появиться гиперемия, иногда кровоизлияние в виде темно-красного пятна в центре отека. У здоровых животных местная реакция не возникает.

7. Реакцию на введение бруцеллина у овец и коз учитывают один раз через 42-48 часов, у свиней - 2 раза через 24 и 48 часов путем осмотра, а при неясно выраженной реакции - пальпацией места инъекции.

При обнаружении на месте введения препарата припухлости реакцию оценивают как положительную.

В случае неясно выраженной реакции прощупывают место введения препарата и сравнивают с кожей века другого глаза (или подхвостовой складки), а у свиней - с кожей основания уха другой стороны. Если обнаруживают хотя бы небольшую разницу, реакцию считают положительной. При отсутствии указанных признаков реакции результат исследования считают отрицательным. Реагирующих на бруцеллин животных метят, выделяют из отары (стада) и изолируют.

8. При исследовании овец и коз в неблагополучных по бруцеллезу отарах (стадах) в целях более полного выявления больных животным, не реагировавшим на первое введение, при читке реакции бруцеллин вводят через 42-48 часов повторно в то же место и в той же дозе.

После второго введения бруцеллина реакцию учитывают через 24 часа, как указано в пункте 7 наставления, При этом всех реагирующих овец и коз метят и изолируют.

9. Если при учете реакции на первое введение аллергена в отаре не будет выявлено реагирующих животных, повторно бруцеллин не вводят.

10. С животными, признанными при исследовании бруцеллином реагирующими положительно, поступают согласно инструкции по предупреждению и ликвидации бруцеллеза сельскохозяйственных животных.

11. После применения бруцеллина у животных можно в любые сроки брать кровь для исследования на бруцеллез серологическими методами (РА и РСК).

12. Результат исследования овец, коз и свиней бруцеллином записывают в акте, который сохраняют в хозяйстве; копию акта направляют главному ветеринарному врачу района.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас или получите полный доступ к системе ГАРАНТ на 3 дня бесплатно!

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.

Наставление по применению бруцеллина ВИЭВ для аллергической диагностики бруцеллеза у мелкого рогатого скота и свиней (утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 24 декабря 1969 г. взамен Наставления от 11 июля 1968 г.)

Текст наставления официально опубликован не был

5.1. Метод аллергического исследования основан на выявлении у больных бруцеллезом

животных повышенной чувствительности замедленного типа к специфическому аллергену.

5.2. Аллергический метод применяют для исследования на бруцеллез крупного рогатого скота,

буйволов, овец, коз, свиней и северных оленей, не подвергавшихся прививке вакцинами против

бруцеллеза, в случаях, предусмотренных инструкцией о мероприятиях по профилактике и

ликвидации бруцеллеза животных.

Аллергическое исследование на бруцеллез животных разрешается проводить только

ветеринарным врачам или фельдшерам со средним специальным образованием под наблюдением

5.3. Для аллергической диагностики бруцеллеза у животных применяют бруцеллин ВИЭВ.

Бруцеллин - стерильный биологический препарат, представляет собой прозрачную жидкость

коричневато-желтого цвета без опалесценции, содержащую продукты жизнедеятельности и

специфические вещества, извлеченные из бруцелл.

Флаконы с бруцеллином должны быть плотно закрыты пробками и закатаны алюминиевыми

колпачками. При встряхивании и переворачивании флакона препарат не должен просачиваться через

пробку. На каждом флаконе должна быть этикетка (или надпись) с обозначением наименования

биопредприятия, изготовившего бруцеллин, наименования препарата и его количества, номера

серии, даты выпуска, срока годности, номера госконтроля, условий хранения, стандарта (ГОСТ) и

5.4. Бруцеллин используют только в день вскрытия флакона. Он пригоден для применения в

течение 18 месяцев со дня изготовления при условии хранения в темном сухом помещении при

температуре плюс 2 - 15 °С.

5.5. Каждый флакон с бруцеллином перед применением просматривают. При обнаружении в

препарате каких-либо примесей, плесени, хлопьев, при нарушении целостности стекла или укупорки,

отсутствии надписи на флаконе, а также бруцеллин, подвергавшийся замораживанию и давший

осадок или помутнение, к применению не допускается.

5.6. Для введения животным бруцеллина используют короткие инъекционные иглы (N 0420 -

0813) или иглы для внутрикожных инъекций с двумя трубками (N 0706, ТУ 46-22-607-80) и шприцы,

снабженные бегунком, вместимостью 2 или 5 мл. При исследовании свиней можно применять

Шприцы и иглы перед и после их использования стерилизуют кипячением в течение 30 минут в

дистиллированной или кипяченой воде без добавления дезинфицирующих средств. Безыгольные

инъекторы стерилизуют в соответствии с инструкцией по их использованию.

Во время исследования животных инъекционные иглы меняют перед каждым наполнением

шприца бруцеллином, а в промежутках между инъекциями препарата иглу держат в ватном тампоне,

смоченном 70° спиртом.

5.7. Непосредственно перед применением бруцеллина алюминиевый колпачок флакона с

препаратом приоткрывают, резиновую пробку обрабатывают спиртом, прокалывают инъекционной

иглой и шприцем через нее набирают необходимое количество аллергена.

Бруцеллин вводят животным под кожу нижнего века на 1 см ниже края века со стороны

наружного угла глаза (пальпебральная проба): овцам, козам и оленям в дозе 0,5 мл, крупному

рогатому скоту и буйволам в дозе 1,0 мл.

Вводить бруцеллин под кожу века, имеющую травматические повреждения, уплотнения,

абсцессы и другие поражения, не разрешается. Животных с заболеванием глаз или с густым

шерстным покровом в области век метят и вводят им бруцеллин внутрикожно в центре одной из

подхвостовых складок в дозах: овцам и козам - 0,2 мл и крупному рогатому скоту и буйволам - 0,3 мл

Свиньям бруцеллин вводят внутрикожно с наружной стороны ушной раковины, ближе к

основанию уха в дозе 0,2 мл. Правильность внутрикожной инъекции препарата контролируют по

образованию бугорка размером с горошину.

При инъекции препарата животным обязательно соблюдение правил асептики. Участок кожи

перед уколом протирают ватой, смоченной в спирте или 3-процентном растворе борной кислоты.

5.8. У животных, больных бруцеллезом, на месте введения бруцеллина наступает

воспалительная реакция в виде плотной или тестоватой припухлости, обычно хорошо видимой при

осмотре; у свиней, кроме того, может развиваться гиперемия, иногда кровоизлияние в виде темно-

красного пятна в центре отека. У здоровых животных местная реакция не возникает.

5.9. Реакцию на бруцеллин у овец, коз, оленей, крупного рогатого скота и буйволов учитывают

один раз через 48 часов, у свиней - два раза, через 24 и 48 часов после введения препарата, путем

осмотра, а при неясно выраженной реакции - пальпацией места инъекции.

При обнаружении на месте введения препарата припухлости реакцию оценивают как

В случае неясно выраженной реакции пальпируют место введения препарата и сравнивают с

кожей века другого глаза (или подхвостовой складки), а у свиней - с кожей основания другого уха.

Если обнаруживают хотя бы небольшую разницу, реакцию считают положительной. При отсутствии

указанных признаков реакции результат исследования считают отрицательным.

Реагирующих на бруцеллин животных метят и выделяют из отары (стада).

5.10. С животными, признанными при исследовании бруцеллина реагирующими

положительно, поступают согласно Инструкции о мероприятиях по профилактике и ликвидации

5.11. После применения бруцеллина у животных можно в любые сроки брать кровь для

исследования на бруцеллез серологическими методами.

5.12. Проведение аллергического исследования на бруцеллез животных оформляют актом с

приложением к нему описи реагировавших животных (указывают инвентарный номер, пол и возраст

животных, характер реакции на бруцеллин). Один экземпляр акта направляют главному ветврачу

района, другой хранят в хозяйстве.

С выходом настоящих Методических указаний утрачивают силу:

"Наставление по лабораторной диагностике бруцеллеза сельскохозяйственных животных" от 17

"Наставление по диагностике бруцеллеза у коров методом кольцевой реакции (КР) с молоком"

от 2 ноября 1960 г.;

"Наставление по применению бруцеллина ВИЭВ для аллергической диагностики бруцеллеза у

мелкого рогатого скота и свиней" от 24 декабря 1969 г.;

"Временное наставление по клинической и лабораторной диагностике инфекционного

заболевания овец, вызываемого бруцеллой овис (инфекционный эпидидимит баранов)" (приложение

к циркулярному письму Главного управления ветеринарии МСХ СССР от 10 марта 1970 г. N 116-9);

"Наставление по постановке и учету реакции агглютинации при диагностике бруцеллеза

сельскохозяйственных животных" от 19 мая 1964 г. с изменениями и дополнениями, внесенными 11

"Наставление по постановке и учету реакции связывания комплемента (РСК) и реакции

длительного связывания комплемента (РДСК) при диагностике бруцеллеза у животных" от 27 мая

"Наставление по постановке и учету пластинчатой реакции агглютинации с роз бенгал

антигеном (роз бенгал проба или РБП) при диагностике бруцеллеза у животных" от 12 декабря 1978 г.

Указания по диагностике бруцеллеза животных разработаны Всесоюзным Ордена Ленина

научно-исследовательским институтом экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко

(проф. П.С. Уласевич, кандидаты вет. наук А.Н. Касьянов и В.А. Ромахов), Всесоюзным

государственным ордена Трудового Красного Знамени научно-контрольным институтом

ветеринарных препаратов МСХ СССР (канд. вет. наук К.В. Шумилов), Главным управлением

ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР (Э.С. Плотников) и Центральной

ветеринарной лабораторией (Б.И. Антонов, Т.А. Сысоева, В.В. Борисова).

Основными тестами при массовых диагностических исследованиях явля­ются пробирочная РА, РА на стекле (Роз-бенгал проба), РСК и РДСК, коль­цевая реакция с молоком, реакция диффузионной преципитации.

При обнаружении в неблагополучных по бруцеллезу стадах крупного рогатого скота (ранее иммунизированного или не иммунизированного) жи­вотных с уровнем антител 100 ME и более их признают больными,
50 ME — результат РА сомнительный. В случае сомнительной РА животных исследу­ют через 15-30 суток повторно и при вторичном сомнительном результате животных признают больными.

При исследовании в РА невакцинированных баранов-производителей, пробников, ярок, козлов, содержащихся в благополучных отарах, где про­водилась иммунизация, РА оценивают как положительную при уровне ан­тител 100 ME и более, сомнительной — 50 ME. В последнем случае живот­ных через 15-30 суток исследуют повторно, и, если содержание антител не увеличилось, их признают здоровыми.

Роз-бенгал проба (РБП).РА на стекле с корпускулярным антигеном, окрашенным розовым бен­гальским, используют для диагностики бруцеллеза крупного рогатого ско­та, овец, коз, лошадей, свиней, буйволов, верблюдов и северных оленей. Реакцию проводят на чистых, сухих эмалированных пластинках с лунками при температуре не ниже 18°С. Исследуемые сыворотки в дозе 0,03 мл вно­сят на дно лунки, затем в лунку рядом с сывороткой помещают при исследо­вании крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов и свиней 0,03 мл ан­тигена, сывороток овец, коз, буйволов и северных оленей — 0,015 мл анти­гена. Компоненты должны иметь температуру не ниже 18°С.

Кольцевая реакция с молоком (КР).Реакцию применяют для проверки благополучных по бруцеллезу стад крупного рогатого скота и молока на рынках.

КР на 2-3 креста считают положительной, 1 крест — сомнительной. При положительной КР от всех животных стада берут кровь для исследо­вания в РА или РСК (РДСК) или РА и РИД. Если получают их отрицатель­ный результат, то независимо от позитивной КР животных признают здоро­выми.

При диагностике бруцеллеза северных оленей для оценки эпизоотического состояния стад, благополучных по бруцеллезу, вакцинированных против бруцеллеза; для исследования на бруцеллез не ранее чем через два месяца после применения вакцин; для дифференциации неспецифических реакций.

Техника проведения РИД. Расплавленный агар разливают по 2,5 мл на предметные стекла, пластинки размером 6x9 см —12 мл, стандартные чашки Петри слоем не менее 2 мм, которые предварительно размещают на строго горизонтальной поверхности. В застывшем агаровом геле штампом делают лунки: центральную диаметром 5 мм и шесть переферических по 3 мм.

В центральную лунку вносят 20 мкл О-полисахаридного антигена, в пе­риферические — 40 мкл исследуемых сывороток крови. Одновременно на каждой пластинке (чашке Петри) ставят контроль с позитивной сывороткой крови. Затем стекла (чашки Петри) выдерживают во влажной камере при температуре не ниже 18° С и учитывают результат в косопроходящем свете через 24 и 48 часов. Как положительный результат оценивают наличие ли­нии преципитации, появившейся через 24 часа. Сыворотки крови, давшие реакцию преципитации через 48 часов, исследуют повторно и при получении линии преципитации через 24 или 48 часов результат реакции признают по­ложительным.

Печеночно-сывороточный или печеночно-аминопептидный агар.Готовят печеночный отвар: 500 г свежего фарша говяжьей печени смешивают с 500 мл воды, кипятят 1 час, фильтруют через ватный фильтр, стерилизуют в автоклаве, смешивают равные объемы печеночного отвара и водопроводной воды, добавляют 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 2% агар-агара. На 1000 мл смеси вносят 17 мл 10%-ной двууглекислой соды, автоклавируют 20-25 минут при 115° С, фильтруют через ватный фильтр, ус­танавливают рН 7,0-7,2, добавляют 1% глюкозы и 2% глицерина, разливают по колбам и стерилизуют 20-25 минут при 110° С. Перед использо­ванием агар расплавляют, остужают до 50° С, добавляют 10-20% сыво­ротки крови лошади или крупного рогатого скота (печеночно-сывороточ-иый агар) или 10-15% аминопептида (печеночно-аминопептидный агар) и разливают по чашкам или пробиркам. Также готовят полужидкие агары, внося 0,15-0,2% агар-агара. Рекомендуют среды данного типа для культивирования В. ovis.

Печеночный агар Хеддльсона.В 500 мл воды вносят 10 г пентона,
5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара, автоклавируют 30 минут, добавляют 500 мл печеночного отвара, охлаж­дают до 60° С, устанавливают рН 7,0. К 1 л среды добавляют один яичный белок, автоклавируют 30 минут при 120° С, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, устанавливают рН 7,0, разливают по емкостям и стерилизуют 30 минут при 115° С.

Плотный печеночно-глюкозо-глицериновый агар (ППГГА). 400 г свежей говяжьей печени освобождают от жира и пленок, измель­чают, добавляют 500 мл водопроводной воды, кипятят 1 час, фильтруют через ватный фильтр. Полученный печеночный отвар разводят водопро­водной водой 1:1, добавляют 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 2,5% ага­ра и
17 мл 10%-ного раствора гидрокарбоната натрия на 1000 мл. Среду автоклавируют 20 минут при 115° С, отстаивают в автоклаве 3-4 часа, фильтруют через ватный фильтр, устанавливают рН 7,2. Затем в среду вно­сят 1% глюкозы и 2-3% глицерина, разливают по пробиркам, колбам, сте­рилизуют 20-25 минут при 110° С. Данную среду рекомендуется приме­нять для культивирования В. abortus, В. melitensis и В. suis, при бактериостатическом методе дифференциации бруцелл. ППГГБ готовят так же, но агар не добавляют.

Сывороточно-декстрозиый агар.К 835 мл дистиллированной воды добавляют 15г агар-агара, 10г пептона, 5 г химически чистого натрия хлорида и 165 мл мягкой воды. Прогре­вают 1 час текучим паром, устанавливают рН 7,8, автоклавируют 30 мин при 127° С, фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,4. Среду разливают по сосудам и стерилизуют при 116° С 15 минут. Перед использованием среду расплавляют, охлаждают до 50° С, добавляют сте­рилизованные фильтрованием сыворотку крови лошади или крупного ро­гатого скота до концентрации 5% и раствор декстрозы до уровня 1%. Сре­да рекомендуется для первичного выделения бруцелл.

Сывороточно-декстрозный бульон.Готовят так же, как сывороточно-декстрозный агар, но без добавления агар-агара.

Альбими-агар.В 1000 мл дистиллированной воды добавляют 20 г сухого пептона, 20 мл дрожжевой воды, 5 г натрия хлорида, 20 г агар-агара. Устанавливают рН 7,3, все компоненты растворяют в аппарате Коха, фильтруют через ватный фильтр. Вносят 1 г глюкозы, 0,2 г бисульфита натрия, устанавливают рН 7,2 0-7,3, разливают по колбам и стерилизуют 40 минут текучим паром, затем 20 минут в автоклаве при 110° С. Дрожжевую воду получают путем кипячения 1 кг хлебных дрожжей в 1000 мл дистиллированной воды, затем фильтруют через полотно и хранят под флороформом в темноте (не более 15 дней).