Внешний лабораторный контроль качества сифилис

Содержание

Дерматология в России

• Сайт зарегистрирован как СМИ, электронное периодическое издание на русском и английском языке, ISSN 2077-3544

• Основатель и главный редактор проекта - проф. А.Ю. Сергеев
• Посещаемость сайта свыше 1500 человек в сутки (статистика). Среди более 15000 наших врачей-подписчиков 223 доктора и 1229 кандидатов медицинских наук, заведующие кафедрами, директора институтов и научных центров, руководители здравоохранения. Издание распространяется бесплатно, для использования профессиональных и интерактивных материалов необходима регистрация
• Дерматология в России выходит и обновляется практически ежедневно. Сайт предоставляет возможности коммуникации для практикующих врачей, ученых, преподавателей, представителей общественных организаций и фармацевтической индустрии

Развитие системы внешнего контроля качества серодиагностики сифилиса в 2004-2006 годах

ФГУ ЦНИКВИ Росмедтехнологий, г. Москва

Цель: изучение показателей, характеризующих развитие Системы BKK, при проведении циклов ВКК в дерматовенерологи ческих учреждениях (ДВУ) субъектов Российской Федерации (РФ) за период 2004-2006 годов. Материалы и методы: материалом исследования служили протоколы с результатами исследований КМ, выполненных в серологических лабораториях ДВУ субъектов РФ в циклах 2004-2006 годов. Участникам BKK предлагалось в течение 7 дней после получения образцов КМ провести их изучение в трех реакциях из числа наиболее стандартизуемых лабораторных методик (РМП, РПР, РПГА, РИФабс/200 и ИФА). Результаты исследований оценивали на основании критериев, в числе которых важное место было отведено формальному соблюдению условий контрольного цикла: полноте проведения контрольных исследований (не менее 3 контролируемых реакций) и оперативности предоставления протоколов. Результаты: развитие Системы BKK осуществлялось путем постепенного привлечения новых участников. В контрольных мероприятиях в 2004 году приняли участие 31 (83,8%) из 37; в 2005 году — 59 (81,9%) из 72, а в 2006 году — 70 (87,5%) из 80 серологических лабораторий ДВУ субъектов РФ, в чей адрес были направлены посылки с КМ. Число контролируемых лабораторий за указанный период времени увеличилось в 2,25 раза. К 2006 году Система BKK охватывала подавляющее большинство — 70 (82,4%) из 85 специализированных ДВУ субъектов РФ, функционировавших на момент проведения работ. На фоне постоянного пополнения числа контролируемых лабораторий при проведении контрольных циклов была установлена положительная динамика показателей, характеризующих выполнение формальных требований BKK. Так, в 2004 году формальные условия контрольного цикла успешно выполнили 23 (74%) из 31, в 2005 году — 43 (73%) из 59, в 2006 году — 58 (83%) из 70 серологических лабораторий. В то же время в 8 (26%), 16 (27%) и 12 (17%) серологических лабораториях КВД субъектов РФ за те же годы соответственно не было обеспечено своевременного исследования предоставленных КМ (материалы исследованы спустя 10 и более дней после их получения) или не был выполнен необходимый объем исследований на сифилис (менее трех контролируемых методик).

За истекший период времени прослежена динамика изменения набора серологических методик, включенных во внешний контроль качества. Так, в 2004 году РМП применили в 31 (100%), РПР — в 7 (22,5%), РПГА — в 24 (77,4%), ИФА — в 26 (83,9%), РИФабс — в 23 (74,2%) и РИФ200 в 13 (41,9%) из 31 лаборатории, принявшей участие в цикле BKK. При исследовании панели КМ в рамках цикла BKK 2005 года РМП использовали 58 (98,3% лабораторий), РПР — 11 (18,6%), РПГА — 51 (86,4%), ИФА — 55 (93,2%), РИФабс — 37 (62,7%) и РИФ200 — 24 (40,6%) из 59 участников мероприятия. В контроль качества серологических методов диагностики сифилиса 2006 года большинство из 70 лабораторий-участниц включило: РМП — 68 (97,1%), РПГА — 61 (87,1%), ИФА — 59 (84,3%) и РИФабс — 37 (52,8%) лабораторий; другие реакции были использованы в небольшом числе лабораторий: РИФ200 — в 25 (35,7%) и PПР — в 13 (18,6%). Выводы: разработка и практическая реализация мероприятий Системы BKK за период 2004-2006 годов позволили привлечь к участию во внешнем контроле качества до 82,4% серологических лабораторий специализированных ДВУ субъектов РФ. Осуществление контрольных циклов за указанный период времени увеличило число лабораторий, которые выполнили формальные условия контроля, с 74% до 83%. Кроме того, в лабораториях были выявлены тенденции к увеличению использования современных медицинских диагностических технологий: число учреждений, внедривших в рутинную практику лабораторных исследований РПГА увеличилось на 9,7%, ИФА — на 0,5%. Одновременно уменьшилось число лабораторий, применявших для диагностики сифилиса трудоемкие лабораторные методики с низким уровнем автоматизации: РИФабс (на 21,4%) и РИФ200 (на 6,2%).

Контроль качества клинических лабораторных исследований - система мер, направленная на выполнение качественных лабораторных исследований на всех этапах их осуществления - от подготовки пациента к процедуре взятия биологического материала до использования полученных результатов в процессе оказания медицинской помощи. Система контроля качества клинических лабораторных исследований включает внутрилабораторный (внутренний) контроль на уровне отдельной лаборатории и межлабораторный (внешний) контроль на областном, республиканском и международном уровнях.

Основной формой контроля качества всех видов исследований, проводимых в клинико-диагностических лабораториях (далее – КДЛ), является внутренний (внутрилабораторный) контроль. Цель: обеспечить точность и правильность выполняемых в КДЛ исследований, предупредить, выявить и устранить грубые, случайные и систематические ошибки количественного анализа биологического материала. Под внутренним (внутрилабораторным) контролем качества понимают проверку результатов измерений каждого лабораторного показателя в каждой аналитической серии. Внутренний (внутрилабораторный) контроль качества должен выполняться во всех КДЛ ежедневно по всем видам лабораторных исследований, охватывать область нормальных и патологических результатов. Мероприятия по проведению контроля качества в КДЛ в каждом ее отделе выполняет медицинский работник, который работает на данном участке в настоящее время. Ответственность за обеспечение и проведение внутрилабораторного контроля качества возлагается на заведующего КДЛ. Контроль за функционированием системы внутрилабораторного контроля качества в КДЛ организаций здравоохранения возлагается на территориальные органы управления здравоохранением, управления здравоохранения облисполкомов и комитет по здравоохранению Мингорисполкома.

Критерии контроля качества:

- точность измерений - качество измерений, отражающее близость результатов измерений к истинному значению измеряемой величины. Высокая точность измерений соответствует малым погрешностям всех видов, как случайных, так и систематических;

- правильность измерений отражает близость к нулю систематических погрешностей в измеряемых результатах. Правильность измерений оценивается величиной отклонения или смещения результата от установленного значения величины сравнения. Правильность измерений характеризует отсутствие систематических погрешностей для всей серии выполняемых исследований;

- грубые ошибки - погрешности одиночного значения, результаты которых выходят далеко за пределы области измеряемого компонента;

- случайные ошибки - погрешности одиночного значения, результаты которых не выходят далеко за пределы области измеряемого компонента и влияют на индивидуальные результаты. Наличие случайных ошибок проявляется в том, что при повторном определении в одинаковых условиях одного и того же показателя результаты исследования отличаются между собой. Величина случайной ошибки является мерой воспроизводимости лабораторных результатов. Чем меньше случайных ошибок, тем лучше воспроизводимость (совпадение) лабораторных показателей. Воспроизводимость результатов характеризуется величиной среднеквадратического отклонения (S);

- систематические ошибки - это погрешности, одинаковые по знаку, то есть результаты лабораторных исследований либо завышены, либо занижены. Такие ошибки имеют однонаправленное отклонение от истинного значения, зависят от одинаковых причин и влияют на всю аналитическую серию исследований. Величина систематической ошибки характеризует правильность результатов анализа.

Контроль качества осуществляется с помощью специальных контрольных материалов, а также ряда способов, не требующих контрольных материалов.

При внутрилабораторном контроле используются контрольные материалы промышленного производства, допущенные в установленном порядке к применению на территории Республики Беларусь. Требуется контрольный материал по всем видам проводимых в лаборатории исследований - гематологический, биохимический, общеклинический и другие. Наиболее подходящим для проведения внутрилабораторного контроля качества являются нормальные и патологические контрольные сыворотки, плазма, моча, взвесь клеток и другие материалы, изготовленные промышленным путем. Паспортные значения контрольного материала могут использоваться как для контроля правильности результатов, так и для первоначальной оценки сходимости (воспроизводимости в серии) и в дальнейшем воспроизводимости результатов во времени (воспроизводимость изо дня в день). Контрольный материал нельзя использовать одновременно в качестве калибровочного материала. Подготовка контрольного материала к исследованию проводится строго в соответствии с инструкцией производителя и используется так же, как и пробы пациентов. Для экономного использования контрольного материала допускается разлить содержимое флакона на аликвоты. Объем аликвот - не менее 0,5 мл в пробирках или флаконах с герметичными крышками хранят при t -20 °С и более низких температурах для дальнейшего использования. Допускается однократное замораживание и оттаивание контрольного материала. В случаях невозможности приобретения контрольных материалов промышленного производства в достаточном количестве в лаборатории для контроля воспроизводимости могут быть использованы приготовленные непосредственно в лаборатории материалы - слитые сыворотки, плазма, моча и др.

Оценка качества лабораторных исследований проводится на всех этапах получения (производства) результатов анализов:

Преаналитический этап - комплекс мероприятий, включающий составление заявки лечащим врачом на исследование, выбор тестов, подготовка пациента и биологического материала к проведению аналитического измерения.

Контролю на преаналитическом этапе лабораторных исследований подлежат следующие процедуры:

-подготовка пациента к исследованию;

-взятие биологического материала;

-первичная обработка биологического материала;

-хранение проб до начала исследования.

Лабораторная часть преаналитического этапа начинается с момента доставки пробы и заявки в КДЛ. Контролю качества на данном этапе подлежат:

-организация приема проб и заявок;

-регистрация проб и пациентов;

-идентификация проб (соответствие их направлениям, время поступления в КДЛ, достаточность количества материала для проведения назначенных тестов);

-центрифугирование и другие манипуляции по подготовке биологического материала к исследованию;

-условия и сроки хранения проб до проведения анализа;

-деление проб или формирование вторичных пробирок с повторной маркировкой;

-распределение проб по рабочим местам.

Критериями отказа в приеме материала на исследование может быть расхождение между сведениями, указанными в заявке и маркировке пробирки, отсутствие маркировки, невозможность прочесть заявку и (или) маркировку и другие объективные причины. В случае отказа в исследовании медицинский работник КДЛ сообщает об этом лечащему врачу, назначившему исследование.

Контролю качества на аналитическом этапе подлежат:

-проверка срока годности реагентов;

-проверка наличия контрольного материала и стандартов;

-проверка состояния аналитического оборудования, калибровки прибора, регулярного и своевременного технического обслуживания и метрологического контроля.

Постаналитический этап включает аналитическую и клиническую оценку полученных результатов и своевременное их использование для оценки состояния пациентов.

Внешний контроль качества -система объективной оценки результатов лабораторных исследований во всех КДЛ организаций здравоохранения Республики Беларусь, осуществляемая внешней организацией. Внешнему контролю качества лабораторных исследований подлежат КДЛ организаций здравоохранения, подчиненных Министерству здравоохранения Республики Беларусь. Участие во внешней системе контроля качества является обязательным условием аттестации или аккредитации клинико-диагностических лабораторий. Цель: выявить, устранить и предупредить возможные ошибки, достичь сравнимых результатов во всех клинико-диагностических лабораториях.

Система внешнего контроля качества клинических лабораторных исследований в Республике Беларусь включает 3 уровня контроля:

- региональный (областной, межрайонный) проводится ежеквартально во всех КДЛ области по всем видам исследований;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

Методология проведения внутрилабораторного и внешнего контроля качества серологических исследований, направленных на диагностику сифилитической инфекции. Программа добровольного контроля качества наборов реагентов для диагностики половых инфекций.

Рубрика	Медицина
Вид	автореферат
Язык	русский
Дата добавления	09.01.2018
Размер файла	998,3 K

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Для обеспечения возможности проведения мероприятий ВКК с использованием более разнообразного состава КМ для серологических исследований на сифилис, а также для оценки качества производственных серий наборов реагентов, предназначенных для диагностики сифилиса регламентированными методами, была дополнительно разработана расширенная квалификационная панель КМ. Панель включает 24 образца сыворотки крови; в том числе: 8 КМ с высоким уровнем трепонемоспецифических и реагиновых антител, 8 КМ - с низким уровнем антител и 8 КМ, не содержащих антител, ассоциированных с сифилисом. КМ расширенной квалификационной панели также получали на основе неразведенной сыворотки крови больных манифестными и скрытыми формами сифилиса, а также лиц, состоявших под клинико-серологическим наблюдением по поводу перенесенного сифилиса, и здоровых доноров.

Объем КМ в индивидуальной фасовке составляет не менее 0,5 мл, что обеспечивает возможность исследования образца с использованием различных серологических методов или нескольких производственных серий наборов реагентов.

При создании расширенной квалификационной панели КМ была разработана консервирующая добавка (включавшая консервант ProСline-300, ингибитор протеаз альфа-1-антитрипсин и дисахарид трегалозу), которая обеспечивала сохранение специфической активности контрольных сывороток на уровне 90-93% от исходного уровня в течение 13 месяцев хранения при температуре +4-8оС. Показано преимущество применения разработанной консервирующей добавки по сравнению с применением стабилизатора ProCline-300 в чистом виде (рис. 4).

Рис. 4 Исследование стабильности КМ с добавлением различных консервантов в условиях хранения при температуре +4-8о С

7. Разработка Программы добровольного контроля качества наборов реагентов, применяемых для диагностики инфекций, передаваемых половым путем, в Российской Федерации

В целях оптимизации проведения диагностических исследований на сифилис и улучшения качества применяемых реагентов и расходных материалов была разработана Программа добровольного контроля качества наборов реагентов, применяемых в Российской Федерации для диагностики ИППП, в том числе сифилиса.

В период 2007-2009 годов с использованием разработанной Программы ежегодно проводилось изучение от 30 до 31 производственных серий изделий медицинского назначения на их соответствие требованиям спецификаций технических условий производства. Всего было изучено 76 производственных серий наборов реагентов для проведения серологических исследований для диагностики сифилиса. Проведенный контроль позволил выявить нарушения, связанные с несоблюдением требований действующих нормативных документов по показателям клинической эффективности (чувствительности и специфичности), а также с несанкционированным изменением текста инструкций по применению наборов реагентов, правилами фасовки и маркировки отдельных компонентов.

Установленные нарушения технологии производства наборов реагентов своевременно и оперативно доводились до сведения ОБТК предприятий-производителей для принятия мер по их устранению. Проведенная работа позволила осуществлять внешний контроль над качеством наборов реагентов, применяемых в лабораториях ДВУ субъектов Российской Федерации при проведении серологических исследований на сифилис.

8. Оценка эффективности применения разработанной Системы контроля качества современных серологических исследований для диагностики сифилиса

Контрольные материалы в перешифрованном виде рассылались по почте в лаборатории, участвовавшие в выполнении мероприятий Программы. В контролируемых лабораториях контрольные материалы тестировались в серологических реакциях на сифилис - РМП, RPR, ИФА, РПГА, РИФ (не менее чем в трех реакциях). В установленные сроки протоколы с результатами тестирования доставлялись в ГНЦД и проводился их анализ. Результат тестирования оценивался по формальным и неформальным (существенным) признакам. Результат ВККСИФИЛИС признавался неудовлетворительным по формальным признакам, если исследование проводилось в неустановленные сроки (дольше 7-и дней с момента получения КМ в лаборатории) и если исследование КМ проводилось менее чем в трех серологических реакциях из числа регламентированных тестов, рекомендованных для проведения ВККСИФИЛИС (РМП, RPR, ИФА, РПГА, РИФ). Результат признавался неудовлетворительным по существенным (неформальным) признакам при несовпадении результатов исследования контрольных материалов в контролируемой и контролирующей лаборатории.

По итогам проведения циклов внешнего контроля качества серологических исследований, применяемых для диагностики сифилиса, проведенным в лабораториях в 2004 - 2009 годы (таблица 2), число неудовлетворительных результатов тестирования составило: по нетрепонемным тестам (РМП) - от 27,3 до 10,9%; по трепонемным: в РПГА - от 9,3 до 1,1%; в ИФА - от 15,4 до 0,8%; в РИФ - от 21,7 до 0,9%. Наиболее значимые различия были выявлены при исследовании контрольных материалов с низким содержанием антител (слабоположительных).

Количество неудовлетворительных результатов серологических тестов

при исследовании КМ в циклах ВККСИФИЛИС в 2004-2009 годах

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ПРИКАЗ
26 марта 2001 г.
N 87
О СОВЕРШЕНСТВОВАНИИ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА
Эпидемиологическая ситуация с заболеваемостью сифилисом остается крайне напряженной. С начала 90-х годов она возросла почти в 40 раз и в 1999 г. достигла 186,7 случаев на 100 тыс. населения.
Серьезность ситуации усугубляется тем, что сифилис, как и другие инфекции, передаваемые половым путем, способствует распространению ВИЧ-инфекции.
Одним из основных мероприятий, направленных на предупреждение дальнейшего распространения заболеваемости сифилисом, является его ранняя диагностика.
Однако материально - техническая база серологических лабораторий не соответствует потребностям учреждений здравоохранения. За последние десять лет число кожно - венерологических диспансеров, не имеющих в своем составе серологических лабораторий, возросло с 25,3% в 1989 г. до 31,2% в 1999 г.
С целью совершенствования лабораторной диагностики сифилиса, повышения качества работы и обеспечения единства подхода по ее организации:
ПРИКАЗЫВАЮ:
1. Утвердить:
1.1. Методические указания "Постановка отборочных и диагностических тестов на сифилис" (приложение N 1).
1.2. Методические указания "Расчетные нормы времени проведения лабораторных исследований при диагностике сифилиса методом реакции пассивной гемагглютинации" (приложение N 2)
2. Директору Центрального научно - исследовательского кожно - венерологического института Минздрава России А.А.Кубановой, директору Уральского научно - исследовательского института дермато - венерологии и иммунопатологии Минздрава России Н.В.Кунгурову, директору Нижегородского научно - исследовательского кожно - венерологического института Минздрава России Н.К.Никулину:
2.1. Обеспечить организационно - методическое руководство по внедрению диагностических тестов в субъектах Российской Федерации в соответствии с приложениями N 1 и N 2.
2.2. До 01.06.2001 подготовить и представить в установленном порядке необходимые материалы на аккредитацию серологических лабораторий научно - исследовательских институтов в качестве экспертных в здравоохранении.
2.3. Обеспечить проведение внешнего контроля качества лабораторной диагностики сифилиса.
3. Руководителям органов управления здравоохранением субъектов Российской Федерации:
3.1. Организовать работу по серологической диагностике сифилиса в соответствии с приложениями N 1, N 2.
3.2. Принять неотложные меры по развитию и укреплению материально - технической базы серологических лабораторий, обратив особое внимание на организацию таких лабораторий в составе кожно - венерологических диспансеров.
4. Считать не действующим на территории Российской Федерации приказ Министерства здравоохранения СССР от 2 сентября 1985 г. N 1161 "О совершенствовании серологической диагностики сифилиса".
5. Контроль за исполнением настоящего приказа возложить на Первого заместителя Министра А.И.Вялкова.
Министр
Ю.Л.ШЕВЧЕНКО

Приложение N 1
Утверждено приказом
Минздрава России
от 26.03.2001 г. N 87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПОСТАНОВКА ОТБОРОЧНЫХ И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ
ТЕСТОВ НА СИФИЛИС
Аннотация
Методические указания предназначены для лабораторных работников и клиницистов дерматовенерологической службы России. Указания посвящены современным методам серо- и ликвородиагностики сифилиса, широко апробированным в научно - исследовательских и лечебно - профилактических учреждениях страны. Представлены новые высоко чувствительные специфичные методики постановки реакций на сифилис. Освещено предназначение различных тестов в качестве отборочных, диагностических и контрольных для оценки эффективности лечения. Описаны принципы реакций, методики их постановки, материально - техническое обеспечение, источники получения ошибочных результатов и мероприятия по технике безопасности при работе с инфекционным материалом.
Организация - разработчик: ГУ ЦНИКВИ МЗ РФ.
Авторы: докт. биол. наук, проф. Г.А.Дмитриев, докт. мед. наук, проф. В.Н.Беднова, докт. мед. наук Г.Ф.Тимченко, канд. мед. наук Г.А.Киселева, канд. мед. наук Т.И.Милонова, канд. мед. наук О.А.Стоянова, З.П.Акопова.
Введение
Для серо- и ликвородиагностики сифилиса в России могут применяться следующие методы:
1. Микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном (МР), которая является отборочным тестом при обследовании населения на сифилис. Постановка МР осуществляется с плазмой или инактивированной сывороткой крови. Зарубежные тесты ВДРЛ (VDRL), РПР (RPR) и другие аналогичные МР как по принципу постановки реакции, так и по чувствительности и специфичности.
2. Иммуноферментный анализ (ИФА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем.
3. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА). Антиген из культуральных или патогенных бледных трепонем.
4. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) в следующих модификациях: РИФ-абс, РИФ-ц, РИФ с капиллярной кровью из пальца. Антиген - патогенная бледная трепонема штамма Никольса.
5. Комплекс серологических реакций на сифилис (КСР), состоящий из реакции связывания комплемента (РСК) с трепонемным и кардиолипиновым антигенами, и МР. Поскольку трепонемный антиген является специфическим, КСР относится к диагностическим тестам. В связи с разработкой более чувствительных, специфичных и менее трудоемких реакций стало возможным заменить при постановке КСР реакцию связывания комплемента на ИФА или РПГА также в сочетании с МР.
6. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ), в которой в качестве антигена используют патогенные бледные трепонемы штамма Никольса.
РИТ, РИФ, ИФА и РПГА являются высокочувствительными и высокоспецифичными реакциями на сифилис. Они относятся к диагностическим подтверждающим тестам. При этом в связи с простотой постановки и наличием коммерческих тест - систем ИФА и РПГА могут быть и высокоэффективными отборочными тестами.
Ввиду различной чувствительности при разных формах сифилиса, специфичности и сложности постановки каждая из указанных реакций имеет свое предназначение.
Профилактическое обследование населения на сифилис можно проводить с помощью МР, КСР, ИФА и РПГА. Все организационные вопросы по применению данных реакций с этой целью решаются органами здравоохранения на местах в зависимости от местных условий и возможностей.
При получении положительного результата в МР пациент должен обследоваться дерматовенерологом с повторным исследованием крови в любом диагностическом тесте на сифилис.
При профилактическом обследовании на сифилис больных глазных, психоневрологических, кардиологических стационаров, беременных, в частности, направляемых на искусственное прерывание беременности, должны использоваться КСР, ИФА или РПГА.
При обследовании доноров необходимо применять КСР или ИФА или РПГА, но обязательно в сочетании с МР. Постановка двух реакций одновременно обусловлена высокой ответственностью данного исследования.
МР в количественном варианте с экономической точки зрения необходимо использовать в качестве контроля эффективности лечения, заменив ею количественную постановку РСК с кардиолипиновым антигеном.
Вышеуказанные специфические тесты служат для диагностики всех форм сифилиса, в частности, скрытого, а также для распознавания ложноположительных результатов, полученных в МР и КСР. При диагностике скрытого сифилиса целесообразна постановка двух специфических тестов одновременно.
Поскольку ИФА и РПГА являются более высокочувствительными, специфическими и воспроизводимыми тест - системами, которые можно использовать в качестве отборочных и подтверждающих тестов, осуществить до 2006 г. замену комплекса серореакций (КСР) вышеуказанными реакциями при диагностике сифилиса.
Таким образом, последовательность обследования пациентов на сифилис представляется следующим образом:
- при первичном обследовании производится постановка отборочной (скрининговой) реакции микропреципитации (РМП) или ее модификации (RPR- РПР, TRUST - ТРАСТ, VDRL - ВДРЛ) в количественном и качественном вариантах и в случае положительного результата - любого специфического подтверждающего трепонемного теста (РПГА, ИФА, КСР, РИФ, РИТ);
- после окончания терапии ставится РМП или ее модификация и по снижению титра судят о динамике инфекционного процесса и эффективности терапии. Подтверждением эффективности проведенной терапии считается снижение титра в 4 и более раз в течение 1 года;
- по окончании этого срока осуществляется постановка той же специфической реакции, что и при первичном обследовании. Следует учитывать, что специфические трепонемные тесты могут оставаться положительными (не негативировать) в течение ряда лет, а в отдельных случаях остаются положительными на всю жизнь.
Методика постановки и суть различных модификаций МР, ИФА, РПГА, РИФ, РСК и РИТ подробно описаны в настоящих Методических указаниях.
Формула метода
Впервые детально описаны 6 методов, используемых для серо- и ликвородиагностики сифилиса включающих 15 модификаций. Рекомендована замена РСК при определении эффективности лечения сифилиса МР, что дает экономический эффект. Введена в инструкцию количественная методика постановки РИТ, расширяющая возможности поздних форм сифилиса. Включены методики постановки РСК, РИТ, РИФ-ц и ИФА для ликвородиагностики сифилиса.
Показания к применению метода
Серо- и ликвородиагностика всех форм сифилиса.
Противопоказаний нет.
МИКРОРЕАКЦИЯ ПРЕЦИПИТАЦИИ С КАРДИОЛИПИНОВЫМ АНТИГЕНОМ
(ЭКСПРЕСС - МЕТОД)
Принцип. При добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена образуется преципитат (комплекс антиген - антитело), выпадающий в виде хлопьев белого цвета.
Материально - техническое обеспечение метода
Оборудование для взятия крови и постановки МР:
- капиллярные пипетки аппарата Панченкова;
- градуированные пипетки 1, 2, 5 и 10 мл;
- автоматические пипетки на 20-200 мкл;
- наконечники для автоматических пипеток;
- пробирки длиной 8-10 см и 14-15см, диаметром 1-1,5 см или центрифужные;
- пластинки из прозрачного материала с лунками диаметром 1-1,2 см, глубиной не менее 0,5 см;
- иглы для взятия крови из пальца и вены; шприцы;
- центрифуга, дающая не менее 1000 об/мин;
- аппарат для встряхивания;
- стерилизатор для кипячения игл, шприцов, инструментов.
Ингредиенты для МР:
- антиген кардиолипиновый для микрореакции;
- холин - хлорид (включается в упаковку с антигеном);
- натрий хлорид х.ч.;
- натрий лимоннокислый (цитрат натрия)трехзамещенный
Na C H O 5H O;
3 6 5 7 2
- мертиолат C H O S Na Hg.
9 9 2
Растворы:
- изотонический раствор натрия хлорида 0,9%;
- 10% раствор холин - хлорида готовится следующим
образом: к 29,65 мл изотонического раствора натрия
хлорида добавляют 0,35 мл 0,01% раствора мертиолата
и 5 мл 70% раствора холин - хлорида. Смесь тщательно
перемешивают. При отсутствии мертиолата для
приготовления 10% раствора холин - хлорида
необходимо к 30 мл стерильного изотонического
раствора натрия хлорида добавить 5 мл 70% раствора
холин - хлорида;
- 5% раствор трехзамещенного цитрата натрия
готовится на дистиллированной воде и фильтруется.
Раствор не стоек. При помутнении его надо заменять
свежим. Хранится в холодильнике при 4 град. в
течение 5-6 дней.
Контрольные лиофилизированные сыворотки крови необходимы для установления пригодности эмульсии антигена. Отрицательную и положительную контрольные сыворотки крови используют неразведенными, слабоположительную получают из положительной путем ее разведения по титру, установленному в день приготовления эмульсии антигена. При отсутствии лиофилизированных сывороток крови используют нативную положительную или смесь положительных в РСК с кардиолипиновым антигеном или микрореакции инактивированных сывороток крови, которые разливают по 0,5 мл в пробирки с плотно закрывающимися пробками, хранят в морозильном отделении холодильника, используют с титром выше 1:8. В день постановки реакции сыворотку крови титруют на пластинке с целью подтверждения ранее установленного титра, для контроля качества эмульсии и получения слабоположительного результата, который используют затем в течение рабочего дня.
Титрование контрольной сыворотки проводят следующим образом: в 9 лунок пластинки, начиная со второй лунки, вносят по 90 мкл изотонического раствора натрия хлорида и добавляют в первую и вторую лунки по 90 мкл контрольной сыворотки крови. Содержимое второй лунки перемешивают пипеткой, насасывая и выпуская его в лунку 5-6 раз. Затем набирают 90 мкл содержимого второй лунки в пипетку и 90 мкл переносят в третью лунку. Содержимое третьей лунки перемешивают таким же образом и переносят в четвертую лунку и так далее до последней лунки. Из последней лунки 90 мкл удаляют. Во все лунки добавляют по 30 мкл эмульсии кардиолипинового антигена. Пластинку встряхивают в аппарате в течение 5 минут, добавляют по 90 мкл изотонического раствора натрия хлорида и оставляют при комнатной температуре на 5 минут, после чего регистрируют результаты. Разведение сыворотки крови, давшее слабоположительный результат (+/ 2+), используют в качестве слабоположительного контроля. Для получения его делают соответствующее разведение. Например, если слабоположительный результат получен с разведением сыворотки крови 1:8, то для получения контрольной слабоположительной сыворотки крови в пробирку вносят 0,7 мл изотонического раствора натрия хлорида и 0,1 мл положительной сыворотки крови, перемешивают.
При правильно проведенном титровании положительной сыворотки крови по мере ее разведения наблюдается равномерное уменьшение величины хлопьев преципитата.
При снижении реактивности хранящейся нативной контрольной сыворотки крови используют разведение, дающее слабоположительный результат при повторном титровании. Контрольную сыворотку крови можно использовать до тех пор, пока она дает положительный результат (4+) в разведении не ниже 1:2, и слабоположительный результат (2+) в разведении не меньше 1:4. При дальнейшем снижении реактивности употреблявшуюся положительную контрольную сыворотку крови заменяют новой.
При хранении контрольных сывороток крови не допускаются повторные замораживания их и оттаивание, т.к. в этом случае реактивность