Тест аутогемолиза эритроцитов - методика, показатели нормы

Добавил пользователь Алексей Ф.
Обновлено: 14.12.2024

Метод определения Реакция гемагглютинации с микрофильтрацией в геле (гелевый метод с использованием ID-карт) с полиспецифическими (анти-IgG + анти-С3d) антиглобулиновым реагентом.

Синонимы: Прямая реакция Кумбса; Прямая антиглобулиновая реакция. Coombs test; direct Coombs; Antihuman globulin test (Coombs), Direct.

Краткое описание исследования Прямой антиглобулиновый тест

Проба Кумбса - это иммуногематологический тест, модификация реакции гемагглютинации, основанный на выявлении антител (иммуноглобулинов) с помощью антиглобулиновой сыворотки. Тест назван по имени английского иммунолога R. R. A. Coombs, в 1945 году впервые применившего тест, описанный еще в 1908 году C. Moreschi.

Прямая проба Кумбса служит для выявления иммуноглобулинов, адсорбированных на эритроцитах пациента (тогда как непрямая - для выявления свободных антител, присутствующих в сыворотке пациента).

Материалом для исследования в прямом тесте Кумбса служат эритроциты пациента, реагентом - антиглобулиновая сыворотка, представляющая смесь антител против иммуноглобулинов человека. Положительный прямой антиглобулиновый тест подтверждает наличие фиксированных на поверхности эритроцитов пациента антител и/или комплемента, что может указывать на вероятную аутоиммунную природу заболевания. Отсутствие агглютинации в прямом тесте Кумбса свидетельствует о вероятном отсутствии сенсибилизации эритроцитов аутоантителами, но не всегда исключает аутоиммунизацию - это возможно, например, при очень низком содержании IgG на эритроцитах (см. также раздел Интерпретация).

С какой целью используется Прямая проба Кумбса

Прямая проба Кумбса используется в комплексной диагностике гемолитических анемий вследствие аутоиммунной патологии, при трансфузионной иммунизации (частые переливания крови и компонентов при заместительной терапии), при подозрении на лекарственную иммунную гемолитическую анемию, а также гемолитической болезни новорожденных при резус-конфликте.

Аутоиммунные гемолитические анемии (АИГА) - гетерогенная группа заболеваний, характеризующихся повышенным разрушением собственных эритроцитов аутоантителами. Они могут быть первичными (идиопатическими) или вторичными, ассоциированными с различными заболеваниями и состояниями (лимфопролиферативные, аутоиммунные и инфекционные заболевания, иммунодефициты, опухоли, трансплантаты, применение некоторых видов лекарственных препаратов).

Аутоиммунные гемолитические анемии делят также соответственно свойствам аутоантител на тепловую и холодовую, с холодовыми гемолизинами, лекарственно индуцированную. При тепловой АИГА аутоантитела в основном относятся к классу IgG. В лабораторной диагностике АИГА важная роль отводится прямой пробе Кумбса.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденного (ГБН) - изоиммунная гемолитическая анемия, возникающая в случаях несовместимости крови матери и плода по эритроцитарным антигенам, при этом антигены локализуются на эритроцитах плода, а антитела к ним вырабатываются в организме матери.

Тест аутогемолиза эритроцитов - методика, показатели нормы

ГлавнаяHelixbook Иммунологический тест определения полиспецифических агглютининов при гемолитических анемиях

Скрининговое лабораторное исследование, позволяющее выявить фиксированные на эритроцитах аутоантитела разных классов, которые играют основную роль в разрушении клеток при гемолитических анемиях.

Синонимы русские

Прямой антиглобулиновый тест, ПАГТ, прямой тест Кумбса, прямая реакция Кумбса.

Синонимы английские

Direct antiglobulin test (DAT) with polyspecific antihuman globulin (AHG), Direct Coombs Test, Direct Anti-human Globulin Test.

Метод исследования

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Аутоиммунные гемолитические анемии характеризуются выработкой антител к эритроцитарным антигенам с последующим разрушением эритроцитов вследствие фагоцитоза или активации системы комплемента.

В зависимости от места, где происходит процесс разрушения эритроцитов, различают внутрисосудистый и внутриклеточный иммунный гемолиз. При внутрисосудистом гемолизе разрушение эритроцитов обусловлено прямым повреждающим действием антител при участии системы комплемента. Комплемент - это семейство сывороточных белков, которые разрушают меченные антителами клетки. Эффекторами внутрисосудистого гемолиза чаще всего являются аутоантитела класса IgM, реже IgG. Антитела фиксируют комплемент на мембране эритроцита с образованием мембраноповреждающего комплекса, формирование которого приводит к образованию большого количества пор в оболочке клетки, ее набуханию и разрушению. Антитела, вызывающие внутрисосудистый гемолиз, называют холодовыми, поскольку они наиболее эффективно связываются с антигенами эритроцитов при температуре 4-18 °С. В процессе внутриклеточного гемолиза участвуют макрофаги - специальные клетки, основная функция которых - поглощение и разрушение чужеродных и меченных антителами субстанций. Макрофаги имеют рецепторы к IgG и С3 компоненту комплемента, поэтому покрытые ими эритроциты захватываются макрофагами и разрушаются. Антитела, вызывающие внутриклеточный гемолиз, называют тепловыми, так как они наиболее эффективно связываются с антигенами эритроцитов при 37 °С.

Таким образом, в качестве лабораторных маркеров аутоиммунного гемолиза целесообразно использовать выявление фиксированных на эритроцитах антител классов IgM и IgG, а также С3 компонента комплемента. В зависимости от эффекта, который аутоантитела оказывают на эритроциты в пробирке, выделяют гемолизины (разрушают клетки) и агглютинины (вызывают склеивание эритроцитов между собой). На способности аутоантител in vitro, то есть в пробирке, вызывать агглютинацию эритроцитов и построено большинство лабораторных методик их выявления.

Современным методом постановки прямого антиглобулинового теста является реакция агглютинации в геле. Используемый в реакции полиспецифический антиглобулиновый реагент содержит антитела к иммуноглобулинy G и к С3 компоненту системы комплемента человека, а также может реагировать с IgA и IgM молекулами. В микропробирки с гелем, содержащим антиглобулиновый реагент, добавляют суспензию исследуемых эритроцитов и центрифугируют. При наличии на поверхности эритроцитов аутоантител они связываются с реагентом, что приводит к агглютинации эритроцитов между собой. В процессе центрифугирования происходит разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов. Неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля, и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета, а агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще.

Для чего используется исследование?

  • Для обнаружения антител к антигенам собственных эритроцитов, фиксированных на их поверхности.

Когда назначается исследование?

  • При выяснении причин гемолитической анемии (когда есть подозрение, что гемолиз обусловлен наличием аутоантител).

Что означают результаты?

Антиэритроцитарные антитела класса IgG и C3d компонент системы комплемента на поверхности эритроцитов не обнаружены.

Норма - клетки образуют компактный осадок на дне микропробирки.

Агглютинированные клетки образуют красный слой на поверхности или в толще геля.

Важные замечания

  • Положительный тест с полиспецифическим антиглобулиновым реагентом показывает, что эритроциты в живом организме покрыты антителами или комплементом. Для дифференциации класса иммуноглобулинов и компонентов комплемента необходимо использовать моноспецифические реагенты: анти-IgG, анти-IgA, анти-IgM, анти-C3, анти-C3b, анти-C3c, анти-C3d и анти-С4.
  • Важно отметить, что описанный лабораторный метод позволяет выявить только те аутоантитела, которые фиксированы на эритроцитах. Вместе с тем антитела могут находиться в сыворотке крови - для их выявления применяют непрямой антиглобулиновый тест. При этом исследуют не эритроциты, а сыворотку пациента. Для этого ее инкубируют с донорскими эритроцитами, на которых при наличии в исследуемой сыворотке антител в процессе инкубации фиксируются иммуноглобулины. Далее эти эритроциты исследуются по тому же принципу, что и прямой тест.

Также рекомендуется

Клинический (общий) анализ крови

Билирубин (общий, прямой, непрямой)

Кто назначает исследование?

Гематолог, трансфузиолог, терапевт, врач общей практики, ревматолог, педиатр.

Литература

  • Гематология: национальное руководство / под ред. О. А. Рукавицына. - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2015. С. 155-157.

Williams Hematology. 9th edition. By: Kenneth Kaushansky, Marshall Lichtman, Josef Prchal, Marcel M. Levi, Oliver Press, Linda Burns, Michael Caligiuri. McGraw-Hill Education, 2016. Pages 832-836.

Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 23e by Richard A. McPherson MD MSc (Author), Matthew R. Pincus MD PhD (Author). St. Louis, Missouri : Elsevier, 2016. Pages 716-719.

ГлавнаяHelixbook Иммунологический тест определения моноспецифических агглютининов при гемолитических анемиях

Лабораторное исследование, которое проводится для выявления специфических антител, прикрепившихся к поверхности эритроцитов. Используется для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии. С его помощью определяется наличие на мембранах эритроцитов IgG, которые могут активировать систему комплемента.

  • Антиэритроцитарные антитела к IgА
  • Антиэритроцитарные антитела к IgG
  • Антиэритроцитарные антитела к IgM
  • Антиэритроцитарные антитела к C3c-компоненту комплемента
  • Антиэритроцитарные антитела к C3d- компоненту комплемента

Кумбс-профиль, реакция Кумбса, антиглобулиновый тест.

Под гемолитической анемией понимают заболевание, которое характеризуется внутриклеточным и внутрисосудистым разрушением эритроцитов. При аутоиммунных гемолитических анемиях образуются антитела к собственным антигенам эритроцитов. Гемолитическая анемия может быть вызвана рядом причин: использованием токсических средств и лекарственных препаратов, иммунной патологией, инфекциями, групповой несовместимостью при переливании крови и пр. При этом нарушено взаимодействие внутри иммунной системы, что приводит к восприятию организмом собственных эритроцитов как чужих. В лимфоузлах синтезируются антитела класса IgG и/или IgM, которые, присоединяясь к поверхности эритроцита, запускают ряд ферментов (систему комплемента) и повреждают стенку эритроцита, что приводит к его разрушению - гемолизу. Первые симптомы обусловлены и разрушением эритроцитов, и уменьшением гемоглобина: усталость, слабость, раздражительность, одышка, боль в животе и груди, тошнота, темный цвет мочи, боли в спине, желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек, увеличение печени, селезенки, снижение количества эритроцитов и гемоглобина в общем анализе крови.

Для диагностики аутоиммунной гемолитической анемии используется проба Кумбса. С помощью этого метода определяется наличие на мембранах эритроцитов, которые могут активировать систему комплемента. Тест направлен на выявление в крови неполных антиэритроцитарных антител к системе резус-фактора. Антитела к резус-фактору - специфические иммуноглобулины, которые вырабатываются в резус-отрицательной крови при попадании в нее эритроцитов с агглютиногенами D. Это может произойти при смешивании крови плода и беременной, при гемотрансфузиях, проведенных без предварительного типирования крови. Положительный результат пробы Кумбса подтверждает диагноз "аутоиммунная гемолитическая анемия", доказывая ее аутоиммунное происхождение. При этом отрицательный результат не позволяет снять диагноз.

  • Для установления аутоиммунной природы гемолитической анемии в целях определения дальнейшей тактики ведения пациента, назначения терапии;
  • для подбора трансфузионных сред;
  • для обследования реципиентов органов, тканей и стволовых клеток;
  • для диагностики гематологических заболеваний и системных заболеваний соединительной ткани.
  • При подозрении на наличие аутоиммунной гемолитической анемии (косвенными признаками гемолитической являются повышение уровня непрямого билирубина, снижение гемоглобина и числа эритроцитов, повышение уровня лактатдегидрогеназы, ретикулоцитоз, возможно увеличение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) и числа лейкоцитов).

Антиэритроцитарные антитела к IgА

Антиэритроцитарные антитела к IgG

Антиэритроцитарные антитела к IgM

Антиэритроцитарные антитела к C3c-компоненту комплемента

Антиэритроцитарные антитела к C3d-компоненту комплемента

Норма - отрицательный результат - в крови нет антител, связанных с эритроцитами, и они не могут быть причиной гемолиза: при подготовке к гемотрансфузии для реципиента - совместимость с кровью донора, при мониторинге беременности - отсутствие резус-сенсибилизации матери, низкий риск развития иммунологического конфликта.

Положительный результат - выявлены антитела, которые приводят к разрушению клеток крови; возможные причины: переливание крови без предварительного типирования - посттрансфузионная гемолитическая реакция, эритробластоз новорождённого, гемолитическая реакция вследствие применения лекарств, первичная или вторичная аутоиммунная гемолитическая анемия; системная красная волчанка, синдром Эванса, макроглобулинемия Вальденстрема, пароксизмальная холодовая гемоглобинурия, хронический лимфолейкоз, лимфома, инфекционный мононуклеоз, сифилис, микоплазменной пневмония.

  • Возможны ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Чтобы верно интерпретировать изменение в результатах исследования, нужна комплексная оценка результатов остальных анализов, а также других медицинских данных.

Гематолог, ревматолог, врач общей практики, терапевт, инфекционист, акушер-гинеколог, трансфузиолог, онколог.

Лабораторное исследование, направленное на выявление аутоантител, вызывающих агглютинацию и гемолиз эритроцитов при низких температурах.

Холодовые агглютинины, исследование полных холодовых агглютининов.

Cold agglutinins blood test, Cold Autoantibodies, Cold-Reacting Antibodies.

Аутоиммунные гемолитические анемии (АИГА) возникают в результате срыва вследствие ряда причин иммунологической толерантности и выработки антител против собственных эритроцитов. Различают тепловые и холодовые аутоантитела. Тепловые наиболее эффективно связываются с эритроцитарными антигенами при температуре 37 °С, а холодовые - при 4-18 °С. В зависимости от эффекта, который аутоантитела оказывают на эритроциты в пробирке, выделяют гемолизины (разрушают клетки) и агглютинины (вызывают склеивание эритроцитов между собой).

Аутоиммунная гемолитическая анемия с холодовыми агглютининами - относительно редкая форма иммунных гемолитических анемий (по некоторым данным, 20% всех случаев АИГА). Может быть как идиопатической (причина возникновения неизвестна), так и симптоматической. Идиопатический вариант чаще встречается у лиц пожилого и старческого возраста (60-80 лет), в то время как симптоматический может возникать в детском и юношеском возрасте, осложняя течение микоплазменной пневмонии, инфекционного мононуклеоза, легионеллеза, а также системных аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка, ревматоидный артрит). У пожилых людей АИГА с холодовыми агглютининами часто ассоциирована с лимфопролиферативными заболеваниями, такими как хронический лимфолейкоз и макроглобулинемия Вальденстрема.

Холодовые агглютинины - это чаще всего IgM, реже - представлены смесью иммуноглобулинов разных классов. Они связываются с мембраной эритроцитов при низких температурах и присоединяют комплемент - семейство сывороточных белков, которые разрушают меченные антителами клетки. После присоединения комплемента на мембране эритроцита образуется мембраноповреждающий комплекс, формирование которого приводит к образованию большого количества пор в оболочке клетки, ее набуханию и разрушению.

В качестве лабораторного маркера аутоиммунного гемолиза, обусловленного холодовыми агглютининами, целесообразно использовать выявление в сыворотке крови пациента антител, приводящих к агглютинации эритроцитов в процессе инкубации при низких температурах.

Современным методом постановки теста на холодовые агглютинины является реакция агглютинации в геле. В микропробирки, содержащие нейтральный гель, добавляют взвесь донорских эритроцитов. Затем добавляют исследуемую сыворотку и инкубируют при температуре 2-8 °С. При наличии в исследуемой сыворотке холодовых агглютининов в процессе инкубации при низких температурах они связываются с эритроцитами и вызывают их агглютинацию. Оценка результата теста производится после центрифугирования, в процессе которого происходит разделение агглютинированных и неагглютинированных эритроцитов. Неагглютинированные эритроциты имеют размер, сравнимый с размером частиц геля, и свободно проходят сквозь них под действием центробежной силы, формируя на дне микропробирки компактный осадок красного цвета, а агглютинированные эритроциты ввиду больших размеров задерживаются на поверхности геля или в его толще.

Определение осмотической резистентности эритроцитов (Osmotic fragility (OF) test, RBC)

Синонимы: Анализ крови на осмотическую резистентность эритроцитов; Осмотическая резистентность эритроцитов (ОРЭ); Осмотическая стойкость эритроцитов.

Osmotic fragility test (OFT); Osmotic fragility of red blood cells; Red blood cell osmotic fragility test.

Краткая характеристика теста на Осмотическую резистентность эритроцитов

Тест на осмотическую резистентность эритроцитов заключается в измерении их устойчивости к гемолизу при воздействии солевых растворов разной концентрации. Когда эритроциты попадают в гипотоническую среду, вода по осмотическому градиенту устремляется в клетки, что может приводить к разрушению и лизису (гемолизу) эритроцитов. Осмотическая устойчивость характеризует способность эритроцитов принимать воду без лизиса клетки, она зависит, в частности, от соотношения площади поверхности к объему клетки.

С какой целью исследуют Осмотическую резистентность эритроцитов

Оценка осмотической резистентности эритроцитов - классический тест, используемый в диагностике наследственного сфероцитоза. Наследственный сфероцитоз - гетерогенная группа наследственных гемолитических анемий, развивающихся вследствие генетических дефектов, которые приводят к дефекту или дисфункции белков мембраны и цитоскелета эритроцитов, в результате чего эритроциты приобретают характерную сферическую форму. Это приводят к ускоренному разрушению эритроцитов в селезенке и укорочению их срока жизни. Сфероциты являются осмотически менее стойкими клетками, которые легче лизируются в гипотоническом растворе, по сравнению с нормальными эритроцитами. Заболевание проявляется гемолитической анемией различной степени выраженности, спленомегалией, желтухой. В крови наблюдается обычно микроцитарная нормохромная анемия, ретикулоцитоз. Гемолитические кризы могут возникать при инфекциях или интоксикациях. Другим частным осложнением субклинического сфероцитоза является желчнокаменная болезнь, возникающая в раннем возрасте, которая может быть одним из показаний для обследования пациентов. Нормальная осмотическая резистентность эритроцитов не исключает диагноз наследственного сфероцитоза и может отмечаться у 10-20% таких пациентов, осмотическая стойкость может быть нормальной при сочетании с дефицитом железа, обтурационной желтухой, в фазе восстановления после апластического криза (когда увеличено число ретикулоцитов).

Напротив, повышенная осмотическая стойкость эритроцитов указывает на наличие сплющенных эритроцитов (лептоцитов), в таких клетках снижено соотношение площади поверхности к объему. Подобные изменения наблюдаются при железодефицитной анемии, талассемии и серповидноклеточной анемии, так как эритроциты с низким содержанием гемоглобина (эритроцитарный индекс MCH) и низким средним объемом клеток (эритроцитарный индекс MCV) необычайно устойчивы к осмотическому лизису.

Что может повлиять на результат оценки Осмотической резистентности эритроцитов

Осмотически более устойчивы ретикулоциты и эритроциты у пациентов после спленэктомии. При заболеваниях печени, вследствие пассивного накопления липидов, эритроциты также проявляют относительно большую резистентность к осмотическому лизису.

Правила подготовки к Определению осмотической резистентности эритроцитов

Специальной подготовки не требуется. Рекомендуется проводить взятие крови не ранее, чем через 4 часа после последнего приема пищи.

В каких случаях проводят Определение осмотической резистентности эритроцитов:

  • дифференциальная диагностика гемолитических анемий;
  • подтверждение наследственного сфероцитоза;
  • желчнокаменная болезнь в раннем возрасте;
  • гиперспленизм и спленомегалия.

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Читайте также: