Пцр плевральной жидкости на туберкулез

Исследование для выявления возбудителя туберкулеза (Mycobacterium tuberculosis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микобактерии в образце биоматериала.

Туберкулез, микобактерии туберкулеза, палочка Коха.

Tuberculosis, Tubercle bacillus, Koch's bacillus.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, венозную кровь, ликвор, мокроту, плевральную жидкость, первую порцию утренней мочи, эякулят.

Общая информация об исследовании

Туберкулез (от лат. tuberculum – "бугорок") – инфекционное заболевание человека и животных, передающееся преимущественно воздушно-капельным путем. Риск заразиться повышает подавление иммунитета, вызванное ВИЧ/СПИДом, диабетом, заболеванием почек, трансплантацией органов и применением иммуносупрессоров, беременностью, старением. Кроме того, наиболее подвержены ему те, кто контактирует с больными туберкулезом, а также дети до 5 лет после виража туберкулиновой пробы. К наиболее уязвимым группам населения относят бездомных, заключенных, мигрантов из стран с высокой заболеваемостью туберкулезом, наркопотребителей, а также пожилых людей.

Для данного исследования используется тест-система, основанная на выявлении геномной ДНК возбудителя туберкулеза с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени (реал-тайм ПЦР). В современной диагностике это один из самых быстрых, универсальных и высокочувствительных методов.

Стандартные способы обнаружения микобактерий туберкулеза базируются на выращивании патогенных микроорганизмов в питательной среде. Сложности связаны с низкой скоростью роста колоний Mycobacterium tuberculosis – необходимо ожидать до 1,5 месяцев после взятия материала.

Высокой чувствительностью и специфичностью обладают молекулярно-биологические методы, основанные на детекции генетического материала микобактерий туберкулеза. Их важнейшим преимуществом является высокая скорость получения результата. Использование ПЦР реал-тайм позволяет выявить возбудитель туберкулеза уже в день получения клинического образца.

Бактериемия (попадание в кровь пациента микобактерий) может возникать на ранних стадиях туберкулезной инфекции, а также при развитии генерализованного или внелегочного туберкулеза. Она опасна тем, что иммунный ответ на бактерии вызовет сепсис и септический шок, чреватый смертью. Риск развития генерализованного туберкулеза наиболее высок у пациентов с ВИЧ на поздних стадиях, у тех, кто прервал противотуберкулезную терапию, а также у не обратившихся вовремя за медицинской помощью при появлении симптомов туберкулеза.

Диагностика туберкулеза у ВИЧ-инфицированных затруднена из-за иммуносупрессированного состояния организма, что зачастую проявляется в ложноотрицательных результатах туберкулиновых реакций и микробиологических тестов. В связи с этим тестирование на Mycobacterium tuberculosis методом ПЦР реал-тайм имеет большое значение.

Для чего используется исследование?

Для диагностики туберкулеза легких (в частности, его генерализованных и внелегочных, связанных с бактериемией, форм), и контроля за его лечением.

Когда назначается исследование?

При подозрении на внелегочный туберкулез.
При симптомах бактериемии на фоне туберкулезной инфекции: повышенной температуре тела, потливости и пр. (при небольшом количестве бактерий в крови бактериемия может протекать бессимптомно).
Если у пациента был длительный контакт с больным туберкулезом.
При ненормальной реакции на туберкулиновую пробу у детей.
Когда у пациента ВИЧ-инфекция.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Наличие возбудителя в исследуемом биоматериале. Это обычно встречается при активной форме туберкулеза, требующей лечения. Выявление большого количества микобактерий чаще всего указывает на внелегочную форму туберкулеза либо генерализацию инфекции.

Возбудителя туберкулеза не выявлено. Бактериемия отсутствует.

Что может влиять на результат?

Эффективная противотуберкулезная терапия со временем приводит к исчезновению микобактерий в клиническом материале.

Для назначения корректной схемы лечения при выявлении у пациента туберкулеза необходимо провести тест на чувствительность микобактерий к противотуберкулезным препаратам.

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, фтизиатр, уролог, гинеколог, инфекционист.

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

Суть метода

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

Кровь.
Слюна.
Мокрота.
Выделения из половых органов.
Смывная жидкость бронхов.
Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-исследование туберкулеза

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

Длительный контакт с больным туберкулезом.
Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
ВИЧ-инфекция.
Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

Зона приемки и сортировки проб.
Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
Зона проведения реакционных проб.
Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

Плюсы ПЦР-диагностики

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы ПЦР-диагностики

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

Где пройти ПЦР-исследование на туберкулез

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

Задуманные и разработанные эксперименты: ПК HKP. Выполнены эксперименты: ПК DSC VMK. Проанализированы данные: ПК MKS DSC VMK HKP. Используемые реагенты / материалы / инструменты анализа: MKS DSC VMK SS HKP. Написал бумагу: ПК HKP.

Неспецифическое клиническое проявление и paucibacillary характер туберкулезного плеврита остается проблемой для диагностики. Диагностика туберкулезного плеврального выпота зависит от проявления наличия туберкулезных бацилл в мокроте, плевральной жидкости или плевральной биопсии или демонстрации гранулемы в плевре путем гистологического исследования. Мы изучили клиническую полезность диагностики плеврального туберкулеза с использованием анализа N-ПЦР в домашних условиях, микроскопии мазка и культивирования АФБ. Помимо плевральной жидкости было изучено включение мокроты в эффективность диагностики плеврального туберкулеза.

Образцы плевральной жидкости и мокроты из 58 туберкулезных и 42 негрубистых пациентов с плевральным выпотом были обработаны для микроскопии мазка AFB, культуры и анализа N-ПЦР. Микобактерии были обнаружены исключительно в туберкулезных образцах плевральной эффузии. Ни один из образцов, не являющихся туберкулезными плевральными выпотами, был положительным для микобактерий. Сравнительный анализ показал, что анализ Н-ПЦР имел наивысшую чувствительность. Включение мокроты вместе с плевральной жидкостью увеличило чувствительность N-ПЦР от 51,7 до 70,6% (p 3 г / дл) и плевральной жидкости: соотношение сывороточного белка (> 0,5); и (4) реакция пациентов на противотуберкулезное лечение. Туберкулезный плевральный выпот был диагностирован, если был определен окончательный критерий или все наводящие критерии. Исходя из этих критериев, 58 пациентов были классифицированы как пациенты с туберкулезным плевральным выпотом. Слюна, а также плевральная жидкость были собраны у всех из них и исследованы [6] — [7].

Критерии, используемые для злокачественного плеврального выпота (контроль), были: (i) клиническая история, указывающая на быстрое наполнение плеврального выпота; с очаговым злокачественным поражением или без него в другом месте тела. (ii) Плевральная жидкость является экссудативной, обычно геморрагической и (iii) на цитологическом исследовании положительным для злокачественных клеток. Исходя из этих критериев, 42 пациента были классифицированы как не туберкулезные плевральные выпоты (N-TPE). В двенадцати из этих пациентов мокрота была собрана в дополнение к плевральной жидкости.

Все клинические образцы были обработаны в установке Biosafty level 3 (BSL-3). После сбора образцы транспортировали при 4-8 ° С и выдерживали при этой температуре в установке до тех пор, пока они не были обработаны для выделения и экстракции ДНК. Все образцы обрабатывали в течение 24 часов после сбора свежеприготовленными реагентами. Только 2-3 клинических образца обрабатывались одновременно, чтобы свести к минимуму перекрестное загрязнение образцов обученным персоналом.

100 образцов плевральной жидкости были обработаны методом NALC-NaOH [12]. Короче говоря, плевральную жидкость центрифугировали при 4500 g в течение 15 мин. Осадок обрабатывали равным объемом N-ацетил-L-цистеина-NaOH (конечная концентрация NALC-NaOH, NaOH, 2%) в течение 15 мин при комнатной температуре и нейтрализовали стерильным фосфатным буфером (0,067 М, рН 6,8). После центрифугирования при 4500 г в течение 15 мин осадок ресуспендировали в 1 мл стерильной дистиллированной воды [13]. Суспензия была разделена на две части. Одна часть была использована для микроскопии мазка AFB и в качестве инокулятов для выделения AFB культурой на средах Lowenstein Jensen и 7H9 или в трубах MGIT (система BD BACTEC MGIT 960). Вторая часть была использована для экстракции ДНК. Слишком обработана мокрота, собранная у 70 пациентов.

Быстрое окрашивание кислоты Ziehl-Neelsen использовалось для подтверждения присутствия AFB.

Как описано, обработанные клинические образцы (плевральная жидкость и мокрота), полученные из 69 пациентов с плевральным выпотом, инокулировали на средах LJ и жидкой средой 7H9 и инкубировали при 37 ° C в течение 8 недель. LJ-уклоны проверяли два раза в неделю на видимые колонии и подвергали скринингу на AFB окрашиванием ZN. Жидкую среду исследовали в одинаковые моменты времени для роста. Трубы, демонстрирующие видимый рост, подвергали скринингу для AFB окрашиванием ZN. Положительные жидкие культуры были субкультивированы на средах LJ для выделения микобактерий. После доступа к автоматизированной системе концентрированные клинические образцы (0,5 мл), полученные от 31 пациента с плевральным выпотом, инокулировали в среду MGIT, содержащую смесь антибиотиков PANTA в соответствии с рекомендациями производителей и постоянно контролируемую в системе MGIT 960 (BD BACTEC ™ MGIT ™ 960 система для тестирования микобактерий, США).

Идентификация уровня изолятов проводилась стандартными биохимическими испытаниями (производство ниацина, восстановление нитратов, активность каталазы и арилсульфатазы, гидролиз Твин, чувствительность гидразида тиопена-2-карбоновой кислоты и т. Д.), Как рекомендовано Центрами по контролю и профилактике заболеваний (CDC), Атланта, штат Джорджия, с соответствующими контролями [14]. Для этой части исследования использовались микобактериальные колонии, полученные из среды LJ.

Шаблон ДНК из клинических образцов :. Вторую порцию суспензии, полученной из обработанных клинических образцов, центрифугировали. Осадок суспендировали в 100 мкл 0,1% тритона Х-100 и кипятили в сухом бане (90 ° С в течение 40 минут). Суспензию центрифугировали и обрабатывали, как описано для экстракции ДНК для ДНК контрольного шаблона.

Детали анализа были описаны ранее [10]. Праймеры N (5′-GAGGGTTGGGATGAACAAAGCAG-3 ‘) и S (5′-TATCCGTGTGTCTTGACCTATTTG-3′) использовали для амплификации гена hupB. Усиленный продукт ПЦР N-S использовали в качестве матрицы для N-ПЦР. Использовалась пара праймеров для N-PCR F (5’-CCAAGAAGGCGACAAAGG-3 ‘) и R (5′-GACAGCTTTCTTGGCGGG-3’). Продукты N-ПЦР подвергали электрофорезу на 10% полиакриламидном геле и окрашивали бромидом этидия. Размер ампликона для Mtb и Mbo составлял

116 bp и 89 bp соответственно [15]. Для анализа N-ПЦР обычно включали следующие элементы контроля: отрицательный контроль (с отсутствующей матричной ДНК) был включен в анализ, чтобы исключить появление ложных срабатываний. Для исключения случаев ложноотрицательных результатов в исследовании было включено ограничение на шипы из-за наличия ПЦР-ингибиторов в ДНК-экстрактах образцов. Помимо этих двух контролей положительный контроль с ДНК-мишенью был включен в каждый анализ [10].

Все статистические анализы проводились с использованием программного обеспечения STATA версии 9.2 (StataCorp, College Station, TX). Для всех анализов считалось, что значения p менее 0,05 указывают на статистическую значимость.

Распределение по полу и возрасту 100 пациентов с плевральным выпотом было следующим: 35 женщин и 65 мужчин со средним возрастом 42 ± 8,8 и 40 ± 4,3 соответственно. На основании клинических критериев описано, что 58 пациентов были классифицированы как TPE, а остальные — как N-TPE. AFB был обнаружен микроскопией мазка и / или культурой в 16 образцах (мокрота / плевральная жидкость), полученных от пациентов с ТПЭ. Эти индивидуумы считались окончательными / подтвержденными случаями плеврального туберкулеза (16/58, 27,5%). Оставшиеся 42 в категории TPE рассматривались как вероятные случаи плеврального туберкулеза (42/58, 72,4%). Результаты N-ПЦР сравнивали с: (i) клиническим диагнозом; (ii) улучшение обнаружения микобактерий в образцах мокроты, кроме плевральной жидкости; (iii) пациенты, выделенные как положительные AFB (подтвержденные ТБ плевры) Vs AFB отрицательный (вероятный туберкулез плевры); и (iv) биохимическая характеристика изолятов AFB.

N-ПЦР, культуральная и микроскопическая мазка микроскопии AFB сравнивались и были показаны в таблице 1. В 31 образце микобактерии были обнаружены либо с помощью микроскопии мазка N-PCR / культура / AFB. Эти 31 образец были получены из 58 клинически диагностированных туберкулезных пациентов с плевральным выпотом (TPE). Напротив, никаких микобактерий не было обнаружено в 42 образцах, полученных от пациентов, не являющихся туберкулезными плевральными выпотами (N-TPE, контрольные образцы).

ЗАМЕТКА. Клинический диагноз, Классификация пациентов и контроль, как описано в методах; PPV, положительное прогностическое значение; NPV, отрицательная прогностическая ценность; Чувствительность, TP / (TP + FN) x 100, где T истинно, F ложно, P положительно, а N отрицательно; Специфичность TN / (TN + FP) x 100; N-ПЦР, 116 bp-ампликона, генерируемого методом Nested-PCR, специфичным для Mycobacterium tuberculosis; Культура, AFB Рост обнаружен на LJ, 7H9 и / MGIT; AFB, кислотные быстрые бациллы.

По данным N-ПЦР 51,7% (30/58) образцов плевральной жидкости, полученных из ТПЭ, были положительными для Mtb по сравнению с 10,3% (6/58) культивированием и 3,4% (2/58) методом микроскопии мазка AFB. В образце плевральной жидкости отрицательным методом N-PCR AFB, выделенный из образца, впоследствии был идентифицирован как Mycobacterium fortuitum (образец № SPF-8). Были получены шесть изолятов, по два по каждой из труб LJ, 7H9 и MGIT соответственно. Все анализы показали идентичную специфичность и положительное прогностическое значение (PPV), но отличались своей чувствительностью и отрицательным прогностическим значением (NPV). Анализ N-ПЦР показал самую высокую чувствительность (51,7%) по сравнению с культурой (10,3%) и микроскопией мазка AFB (3,4%, таблица 1).

Основываясь на критериях, описанных в методах, распределение 70 образцов мокроты, собранных у пациентов с плевральным выпотом, показано в таблице 2. Пятьдесят восемь образцов мокроты были получены у пациентов с туберкулезным выпотом плевры, а 12 — с не туберкулезным плевральным выпотом. Идентичные методы были использованы для обнаружения Mtb в этих образцах мокроты, как описано ранее. Из 70 проанализированных образцов в 33 образцах Mycobacteria была обнаружена либо с помощью микроскопии мазка N-PCR / Culture / AFB. Все 33 положительных образца были получены из TPE. Двенадцать образцов, собранных из N-TPE, были отрицательными.

Используя N-ПЦР-анализ, 53,4% (31/58) образцов мокроты были положительными для микобактерий по сравнению с 12,1% (7/58) культивированием и 6,9% (4/58) с помощью микроскопии мазка AFB. Семь изолятов были получены, по два от LJ, 7H9 и три из труб MGIT соответственно. Из 33 образцов, в которых были обнаружены микобактерии, два образца были отрицательными с помощью анализа N-ПЦР. В одном образце выделенный AFB был идентифицирован как Mycobacterium chelonae (образец № SPF-80). Второй образец был положительным AFB, но культурой и отрицательным N-ПЦР (образец № SPF-18). Как было замечено ранее, три метода, используемые для обнаружения микобактерий в образцах мокроты, показали сходный диапазон специфичности, PPV и чувствительность. Все три метода показали 100% специфичность и PPV, и их чувствительность составляла 53,4% по анализу N-ПЦР, 12,1% по культуре и 6,9% с помощью микроскопии мазка AFB.

Цитологический анализ плевральной жидкости. Обязательные и дополнительные исследования плеврального выпота

Если клинически подозревается наличие экссудата или оно подтверждено результатами испытаний на биохимию, в плевральной жидкости подсчитывают общее количество клеток и их тип - дифференциальный подсчет, окрашивание по Граму, культура и цитология. Перечень рутинных и дополнительных анализов ПЖ и их трактовка отражены в таблицах 1 и 2.

Лимфоцитоз ПЖ - это состояние, при котором показатели лимфоцитов превышают 85% от всех ядросодержащих клеток. Лимфоцитоз ПЖ указывает на туберкулёз, лимфому, саркоидоз, хронический ревматоидный плеврит, синдром желтого ногтя и хилоторакс. Значения лимфоцитов ПЖ, составляющие 50-70% ядерных клеток, свидетельствуют о злокачественности.

ЭПЖ со значениями эозинофилов, превышающими 10% ядерных клеток, наблюдается примерно в 10% плевральных выпот и не коррелирует с эозинофилией периферической крови. ЭПЖ чаще всего вызывается воздухом или кровью в плевральном пространстве (ПП). Кровь в ПП, вызывающая ЭПЖ, может быть результатом легочной эмболии с инфарктом или доброкачественным плевральным выпотом (ПВ) в начале асбестоза. ЭПЖ может быть ассоциирована с другими заболеваниями, включая паразитарную инфекцию (особенно парагонимиоз), грибковую инфекцию (кокцидиоидомикоз, криптококкоз, гистоплазмоз) и различными лекарствами.
Наличие ЭОЖ не исключает злокачественного выпота. Наличие ЭПЖ практически исключает туберкулезный плеврит и парапневмонический выпот.

Мезотелиальные клетки обнаруживаются в переменных количествах в большинстве ПВ, но их число в более чем 5% от всех ядросодержащих клеток маловероятно при туберкулезе. Заметное увеличение количества мезотелиальных клеток, особенно при кровопотере или эозинофильных выпотах, свидетельствует о легочной эмболии как причине выпота.

Дают положительные результаты примерно в 60% случаев. В случае анаэробных инфекций еще реже. Диагностический выход, особенно для анаэробных патогенов, может быть увеличен путем непосредственного культивирования плевральной жидкости в бутылках для культивирования.

Злокачественность подозревается у пациентов с известным раком или с лимфоцитарными экссудативными выпотами, особенно при гемотораксе. Прямое вовлечение опухолью плевры диагностируется наиболее легко, выполняя цитологию ПЖ.
Указанные диагностические результаты в цитологии варьируются от 60-90%, в зависимости от степени вовлеченности плевры и типа первичной злокачественности. Результаты цитологии положительны в 58% выпотов, связанных с мезотелиомой.

Опухолевые маркеры, такие как раковоэмбриональный антиген, лей-1 и муцин, указывают на злокачественные выпоты (особенно аденокарциномы), когда их значения в плевральной жидкости очень высокие. Однако из-за низкой чувствительности они не помогают, если значения нормальны или только незначительно увеличены.

Подозревают туберкулезный плеврит у пациентов с историей контактов или положительной пробой Манту, а также у пациентов с лифоцитарным экссудативным выпотом, особенно если выявлено менее 5% мезотелиальных клеток при дифференциальном подсчете.
Поскольку большинство туберкулезных ПВ, вероятно, является результатом реакции гиперчувствительности к Mycobacterium, а не микробной инвазии плевры, то палочки туберкулеза в плевральной жидкости редко обнаруживаются (
Концентрации интерферона-гамма более 140 пг / мл в ПЖ также подтверждают диагностику туберкулезного плеврита. К сожалению, этот тест не всегда доступен.

Дополнительные специализированные тесты оправданы при подозрении на конкретную причину ПВ.

Определяют уровень амилазы ПЖ, если подозревается как источник поджелудочная железа или разорванный пищевод, или если после первоначального тестирования односторонний левосторонний ПВ остается недиагностированным. Следует отметить, что повышенная активность амилазы плевральной жидкости также наблюдается при злокачественных новообразованиях. Дополнительный анализ изоферментов амилазы может помочь отличить источник поджелудочной железы (повышенный изофермент поджелудочной железы в плевральной жидкости) от других источников.
Определение уровня триглицеридов и холестерина в молочных ПЖ осуществляют, когда подозреваются хилоторакс или псевдохилоторокс.
Иммунологические исследования, включая антиядерные антитела в ПВ и ревматоидный фактор, когда подозреваются коллагенозы.

В таблицах 1 и 2 отражены рутинные и дополнительные анализы плевральной жидкости.

Таблица 1 - Рутинные тесты анализа плеврального выпота

Читайте также: