Посев на возбудители инфекционного процесса аэробы
Микробиологическое исследование на анализаторе VITEK bioMerieux, позволяющее с более высокой чувствительностью и специфичностью, чем обычный посев, идентифицировать около 200 видов клинически значимых бактерий и подобрать антибиотикотерапию с расчетом минимальной эффективной дозировки препарата. Преимущества исследования по сравнению с обычным посевом: срок выполнения короче на 24 часа; чувствительность определяется к расширенному списку антибиотиков (до 20 шт.); результат выдается как в виде критических значений (чувствителен, умеренно-устойчив, устойчив), так и в виде значений минимальных ингибирующих концентраций антибиотика (МИК). Что, в свою очередь, позволяет выбрать наиболее эффективную минимальную дозу антибиотика, снизив его негативное влияние на человеческий организм. * Чувствительность к антибиотикам будет определена при выявлении патогенных и/или условно-патогенных микроорганизмов. При обнаружении микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору, чувствительность к антибиотикам не определяется, т.к. не имеет диагностического значения.
Бактериологическое исследование клинического материала с определением чувствительности к антибиотикам на анализаторе VITEK bioMerieux; посев на микрофлору в аэробных условиях.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Грудное молоко, мазок из десневого кармана, мазок из зева, мазок с конъюнктивы, мазок из носа, мазок из носоглотки, мазок урогенитальный (с секретом предстательной железы), мокроту, отделяемое уха, рвотные массы, синовиальную жидкость, смыв из бронхов, среднюю порцию утренней мочи, эякулят.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Рекомендуется употребить большой объем жидкости (чистой негазированной воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
- За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
- Женщинам исследование (процедуру взятия урогенитального мазка или сбор мочи) рекомендуется производить до менструации или через 2-3 дня после её окончания.
- Мужчинам - не мочиться в течение 3 часов до взятия урогенитального мазка или сбора мочи.
Общая информация об исследовании
Анаэробная микрофлора – это микроорганизмы, для жизнедеятельности и размножения которых не требуется кислород, для многих из них он, наоборот, является губительным. Анаэробы населяют организм человека в норме (в пищеварительном тракте, органах дыхания, мочеполовой системе). При снижении иммунитета или травмах, повреждениях возможна активация инфекции с развитием воспалительного процесса. Организм человека тогда может становиться по сути источником заражения сам для себя (эндогенное инфицирование). Реже анаэробы попадают в организм снаружи (глубокая колотая рана, инфицированный аборт, ранения брюшной и грудной полости, введение спиц и протезов). Развиваясь в толще кожи, мягких тканей и мышц, анаэробные организмы способны вызывать целлюлиты, абсцессы, миозиты. Симптомы, позволяющие заподозрить анаэробную инфекцию мягких тканей: плотный отёк, газообразование (ощущение, что лопаются пузырьки воздуха под кожей при надавливании), гнилостное воспаление, зловонный запах.
Основное лечение анаэробного воспаления – хирургическое. При этом необходимо устранить источник воспаления либо раскрыть рану, обеспечив доступ кислорода, губительного для анаэробов.
Жизнедеятельность аэробной флоры возможна лишь при наличии свободного кислорода. В отличие от анаэробов, у них он участвует в процессе выработки энергии, необходимой им для размножения. Эти бактерии не имеют выраженного ядра. Они размножаются почкованием или делением, при окислении образуя токсичные продукты. Культивирование аэробных бактерий подразумевает не только использование подходящей для них питательной среды, но также и количественный контроль кислородной атмосферы и поддерживание оптимальных температур. Для каждого микроорганизма данной группы существует минимум и максимум кислородной концентрации в среде, окружающей его, необходимой для его нормального размножения и развития.
Факультативные анаэробы – организмы, которые существуют и выполняют все энергетические и репродуктивные циклы по анаэробному пути, но при этом при этом способны существовать и развиваться в присутствии кислорода. Последней характеристикой облигатные и факультативные анаэробы и отличаются, т.к. облигатные не способны существовать в условиях кислорода и при его появлении гибнут. Всю необходимую для своего существования, развития и размножения энергию факультативные анаэробы получают с помощью расщепления органических и неорганических соединений.
Для дифференциальной диагностики анаэробной и аэробной инфекции проводят посев биоматериала на флору, так как принципы лечения в том или ином случае будут разные. По выросшей культуре определяется вид микроорганизмов, которые участвуют в формировании воспалительной реакции. Зная вид возбудителя, можно подобрать антибактериальный препарат, который способен успешно влиять на данные микроорганизмы.
В ходе данного исследования определяется наличие аэробной и факультативно-анаэробной флоры.
Микробиологическое исследование на анализаторе VITEK bioMerieux позволяет с более высокой чувствительностью и специфичностью, чем обычный посев, идентифицировать около 200 видов клинически значимых бактерий и подобрать антибиотикотерапию с расчетом минимальной эффективной дозировки препарата. Система анализатора предназначена для идентификации грамотрицательных палочек, грамположительных кокков, анаэробных бактерий, нейссерий, гемофильных палочек, других прихотливых бактерий, коринбактерий, лактобактерий, бацилл, грибов (более 450 таксонов). Система анализатора состоит из анализатора бактериологического и персонального компьютера. Автоматизация процесса снижает риск контаминации материала и ошибок в результатах исследования.
После выявления культуры бактерий целесообразно провести определение их чувствительности к разным антибиотикам. Зная вид возбудителя, можно подобрать антибактериальный препарат, который способен успешно влиять на данные микроорганизмы. В связи с тем что все чаще наблюдается развитие антибиотикорезистентности микроорганизмов, подбор антибиотиков по их спектру действия на бактерии может привести к малоэффективному или вообще безрезультатному лечению. Преимуществом метода определения чувствительности к антибиотикам является точное определение антибактериального препарата, имеющего наивысшую эффективность в конкретном случае.
Для чего используется исследование?
- Дифференциальная диагностика анаэробной и аэробной инфекций, подбор адекватного терапевтического лечения с учетом обнаруженной микрофлоры.
- Диагностика латентных, скрытых и хронических инфекций: обнаружение персистирующих, труднокультивируемых и/или некультивируемых форм микроорганизмов.
- Для выбора антибиотика для успешного лечения инфекции.
Когда назначается исследование?
- При различных патологиях воспалительно-инфекционного генеза - для своевременной, быстрой идентификации возможного возбудителя.
- При симптомах, позволяющих заподозрить анаэробную инфекцию (газообразование, гнилостное воспаление).
Что означают результаты?
Причина выявления микроорганизмов - присутствие роста колоний данного вида микроорганизмов на питательной среде (при этом данная микрофлора может быть нормальной: Streptococcus mitis, Neisseria mucosa, Staphylococcus aureus, Streptococcus viridans group).
Данное исследование не предусматривает выделение анаэробной микрофлоры, вирусов, хламидий, а также микроорганизмов, требующих особых условий культивирования, таких как Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae, Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Corynebacterium diphtheriae, Mycoplasma spp, Ureaplasma spp, Mycobacterium tuberculosis. При отсутствии роста диагностически значимой микрофлоры при бактериологическом посеве и наличии клинической картины рекомендуется назначение дополнительных исследований.
Кто назначает исследование?
Инфекционист, терапевт, гинеколог, врач общей практики, оториноларинголог, педиатр.
Литература
- Fermin A Carranza, Paulo M. Camargo. The Periodontal Pocket. / Carranza's Clinical Periodontology, 2012, 127-139.
- Mirela Kolakovic, Ulrike Held, Patrick R Schmidlin, Philipp Sahrmann. An estimate of pocket closure and avoided needs of surgery after scaling and root planing with systemic antibiotics: a systematic review. / BMC Oral Health. 2014; 14: 159.
Бактериологический посев или, как принято называть короче – бак посев, применяется для получения большого количества микробов одного вида (чистая культура) с целью изучения их физико-химических и биологических свойств, чтобы затем полученные данные использовать для диагностики инфекционных заболеваний.
К сожалению, даже популярные нынче иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие методы, основным недостатком которых являются ложноположительные или ложноотрицательные результаты, не всегда могут идентифицировать возбудителя. Кроме того, они не способны подобрать антибактериальные препараты направленного действия. Подобную задачу решает бак посев, который часто не спешат назначать, ссылаясь на то, что, например, уреа- микоплазмы медленно культивируется, а стоимость анализа немалая. Однако ведь и здоровье того стоит!
Для питания и дыхания нужны условия
пример роста микроорганизмов после бак-посева в питательную среду
Цель культивирования микроорганизмов и значимость ее для диагностики
Кроме воды, воздуха, почвы, содержащие в тех или иных концентрациях различные микроорганизмы, в том числе и приносящие болезнь (патогенные), многие отрасли медицинской науки интересуют микробы, живущие на коже и слизистых человеческого организма, которые могут быть представлены:
- Постоянными обитателями, не несущими никакой опасности человеку, то есть, нормальной микрофлорой организма, без которой мы просто жить не можем. Например, исчезновение бактерий, живущих в кишечнике и участвующих в процессе пищеварения, приводит к дисбактериозу, лечить который – дело непростое. Так же происходит и с исчезновением вагинальной микрофлоры. Ее тут же заселяют условно-патогенные микроорганизмы, гарднереллы, например, которые вызывают бактериальный вагиноз (гарднереллез);
- Условно-патогенной флорой, которая приносит вред лишь в больших количествах при определенных условиях (иммунодефицит). Вышеназванная гарднерелла – представитель такого типа микроорганизмов;
- Наличием патогенных микробов, которые в здоровом теле не присутствуют. Они чужды человеческому организму, куда попадают случайно при контакте с другим (больным) человеком и вызывают развитие инфекционного процесса, порой, довольно тяжелого или даже смертельного. Например, встреча с возбудителями сифилиса – еще куда ни шло, на первых порах лечится, а вот (упаси Бог!) выпустит на волю холеру, чуму, черную оспу и др.
Таким образом, методы посева, как и питательные среды, бывают разными, тем не менее, цель у них одна: получить чистую культуру без посторонних примесей в виде микробов других классов, которые обитают повсеместно: в воде, в воздухе, на поверхностях, на человеке и внутри его.
Когда назначается бак посев и как разобраться в ответах?
Бактериологический анализ пациенты сами себе не назначают, это делает врач, если у него есть подозрения, что проблемы больного, предъявляющего различные жалобы, связаны с проникновением в организм патогенного возбудителя или с усиленным размножением микроорганизмов, постоянно живущих с человеком, но проявляющих патогенные свойства только в определенных условиях. Сдав анализ и через некоторое время получив на руки ответ, человек теряется, а порой и пугается, увидев непонятные слова и обозначения, поэтому, чтобы этого не произошло, хочется дать краткое разъяснение по данному вопросу:
- Первым пунктом заключения, как правило, стоит название возбудителя на латинском языке, например, Escherichiacoli. Это – кишечная палочка, она является естественным обитателем кишечника и в допустимых количествах никакого вреда не приносит;
Следующий пункт – концентрация микроорганизма. Е.coli– обильный рост (1х10^ 6 и более) норма – менее 1x10^ 4 ;- Далее – патогенность: флора условно-патогенная.
- Вид микроорганизма, допустим, та же Е.coli в количестве 1х10^ 6 ;
- Название антибиотика с обозначением (S) указывает на чувствительность возбудителя к этому препарату;
- Вид антибиотиков, не действующих на микроорганизм, обозначается символом (R).
Бактериологический анализ представляет особую ценность в определении чувствительности к антибиотикам, поскольку основной проблемой в борьбе с хламидией, микоплазмой, уреаплазмой и др. остается подбор действенного лечения, не приносящего вред организму и не ударяющего по карману пациента.
Правильная подготовка к бактериологическому анализу – залог достоверного результата
Бактериологическому анализу может подвергаться любой биологический материал, взятый у человека (кожа, кровь, сперма, слизистые ротовой полости, дыхательных и мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта, органов зрения, слуха и обоняния и др.). Чаще всего бак посев назначают гинекологи и урологи, поэтому на нем следует несколько остановиться.
Правильная подготовка к бактериологическому посеву будет залогом правильного результата, потому что в противном случае, анализ придется сдавать заново и ждать назначенное время. Как сдать кровь на стерильность из вены – это задача медработников. От больного здесь, как правило, ничего не зависит, он просто предоставляет локтевой сгиб, а медсестра производит забор в стерильную пробирку с соблюдением всех правил асептики и антисептики.
Другое дело – моча или мазок из половых путей. Здесь пациент должен обеспечить первый этап (забор), соблюдая предписанные правила. Следует заметить, что моча женщин и мужчин несколько отличается, хотя в мочевом пузыре у обоих полов она стерильна:
- У женщин при прохождении через мочеиспускательный канал может захватить небольшое количество непатогенных кокков, хотя в целом, часто остается стерильной;
- У мужчин все несколько по-другому. Передняя часть уретры может снабдить проходящую мочу находящимися там:
- дифтероидами;
- стафилококками;
- некоторыми непатогенными грамотрицательными бактериями, что и покажет впоследствии бактериологический анализ.
Однако, если они находятся в допустимой концентрации (до 10 3 КОЕ/мл), то пугаться нечего, это вариант нормы.
Чтобы избежать присутствия других микроорганизмов и максимально обеспечить стерильность взятого материала, перед сдачей анализа производится тщательный туалет половых органов (вход во влагалище у женщин закрывается ватным тампоном – защита от попадания отделяемого половых органов). Для анализа берется средняя порция мочи (начало мочеиспускания в унитаз, приблизительно 10 мл средней порции в стерильную баночку, окончание в унитаз). Пациентам необходимо знать: моча, взятая на посев, должна быть обработана не позднее, чем через два часа при хранении не выше 20°С, поэтому следует рассчитывать время на транспортировку.
Кроме этого материал на бак посев при необходимости берут из уретры и прямой кишки у мужчин, из уретры, прямой кишки, влагалища, шейки матки и цервикального канала – у женщин, но это происходит в медицинском учреждении, куда пациент должен прибыть. Подмывание, спринцевание и использование антисептических средств в таких случаях запрещено.
Другие вопросы, волнующие пациентов
Многие пациенты интересуются, сколько дней делается анализ. Однозначно на этот вопрос ответить нельзя, все зависит от того, какой материал подвергается исследованию и какой возбудитель нужно искать. Иногда ответ готов через 3 дня, иногда через неделю или даже дней 10 – 14, поскольку некоторые образцы требуют пересева на другую среду.
Не обходят стороной люди, направляющиеся на бак посев и вопрос о цене анализа. Примерная стоимость в Москве составляет порядка 800 – 1500 рублей. Разумеется, она может быть выше и зависит от широты спектра бактериологического поиска. Бесплатно анализ, наверное, можно сдать при беременности в женской консультации, или в поликлинике по особым медицинским показаниям.
Для беременных бак посев является обязательным, сдается 2 раза (при постановке на учет и в 36 недель), при этом, мазок берется не только из половых путей, но и со слизистых носа и зева. Объектом поиска в данном случае, кроме урогенитальных инфекций, будет золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), который в послеродовом периоде может натворить много бед (гнойный мастит и др). Кроме этого, беременным в обязательном порядке делается посев мочи, соскоба влагалищного эпителия и мазки из шейки матки и цервикального канала.
Видео: ролик-демонстрация по бак-посеву из цервикального канала
Частные случаи, особо интересные сдающим анализы
Следует заметить, что, если соскоб со слизистых мочеполовых путей, взятый для посева на уреаплазму, является не таким уж редким явлением, то посева мочи сами врачи часто избегают, поскольку с ней работать сложнее.
Трудности в диагностике создает хламидийная инфекция, приносящая большой вред не только при беременности. Кроме этого, хламидия вызывает множество заболеваний, свойственных не только женщинам, но и мужскому населению тоже, поэтому ее сеют, культивируют, изучают, определяют чувствительность к антибактериальной терапии и, таким образом, борются с ней.
Методы посева
Для выделения чистых культур возбудителей на первом этапе прибегают к их посеву на соответствующие среды, который проводится в специальных (стерильных!) условиях. В основном, перенос материала на среду осуществляется с помощью приспособлений, применяемых еще в 19 века великим Луи Пастером:
- Бактериальной петлей;
- Пастеровской пипеткой;
- Стеклянной палочкой.
Конечно, многие инструменты за 2 столетия претерпели изменения, на смену пришли пластиковые стерильные и одноразовые, однако и старые не остались в прошлом, продолжая и поныне служить микробиологической науке.
Первый этап получения колоний требует соблюдения определенных правил:
- Посев осуществляется над спиртовкой в боксе, предварительно обработанном дезинфектантами и кварцеванием, или в ламинарном шкафу, обеспечивающем стерильность в рабочей зоне;
- Одежда медработника, перчатки и среда также должны быть стерильными, поскольку обратное мешает выделению изолированных штаммов;
- Работать в боксе нужно быстро, но аккуратно, нельзя разговаривать и отвлекаться, при этом – необходимо помнить о личной безопасности, ведь материал может быть заразным.
Выделение штаммов и изучение чистых культур
Посев мочи, промывных желудочных вод и других жидких материалов тоже имеет свои особенности, где для получения чистой культуры, жидкость сначала следует центрифугировать (условия – асептические!), а уж затем сеять, причем не саму жидкость, а ее осадок.
Культивирование и выращивание колоний осуществляют на чашках Петри или помещают сначала в жидкую среду, разлитую в стерильные флакончики, а затем изолированные колонии еще раз высевают, но уже на скошенный агар и помещают материал на сутки в термостат. Убедившись в чистоте полученной культуры, штаммы переносят на предметное стекло, делают мазок и окрашивают по Граму (чаще всего), Цилю-Нильсену и др. и для дифференцировки изучают морфологию микроба под микроскопом:
- Размер и форму бактериальной клетки;
- Наличие капсул, жгутиков, спор;
- Тинкториальные свойства (отношение микроорганизма к окрашиванию)*.
*Читатель, вероятно, слышал о таком возбудителе, как бледная трепонема? Это – возбудитель сифилиса, а ее название (бледная) поэтому и появилось, что она плохо воспринимает краски и остается слегка розоватой при окрашивании по Романовскому. Микроорганизмы, невоспринимающие анилиновые красители называются грамотрицательными, а воспринимающие – грамположительные. Грамотрицательным бактериям придают розовый или красный цвет при окраске по Граму дополнительные красители (фуксин, сафранин).
Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности выделения не только штаммов, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном. Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).
Общая информация
Микробиологическое исследование, которое позволяет определить качественный и количественный состав микрофлоры исследуемого биоматериала, а также обнаружить условно-патогенную микрофлору в высоком титре и патогенные микроорганизмы, а также определить их чувствительность к антибактериальным препаратам.
В качестве биологического материала для изучения может использоваться аспират из полости матки, биоптат, выделения из молочной железы, грудное молоко, материал из дренажа, содержимое желудка, желчь, содержимое желчного пузыря, мазок из зева, мазок с конъюнктивы, мазок из носа, мазок из носоглотки, мазок из носовых пазух, мазок урогенитальный, мазок из уретры, мазок с внутренней поверхности шейки матки, мокрота, постмассажная порция мочи с секретом предстательной железы, отделяемое абсцесса ротовой полости, отделяемое влагалища, отделяемое уха, плевральная жидкость, синовиальная жидкость, смыв из бронхов, средняя порция утренней мочи, экссудат, эякулят.
При выявлении посредством микробиологического метода микроорганизмов, относящихся к естественной микрофлоре либо условно-патогенных микроорганизмов в титре менее диагностического не проводится определения чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, так как это количество не имеет важного диагностического значения и не требует назначения противомикробного лечения.
К анаэробной флоре относят актиномицет, бактероидов, клостридий, эубактерий и фузобактерий, пептострептококков, пропионобактерий, вейлонелл, превотелл, гемелл, порфиромонад, бифидобактерий.
Нормальная микрофлора человеческого организма представляет собой совокупность микроорганизмов, которые населяют кожу и слизистые оболочки человека. Наибольшее количество микроорганизмов, примерно 40%, обитает в пищеварительной системе, остальная их часть обнаруживается на кожных покровах, зеве, глотке, в мочеполовой системе. Нормальная микрофлора подразделяется на постоянную, примерно 90%, которая присутствует в организме постоянно, факультативную, на которую приходится меньше 10% и случайную, не более 0,5%.
По способности провоцировать развитие инфекционных заболеваний микроорганизмы подразделяются на непатогенные (данная микрофлора не опасна и не вызывает заболеваний), условно-патогенные (в норме может обнаруживаться в незначительном количестве, но при определенных условиях начинает активно размножаются, что приводит к возникновению воспаления) и патогенные (микрофлора этого вида является возбудителем инфекционных заболеваний и в норме не обнаруживаются у здоровых людей).
Бактериологическое исследование или посев на флору дает возможность оценить качественный и количественный состав микрофлоры исследуемого биологического материала пациента, в том числе и обнаружить болезнетворные микроорганизмы. При обнаружении условно-патогенных микроорганизмов в высоком титре или патогенных микроорганизмов проводится определение их чувствительности к антимикробным препаратам, таким как антибиотики и бактериофаги.
Показания
Данное исследование используется:
для определения возбудителя инфекционного заболевания;
для подбора наиболее эффективной антимикробной терапии;
для мониторинга эффективности проводимой терапии.
Полученные результаты
Референсные значения для различных видов микроорганизмов зависят от области получения биологического материала.
Предполагаемые болезни
Положительные результаты исследования могут указывать на наличие в организме патологического процесса, ассоциированного с выделенным возбудителем. Положительный результат данного анализа, в зависимости от области получения биоматериала может указывать на наличие у пациента воспалительного порождения верхних отделов респираторного тракта (синуситы, риниты, ларингиты, тонзиллиты), заболевания мочеполовой системы (циститы, вагиниты, цервициты, уретриты), воспалительное поражение нижних отделов бронхолегочной системы (плевриты, пневмонии, бронхиты).
Врач-консультант
Данное исследование может назначать терапевт, врач общей практики, педиатр, хирург, ЛОР-врач, пульмонолог, уролог, гинеколог, дерматовенеролог, офтальмолог.
| Подготовка к исследованию: |
