Криоконсервация гамет и эмбрионов. Техника

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 21.12.2024

Криоконсервация ооцитов, эмбрионов. ЭКО у онкологических больных

В настоящее время с применением технологий для сохранения фертильности появились новые возможности, доступные для женщин, получавших химио- или лучевую терапии. Основой этих возможностей служит ЭКО. Существует два обычных способа:
• забор незрелого или зрелого ооцита, криоконсервация его до будущего ЭКО;
• забор зрелого ооцита с немедленным ЭКО, затем криоконсервация полученного эмбриона для последующего его переноса.

Криоконсервация ооцитов. Способ криоконсервации ооцитов перед оплодотворением путем ЭКО считают экспериментальной технологией, его следует выполнять в рамках исследовательской работы. В большинстве случаев результаты этого способа разочаровывают ввиду низкого уровня выживания ооцитов, оплодотворения и наступления беременности после ЭКО размороженных ооцитов. Однако у женщин, не имеющих партнера, криоконсервация зрелых или незрелых ооцитов может оказаться единственной практической возможностью.

Фактор, имеющий наибольшее значение для криоконсервации, — структурная сложность ооцитов, что является причиной низкой эффктивности этой процедуры. Внутриклеточные органоиды ооцита имеют структуру, гораздо более сложную и, вероятно, более чувствительную к термальному повреждению, чем у эмбрионов перед имплантацией.

Недавние исследования продемонстрировали ограниченную эффективность этого способа. В качестве криопротекторов перед замораживанием в жидком азоте могут быть использованы этиленгликоль или диметилсульфоксид. Длительность хранения ооцитов не сказывается на их выживании. В ходе исследования установлено, что показатель выживаемости размороженных ооцитов составляет 68%, а частота оплодотворения — 48%. Частота наступления беременности на каждый размороженный ооцит составляла 2%.

Криоконсервация эмбриона после экстракорпорального оплодотворения. Криоконсервация эмбрионов после ЭКО была введена в практику для создания максимальных шансов для наступления беременности в результате одного цикла ЭКО. В результате многолетнего опыта работы стало ясно, что этот способ создает наибольшие возможности для последующей беременности. Однако обычно он неприемлем для детей и женщин, не имеющих партнеров.

Показатель выживаемости эмбрионов после размораживания колеблется между 35 и 90%, а частота наступления беременности может быть выше 60%. На практике частота родов после предварительной криоконсервации эмбрионов составляет приблизительно 19%.

Существует некоторая обеспокоенность, что задержка химиотерапии и повышение содержания эстрогенов в течение цикла ЭКО может снизить долговременную выживаемость у больных раком молочной железы. Обычно при раке молочной железы интервал между хирургическим вмешательством и началом химиотерапии составляет 6 нед. Существует ряд стратегий, особенность которых состоит в том, чтобы получить ооциты для ЭКО как можно быстрее на фоне самого низкого содержания эстрадиола.
Количество криоконсервированных эмбрионов было больше у пациенток, у которых программа ЭКО была проведена до химиотерапии.

В результате в некоторых медицинских учреждениях забор ооцитов производят в естественном цикле (в рамках программы ЭКО) у больных раком молочной железы. Обычно аспирируют один ооцит. Однако количество неудачных результатов очень велико, а частота наступления беременности очень низка (7,2% за цикл и 15,8% с переносом эмбриона).

В ряде других случаев был использован эффект «короткой вспышки» (вместо стандартного) с целью минимизировать время, необходимое для забора одного фолликула в программе ЭКО. При использовании этой техники забор проводят сразу после непосредственной стимуляции яичников агонистом люлиберина, а не ждут последующего подавления гипофиза, происходящего через несколько недель терапии.

Еще один подход состоит в стимуляции яичников перед ЭКО тамоксифеном (нестероидным антиэстрогеном), который обычно применяют для профилактического лечения при раке молочной железы. Способ похож на применение кломифена. Тамоксифен (40-60 мг) назначают 2-3 раза в день в начале цикла, ежедневно от 5 до 12 дней. По сравнению с естественным циклом ЭКО тамоксифен более эффективен, что проявляется высокой численностью зрелых ооцитов, повышением содержания эстрадиола и количества эмбрионов (в среднем 1,6 эмбриона против 0,6 эмбриона).

Летрозол, ингибитор ароматазы, индуцирующий овуляцию, недавно внедрен в практику как многообещающий препарат. Летрозол конкурентно задерживает активацию ароматазы, прекращая таким образом превращение андрогенных веществ в эстрогены. Этот препарат применяют при лечении поздних стадий развившегося после менопаузы рака молочной железы, поскольку он снижает концентрацию эстрогена в плазме крови на 0,1 мг/день. Для индукции овуляции перед ЭКО летрозол можно использовать независимо от ФСГ или в комбинации с ним.

Этот способ — самый многообещающий из всех, потому что не требует стимуляции и допускает минимальную задержку следующих действий; однако его использование еще недостаточно изучено. Исследование 29 женщин, больных раком молочной железы, обнаружило одинаковую частоту рецидивов рака у тех, кто подвергался стимуляции яичников для ЭКО, и тех, кто не подвергался стимуляции. Однако эффективность этого способа еще требует дальнейшего изучения.

Созревание ооцитов in vitro — другая потенциальная возможность сохранения ооцитов без стимуляции яичников. Эта техника может оказаться эффективной у женщин с СПКЯ, у которых возможно извлечение большого количества незрелых ооцитов.

Незрелые ооциты помещают в инкубатор, хранят в специальной культурной среде. Если ооциты созревают, что определяют по выходу первого полярного тельца, осуществляют оплодотворение методом ИЦИС. Эмбрионы криоконсервируют. Если партнера нет, замораживают зрелые ооциты.

Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021

Криоконсервация гамет и эмбрионов. Техника

Криоконсервация гамет и эмбрионов максимально увеличивает успешность зачатия при любом цикле ЭКО и предотвращает утрату образцов. В настоящее время замораживание эмбрионов считают незаменимой технологией в большинстве лабораторий вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Важность криоконсервации была подтверждена комиссией по этическим нормам ASRM. Утверждают, что эффективная программа криоконсервации может снизить вероятность многоплодной беременности, расходы, необходимость применения стимуляции гормонами в дополнительных циклах, а также предотвратить утрату эмбриона.

Однако важно осознавать, что существуют этические, религиозные, правовые и социальные аспекты замораживания эмбриона. В некоторых странах, например в Италии, Германии, Австрии, Швейцарии, Дании и Швеции, криоконсервация эмбрионов строго запрещена.

Для успешной криоконсервации необходимы криопротекторы — химические вещества, которые при добавлении в криоконсервирующую среду защищают клетки от повреждений во время охлаждения, хранения или размораживания. Криопротекторы бывают двух категорий: проникающие и непроникающие (исходя из способности проникать в клеточную мембрану).
Проникающие криопротекторы традиционно обладают низкой молекулярной массой, которая понижает температуру замерзания; в их числе глицерол, этиленгликоль, пропиленгликоль и диметилсульфоксид.

Непроникающие криопротекторы используют при осмотическом сжатии клеток перед заморозкой, они контролируют регидратацию при размораживании. Таким образом, непроникающие криопротекторы (обычно моносахариды или дисахариды) очень важны для смягчения потенциально вредного воздействия «осмотического шока» при замораживании и размораживании. Сахароза служит самым распространенным непроникающим криопротектором.

Повреждения в процессе криоконсервации могут возникнуть в результате криофакторов, например длительного воздействия токсичных криопротекторов, образования кристаллов льда или осмотического шока при заморозке. На данный момент существует две основные категории стратегий криоконсервации гамет/эмбрионов: медленная заморозка и витрификация.

Медленная заморозка при криоконсервации. В настоящее время наиболее популярны методы медленной заморозки эмбрионов. Многочисленные протоколы различаются применением проникающих и непроникающих криопротекторов, а также скоростью заморозки и разморозки. По этим причинам зачастую сложно обобщить или сравнить результаты криоконсервации. Ниже приведен универсальный пример протокола медленной криоконсервации эмбриона в стадии дробления.

Перед криоконсервацией эмбрионы подвергают специфичному для данной программы критерию отбора. После промывания эмбрионов в обрабатывающей среде с добавлением протеина 12-15 мг/мл их погружают в ту же самую среду, содержащую 1,5 моль/л пропиленгликоля (пропандиола), а затем в раствор с содержанием 1,5 моль/л пропиленгликоля и 0,1 моль/л сахарозы. Эмбрионы погружают в пластиковые пробирки или пузырьки и помещают в программируемую криогенную камеру, где они охлаждаются на 2 °С в минуту, начиная с комнатной температуры, до 4 или 6 °С. Через 5 мин термовоздействия охлажденный объект прижимают к стенке контейнера, чтобы индуцировать «сидинг».

Некоторое время эмбрион держат там, затем температуру снижают со скоростью 0,3 °С в минуту до температуры -32 °С. На этом уровне контейнеры погружают в жидкий азот для хранения.

Размораживание происходит при хранении контейнера сначала при комнатной температуре, затем при 37 °С. Эмбрионы извлекают из контейнеров и погружают в размораживающие растворы. Первый раствор обычно содержит чуть большее количество непроникающего криопротектора. Он защищает клетки от «осмотического шока» и разрыва, а также удаляет проникающий криопротектор. Последующие размораживающие растворы содержат сниженные концентрации пропиленгликоля.

Витрификация. Витрификация — форма быстрой заморозки, применяющая очень высокие концентрации криопротектора, таким образом происходит отвердевание без формирования кристаллов льда. Кристаллы льда бывают главной причиной внутриклеточных повреждений в результате заморозки. Термин «витрификация» происходит от латинского слова «vitreous», что означает «стеклянный» или «напоминающий стекло». Витрификацию можно считать модифицированным подходом к криоконсервации, развившимся на основе криоконсервации зародышей млекопитающих.

Таким образом, вещества для замораживания содержат нормальные молекулярные и ионные пропорции первоначального жидкого состояния и могут считаться чрезвычайно вязкими, сверхохлажденными жидкостями. При данном методе ооциты или эмбрионы обезвоживаются путем кратковременного воздействия концентрированного раствора криопротектора перед помещением образцов непосредственно в жидкий азот. Применение витрификации в настоящее время находится в центре внимания многих клинических лабораторий, в которых проводят также исследования на грызунах и домашних животных. С прекрасным обозрением истории витрификации и потенциальных преимуществ можно ознакомиться по этой ссылке.

Независимо от средств криоконсервации, гаметы или зародыши хранят в жидком азоте при температуре 196 С. При таком режиме реакции и процессы, происходящие внутри клеток, приостанавливаются. Таким образом, нельзя определить длительность хранения гамет и зародышей. Существует предположение, что фоновая ионизирующая радиация может нанести вред по прошествии многих сотен лет.

Как происходит криоконсервация ооцитов: все о методе и подготовке

Одна из проблем репродуктивной медицины заключалась в сохранении генетического материала, используемого при оплодотворении. Дело в том, что яйцеклетки жизнеспособны в течение всего 2 суток, по истечении этого срока зачатие с их помощью невозможно. Это существенно осложняет проведение ЭКО, ведь в подавляющем большинстве случаев нужно выполнить несколько процедур для успешной имплантации. Решить данную проблему позволяет криоконсервация ооцитов при сверхнизкой температуре. Эта технология позволяет сохранять генетический материал женщины в жизнеспособном состоянии неограниченно долго. На данный момент она широко используется в медицинской практике центров репродуктологии по всему миру.

История криоконсервации

О сохранении биологического материала с помощью низкой температуры человек задумывался давно. Тем более, что на такую мысль наталкивает сама природа – всем известны лягушки, впадающие в ледяной анабиоз зимой и успешно оживающие после оттаивания. Учеными неоднократно делались попытки замораживания отдельных органов и даже целых живых организмов (лабораторных мышей), однако из-за несовершенства технологии результаты этих опытов были не слишком успешными.

Куда больших результатов удалось достичь в криоконсервации клеток и тканей. Уже в 1954 году было успешно проведено первое искусственное оплодотворение с использованием замороженной спермы. Однако, на тот момент использовалась несовершенная технология постепенного замораживания, из-за чего в некоторых клетках образовывались кристаллы льда, и часть из них разрушалась.

Лишь в 1983 году было проведено первое искусственное оплодотворение с использованием криоконсервированных яйцеклеток, а затем и эмбрионов. Постепенно с развитием технологий замораживания, эта процедура стала штатно использоваться для хранения генетического материала в донорских банках и центрах репродуктологии.

Как происходит криоконсервация яйцеклеток?

Эффективность этой процедуры сильно зависит от технологий, которые используются для сохранения ооцитов. В настоящее время используются три основных метода криоконсервации:

Постепенное замораживание. Исторически первая технология, появившаяся и опробованная на практике еще в середина прошлого века. Ее суть заключается в постепенном (со скоростью -1°С в минуту) понижении температуры клеток до -196°С. При этом происходит частичная дегидратация (обезвоживание) ооцитов. Недостатком этого метода является разрушение части клеток из-за образования в них микрокристаллов льда и соли. Поэтому сегодня постепенное замораживание в репрудоктологии применяется сравнительно редко.
Витрификация (быстрая заморозка). Этот метод основан на эффекте фазового перехода воды из жидкого состояния в твердое аморфное (стеклообразное), минуя этап кристаллизации. В результате жидкость в ооцитах замерзает, не повреждая структуру клеток. Витрификация достигается за счет моментального охлаждения биоматериала с помощью жидкого азота до температуры -196°С.
Использование криопротекторов. Хотя витрификация демонстрирует высокую эффективность и низкий процент поврежденных клеток, остается вероятность того, что ооцит при быстром замораживании будет разрушен. Чтобы этого не произошло, в клетках предварительно вода заменяется на специальные вещества (криопротекторы), препятствующие образованию кристаллов.

В настоящее время общепринятой в репродуктивной медицине практикой является сочетание последних двух методов. Это позволило повысить выживаемость клеток до 90%, что сегодня считается нормой. Ооциты помещаются в раствор криопротектора, который постепенно вытесняет из них воду. Затем яйцеклетки в тонкостенных капсулах устанавливаются в сосудах Дьюара, наполненные жидким азотом, где и происходит их замораживание.

При ЭКО криоконсервация яйцеклеток требует их большого количества с расчетом на проведение повторных процедур оплодотворения. Это объясняется тем, что даже полностью здоровые оплодотворенные яйцеклетки не всегда приживаются в матке после имплантации. Для этого пациентке назначается курс гормональной стимуляции яичников. Благодаря этой технологии за 1 менструальный цикл в организме женщины образуется не 1, а 5-8 созревших ооцитов. 1-2 из них отбираются для непосредственно процедуры оплодотворения, остальные – замораживаются для дальнейшего использования.

Размораживание ооцитов

Возвращение замороженных ооцитов к нормальному состоянию для последующей пересадки происходит постепенно. Врач медленно понижает концентрацию криопротектора в клетках, вытесняя его водой. После того, как ооциты достигают температуры тела, их оплодотворяют спермой донора или супруга пациентки. Полученные эмбрионы 3-5 дней содержатся в инкубаторе, где развиваются до стадии начального дробления или бластоцисты и пересаживаются пациентке.

Размораживание, выполненное с соблюдением правильной технологии, не наносит никакого вреда клеткам и не снижает их фертильность. Напротив, по некоторым исследованиям вероятность наступления беременности при ЭКО с использованием размороженного материала на 15% выше, чем с применением «свежих» клеток. Это объясняется тем, что при криоконсервации ооцитов проводятся дополнительные исследования, позволяющие точнее установить фертильность биоматериала.

Применение криоконсервации яйцеклеток

Замораживание яйцеклеток – процедура добровольная и проводится только с письменного согласия пациентки. Она проводится по следующим медицинским и социальным показаниям:

Для повторных процедур ЭКО. При экстракорпоральном оплодотворении пациентке подсаживается 1-2 оплодотворенные яйцеклетки. Однако, после гормональной стимуляции яичников за 1 менструальный цикл их получают до 8 штук. С учетом того, что имплантированные эмбрионы приживаются не всегда, оставшиеся после первой процедуры ЭКО ооциты криоконсервируются для использования в повторных попытках. Это позволяет избежать повторной стимуляции, которая оказывает негативное воздействие на организм женщины. Более того, криоконсервация в естественном цикле позволяет накопить достаточное количество биоматериала женщинам, которым гормональная стимуляция строго противопоказана.
Отложенное материнство. Многие молодые женщины желают иметь детей, но откладывают это на поздние сроки ради карьеры или по каким-либо иным немедицинским причинам. Однако, с возрастом из-за естественных изменений в женском организме повышается вероятность бесплодия и рождения ребенка с врожденными дефектами. В этом случае криоконсервация яйцеклеток используется как страховка на будущее.
Сохранение онкофертильности. Некоторым женщинам приходится откладывать планирование беременности из-за прохождения химио- или радиотерапии от онкологических заболеваний. Излучение и химические препараты, используемые против опухолей, негативно влияют на развитие и жизнеспособность яйцеклеток. В этой ситуации перед лечением они проходят курс гормональной стимуляции для получения нескольких (6-8) здоровых ооцитов, которые криоконсервируются до тех пор, пока пациентка не восстановится после терапии.
Донорство яйцеклеток. Женщины, уже имеющие здорового ребенка, могут стать донором ооцитов для пациенток с диагностированным бесплодием (безвозмездно или за денежное вознаграждение). Они также проходят курс гормональной стимуляции, после чего их яйцеклетки сохраняются в криобанке и используются в ЭКО.

Таким образом, воспользоваться услугой криоконсервации яйцеклеток могут не только пациентки со сниженным овариальным резервом или готовящиеся к лечению от онкологических заболеваний, но и вполне здоровые женщины, не имеющие проблем с репродуктивной функцией. Наличие собственных замороженных яйцеклеток – хороший задел на будущее, если возникнет потребность снова стать матерью.

Преимущества и проблемы криоконсервации ооцитов

Криоконсервация яйцеклеток в Москве в нашем медицинском центре – эффективная репродуктивная технология, обеспечивающая высокую сохранность генетического материала женщины. По статистике, до 80% замороженных ооцитов остаются способными к оплодотворению после размораживания. Клетки могут содержаться в криобанке неограниченно долгое время. В медицинской практике известен случай успешного оплодотворения и рождения ребенка с помощью яйцеклетки, хранившейся 30 лет. В рамках ЭКО криоконсервация никак не влияет на организм будущего малыша, не вызывает каких-либо генетических отклонений.

Однако, у этой технологии имеются и недостатки, хотя с самим замораживанием они связаны косвенно:

Опасность гиперстимуляции. Для получения большого числа здоровых ооцитов в одном менструальном цикле женщина проходит курс гормональной стимуляции яичников. Интенсивное воздействие гормонов способно вызвать синдром гиперстимуляции, сопровождающийся многочисленными физиологическими нарушениями различной тяжести. Для предотвращения негативного эффекта от этой процедуры врач назначает каждой пациентке индивидуальный курс, подбирая дозу и периодичность гормональных инъекций исходя из ее медицинских показания.
Осложнения при пункции яичников. Извлечение созревших яйцеклеток из организма пациентки выполняется аспирационной иглой. В редких случаях (например, при недостаточной квалификации врача) этот инструмент может повредить матку, кишечник и другие органы малого таза, вызвать кровотечение, инфекционное заражение. Такие ситуации встречаются редко – чтобы их избежать, нужно проходить процедуру в профессиональных центрах репродуктологии у опытного специалиста.
Эмоциональные риски. При всей эффективности технологии криоконсервации ооцитов она не всесильна. Определенный процент яйцеклеток после размораживания теряет фертильность. Неудачная попытка оплодотворения может вызвать у пациентки разочарование и эмоциональную подавленность.

Несмотря на эти риски и достаточно высокую цену, криоконсервация яйцеклеток полностью себя оправдывает. Эта технология помогает тысячам женщин с различной жизненной ситуацией стать счастливой матерью.

Подготовка к криоконсервации ооцитов

Проходить эту процедуру рекомендуется женщинам возрастом до 35 лет – выше этого предела резко возрастает количество хромосомных мутаций в яйцеклетках, что отрицательно сказывается на их качестве. Однако и пациентки, подходящие под это требование, проходят комплексное медицинское обследование, включающее:

Анализы крови (общий, биохимический, гормональный, на наличие ВИЧ, гепатитов В и С, сифилиса);
Анализ мочи (общий и гормональный);
Мазки из влагалища и шейки матки для гистологического и цитологического исследований, половые инфекции;
Ультразвуковое обследование органов малого таза и молочных желез.

Перечень диагностических процедур может быть расширен в зависимости от особенностей организма пациентки и результатов проведенных обследований. Непосредственно перед пункцией фолликулов женщине также необходимо соблюсти несколько правил:

За 2 недели до процедуры исключить употребление кофеиносодержащих продуктов и алкоголя, а также курение;
за 2-3дня до пункции отказаться от любой сексуальной активности (в том числе мастурбации);
За 8 часов до забора яйцеклеток необходимо прекратить прием пищи, за 2 часа — жидкостей.

Более подробные рекомендации по подготовке к процедуре пациентке предоставит лечащий врач. Сама криоконсервация ооцитов никаких предварительных действий со стороны женщины не требует – она проводится в лабораторных условиях и не зависит от ее участия.

Стоимость криоконсервации яйцеклеток

Хранение биоматериала в криобанке являются платными. Получение, исследование, отбор, обработка и заморозка клеток – мероприятия трудозатратные. Это обуславливает достаточно высокую стоимость услуги. На конкретную цену криоконсервация ооцитов влияют:

Количество яйцеклеток, предусмотренных для хранения;
Число диагностических исследований перед получением биоматериала;
Наличие или отсутствие этапа стимуляции яичников;
Используемый метод криоконсервации;
Срок хранения замороженных ооцитов.

Цены на эту услугу разнятся в зависимости от учреждения, где она предоставляется. В нашем медицинском центре в Москве стоимость криоконсервации яйцеклеток составляет от 21 000 рублей. При этом мы проводим полный комплекс диагностических исследований пациентки, индивидуальный курс гормональной терапии, тщательный анализ и подготовку биоматериала перед его заморозкой. Это обеспечивает максимальную сохранность клеток и высокие шансы на наступление беременности при экстракорпоральном оплодотворении с их использованием.

Технологии будущего, доступные сегодня: криоконсервация половых клеток и эмбрионов

Ученых очень давно интересовала возможность замораживать живые ткани и целые организмы, тем самым «останавливая» для них время и сохраняя их в жизнеспособном состоянии неограниченно долго. Наблюдая за животными, люди замечали, что некоторые из них, погружаясь в состояние заморозки, не погибают, а «оттаивая», сразу «оживают».

Но повторить этот процесс искусственно очень долго не удавалось. Еще в начале прошлого века хранение живых тканей в замороженном состоянии казалось невыполнимой задачей. Основная проблема состояла в том, что при замораживании из воды образуются острые кристаллы льда, которые повреждают клетку.

Первая революция в области криобиологии произошла в 1949 году. Ученые обнаружили, что глицерин обладает свойствами криопротектора – он защищает клетки от повреждения во время заморозки. В последующие годы были проведены эксперименты с заморозкой половых клеток разных животных, и многие из них оказались успешными.

Первый ребенок от замороженной яйцеклетки родился намного позже – в 1986 году.

В настоящее время использование донорских половых клеток уже распространено повсеместно и превратилось в рутинную процедуру. По всему миру работают криобанки, предлагающие как сохранить собственные половые клетки, так и большой выбор доноров. Хотя не все нюансы этой процедуры изучены досконально (например, предполагается, что половые клетки могут храниться в криобанке практически бесконечно, но проверить невозможно), на данный момент можно с уверенностью утверждать, что это безопасно, и женщины рожают здоровых детей – таких же, как после зачатия естественным способом.

Что можно «заморозить»?

В современных криобанках в «замороженном» состоянии хранятся:

Женские половые клетки – ооциты. Их получают так же, как во время ЭКО: женщина принимает гормональные препараты, чтобы стимулировать созревание фолликулов в яичниках, затем с помощью специальной иглы под местной анестезией извлекают яйцеклетку. Позже замороженные яйцеклетки размораживают, искусственно оплодотворяют, в течение 5 дней эмбрион развивается в лаборатории, затем его подсаживают в матку. Можно получить яйцеклетки без гормональной стимуляции, в естественном цикле, но в данном случае удастся извлечь только 1-2 половые клетки.
Мужские половые клетки – сперматозоиды. Их получают путем мастурбации, в некоторых случаях — пункции (прокола) или биопсии яичка. После разморозки проводят ЭКО, ИКСИ (интрацитоплазматическую инъекцию сперматозоидов) или инсеминацию, когда сперматозоиды вводят женщине во влагалище или сразу в матку.
Эмбрионы. Отличие от криоконсервации ооцитов в том, что оплодотворение яйцеклеток в лаборатории проводят до заморозки, и замораживают уже целые эмбрионы. Как показывает практика, после оттаивания они лучше сохраняют жизнеспособность, по сравнению с яйцеклетками.

В криобанке каждый желающий может сохранить свои половые клетки и эмбрионы как для себя, чтобы использовать в будущем, так и стать донором – помочь другим людям, которые не могут иметь детей. А еще в Репробанке есть специальная программа «Сохрани для себя и помоги другим». В рамках этой программы женщина бесплатно проходит обследование и сохраняет свои яйцеклетки: часть из них она потом может использовать сама, а часть перейдет в донорский банк.

Кто обычно пользуется такими услугами?

Многие люди сохраняют половые клетки в криобанках, чтобы «застраховать» свою репродуктивную функцию, обеспечить возможность иметь ребенка на случай, если в будущем они ее лишатся.

Например, яйцеклетки часто размещают в криобанке женщины, которые планируют беременность после 35 лет, имеют хромосомные нарушения, страдают онкологическими заболеваниями, контактируют с вредными веществами на работе, у которых повышен риск наступления ранней менопаузы, и которым предстоят операции на органах малого таза.

Донорами половых клеток становятся по разным причинам, и далеко не всегда это стремление получить материальное вознаграждение. По опыту Репробанка, многими движут альтруистические соображения, они просто хотят помочь другим людям.

Соответственно, донорскими половыми клетками пользуются люди, которые по тем или иным причинам не могут иметь детей, либо те, у кого нет полового партнера. Раньше медицина в таких случаях ничем не могла помочь, зачастую единственным выходом становилось усыновление приемных детей.

Технологии криоконсервации, вместе с другими вспомогательными репродуктивными технологиями, открыли огромные возможности: благодаря им, завести ребенка может практически любая пара или одинокий человек.

Как работает криобанк?

Главный секрет сохранения живых тканей при низких температурах – особая, шоковая, технология заморозки. Она называется витрификацией. При этом используют специальные вещества – криопротекторы, а охлаждение тканей происходит очень быстро. При этом не успевают образоваться кристаллы льда, которые могли бы повредить клетку. Вода превращается в стекловидную субстанцию.

После заморозки половые клетки и эмбрионы находятся в криохранилище, в специальных криостатах, где поддерживается температура –196° C. При таком сильном охлаждении в клетках не могут проходить никакие биохимические процессы, жизненный цикл замирает и процесс разрушения клетки не происходит.

Современные криохранилища оснащены сложным оборудованием, которое помогает обеспечить сохранность материала:

Датчики круглосуточно контролируют температуру в криостатах и другие параметры.
Работает специальная система оповещения о неполадках.
Автономные системы электроснабжения позволяют криохранилищу работать в течение длительного времени, если в центральной сети нет электричества.
Специальная маркировка сводит практически к нулю вероятность того, что материалы от разных людей будут случайно перепутаны.

Как криоконсервация влияет на качество половых клеток, беременность и здоровье ребенка?

Доказано, что использование замороженных половых клеток не влияет на здоровье ребенка, течение беременности, родов, не повышает риск осложнений.

Если человек сохраняет в криобанке собственные половые клетки для себя, риск передачи генетических дефектов ребенку не выше, чем при зачатии естественным способом. Перед забором половых клеток проводится консультация клинического генетика, генетические анализы — это помогает свести риски к минимуму. Что касается донорского материала, то все кандидаты в доноры Репробанка проходят эти процедуры в обязательном порядке, у нас действуют строгие условия отбора.

Как долго можно хранить половые клетки в замороженном состоянии?

Хранение в замороженном состоянии не влияет на качество яйцеклеток, сперматозоидов и эмбрионов – это доказано многими научными исследованиями. Известны случаи наступления беременности с применением яйцеклеток, хранившихся дольше 14 лет, и сперматозоидов, хранившихся 24 года, и после этого рождались совершенно здоровые дети.

Фактически, вероятность забеременеть и родить ребенка при использовании яйцеклеток от здоровой женщины 20 лет выше, чем при использовании «свежих» яйцеклеток женщины 30–35 лет.

Почему донорский материал лучше всего подбирать в криобанке?

Одну из причин мы уже озвучили – все доноры сдают анализы и проходят обследование, их здоровье тщательно проверяют. Каждый кандидат должен предоставить справку от психиатра, с ним беседует клинический психолог. Профессиональные криобанки дорожат своей репутацией и предоставляют только качественный материал.

Кроме того, в криобанках серьезно относятся к вопросам конфиденциальности. Донор никак не может узнать, кто получил его материал, а значит, в будущем он не сможет появиться в жизни ребенка и родителей.

Взгляд в будущее

Современная наука и, в частности, та ее часть, которая касается медицины, развивается очень бурно. На наших глазах творится история, и открывается всё больше возможностей. Получают надежду тяжелобольные, люди, которые от природы не могут, но очень хотят иметь детей.

Низкие температуры используются не только в репродуктологии. Например, есть такое направление, как криохирургия – уничтожение различных патологических образований с помощью холода. Уже давно существует крионика – область за пределами науки, ее сторонники предлагают замораживать живые организмы, в том числе людей, в надежде, что в будущем, с развитием технологий, их смогут разморозить и «оживить».

Пока это из области научной фантастики, но ведь и заморозка половых клеток век назад считалась чем-то нереальным. Только время покажет, какие открытия и новые прорывы ждут нас в будущем.

Заморозка яйцеклеток: как происходит?

При лечении бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения часто используется заморозка яйцеклеток. Эта технология позволяет хранить половые клетки неограниченно долго без ущерба их фертильности. Обычно она применяется в тех случаях, когда будущая мать планирует отложенную беременность или проходит несколько циклов ЭКО. Также распространена заморозка донорских яйцеклеток для их использования пациентками с нарушением функции яичников. В этой статье рассмотрим, как проходит эта процедура, сколько хранятся яйцеклетки в заморозке, насколько этот метод эффективен и безопасен.

Когда используется заморозка яйцеклеток?

Хотя криоконсервация живых клеток и тканей используется достаточно давно (с 50-х годов прошлого века), в репродуктологии эту технологию стали применять лишь около 20 лет назад. Первый ребенок, зачатый с помощью размороженной яйцеклетки, появился на свет в 1999 году. Однако, сегодня этот способ сохранения женских половых клеток является общепринятым и применяется во всех развитых странах. Типичными ситуациями для заморозки ооцитов являются:

Отложенное материнство. Часто здоровые женщины, не имеющие никаких патологий репродуктивной системы, предпочитают отложить рождение ребенка на поздний срок. Причиной тому может быть желание построить собственную личную жизнь или карьеру, нестабильность финансового положения, отсутствие постоянного полового партнера или супруга, работа с высоким уровнем риска, прохождение тяжелого лечения от онкологии или других опасных болезней и т. д. Так как с возрастом у женщины истощается овариальный резерв, а фертильность яйцеклеток становится ниже, у нее в репродуктивный период извлекаются ооциты и помещаются в криобанк до «лучших времен». Это позволит ей стать матерью даже тогда, когда функция ее яичников уже угасла.
Донорство яйцеклеток. Некоторые женщины на заморозку яйцеклеток идут из желания помочь бесплодным матерям или ради материального вознаграждения. В этом случае их генетический материал используется другими людьми, поэтому проходит тщательный отбор, чтобы максимально снизить риск развития патологий у будущей матери и ее ребенка.
Экстракорпоральное оплодотворение. При ЭКО заморозка яйцеклеток используется как метод их сохранения в экстренных случаях. Например, при обнаружении в организме женщины патологий, мешающих успешному зачатию и беременности, после проведения стимуляции яичников. Яйцеклетки замораживаются и помещаются в криобанк до тех пор, пока пациентка не вылечится от болезни.

До какого возраста заморозка яйцеклеток эффективна и безопасна? Из-за того, что фертильность женщины изменяется с течением времени, оптимальным периодом для извлечения ооцитов и их криоконсервации считается интервал между 18 и 35 годами. В этот период женский организм производит наиболее жизнеспособные ооциты. Слишком ранее или позднее получение яйцеклеток чревато высоким риском прерывания беременности и врожденных патологий у плода.

Как берут яйцеклетки для заморозки

Для того, чтобы заморозить яйцеклетки, их необходимо сначала получить и извлечь из женского организма. В естественных условиях яичники производят 1 (очень редко – 2) созревшие для оплодотворения клетки в месяц. Их можно извлечь и сохранить, но на практике требуется больше зрелых ооцитов, часть из которых используется сразу, а часть оставляется «про запас». Чтобы получить необходимое число яйцеклеток, применяют два способа:

На протяжении нескольких овуляционных циклов у женщины извлекается по 1-2 половой клетки. Этот способ более долгий, зато позволяет не прибегать к гормональной стимуляции, которая создает высокую нагрузку на организм и противопоказана при некоторых заболеваниях и особенностях физиологии.
Проводится гормональная стимуляция яичников, которая стимулирует развитие сразу нескольких яйцеклеток (до 6-8) за один овуляционный цикл. Эта процедура имеет побочные эффекты и может применяться не ко всем женщинам, однако позволяет получить достаточное количество созревших ооцитов в короткий срок.

В обоих случаях врач-репродуктолог отслеживает развитие фолликулов яичников с помощью ультразвука и измерения уровня половых гормонов в моче и крови пациентки. Когда ооциты достигают нужного уровня развития, выполняется забор яйцеклеток для заморозки. Для этого пациентке трансвагинально в матку вводится катетер с иглой, которой прокалывают заднюю маточную стенку и каждый из фолликулов, отсасывая их содержимое вместе с созревшими половыми клетками.

Как происходит заморозка яйцеклеток?

Простой жизненный опыт подсказывает нам, что для сохранения тканей и клеток достаточно поместить их в среду с низкой температурой. Так можно сохранить, например, мясо в холодильнике, по тому же принципу некоторые животные возвращаются к жизни после зимовки в состоянии анабиоза. Однако, у этого метода есть несколько недостатков:

При недостаточно низких температурах живые ткани и клетки сохраняются в течение ограниченного времени;
При температуре ниже нуля ткани и клетки сохраняются неограниченно долго, однако образующиеся в них микрокристаллы льда разрушают клеточную структуру, вызывая их гибель.

Долгое время эти два недостатка ограничивали применение криоконсервации в медицине вообще и в репродуктологии в частности. Частично обойти их позволяло медленное замораживание биоматериала – постепенное понижение температуры снижало риск образования микрокристаллов льда. Однако, даже в этом случае сохранялось всего 50% из всех замороженных яйцеклеток.

Положение изменилось с появлением криопротекторов – веществ, которые при замерзании образуют аморфную (стекловидную) структуру без микрокристаллов. Именно они позволили вывести замораживание яйцеклеток на новый уровень, обеспечив эффективность и безопасность этой технологии.

В современном виде процесс криоконсервации ооцитов выглядит следующим образом:

извлеченные из организма женщины яйцеклетки отправляются на предварительное исследование, в ходе которого из них отбираются наиболее жизнеспособные;
прошедшие отбор ооциты помещаются в тонкостенные стеклянные пробирки и заполняются криопротектором, который постепенно вытесняет из них воду;
подготовленные таким образом клетки в пробирках помещаются в сосуд Дьюара с жидким азотом, температура которого достигает -196°С, где замораживаются до нужного состояния в течение 2 часов.

Эта технология называется витрификацией или стеклованием (от латинского vitro – «стекло»). При сверхбыстрой заморозке в жидком азоте криопротектор, заполняющий клетку, переходит в твердое аморфное состояние. В таком виде биоматериал может храниться в течение десятилетий без ущерба его фертильности, хотя репродуктологи рекомендуют все же использовать его в течение 5-7 лет с момента заморозки.

Эффективность заморозки яйцеклеток

Очевидно, что одним из актуальных вопросов является результативность этого метода сохранения биоматериала для оплодотворения. У медленного замораживания, применявшегося ранее, этот показатель был достаточно низким, что делало процедуру более трудоемкой, сложной и дорогой. Однако, современный уровень развития криотехнологии позволяет 90-95% яйцеклеток сохранить свою жизнеспособность и фертильность после разморозки.

Этот показатель не стоит путать с вероятностью наступления беременности с использованием криоконсервированных ооцитов. Даже при сегодняшнем уровне развития вспомогательных репродуктивных технологий шанс зачать ребенка с первой попытки ЭКО составляет всего 25-30% - что, однако, вполне сравнимо с аналогичным показателем при естественном оплодотворении у абсолютно здоровых пар.

Фертильность замороженных яйцеклеток зависит от множества факторов, среди которых основную роль играют следующие:

Качество заморозки. Криоконсервация генетического материала только на словах выглядит простой – в реальности это довольно сложная процедура, требующая высокой подготовки и специального оборудования. Поэтому эффективно провести ее могут только в специализированных репродуктологических центрах, где работают квалифицированные и опытные специалисты-репродуктологи. Чтобы проводить заморозку яйцеклеток, клиника должна иметь соответствующую лицензию, подтверждающее качество предоставляемых ею услуг.
Фертильность спермы. Даже при высокой жизнеспособности самой яйцеклетки зачатие может не наступить при низком качестве мужского семени (например, малой концентрации или подвижности сперматозоидов). Обойти это ограничение позволяют тщательный отбор половых клеток и вспомогательные репродуктивные технологии – например принудительная инъекция сперматозоида в ооцит (ИКСИ), использование донорской спермы и т. д.
Состояние материнского организма. Зачатие не исчерпывается лишь оплодотворением, то есть слиянием женской и мужской половых клеток. Уже оплодотворенной яйцеклетке необходимо закрепиться в эндометрии матки для дальнейшего развития. Этот процесс может нарушиться, если женщина страдает какими-либо расстройствами репродуктивной системы или общими заболеваниями организма, снижающими детородную функцию. Чтобы уменьшить этот риск, пациентка перед процедурой ЭКО проходит комплексное обследование, в ходе которого выявляются возможные нарушения, мешающие зачатию. Также повысить вероятность успешного наступления беременности, в ее матку подсаживают сразу несколько эмбрионов (чаще всего не более 2).

Многих женщин, решивших пройти ЭКО с использованием замороженных яйцеклеток, также волнует вопрос безопасности этой процедуры. Распространено мнение, что криоконсервация наносит ооцитам ущерб, в том числе на генетическом уровне, что может вызвать самопроизвольное прерывание беременности или врожденные патологии у плода. Однако, научные исследования не подтверждают такой зависимости. Напротив, имеются данные, что прошедшие процедуру заморозки яйцеклетки сохраняют более высокую фертильность, чем «свежие», особенно если речь идет о пациентках старшего возраста.

Читайте также: