Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции. Диагностика менингококка. Выявление менингококка.
Добавил пользователь Евгений Кузнецов Обновлено: 06.11.2024
Выделяют чистую культуру возбудителя и проверяют ее чувствительность к сульфаниламидным препаратам и антибиотикам.
Материал : спинномозговая жидкость , кровь, экссудат, гной, слизь из зева и носоглотки.
Вопрос 88.Бактериоскопическая диагностика Менингококковых инфекций.
С помощью микроскопии нативного патологического материала определяют вид возбудителя заболевания по форме, взаиморасположению и способности окрашиваться определенными красителями.
Имеют форму, напоминающую пламя свечи : один конец клетки заострен, другой уплощен. Располагаются обычно парами (плоские концы обращены друг к другу), иногда в виде коротких цепочек. Жгутиков нет, спор нет. В организме человека и животных, на средах, содержащих кровь или сыворотку, образуют капсулу.
Грамположительны, но в молодых и старых культурах нередко грамотрицательны.
№ 89. Серологическая классификация менингококков
Менингококк имеет видоспецифические и полисахаридные антигены, по которым менингококки разделены на семь серологических групп, обозначаемых буквами A, В, С, D,X,Y,Z
№90. Иммунологическая диагностика менингококковых инфекций
Приготовленные из свежих культур менингококков различных серогрупп препараты обрабатывают сывороткой , а затем флюоресцирующей сывороткой против глобулинов человека. После этого препараты изучают в люминесцентном микроскопе.
№91. Специфическая профилактика менингококковых инфекций.
Для создания искусственного иммунитета против менингита предложены вакцины , получаемые из высокоочищенных полисахаридов серогрупп А, С, Yи W135, но каждая из них формирует группоспецифический иммунитет.Полисахарид серогруппы В оказался неиммуногенным.Поскольку после перенесенной болезни иммунитет возникает против всех серогрупп менингококков, возобновился поиск таких их антигенов( в том числе и серогруппы В), которые создавали бы надежный иммунитет против всех серогрупп, включая серогруппу В.
№ 92. Отличия пневмококков от других стрептококков.
Практическому здравоохранению предложен способ идентификации пневмококков с помощью теста на продукцию -стрептококков, не образующихИзвестен метод дифференцировки пневмококков от других -стрептококки других видов растут на фильтре, создавая четко обозначенные длинные цепочки. Однако следует отметить, что эти исследования затруднены трудоемкостью микробиологических исследований с большой затратой рабочего времени.
Наиболее близким к предлагаемому способу является способ идентификации пневмококков с помощью оптохинового теста, сущность которого заключается в определении чувствительности испытуемых культур к оптохину (Н.Н.Костюкова //Ж.Микробиол. N 12, 1981).
Постановка данного теста осуществляется на плотной питательной среде для выращивания пневмококков с помощью дисков, пропитанных оптохином. Установлено, что только пневмококки чувствительны к концентрации 1:4000 водного раствора оптохина, тогда как другиеДля идентификации пневмококков авторы предлагают использовать отечественный препарат хинин, алкалоид, содержащийся в коре различных видов хинного дерева. Хинин белый кристаллический порошок без запаха, хорошо растворим в воде (1: 30), легко в кипящей (1:1), в спирте (1:3). Содержит 82% хинина (основания). Водные растворы стерилизуют при 100 о С в течение 30 мин. В отличие от оптохина хинин более стойкий препарат, отличается стандартностью, хорошей растворимостью и доступен для широкого применения в нашей стране. Формы выпуска отечественной промышленностью: порошок, таблетки по 0,25 и 0,5 г (М.Д.Машковский, Лекарственные формы, т.2, 1985).
Идентификация пневмококков осуществляется путем определения на 5% кровяном агаре чувствительности его к хинину с помощью стандартных дисков, нагруженных 0,6-0,8 мкг данного препарата на один диск
№93. Факторы патогенности менингококков.
Капсула- важный фактор патогенности менингококков, полисахаридной природы, нейтрализует фагоцитарную активность клеток , способствуя внутриклеточной персистенции.
Фимбрии(пили)обеспечитвают адгезию менингококков к клеткам эпителия носоглотки.
Белки наружной мембраны-комплекс множества белков на поверхности клеточной стенки, которые участвуют в прикреплении , проникновении менингококка
Колонизации способствуют факторы микробного антагонизма: бактериоцины, оксидаза и каталаза.
Эндотоксин-липоолигосахаридный комплекс, который индуцирует синтез цитокинов, проявляет пирогенность, имеет сходство с гликолипидами человека(антигенная мимикрия), обладает летальными свойствами( развитие токсического шока и диффузной внутрисосудистой коагуляции )
Гиалуронидаза-факторы распространения.нейраминидаза и фибринолизин-факторы инвазии.
Оксидаза и супероксиддисмутаза-факторы микробного антагонизма.
№94. Какие заболевания вызывают гонококки?
Эндометрит, аднексит, простатит, фарингит, проктит, коньюктивит( бленнорея новорожденных), специфический уретрит.
№95. Морфологические , тинкториальные, культуральные свойства гонококков.
Грам- диплококки, форма кофейных зёрен или почек, сложенных вогнутыми сторонами друг к другу.Неподвижны, спор не образуют, имеют нежную капсулу , пили IV типа.гонококки принадлежат к наиболее прихотливым бактериям .Оптимальный рост на средах с нативным сывороточным белком во влажной среде с содержанием в воздухе 3-10 % углекислого газа.для роста необходимо железо.добавление к плотным средам крахмала,холестерола, альбумина или частичек угля способствует росту, а добавление кальция повышает жизнеспособность.Характеризуется низкой сахаролитической активностью-ферментируют только глюкозу.Оксидазо- и каталазоположительны.Легко подвергаются аутолизу.На плотной среде образуют мелкие бесцветные колонии.Дифференцируют 4 вида гонококков(1,2,3,4)по морфологии колоний в боковом освещении в стериоскопическом микроскопе.гонококки 1 типа выявляются при острой гонорее, образуют колонии ярко-оранжевого цвета.Гонококки второго типа выделяются при бессимптомном течении болезни, образуют колонии голубовато-зеленого цвета.только у гонококков 1,2 типов обнаружены пили..гонококки 3 и 4 типов-музейные штаммы, образуют тусклые колонии без четкого разделения цветных полос.
Микроскопия мазков выделений из уретры при диагностике уретрита у мужчин имеет чувствительность 90% и специфична в 100% случаев, если видны внутриклеточные грамм-отрицательные диплококки — нейсерии гонореи. У женщин мазки из шейки матки менее чувствительны, по сравнению с бактериологическим посевом (65%), поэтому необходим именно посев.
Бактериологический посев выделений на шоколадный агар для гонореи.
Нормальный результат бактериологического посева на гонорею
Отрицательны результат — отсутствие в материале гонококков
Материал для исследования для бактериального посева на гонорею
Исследуемый материал у женщин - отделяемое уретры, влагалища, цервикального канала, прямой кишки.
У мужчин - отделяемое уретры и прямой кишки.
Возможен анализ мазков из глотки, глаза, крови, спинномозговой жидкости, мочи, других биожидкостей. Материал следует немедленно транспортировать в лабораторию. Не охлаждать. Засеянные образцы до отправления в лабораторию необходимо поместить в СО2 инкубатор при температуре +37°С, так как гонококки лучше размножаются в среде с углекислым газом.
№ 98.Серологическая диагностика гонореи. Единственной серологической реакцией, используемой при диагностике гонореи, является РСК (реакция Борде-Жангу), хотя и она применяется всё реже. Реакцию Борде-Жангу рекомендуется проводить при хронической и осложнённой гонорее, особенно в случаях, когда заболевание не подтверждено бактериологически. Серологические исследования (реакция Борде-Жангу, реакция определения гонококкового антигена), а также кожно-аллергическая проба с гонококковой вакциной имеют лишь вспомогательное значение и непригодны ни для доказательства гонококковой инфекции, ни для установления излеченности.
№99. Иммунитет при гонорее.не формируется ,часто регистрируется реинфекция
Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции. Диагностика менингококка. Выявление менингококка.
Менингококковый менингит - инфекция вызванная Neisseria meningitidis: диагностика, лечение, профилактика
Эпидемиология менингококкового менингита. Носительство Neisseria meningitidis очень распространено, но заболевание развивается достаточно редко. Наиболее часто инфекция возникает в зимний период. Эпидемии регистрируют каждые 10—12 лет.
В Африке их чаще всего отмечают в зоне «менингитного пояса», где численность заболевших ежегодно достигает 1 тыс. человек на 100 тыс. населения. Возбудители наиболее инвазивных инфекций — представители серогрупп А, В и С. Самой распространённой в настоящее время считают инфекцию, вызванную N. meningitidis группы В.
В странах с обязательной вакцинацией населения заболеваемость менингитом группы С существенно снизилась.
Патогенез и клинические признаки инфекции Neisseria meningitidis
Основной фактор патогенности Neisseria meningitidis — полисахаридная капсула, препятствующая фагоцитозу. Менингококки проникают через слизистую оболочку посредством эндоцитоза, а капсула помогает им выживать в кровотоке. Липоолигосахариды активируют комплекс комплемента и стимулируют выброс цитокинов, что приводит к развитию диссеминированного внутрисосудистого свёртывания крови.
Для менингококкового менингита характерны сильный жар, ригидность мышц шеи и нарушение сознания. Признак септицемии — петехиальная сыпь, которая может быть единственным признаком заболевания (без симптомов менингита). В некоторых случаях развивается септический или реактивный артрит.
Диагностика и лечение инфекции Neisseria meningitidis
Диагноз основан на данных клинической картины и подтверждается выделением чистой культуры микроорганизма из крови, кожных высыпаний и спинномозговой жидкости. Надёжный и очень чувствительный метод определения возбудителя в спинномозговой жидкости и крови — обнаружение антигена и молекулярно-генетический.
Заболевание быстро профессирует и представляет серьёзную опасность для жизни пациентов, поэтому лечение необходимо начинать до получения результатов лабораторных анализов. Антибиотик выбора — пенициллин G (внутривенное или внутримышечное введение), но в последнее время в разных странах регистрируют случаи выделения штаммов со сниженной чувствительностью к действию антимикробных препаратов. В этом случае альтернативным препаратом считают цефотаксим.
Следует учитывать, что лекарственная терапия не помогает избавиться от носительства инфекции, поэтому после выздоровления необходимо пройти курс профилактики.
Профилактика инфекции Neisseria meningitidis
Против возбудителей серогрупп А и W135 применяют полисахаридную вакцину. Против бактерий серофуппы С — конъюгированную вакцину (эффективна в 90% случаев). Против возбудителей серофуппы В до настоящего времени вакцина не создана. Помимо вышеуказанного, лицам, контактирующим с инфицированными, необходимо пройти профилактический курс приёма рифампицина или ципрофлоксацина.
Редактор: Искандер Милевски. Дата обновления публикации: 18.3.2021
Информация на сайте подлежит консультации лечащим врачом и не заменяет очной консультации с ним.
См. подробнее в пользовательском соглашении.
4.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Лабораторная диагностика менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов
Дата введения с момента утверждения
1. Разработаны: Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии Минздрава России (И.С.Королева, Г.В.Белошицкий, Л.В.Спирихина, А.М.Грачева, И.М.Закроева); Центром Госсанэпиднадзора в г.Москве (Н.Н.Филатов, Г.Г.Чистякова); Департаментом Госсанэпиднадзора Минздрава России (Г.Ф.Лазикова, Н.А.Кошкина, З.С.Середа).
2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 4 марта 2004 года.
3. Введены впервые.
1. Область применения
1.1. В настоящих методических указаниях изложены организационные и методологические принципы лабораторной диагностики менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов.
1.2. Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы и здравоохранения.
2. Общие сведения
Менингиты бактериальной природы - тяжелейшие инфекционные заболевания, при которых в инфекционный процесс вовлекаются мягкие мозговые оболочки основания головного мозга и верхняя часть спинного мозга.
Локализация очага воспаления, а также характерные для этих заболеваний тяжелейшие клинические проявления и генерализация процесса с поражением различных органов и тканей указывают на необходимость быстрого решения вопроса об этиологии заболевания и назначения адекватной антибактериальной терапии, которая неоднозначна для гнойных бактериальных менингитов (ГБМ) разной этиологии.
От грамотного и своевременного проведения исследований по определению этиологического агента заболевания и как можно более раннего начала соответствующего этиотропного лечения зависит исход заболевания, показатели летальности, число и тяжесть постинфекционных осложнений.
Данные лабораторной диагностики бактериальных менингитов и изучение основных биологических свойств у возбудителей лежат в основе определения прогностических критериев в системе эпидемиологического надзора за бактериальными менингитами, в том числе и генерализованными формами менингококковой инфекции (ГФМИ).
Необходимо учитывать, что одним из проявлений ГФМИ является распространенная клиническая форма "менингококковый менингит" без менингококкцемии, при которой точный клинический диагноз без проведения лабораторных исследований поставить невозможно.
Рационально организованная комплексная лабораторная диагностика гнойных бактериальных менингитов любой этиологии позволяет достоверно контролировать состояние проблемы этой инфекционной патологии.
3. Эпидемиологические особенности менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов
Гнойные бактериальные менингиты, включающие в себя генерализованные формы менингококковой инфекции, широко распространены во всем мире. Эти заболевания отличаются не только высокими показателями заболеваемости, смертности и летальности, но и частыми осложнениями, затрудняющими нормальное развитие и полноценную жизнь переболевшего менингитом. Показатели летальности от ГБМ в зависимости от возраста, клинических форм болезни и от этиологического агента в развитых странах составляют в среднем 3-19%, а в развивающихся - 37-60%. С признаками тяжелой инвалидизации (глухота, задержка умственного развития, патологическая неврологическая симптоматика и др.) из стационаров выписывается более 50% пациентов. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) ежегодно в мире регистрируется 1 млн случаев гнойных бактериальных менингитов, из которых 200 тыс. заканчиваются летально.
Заболевание наиболее часто встречается в первые два года жизни, хотя известно, что бактериальный менингит может развиться в любом возрасте. Этиологическими агентами являются менингококки, пневмококки, гемофильные палочки, стафилококки, энтеробактерии, стрептококки, листерии и другие микроорганизмы. Наиболее значимыми возбудителями признаны менингококки, пневмококки и гемофильные палочки типа "b", отвечающие за более чем 90% случаев от числа всех расшифрованных ГБМ. Следует подчеркнуть важную роль и "прочих" микроорганизмов, особенно в этиологии бактериальных менингитов у новорожденных. Клиническая и лабораторная дифференциальная диагностика синдрома менингита должна включать и учитывать большой спектр заболеваний, таких как туберкулезный менингит, малярия, ряд энцефалитов, способных давать похожую на бактериальный менингит клиническую картину.
Среди гнойных бактериальных менингитов генерализованные формы менингококковой инфекции вызывают наибольшую озабоченность в мире из-за периодически возникающих пандемий, эпидемий, эпидемических подъемов заболеваемости и вспышек.
Менингококки классифицируют по составу полисахарида на 12 серологических групп - А, В, С, X, Y, Z, W-135, 29Е, K, L, Н, I, из которых только первые три серогруппы (А, В, С) отвечают за более чем 90% случаев клинически выраженной генерализованной менингококковой инфекции.
Важным параметром эпидемиологического надзора за МИ является изучение серогрупповой характеристики менингококков, выделенных из ликвора и крови больных генерализованными формами менингококковой инфекции. По данным Российского центра по эпидемиологическому надзору за менингококковой инфекцией и гнойными бактериальными менингитами, в 2002 году в серогрупповой характеристике менингококков почти в равных соотношениях выявлены менингококки серогруппы А (38,2%) и В (36,6%). Доля менингококков серогруппы С составила 24,6%. На другие серогруппы менингококков и негруппируемые штаммы приходилось 0,5% (табл.2).
Серогрупповая характеристика менингококков в Российской Федерации в 2002-2003 годах (в % от общего числа отгруппированных штаммов)
* НА - неагглютинирующиеся штаммы.
По обобщенным данным, в 2003 году отмечалось некоторое преобладание менингококков серогруппы А (35%), а доля менингококков серогруппы В и С составила 31 и 17,8% соответственно. На редкие серогруппы менингоккоков приходилось 1,1%, а доля неагглютинирующихся штаммов составила 15,1%.
Выявленные показатели серогруппового пейзажа менингококков в 2003 году различались по территориальным округам Российской Федерации. Так, в Южном и Центральном федеральных округах выявлено преобладание менингококков серогруппы А (52,8 и 44,9% соответственно). В других округах распространение эпидемиологически опасной серогруппы А было незначительным и колебалось от 3 (Северо-Западный федеральный округ) до 9,5% (Дальневосточный федеральный округ). Вместе с тем, в Северо-Западном, Дальневосточном и Сибирском федеральных округах значительно преобладали менингококки серогруппы В (66,7, 52,4 и 48,9% соответственно). Наименьшим территориальным колебаниям было подвержено распространение менингококков серогруппы С, при этом их удельный вес составил в среднем 17,8% с ранжированным интервалом колебаний от 14,6 (Южный федеральный округ) до 37,9% (Уральский федеральный округ).
Микробиологическое подтверждение ГФМИ и изучение биологических свойств менингококков, выделенных от больных (из крови и ликвора), являются необходимой составляющей для формирования системы эпидемиологического надзора и выявления особенностей течения эпидемического процесса МИ на определенной территории. Выявление эпидемиологических параметров позволяет оценивать эпидемиологическую обстановку и определять тактику вакцинопрофилактики. В Российской Федерации разрешены для применения и используются полисахаридные вакцины, способные защитить от заболеваний, вызываемых менингококками серогруппы А и серогруппы С.
Ведущие позиции в этиологии эндемического бактериального менингита занимают гемофильные палочки типа "b" (Haemophilus influenzae тип "b" - Hib) и пневмококки.
Заболевания, вызываемые Hib, распространены повсеместно и входят в блок детских инфекций. Hib-возбудитель вызывает большой спектр гнойно-септических воспалений: менингит, пневмония, эпиглотит, остеомиелит, перикардит, артрит и другие. В этиологической структуре бактериальных менингитов среди детей Hib-возбудитель занимает второе место после менингококков. В отличие от других бактериальных менингитов Hib-менингиты встречаются почти исключительно среди детей раннего возраста: 80-95% Hib-менингитов приходится на возраст до 5 лет. Заболевание не носит различий, связанных с полом: в равной степени болеют лица как женского, так и мужского пола. Внутригодовая сезонность не имеет выраженного характера, но наблюдается возрастание числа случаев заболеваний весной и осенью. Летальность составляет 3-6% и оценивается как высокая. В этой связи Hib-менингиты относят к категории опасных инфекционных заболеваний детского возраста. Применение разрешенных в Российской Федерации вакцинных препаратов защищает от возникновения Hib-заболеваний.
Инфекционные заболевания пневмококковой этиологии являются актуальной проблемой практического здравоохранения, что обусловлено ведущей ролью S.pneumoniae (пневмококка) в структуре инфекций дыхательных путей, особенно внебольничных пневмоний, отитов, синуситов, бактериальных менингитов, в более редких случаях как возбудителя эндокардитов, септических артритов, флегмон и других заболеваний.
Резервуар пневмококковой инфекции - больные и носители. Уровень носительства максимален в организованных коллективах и достигает у детей 30-50%, у взрослых 20-30%. Основной путь передачи - контактный, при вспышках - воздушно-капельный. Пик заболеваемости приходится на осенне-зимний период. Мужчины болеют в два раза чаще, чем женщины.
В результате попадания пневмококков в кровоток и центральную нервную систему возбудитель вызывает инвазивную инфекцию в виде бактериемии и менингита. Генерализация процесса обусловлена низким уровнем специфического и неспецифического иммунитета и вирулентными свойствами возбудителя.
Менингиты пневмококковой этиологии занимают второе место в этиологической структуре бактериальных менингитов, уступая только генерализованным формам менингококковой инфекции. Они отличаются тяжелым и осложненным течением, часто требующим проведения интенсивных терапевтических и реанимационных мероприятий, высокими показателями летальности, развитием резидуальных явлений, нередко приводящих к тяжелой инвалидизации больных. От 50 до 80% больных при поступлении в стационар направляются в реанимационные отделения. Летальность среди детей до года и лиц пожилого возраста старше 65 лет достигает от 40 до 70%. Более трети переболевших страдают цереброгенными астено-вегетативными расстройствами, неврологическими и психическими дефицитами различной степени тяжести.
Пневмококковые менингиты не входят в перечень инфекций, подлежащих обязательной регистрации в Российской Федерации, учет заболеваний проводится только на отдельных территориях. По данным, полученным Российским центром по эпидемиологическому надзору за менингококковой инфекцией и гнойными бактериальными менингитами, уровень заболеваемости пневмококковыми менингитами в 2001-2003 годы (г.Москва) составил 0,8 на 100 тыс. населения. Доля взрослых старше 25 лет в структуре заболевших составляла 80%. Общая летальность определялась на уровне 29% (среди детей до 14 лет - 9%, взрослых - 31,7%). Показатели смертности составили 0,23 на 100 тыс. населения (среди детей до 14 лет - 0,05 на 100 тыс., среди взрослых - 0,27 на 100 тыс. населения).
Пневмококковые менингиты, как правило, являются следствием вторичной локализации S.pneumoniae, и осложняют течение пневмонии, отита, синусита и других гнойно-септических заболеваний. В тех случаях, когда определить первичную локализацию пневмококковой инфекции не удается, говорят о первичном пневмококковом менингите. Инфицирование оболочек и вещества головного мозга чаще всего происходит гематогенным путем, но возможно распространение возбудителя в результате непосредственного перехода из гнойных очагов, расположенных вблизи оболочек мозга (гнойный отит или гайморит), либо путем метастазирования из более отдаленных очагов (абсцесс легкого), либо в результате травмы. Фоном для развития пневмококкового менингита служат острые респираторные заболевания, грипп и другие простудные заболевания.
По капсульным полисахаридам пневмококки разделены на 90 серотипов, имеющих различное эпидемиологическое значение. Из наиболее опасных серотипов приготовлены пневмококковые вакцины, использующиеся для вакцинации групп риска. В группы риска в первую очередь входят дети в возрасте до года и лица пожилого возраста старше 65 лет, лица, имеющие в анамнезе хронические заболевания сердца, легких, печени (особенно у больных алкоголизмом), почек, эндокринную патологию, сахарный диабет, гематологические, онкологические заболевания, черепно-мозговые травмы, ликворею, иммунодефициты различного генеза.
Гнойные бактериальные менингиты, вызванные "прочими" этиологическими агентами, отличаются своей мозаичностью по этиологическому признаку и особенно часто встречаются у новорожденных детей. В неонатальный период (от рождения до 2-х месяцев) преобладающими этиологическим агентами бактериальных менингитов являются бактерии семейства Enterobacteriaceae: Eshericnia coli, Salmonella spp., Citrobacter spp. Значимыми возбудителями в этой возрастной категории являются Streptococcus agalactiae (группа В) и Listeria monocytogenes. С возрастом соотношение этиологических агентов меняется и основными возбудителями становятся менингококки, пневмококки и гемофильные палочки типа "b", каждый из которых может занимать лидирующее положение в зависимости от времени наблюдения, эпидемиологической ситуации, территориальных особенностей и многих других причин. Удельный вес так называемых "прочих" этиологических агентов, по данным Российского центра по эпидемиологическому надзору за менингококковой инфекцией и гнойными бактериальными менингитами составляет 5% от общего числа этиологически подтвержденных случаев. Так, из 1999 бактериологически расшифрованных случаев, количество бактериальных менингитов, обусловленных "прочими" возбудителями, было равно 97, при этом выявлено 17 различных этиологических агентов, среди которых: Candida albicans - 22,7%, Staphylococcus aureus - 17,5%, Streptococcus pyogenes - 14,4%, Streptococcus agalactiae - 10,3%, Escherichia coli - 7,2%, Listeria monocytogenes - 7,2%, Klebsiella pneumoniae - 6,2%, Pseudomonas aeruginosa - 4,1% и другие в единичных случаях.
Таким образом, главная особенность гнойных бактериальных менингитов - полиэтиологичность возбудителей, которые относятся к разным таксономическим категориям и требуют неоднозначных методических приемов при лабораторной идентификации возбудителей.
4. Основные принципы лабораторной диагностики менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов
Основные принципы лабораторной службы по этиологической расшифровке гнойных бактериальных менингитов и подтверждению клинического диагноза базируются на особенностях самого заболевания:
тяжелейший симптомокомплекс клинических проявлений в первые дни болезни указывает на необходимость экстренного незамедлительного проведения исследований по определению этиологии заболевания с обязательным использованием методов экспресс-диагностики;
ответ должен быть не только быстрым, но и безошибочно точным. Это чрезвычайно актуально для ГБМ, так как заболевания полиэтиологичны по своей природе. Данное обстоятельство необходимо учитывать при организации работы лабораторий по этиологической расшифровке заболеваний. Показано, что практически любой микроорганизм может быть причиной бактериального менингита, но основных возбудителей три. Это менингококки, пневмококки и гемофильные палочки типа "b", отвечающие за 85-90% от общего числа расшифрованных случаев. На выявление этих основных возбудителей и должны быть направлены все силы и средства лабораторий, занимающихся исследованием материала от больных с подозрением на бактериальный менингит;
учитывая то, что очагом воспаления являются мягкие мозговые оболочки головного мозга и спинной мозг, основным материалом для исследования является спинно-мозговая жидкость (СМЖ). Кроме того, из-за возникающей генерализации процесса обязательным объектом исследования является и кровь.
Исследование носоглотки для подтверждения клинического диагноза ГФМИ представляется нецелесообразным и, если исследование все же проводят и при этом из носоглотки выделяют менингококки, то расценивать данный факт необходимо как выявление локализованных форм - назофарингита (если есть клинические признаки воспаления в носоглотке) или носительства (если нет клинических признаков локализованного воспаления).
Теоретическое обоснование подходов к лабораторной диагностике бактериальных менингитов (в том числе и генерализованных форм менингококковой инфекции) следует сочетать с адекватной практической составляющей. Основой рутинного алгоритма ежедневной работы являются специальные требования к объему патологического материала, подлежащего исследованию, и комплексное методологическое оснащение исследований.
5. Отбор материала для исследования
Основным биологическим материалом для исследования при бактериальных менингитах служат спинно-мозговая жидкость и кровь. Для бактериологического подтверждения менингококкового назофарингита и выявления назофарингеального менингококкового носительства исследуют носоглоточную слизь.
Схема 16. Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции
Микроскопический метод. Мазки из осадка спинномозговой жидкости окрашивают по методу Грама и микроскопируют. При наличии гноя и обнаружении внутри лейкоцитов грамотрицательных диплококков в виде «бобов» или «кофейных зерен», обращенных вогнутой
стороной друг к другу, позволяет сделать положительное заключение о наличии у пациента менингококковой инфекции (рис. 22).
А б
Рис. 22. Менингококк(Neisseria meningitides) в спинно-мозговой жидкости больного эпидемическим цереброспинальным менингитом (а) и в чистой культуре (б). Окраска по Граму. х630
Микроскопическое исследование мазков из носоглотки бактерионосителей дает возможность выявить наряду с менингококком стафилококки, стрептококки и непатогенные нейссерии (Moraxella spp. и др.), дифференцировать которые по морфологическим и тинкториальным свойствам практически невозможно.
Бактериологический метод.Исследуемый материал засевают петлей на чашки с сывороточным МПА, содержащим антибиотики (ристомицин, ванкомицин, колистин и ниста-
тин) для подавления роста сопутствующей микрофлоры (преимущественно кокков). Асцитическая жидкость в качестве добавки к питательным средам в настоящее время не
применяется, так как в результате лечения больных в ней накапливаются вещества, ингибирующие рост микроорганизмов (в том числе менингококка). Менингококк на сывороточном МПА вырастает при температуре 37 0 С в атмосфере с повышенным содержанием СО2 (используют СО2 инкубатор, газогенераторные пакеты или эксикатор с зажженной свечой) через 48 часов, колонии величиной с булавочную головку, прозрачные, с голубоватым оттенком и ровными краями. В мазках из чистой культуры менингококка (рис.21) микрокартина иная (полиморфные дипло- и тетракокки), чем в мазках из спинно-мозговой жидкости.
Типичные для менингококка колонии пересевают в пробирку со скошенным сывороточным МПА для выделения чистой культуры. Идентификацию чистой культуры менингококка, ее дифференциацию от сапрофитных нейссерий, обитающих в носоглотке, проводят на основании изучения комплекса биологических свойств (табл. 18).
Таблица 18.Основные биологические свойства нейссерий
| Свойства | Виды нейссерий | ||||
| N.meningitidis | N.subflava | N.flava | N.mucosa | N.sicca | |
| Рост на МПА | - | + | + | + | + |
| Потребность в СО2 | + | - | - | - | |
| Желтый пигмент | - | + | + | ± | ± |
| Ферментация: глюкозы мальтозы сахарозы фруктозы лактозы | К+ К+ - - - | К+ К+ К± К± - | - - - - - | К+ К+ К+ К+ - | К+ К+ К+ К+ - |
| Образование полисахарида из сахарозы | - | ± | + | + | + |
| Нитратредуктаза | - | - | - | + | - |
| РА с менингококковыми сыворотками сероваров А., В, С | + | - | - | - | - |
Обозначения: (+) – наличие признака, (-) – отсутствие признака, (±) – непостоянный признак, К – образование кислоты
Специфический полисахаридный менингококковый антиген можно выявить в спинномозговой жидкости с помощью метода встречного иммуноэлектрофореза в геле. С этой целью в агаровом геле на стеклянных пластинках, размером 9x12 см, вырезают два параллельных ряда лунок диаметром 3 мм. В лунки одного ряда вносят исследуемый ликвор, в лунки другого - преципитирующие сыворотки против менингококков разных серогрупп. Пластинки помещают в аппарат для иммуноэлектрофореза на 40-45 мин при комнатной температуре. Положительный результат характеризуется появлением 1-2 полосок преципитации между лунками со спинномозговой жидкостью и соответствующей антисывороткой.
Генодиагностика. Исследуемый материал используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР, что дает основание в случае получения положительного результата поставить предварительный диагноз.
Серодиагностика.Для ретроспективного подтверждения диагноза используют РНГА с парными сыворотками.
Экспресс-методы диагностики.Для выявления антигенов менингококков в мазках из исследуемого материала используют ИФМ, а также непрямую латекс-агглютинацию и РНГА с антительными диагностикумами.
Самостоятельная работа студентов
1. Микроскопический метод. Изучение морфологии менингококка в мазках из ликвора больного с подозрением на менингококковую инфекцию (демонстрация). Типично наличие грамотрицательных диплококков, располагающихся внутри лейкоцитов.
2. Бактериологический метод. Учет культуральных свойств менингококка на сывороточном МПА с ристомицином. Колонии менингококков прозрачные с голубым оттенком, ровные, мелкие (с булавочную головку). Изучить биохимические свойства менингококка в соответствии с таблицей .
3. Учесть демонстрационную РНГАс парными сыворотками больного (7 и 14 дни болезни) с подозрением на менингококковую инфекцию.
4. Биопрепараты для диагностики и профилактики менингококковой инфекции:
· агглютинирующие и преципитирующие сыворотки против менингококка, применяются с диагностической целью для постановки РА с целью серологического типирования менингококка и встречного иммуноэлектрофореза для обнаружения менингококкового антигена в спинно-мозговой жидкости.
· эритроцитарные антительные менингококковые диагностикумы для обнаружения антигенов менингококка в спинномозговой жидкости с помощью РНГА.
80. Менингококки. Таксономия. Характеристика. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций. Лечение.
Менингококковая инфекция — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением слизистой оболочки носоглотки, оболочек головного мозга и септицемией; антропоноз.
Таксономия: возбудитель Neisseria meningitidis (менингококк) относится к отделу Gracilicutes, семейству Neisseriaceae, роду Neisseria.
Морфологические свойства. Мелкие диплококки. Характерно расположение в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Неподвижны, спор не образуют, грамотрицательные, имеют пили, капсула непостоянна.
Культуральные свойства. Относятся к аэробам, культивируются на средах, содержащих нормальную сыворотку или дефибринированную кровь лошади, растут на искусственных питательных средах, содержащих специальный набор аминокислот. Элективная среда должна содержать ристомицин. Повышенная концентрация СО2 в атмосфере стимулирует рост менингококков.
Антигенная структура: Имеет несколько АГ: родовые, общие для рода нейссерии (белковые и полисахаридные, которые представлены полимерами аминосахаров и сиаловых кислот); видовой (протеиновый); группоспецифические (гликопротеидный комплекс); типоспецифические (белки наружной мембраны), которые разграничивают серотипы внутри серогрупп В и С. По капсульным АГ выделяют девять серогрупп (А, В, С, D, X, Y, Z, W135 и Е). Капсульные АГ некоторых серогрупп иммуногенны для человека. Штаммы серогруппы А вызывают эпидемические вспышки. В, С и Y - спорадические случаи заболевания. На основании различий типоспецифических АГ выделяют серотипы, которые обозначают арабскими цифрами (серотипы выявлены в серогруппах В, С, Y, W135). Наличие АГ серотипа 2 рассматривается как фактор патогенности. Во время эпидемий преобладают менингококки групп А и С, которые являются наиболее патогенными.
Биохимическая активность: низкая. Разлагает мальтозу и глк. До кислоты, не образует индол и сероводород. Ферментация глк. и мальтозы – диф.-диагностический признак. Не образует крахмалоподобный полисахарид из сахарозы. Обладает цитохромоксидазой и каталазой. Отсутствие β-галактозидазы, наличие γ-глютаминтрансферазы.
Факторы патогенности: капсула – защищает от фагоцитоза. AT, образующиеся к полисахаридам капсулы, проявляют бактерицидные свойства. Токсические проявления менингококковой инфекции обусловлены высокотоксичным эндотоксином. Для генерализованных форм менингококковой инфекции характерны кожные высыпания, выраженное пирогенное действие, образование AT. Пили, белки наружной мембраны, наличие гиалуронидазы и нейроминидазы. Пили являются фактором адгезии к слизистой оболочке носоглотки и тканях мозговой оболочки. Менингококки выделяют IgA-протеазы, расщепляющие молекулы IgA, что защищает бактерии от действия Ig.
Резистентность. Малоустойчив во внешней среде, чувствителен к высушиванию и охлаждению. В течение нескольких минут погибает при повышении температуры более 50 °С и ниже 22 °С. Чувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, эритромицину, устойчивы к ристомицину и сульфамидам. Чувствительны к 1 % раствору фенола, 0,2 % раствору хлорной извести, 1 % раствору хлорамина.
Эпидемиология, патогенез и клиника. Человек — единственный природный хозяин менингококков. Носоглотка служит входными воротами инфекции, здесь возбудитель может длительно существовать, не вызывая воспаления (носительство). Механизм передачи инфекции от больного или носителя воздушно-капельный.
Инкубационный период составляет 1—10 дней (чаще 2—3 дня). Различают локализованные (назофарингит) и генерализованные (менингит, менингоэнцефалит) формы менингококковой инфекции. Из носоглотки бактерии попадают в кровяное русло (менингококкемия) и вызывают поражение мозговых и слизистых оболочек с развитием лихорадки, геморрагической сыпи, воспаления мозговых оболочек.
Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах болезни стойкий, напряженный.
Микробиологическая диагностика: Материал для исследования - кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы.
Бактериоскопический метод – окраска мазков из ликвора и крови по Граму для определения лейкоцитарной формулы, выявления менингококков и их количества. Наблюдают полинуклеарные лейкоциты, эритроциты, нити фибрина, менингококки – грам «-», окружены капсулой.
Бактериологический метод – выделение чистой культуры. Носоглоточная слизь, кровь, ликвор. Посев на плотные, полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь. Культуры инкубируют в течение 20 ч. При 37С с повышенным содержанием СО2.Оксидазаположительные колонии – принадлежат в данному виду. Наличие N.meningitidis подтверждают образованием уксусной кислоты при ферментации глк. и мальтозы. Принадлежность к серогруппам – в реакции агглютинации (РА).
Серологический метод – используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе, или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА,РИА. У больных, перенесших менингококк – в сыворотке специфические АТ: бактерицидные, аггютинины, гемаггютинины.
Лечение. В качестве этиотропной терапии используют антибиотики - бензилпенициллин (пенициллины, левомицетин, рифампицин), сульфамиды.
Профилактика. Специфическую профилактику проводят менингококковой химической полисахаридной вакциной серогруппы А и дивакциной серогрупп А и С по эпидемическим показаниям. Неспецифическая профилактика сводится к соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в дошкольных, школьных учреждениях и местах постоянного скопления людей.
Читайте также: